微卫星不稳定性的检测与胃癌

微卫星不稳定性是指基因组中简单重复序列的增加或丢失。许多肿瘤中存在微卫星不稳定性现象。胃癌是常见的恶性肿瘤 ,其发病机理较复杂 ,涉及一系列遗传学改变。近年来对微卫星不稳定性的研究为胃癌发生的分子学研究开辟了新途径     

微卫星不稳定性的检测与胃癌

微卫星不稳定性是指基因组中简单重复序列的增加或丢失，许多肿瘤中存在微卫星不稳定性现象，胃癌是常见的恶性肿瘤，其发病机理较复杂，涉及一系列遗传学改变，近年来对微卫星不稳定性的研究为胃癌发生的分子学研究开辟了新途径。     

消化系癌的微卫星不稳定性研究

遗传物质的不稳定性可导致肿瘤的发生，晚近研究发现，微卫星不稳定性参与了消化系癌的发生，是消化系癌发生、发展的一种新机制。本文对消化系癌的微卫星不稳定性作一综述。     

鼻咽癌微卫星不稳定性初步探讨

目的探讨鼻咽癌的微卫星不稳定性(MSI)。方法随机抽取经病理确诊的鼻咽癌初治病例82例,其中,未分化癌2例,其余全为低分化鳞癌。按2008分期标准,Ⅰ期1例,Ⅱ期10例,Ⅲ期30例,Ⅳ期41例。取鼻咽癌组织和口腔脱落细胞,Chelex-100法提起DNA,应用AmpFlSTR Identilifiler系统,用多重聚合酶链式反应(PCR)方法对15个常染色体基因(D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA)进行扩增,扩增产物经电泳分离和激光扫描分析,STR基因座检测,确定基因分型,是否存在变异。结果 82例鼻咽癌石蜡组织与口腔脱落细胞基因型分析对比,6例检测出鼻咽癌的MSI,占7.32%。1例为两个基因位点MSL,5例为单个基因位点MSL。其中D18S51出现MSI共2例,D16S539出现MSI共5例。Ⅱ～Ⅳ期都有MSI发生,Ⅱ期1例,Ⅲ期1例,Ⅳ期4例。不同分期的基因位点变异情况用Kruskal-Wallis H法分析P>0.05,两类变异位点出现情况比较的McNemar检验P>0.05,均无显著相关性。结论鼻咽癌存在MSI现象,可见于鼻咽癌的各期,呈散在分布,是否与鼻咽癌预后相关尚需进一步探讨。     

消化系癌的微卫星不稳定性研究

遗传物质的不稳定性可导致肿瘤的发生，晚近研究发现，微卫星不稳定性参与了消化系癌的发生，是消化系癌发生、发展的一种新机制。本文对消化系癌的微卫星不稳定性作一综述。     

微卫星不稳定性在胃癌组织中的表达

目的 研究微卫星在胃癌发生中的作用及其与胃癌临床病理特征之间的关系。方法 采用PCR、PCR-变性聚丙烯酰凝胶及银染法检测38例胃癌及相应的22例癌旁肠化生组织的MSI。结果 胃癌MSI阳性率为39．5％（15／38），DIS 123和BAT 26的MSI阳性率略高于其它位点，癌旁肠化生组织MSI阳性率为27．3％（6／22），6例MSI阳性肠化生标本对应的胃癌组织均为MSI—H，MSI与胃癌的分化程度和发生部位有关。结论 肠化生组织中MSI的进行积累可能在一部分胃癌的发生中起作用，NSI可能是胃癌的早期发展过程。     

胃肠多重癌微卫星不稳定性的研究

目的　探讨胃肠多重癌发生的分子诊断标志物。方法　用 PCR方法对 1 5例胃肠多重癌患者术后所得肿瘤进行微卫星不稳定性 ( MSI)的检测。结果　 1 5例胃肠多重癌中 ,9例胃癌 MSI阳性 ,阳性率为 6 0 .0 % ( 9/1 5) ;1 1例肠癌 MSI阳性 ,阳性率为 81 .2 % ( 1 1 /1 5)。而 1 5例单纯胃癌 MSI阳性表达率仅为 1 3.3% ( 2 /1 5) ,1 5例单纯肠癌 MSI阳性表达率为 2 0 .0 % ( 3/1 5)。多重癌与单纯癌相比有非常显著性差异 ( P<0 .0 0 1 )。结论　胃肠肿瘤 MSI的表达可以作为其多重癌发生的有用的分子诊断标志物 ,对 MSI表达阳性的胃肠肿瘤患者 ,应警惕多重癌发生的可能性。     

程序性死亡配体-1表达与微卫星不稳定性胃癌患者预后的关系

目的 观察微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)胃癌患者癌组织程序性死亡配体-1(programmed death-ligand 1, PD-L1)表达变化,探讨其与MSI胃癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 108例胃癌患者均行胃癌根治术,采用免疫组织化学法检测胃癌组织PD-L1阳性表达及错配修复蛋白表达情况,根据错配修复蛋白表达情况分为MSI组28例和非MSI组80例,比较2组患者胃癌组织PD-L1阳性表达率及不同临床病理特征的MSI胃癌患者癌组织PD-L1阳性表达率。随访3年,采用Kaplan-Manier生存曲线分析PD-L1阳性与阴性表达的MSI胃癌患者术后3年总生存率;绘制ROC曲线,评估癌组织PD-L1表达预测MSI胃癌患者术后3年预后不良的效能。结果 108例胃癌患者癌组织PD-L1阳性表达率为43.52%;MSI胃癌患者28例,发生率为25.93%。MSI组PD-L1阳性表达率(60.71%)高于非MSI组(37.50%)(χ²=4.547,P=0.033);临床分期Ⅲ～Ⅳ期(81.25%)、有淋巴结转...     

卵巢癌组织17号染色体位点的微卫星不稳定性的研究

目的 探讨卵巢癌组织微卫星不稳定性（Microsatellite Instability,MIN)的表现。方法 在23例卵巢癌新鲜组织和自身癌旁正常组织的DNA中,用聚合酶链反应（PCR）扩增17号染色体上5个微卫星位点,用单链构象多态性（Single Strand Conformation Polymorphism,SSCP)分析法检测微卫星不稳定性（MIN）,并用银染方法显示结果。结果 在23例卵巢癌组织中均有不同程度的MIN发生,其中浆液性卵巢癌阳性率明显高于其他类型卵巢癌;Ⅲ-Ⅳ期肿瘤微卫星不稳定性高于Ⅰ－Ⅱ期肿瘤。在17号染色体长臂上的3个微卫星位点D17S855、D17S806和D17S579的MIN的发生率分别为4／23、7／23、6／23,短臂上2个位点D17S513和TP53的MIN的发生率分别为2／23和4／23,长臂的阳性率明显高于短臂,表明长臂比短臂更不稳定。有4例病例在短臂和长臂处均出现MIN,表明17号染色体的长臂和短臂出现MIN是卵巢癌普遍发生的现象。结论 17号染色体定位于BRCA1附近的3个微卫星位点以及p53附近的微卫星位点均频繁地出现MIN。证实了频繁发生微卫星不稳定的染色体区域附近,可能存在抑癌基因,并且有可能引起抑癌基因功能的丧失。位于端粒处的D17S513发生MIN,可以推测在端粒至p53的区域可能存在一个新的抑癌基因。     

食管癌组织3p、18q位点微卫星DNA序列不稳定性的研究

目的:探讨微卫星DNA序列不稳定性(M SI)表达水平与人食管癌发生及其临床病理特征的关系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对30例人食管癌中M SI表达情况进行研究。结果:D3S1067位点M SI发生检出频率较高,为26.7%(8/30);D18S58位点M SI阳性率为20%(6/30)。有18对组织在D3S1067和D18S58两个位点均未检出M SI。食管癌M SI多发生在3p位点,尤其是在3p14～3p21区段。食管鳞癌组织中M SI阳性为26.1%(6/23),差异有显著性(P0.05)。结论:食管癌在3p和18q染色体位点均存在微卫星不稳定现象;D3S1067和D18S582个位点上M SI与食管癌的临床病理类型均相关:D3S1067位点M SI与食管鳞癌的发生关系密切,D18S58与食管小细胞癌的发生关系密切;M SI也许可做为临床筛查恶性肿瘤高危人群的分子手段,具有潜在的应用前景。     

胃癌微卫星不稳定性与幽门螺杆菌感染的关系

目的　研究胃癌中幽门螺杆菌 (helicobacterpylori,HP)感染与微卫星不稳定性 (microsatelliteinstablility ,MSI)的关系 ,探讨HP感染致胃癌发生的机制。方法　应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染及Warthin Starry嗜银染色 (W S染色 ) ,分别对 18例轻度慢性浅表性胃炎、5 2例胃癌 (19例乳头状及管状腺癌、17例低分化腺癌、16例黏液腺癌 )进行MSI及HP感染情况的研究。结果　各型胃癌MSI阳性率及HP感染率均明显高于轻度慢性浅表性胃炎组 (P <0 0 5 ) ;35例HP感染阳性胃癌组MSI表现阳性 19例 ,阳性率5 4 3% ,2 2例HP感染阴性者MSI表现阳性 6例 ,阳性率 2 7 3% ,两者比较差异不显著 (P >0 0 5 )。结论　MSI及HP感染在胃癌发生中均有一定作用 ,但HP感染诱发胃癌可能不是通过MSI来实现。     

微卫星不稳定检测在新疆地区人群HNPCC家系筛查中的应用

目的通过微卫星不稳定性(MSI)检测在中国新疆地区人群遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系筛查,为临床筛查提供相关依据。方法通过聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对新疆地区的HNPCC家系组(A组12例)、可疑HNPCC家系组(B组10例)及散发型大肠癌(C组20例)进行检测及分析。结果 HNPCC家系、可疑HNPCC家系组及散发型大肠癌高度微卫星不稳定(MSI-H)情况分别为83.3%、50.0%、10.0%,HNPCC家系、可疑HNPCC家系组分别较散发型大肠癌高度微卫星不稳定情况高(P<0.05),差异有统计学意义。结论 MSI与HNPCC情况高度相关,作为HNPCC筛查的重要手段,对指导临床有重要意义。     

微卫星不稳定性与卵巢癌的初步研究

目的检测微卫星不稳定与卵巢癌的关系。方法收集卵巢癌患者及对照组的血液标本,提取循环血DNA,设计特异性引物,采用PCR-SSCP及测序分析的方法检测卵巢癌患者循环血中微卫星不稳定性与卵巢癌易感性的关系,分析微卫星不稳定性与卵巢癌患者的病理类型、临床病理分期等相关性。结果卵巢癌组中浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、子宫内膜样癌、库肯勃瘤及其他类型发生微卫星不稳定的频率相比较差异具有显著性(P0.05)。微卫星不稳定在早期和晚期中相比较差异具有显著性(χ2=18.59,P0.05)。91例卵巢癌患者中发生微卫星不稳定的频率为47.25(43/91),良性肿瘤和正常人血中未检测到微卫星不稳定性的发生。结论卵巢癌患者外周静脉血循环DNA中存在微卫星不稳定性;微卫星不稳定与卵巢癌病理类型、临床病理分期均有关;微卫星不稳定主要发生在卵巢恶性肿瘤中,良性肿瘤及正常人中不存在微卫星不稳定。     

胃蛋白酶原亚群测定对胃癌早期诊断预测的研究

目的:研究血清胃蛋白酶原Ⅰ,Ⅱ含量变化与胃癌发生及复发的关系,探讨血清胃蛋白酶原Ⅰ,Ⅱ作为胃癌早期诊断标志物的可能性。方法:应用放射免疫分析方法测定非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃癌及胃溃疡糜烂患者胃蛋白酶原Ⅰ,Ⅱ的含量及其比值的变化。结果:与非萎缩性胃炎组相比,萎缩性胃炎和胃癌组血清胃蛋白酶原Ⅰ水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。胃溃疡糜烂组胃蛋白酶原Ⅰ水平高于非萎缩性胃炎组,但2组差异无统计学意义(P>0.05)。胃蛋白酶原Ⅱ水平在4组间差异均无统计学意义(P>0.05)。萎缩性胃炎组和胃癌组胃蛋白酶原Ⅰ,Ⅱ比值与非萎缩性胃炎组相比差异有统计学意义(P<0.05)。萎缩性胃炎和胃癌组胃蛋白酶原Ⅰ,胃蛋白酶原Ⅰ与Ⅱ比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。与非萎缩性胃炎组和胃溃疡组相比,萎缩性胃炎组和胃癌组胃蛋白酶原Ⅰ<70μg/L和比值<3患者出现概率增高(P>0.05)。结论:胃蛋白酶原Ⅰ,Ⅱ值及比值下降与胃癌发生及复发密切相关,对胃癌的早期诊断具有重要的临床意义。     

Detection of a novel panel of 24 genes with high frequencies of mutation in gastric cancer based on next-generation sequencing

BACKGROUNDGastric cancer is a leading cause of cancer-related mortality worldwide. Many somatic mutations have been identified based on next-generation sequencing; they likely play a vital role in cancer treatment selection. However, next-generation sequencing has not been widely used to diagnose and treat gastric cancer in the clinic.AIMTo test the mutant gene frequency as a guide for molecular diagnosis and personalized therapy in gastric cancer by use of next-generation sequencing.METHODSWe constructed a panel of 24 mutant genes to detect somatic nucleotide variations and copy number variations based on a next-generation sequencing technique. Our custom panel included high-mutation frequency cancer driver and tumour suppressor genes. Mutated genes were also analyzed using the cBioPortal database. The clinical annotation of important variant mutation sites was evaluated in the ClinVar database. We searched for candidate drugs for targeted therapy and immunotherapy from the OncoKB database.RESULTSIn our study, the top 16 frequently mutated genes were TP53(58%), ERBB2(28%), BRCA2 (23%), NF1 (19%), PIK3CA (14%), ATR (14%), MSH2 (12%), FBXW7 (12%), BMPR1A (12%), ERBB3 (11%), ATM (9%), FGFR2 (8%), MET (8%), PTEN (6%), CHD4 (6%), and KRAS (5%). TP53 is a commonly mutated gene in gastric cancer and has a similar frequency to that in the cBioPortal database. 33 gastric cancer patients (51.6%) with microsatellite stability and eight patients (12.5%) with microsatellite instability-high were investigated. Enrichment analyses demonstrated that high-frequency mutated genes had transmembrane receptor protein kinase activity. We discovered that BRCA2, PIK3CA, and FGFR2 gene mutations represent promising biomarkers in gastric cancer.CONCLUSIONWe developed a powerful panel of 24 genes with high frequencies of mutation that could detect common somatic mutations. The observed mutations provide potential targets for the clinical treatment of gastric cancer.