江苏省传染性非典型肺炎病原学检测研究

目的:建立传染性非典型肺炎(SARS)实验室检测方法,为SARS病例诊断和现场防治提供依据。方法:用逆转录套式PCR、实时荧光定量PCR检测SARS病毒核酸;酶联免疫法检测血清标本SARS病毒IgM抗体;部分PCR检测阳性或SARS病毒IgM抗体阳性病例的标本进行直接电镜观察;简并引物PCR检测冠状病毒属病毒核酸;鉴别诊断IFA检测血清中肺炎支原体等9种常见呼吸道感染病原IgM抗体,PCR检测军团菌以及甲、乙型流感病毒核酸。结果:检测各类临床标本506份。2003年全省报告临床诊断病例7例,5例检测结果阳性;逆转录套式PCR检测各类标本132份,阳性8份;对其中4份PCR扩增产物(108bp)进行了序列分析,与SARS病毒序列100%同源;实时荧光定量PCR检测各类标本30份,阳性3份;酶联免疫法检测血清标本101份,SARS病毒IgM抗体阳性4份;3个诊断病例的各类标本电镜检查发现冠状病毒样颗粒;IFA检测血清标本75份,嗜肺军团菌IgM抗体阳性9份,乙型流感IgM抗体阳性11份,两者同时阳性3份,其他病原体IgM抗体均为阴性。不明发热病例的标本21份简并引物PCR检测冠状病毒,2份咽拭子标本阳性;漱口液、尿液标本各15份PCR检测军团菌、漱口液25份PCR检测甲、乙型流感病毒结果均为阴性。结论:本研究建立的检测方法与临床诊断有比较好的符合性,对于临床诊断和防治工作具有重要的参考价值。PCR检测SARS-CoV特异性较好,而敏感性有待提高。     

云南省西双版纳地区2011年蚊虫及虫媒病毒调查

目的了解云南省西双版纳地区蚊虫媒介的分布特点及当地虫媒病毒情况,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法在云南省西双版纳州采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,并用RTPCR法检测常见虫媒病毒核酸;在西双版纳州采集发热患者血清及脑脊液标本,并用ELISA法检测常见病毒性脑炎IgM抗体。结果共采获蚊虫5属29种13337只,其中三带喙库蚊、中华按蚊、带足按蚊分别占蚊虫标本总数的79.98%(10667/13337)、7.95%(1060/13337)和7.38%(984/13337),三带喙库蚊为当地优势蚊种。采用流行性乙型脑炎(乙脑)病毒、版纳病毒、甲病毒属、环状病毒等多种虫媒病毒引物对214批蚊虫标本进行PCR检测,结果均为阴性;采用多种细胞对蚊虫标本进行病毒分离,结果也为阴性。用相关脑炎病毒试剂盒对采集到的52份急性期血清标本及54份脑脊液标本进行ELISA检测,发现乙脑病毒IgM阳性16例,单纯疱疹病毒IgM抗体阳性4例,腮腺炎病毒IgM抗体阳性13例,埃可病毒IgM抗体阳性3例,登革热病毒IgM抗体阳性1例。结论 2011年西双版纳地区采集到的蚊虫标本中未检测到乙脑、版纳及环状病毒等虫媒病毒,但血清学检测结果表明当地发热患者存在乙脑等多种病毒性脑炎感染。     

陕西省2005～2006年流行性乙型脑炎报告病例实验室复核检测

目的 对陕西省2005～2006年流行性乙型脑炎(乙脑)报告病例标本进行复核检测,并对乙脑阴性标本检测其它病毒性脑炎病毒IgM抗体.方法 对陕西省两年乙脑报告病例的血清及脑脊液标本,用两种国产乙脑病毒IgM抗体捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,澳大利亚Panbio公司生产的乙脑/登革病毒IgM抗体ELISA试剂盒,以及间接免疫荧光方法进行复核检测,并用10种引起病毒性脑炎病毒的IgM抗体ELISA检测试剂盒检测乙脑阴性标本.结果 陕西省2005～2006年送检的9I份标本中,乙脑病毒IgM抗体阳性54份,乙脑病毒IgM抗体检测复核一致率分别为92.68%和100%.24份乙脑病毒IgM抗体阴性血清标本中,13份对7种其它病毒性脑炎病毒的IgM抗体阳性,总检出率为21.67%.结论 陕西省乙脑报告病例的实验室检测复核一致率较高,乙脑检测阴性病例中可能有其它脑炎病毒感染,提高乙脑报告病例的实验室检测率非常重要.     

用乙型脑炎组织培养病毒制备ELISA抗原检测特异性IgG

用C6/36细胞增殖流行性乙型脑炎(乙脑)病毒制备抗原,在ELISA 间接法中检测特异性IgG 抗体。用此法检测了本市临床疑似乙脑病人77例,阳性检出率为61.04%(47/77),与补体结合试验(cF)比较,cF 阳性率仅为33.77%(26/77)。x~2=10.43,P<0.01。与捕捉法ELISA IgM 比较,后者阳性率为64.94%(50/77)。x~2=0.25,P>0.05。当检测标本达合适的稀释度时,与其他病毒抗原无交叉反应。本法重复性良好,可用于流行病学调查、疫苗效果考核以及乙脑的诊断。     

巨细胞病毒IgG抗体亲和力检测试剂盒的临床应用评估

目的对巨细胞病毒(CMV)IgG抗体亲和力检测试剂进行临床应用评估,为临床资料提供参考依据。方法收集医院364例CMV IgG阳性标本,同时用被考核试剂(罗氏公司生产)和参考试剂[意大利索灵诊断医疗设备(上海)有限公司生产]进行CMV IgM和IgG抗体亲和力检测,计算被考核试剂IgG抗体亲和力检测的相对灵敏度、相对特异度、相对总符合率。结果参考试剂检测为高亲和力抗体的350例、低亲和力抗体11例、灰区3例,即被考核试剂的相对灵敏度为90.90%、相对特异度为98.25%、相对总符合率为98.02%。结论罗氏公司的巨细胞病毒(CMV)IgG抗体亲和力检测试剂盒的灵敏度、特异性均高(>90.00%),具有临床应用的可行性及检测结果的可靠性。     

外周血IFN-γ释放试验对活动性肺及胸膜结核诊断价值

目的探讨IFN-γ释放试验在活动性肺结核及胸膜结核诊断中的价值。方法使用TB-IGBA试剂、结核抗体试剂对湖南省人民医院呼吸科经诊断为活动性肺及胸膜结核分枝杆菌感染的患者70例和115例非结核患者外周血进行检测。结果 IFN-γ释放试验敏感性87.1%(61/70),特异性76.5%(88/115),阳性预测值69.3%(61/88),阴性预测值90.7%(88/97);结核抗体敏感性35.7%(25/70),特异性74.8%(86/115),阳性预测值46.3%(25/54),阴性预测值65.6%(86/131)。结论 IFN-γ释放试验诊断活动性肺结核及胸膜结核敏感性、特异性高,敏感性远远优于结核抗体检测,在活动性肺结核及胸膜结核诊断中有重要价值,值得临床推广。     

甘肃省部分地区病毒性脑炎标本的实验室检测

目的:初步了解甘肃省病毒性脑炎的病原种类及其分布特征。方法:用ELISA方法对2006年-2009年甘肃省5个地、州、市送检的209例临床诊断为病毒性脑炎患者的急性期血清和脑脊液标本,检测乙脑病毒IgM抗体,然后对乙脑IgM抗体阴性的所有血清、脑脊液标本检测其它6种常见病毒IgM抗体。结果:经血清学及脑脊液检测,209例患者中的154例(73.7%)检测出病毒特异性IgM抗体,构成顺序为乙脑病毒(16.7%)、呼吸道合胞病毒(15.8%)、腮腺炎病毒(13.4%)柯萨奇病毒(9.6%)、埃可病毒(9.1%)、单纯疱疹病毒(8.1%)、水痘-带状疱疹病毒(1.0%)。结论:乙脑病毒及呼吸道合胞病毒是甘肃省病毒性脑炎的主要病原体,腮腺炎病毒次之,柯萨奇病毒、埃可病毒、单纯疱疹病毒也是重要的抗原。     

病毒性脑炎88例临床分析

[目的]探讨病毒性脑炎的病原及临床早期诊断方法。[方法]对88例住院患儿的临床症状、发病早期脑电图检查、脑脊液细胞学分析以及检测血清病毒特异性IgM抗体的结果进行分析。[结果]早期临床表现主要为发热、头痛、呕吐等非特异性症状；脑电图异常率98．8％；脑脊液细胞学分析异常者78．2％；血清柯萨基B组病毒IgM抗体阳性39．3％，EB病毒IgM抗体阳性38．1％。[结论]本组病毒性脑炎主要由柯萨基B组病毒及EB病毒引起，脑电图及脑脊液细胞学对病毒性脑炎的早期诊断有重要的参考价值。     

汉坦病毒核蛋白及其单抗标记物在建立ELISA试剂中的应用

[目的]利用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂。[方法]制备、纯化重组核蛋白抗原和抗核蛋白单抗并进行辣根过氧化物酶标记，在抗人μ链包被板中结合四甲基联苯胺-过氧化氢（TMB／H2O2）酶底物系统，从血清中检测肾综合征出廊热早期特异性IgM抗体，并与免疫荧光抗体法（IFA）进行比较。[结论]检测42份可疑HFRS病人血清，ELISA法和IFA法均阳性的20份，均阴性的19份；ELISA法阴性、IFA法阳性的1份，ELISA法阳性、IFA法阴性的2份，2种方法的差异无统计学意义（配对x^2=0．08，P〉0．05）。[结论]用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂可用于HFRS的早期IgM抗体检测。     

传染性单核细胞增多症患者血清EBV-IgM抗体检测分析

[目的]探讨急性期血清EB病毒特异性IgM抗体在传染性单核细胞增多症（IM）临床诊断中的应用价值.[方法]选择IM患者血清标本78份,同期健康体检血清标本30份,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测EBV-VCA-IgM抗体.[结果]两组阳性率分别为87.2%和3.3%;阳性率IM组高于体检对照组（P＜0.01）.[结论]对IM患者作血清EBV-VCA-IgM抗体检测,具有较高的特异性和敏感性,有助于临床诊断.     

登革热病毒感染后NS1抗原检测的应用评价

目的通过使用不同的检测方法及检测试剂,评价本地区登革热病毒感染后NS1抗原检测的应用价值。方法收集2014年-2015年确诊的登革热阳性病例血清标本127例及相应的对照样本155例,同时采用酶联免疫及real-time RT-PCR法,针对登革热病毒NS1抗原、Ig M抗体和核酸3种靶标进行检测,判断NS1抗原检测的价值。结果登革热病毒感染早期(5 d),核酸检测及抗原检测阳性率高于抗体检测,差异有统计学意义(χ2=77.537,P=0.000)。急性期过后(≥10 d)抗体检测阳性率较高,差异有统计学意义(χ2=14.797,P=0.002)。进口Panbio Dengue Early ELISA(Pan-E)试剂特异性(100.00%)高于国产试剂(92.30%),同时国产试剂敏感性(86.61%)高于进口Pan-E试剂(83.46%)。结论本地区登革热病毒感染后NS1抗原检测具有较高的敏感性和特异性,相对抗体检测可以有效提前诊断时间,2种方法的联合应用可以提高阳性检出率。     

柯萨奇B组病毒IgM抗体蛋白芯片法检测分析

目的分析蛋白芯片法检测柯萨奇B组病毒(CVB)IgM抗体的临床应用价值。方法收集356例呼吸道病毒性感染者血清和85例非呼吸道感染患者及30例健康献血员的血清标本,同时采用蛋白芯片法和ELISA法检测,进行灵敏度和特异性的比较。结果蛋白芯片法和ELISA法的阳性检出率分别为27.0%和20.8%,两种方法检测检测柯萨奇B组病毒IgM抗体的差异有统计学意义(2χ=17.3,P<0.01);85例非呼吸道感染的病毒性肝炎患者的血清,ELISA法检出阳性7例,阴性78例,特异性91.8%;蛋白芯片法检出阳性6例,阴性79例,特异性92.4%;30例健康献血员的血清,两种方法均未检出CVB-IgM抗体,特异性100.0%。结论蛋白芯片法检测柯萨奇B组病毒IgM抗体具有灵敏度高、特异性强、标本用量少的特点,值得推广应用。     

安溪县47例乙脑病人血清学检测分析

流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙脑病毒引起的急性传染病,该病在我省多呈散发。1999年安溪发生47例乙脑病人,我们采集临床诊断病人的血液进行血清学检测。在47份标本中25份为血清学阳性病例,其中乙脑IgM抗体阳性的22份,IgG抗体≥1：80的3份(表1)。     

SARS-CoV特异性抗体产生规律的初步研究

目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染后体内病毒特异性抗体产生规律。方法 收集临床确诊为SARS患者的血清和非SARS人群血清标本,用IgM捕获法、间接法和抗原夹心法三种不同方法检测抗SARS病毒特异性IgM、IgG和总抗体。结果 检测146份临床诊断为SARS的患者不同发病时间血清标本,三种抗体阳性率分别为61.64％、53.43％和69.86％;SARS病毒特异性IgM、IgG抗体的最早检出时间分别在发病第7天和第12天,特异性IgM抗体最短在发病后42天消失。三种方法检测70份甲型肝炎患者血清时,均有2份非特异阳性反应,检测127份其他病种血清均阴性,1例密切接触SARS患者的医务人员SARS特异性IgG抗体和总抗体均阳性,三种检测方法均不受类风湿因子影响。结论 与其他病毒感染相比,SARS病毒感染者的特异性IgM抗体检出时间较晚,且持续时间较短;三种检测方法均有较好的特异性和敏感性,可用于SARS的流行病学调查和临床诊断的确认和补充,但不适用于SARS的早期诊断。     

2006～2007年黔东南州乙脑疑似病例乙脑血清抗体检测结果分析

[目的]了解乙脑疑似病例血清乙脑抗体水平,为预防控制乙脑提供参考依据。[方法]对2006~2007年黔东南州各县(市)送检的乙脑疑似病例急性期血清及部分双份血清乙脑IgM抗体检测结果进行分析。[结果]检测202例乙脑疑似病例血清,乙脑IgM抗体阳性的150例,阳性率为74.25%。乙脑IgM抗体阳性率,有乙脑疫苗接种史的23例为69.57%,无接种史的104例为80.77%,免疫史不详的75例为66.67%(P>0.05);2006年的125例为84.80%,2007年的77例为59.21%(P<0.01);10岁以下159例为78.62%,10岁以上的43例为60.47%(P<0.05)。[结论]应提高免疫质量和接种率,搞好防蚊工作。     

金标免疫层析法检测恙虫病抗体的效果测评

目的对新开发的恙虫病金标试剂做特异性和敏感性的效果测评。方法采用微量间接免疫荧光试验（IFA）检测发热患者血清的恙虫病IgG抗体,然后选取阴性及强阳性血清共242份,用3种金标免疫层析试剂条检测恙虫病东方体IgM、IgG和总抗体。在对照成立的情况下,观察检测线的反应情况,以出现红色条带判为阳性,再用统计学方法进行分析。结果金标免疫层析法检测恙虫病IgM、IgG和总抗体的敏感性分别为62.25%、30.12%和93.98%,特异性分别为98.11%、98.74%和96.23%,与IFA比较的统计学结果分别为P〈0.05、P〈0.05和P〉0.05。结论 IgG和IgM抗体试剂条的检测结果与IFA检测结果差异有统计学意义;总抗体试剂条的检测结果与IFA检测结果差异无统计学意义,可替代IFA检测恙虫病抗体。     

汕头市澄海区一起麻疹暴发的血清学和分子生物学研究

[目的]分析汕头市区一起麻疹暴发的原因。[方法]收集2005年9月麻疹暴发流行资料,采集病例急性期血清和咽拭子各8份,进行血清学检测、病毒分离和中和实验、通过RT-PCR扩增麻疹N基因碳末端589个核苷酸进行测序。[结果]麻疹暴发流行累计发病23例,8份血清的麻疹IgM抗体阳性7份(87.5%),8份咽拭子仅分离出1株麻疹病毒,该流行株不同于S-191疫苗株,鉴定为H1基因型;中和实验表明麻疹疫苗免疫后血清能够中和该野病毒,但其中和滴度比中和疫苗株低2～4倍。[结论]麻疹H1基因型野病毒是此次暴发的病源,人群抗体水平低下是暴发的根本原因。     

IFA、ELISA和WB用于莱姆病血清学诊断的比较研究

目的比较研究间接免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和蛋白免疫印迹试验（WB）3种检测方法对莱姆病血清学的诊断效果。方法收集临床疑似莱姆病患者血清标本及其流行病学和临床资料,分别采用IFA、ELISA和WB进行血清抗伯氏疏螺旋体抗体（IgM和IgG）检测,结合流行病学和临床资料进行综合分析。结果实验共检测莱姆病疑似患者血清398份,ELISA阳性86例,阳性率21.61%,其中IgM阳性27例,IgG阳性59例;IFA阳性82例,阳性率20.60%,其中IgM阳性26例,IgG阳性56例;WB阳性83例,阳性率20.85%,其中IgM阳性31例,IgG阳性52例;并且实验表明,在对于游走性红斑病例的诊断上,WB法阳性率明显高于ELISA和IFA（χ2=6.34,P〈0.05）。结论在莱姆病的实验室诊断中,IFA、ELISA和WB3种方法结合运用,可提高诊断的灵敏性和特异性;WB在排除ELISA和IFA的假阳性结果中有着重要作用。     

广元市2007～2009年流行性乙型脑炎血清学检测结果分析

[目的]通过对广元市2007～2009年流行性乙型脑炎疑似或临床诊断病例进行血清学检测,核实诊断,为乙脑疫情的防控提供科学依据。[方法]用酶联免疫法(ELISA)对血清和/脑脊液标本进行乙脑IgM抗体检测。[结果]2007～2009年共检测乙脑疑似或临床诊断病例62例,乙脑IgM阳性43例,阳性率69.35%。送检病例主要集中在10岁以下儿童,各区县均有发病,大多分布于农村或城乡结合部,均为散发,发病高峰在8月份。[结论乙脑是引起广元市儿童病毒性脑炎的主要疾病,应加强监测,做好农村和城乡结合部儿童乙脑疫苗接种工作,加强环境治理,在夏、秋季节加强灭蚊、防蚊措施,科学防控乙脑。     

2种登革热抗体检测试剂应用评价

[目的]探讨酶联免疫吸咐试验(EIJSA)、快速免疫层析法(ICT)检测试剂检测登革病毒(DV)抗体的敏感性、特异性及优缺点。[方法]用ELISA及ICT试剂同时检测来自登革热疫区入境人员血清标本的DV-IgM、IgG抗体,比较检测结果。[结果]用ELISA检测91份来自登革热疫区但无登革热体征的入境人员血清DV-IgG抗体,阳性59份,阳性率64．8％；对59份DV-IgG抗体阳性标本采用ICT法检测DV-IgM、IgG抗体,结果检出4份DV-IgM阳性,未检出DV-IgG阳性。ICT法检测181份血清标本DV-IgM、IgG抗体,检出12份DV-IgG阳性,阳性率6．63％；2份DV-IgM阳性,阳性率1．10％；其中44份血清标本采用ICT试剂不同批号检测DV-IgM、IgG抗体,批号为10014c- 12405的检出DV-IgM阳性7份,未检出DV—103阳性；批号为10014c一24505的检出4份DV-IgG阳性,1份DV-IgM阳性。[结论]2种试剂的敏感性和特异性及不同批次之间的稳定性有待进一步论证。