放射线诱导肺腺癌细胞增殖凋亡

 目的 观察人肺腺癌细胞和肺纤维母细胞照射后死亡的特征。方法 HE染色观察照射后死亡细胞的形态学改变,Comet检测凋亡细胞内DNA双链断裂,流式细胞仪检测照射后细胞周期的改变及凋亡发生时机。结果 肺腺癌细胞照射后出现凋亡,凋亡发生于细胞渡过照射诱导的C2停滞后的G1停滞期;肺纤维母细胞照射后仅见到坏死改变。结论 凋亡是肺腺癌细胞照射后增殖死亡的表现形式之一,增殖凋亡的发生具有剂量和时间依赖关系。而增殖坏死可能是肺纤维母细胞照射死亡的主要形式,揭示了不同种类细胞增殖死亡的复杂性和多样性。     

Ad-Gax转染诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制

背景与目的细胞凋亡与肺癌的发生发展密切相关,诱导肺癌细胞凋亡是肺癌治疗的一大策略。本研究探讨生长终止特异性同源盒Gax(growth arrest-specific homeobox)基因转染对人肺腺癌A549细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染A549细胞。以透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)观察转染前后A549细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法测定细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后A549细胞凋亡现象明显增强。无Ad-Gax转染时,无或仅见极少量的TUNEL染色阳性细胞;Ad-Gax转染后,TUNEL染色阳性细胞显著增多,尤其在转染后24小时更明显。Ad-Gax转染后12h、24h和48h细胞凋亡率分别为12.57%、17.29%和15.03%,与未转染组(0.25%)比较有显著性差异(χ2值分别为7.357、11.126、9.943,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bcl-2蛋白平均积分光密度值(AOD)分别是2.02±0.07、1.79±0.02、1.25±0.51和1.21±0.24,转染组Bcl-2蛋白AOD随转染时间的延长逐渐降低,与未转染组相比呈显著性差异(t值分别为6.651、7.089、7.438,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bax蛋白AOD分别是3.12±0.42、4.49±0.61、4.24±0.37和3.95±0.43,转染组Bax蛋白AOD升高,与未转染组相比差异显著(t值分别为7.469、7.287、6.473,P值均小于0.01)。转染组A549细胞凋亡率与Bcl-2/Bax比值呈负相关关系(r=-0.49,P<0.01)。结论Ad-Gax转染可诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2/Bax比值实现的。     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

雷公藤甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:探讨雷公藤甲素(TP)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法:体外细胞培养,待细胞处于对数生长期时加入4.0μg/mLTP处理24和48h;Western blot检测Sur-vivin、Bcl-2和Fas蛋白质表达;Caspase检测试剂检测Caspase-3和Caspase-9活性。结果:4.0μg/mLTP呈时间依赖性降低Survivin和Bcl-2的表达(与对照组比较P<0.05),升高Fas的表达(与对照组比较P<0.05),TP作用后Caspase-3和Caspase-9活性增强,作用24、48h后Caspase-3活性分别为1.32±0.07和1.46±0.03,Caspase-9活性分别为2.36±0.06和2.41±0.03,与对照组比较,P<0.01。结论:降低Survivin和Bcl-2表达,促进Fas表达可能是TP诱导A549细胞凋亡的机制之一。     

HSV1—TK转染人肺腺癌细胞A549的实验研究

目的体内外观察HSV     

肉桂酸对人肺腺癌细胞诱导分化的实验研究

目的：研究肉桂酸对人肺腺癌细胞的诱导分化作用。方法：在细胞培养中,用不同浓度的肉桂酸处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,进行细胞群体增殖动力学检测,流式细胞计量术（ＦＣＭ）测定来观察诱导分化作用效果。结果：肉桂酸能明显抑制Ａ５４９细胞增殖和促进细胞分化（Ｐ〈０．０５）;细胞在软琼脂中的集落形成率明显下降（Ｐ〈０．０５）;ＦＣＭ显示细胞周期移行被阻滞于Ｇ１／Ｇ０期。结论：肉桂酸具有使人肺腺癌细胞逆转的作用,是     

薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的　探讨薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法　应用形态学方法 ,流式细胞术 (FACS) ,DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生 ,应用RT PCR检测凋亡相关基因Fas与FasL的变化。结果　薏苡仁酯对人宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质碎裂 ,DNA凝胶电泳显示清晰的DNA梯形条带 ,FACS检测到凋亡率最高为 13%。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现 ,坏死与凋亡共存。在薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强 ,而FasL转录水平减低。结论　除了坏死 ,凋亡也为薏苡仁酯抑癌的机制之一。薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡可能与Fas基因与FasL基因表达有关。     

蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人肺腺癌细胞的作用及其机制。方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;瑞氏 吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体跨膜电位;Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果 (1) 蟾蜍灵明显抑制A549细胞增殖,48h及72h的IC50分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L。(2) 蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪检测到的亚二倍体凋亡峰。(3) 蟾蜍灵可以明显降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)。(4) 蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3。结论 线粒体途径是蟾蜍灵诱导肺腺癌A549细胞凋亡的主要通路之一。     

人肺腺癌A549/DDP耐药细胞减弱顺铂诱导的细胞凋亡

目的：探讨人肺腺癌Ａ５４９／ＤＤＰ耐药细胞的多药抗药机理。方法;应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、原位ＤＮＡ断裂点的末端标记法观察细胞亡的状况,用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因的表达。结果：癌细胞在顺铂作用下产生了典型的凋亡形态学改革。３μｇ／ｍｌ,５μｇ／ｍｌ,７μｇ／ｍｌ顺铂作用４８小时,Ａ５４９细胞ＤＮＡ裂解片断呈现典型的阶梯状排列条喧,而在５μｇ／ｍｌ、７μｇ／ｍｌ顺铂作用４８小时,Ａ５４９／     

可溶性FasL联合survivin RNA干扰诱导肺腺癌细胞凋亡

目的：探讨可溶性FasL（sFasL）联合survivin RNA干扰对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法：构建survivin特异RNA小干扰表达载体，DNA测序，转染A549细胞。G418（geneticin）筛选稳定表达survivin RNA小干扰细胞株，荧光实时定量RT-PCR、免疫印迹（Western blot）和免疫组化法检测survivinm RNA和蛋白表达。sFasL作用于转染后细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测细胞活性和凋亡率。结果：成功构建survivin-siRNA表达载体，筛选出稳定表达单克隆细胞。SurvivinmRNA和蛋白表达分别下降76．4％（P〈0．01）和84．5％，免疫组化也显示survivin下调。sFasL联合survivinRNA干扰细胞，光密度值在各时间点较siRNA组、sFasL组和对照组均明显降低（P〈0．01），抑制率增加；凋亡率较siRNA组、sFasL组和对照组明显增加（P〈0．01）。结论：SurvivinRNA干扰表达载体可降低survivin的表达。sFasL联合survivinRNA干扰较单用sFasL或survivin RNA干扰能更有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖，促进凋亡。     

多西他赛诱导HL60细胞凋亡的实验研究

目的:探讨多西他赛诱导HL60细胞凋亡的作用机制。方法:应用形态学方法、流式细胞术、DNA凝胶电泳和Annexin V标记等方法检测细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2和c-myc表达的变化。结果:多西他赛对HL60细胞的生长有明显的抑制作用。多西他赛使细胞分裂阻滞于G2M期,并诱导肿瘤细胞发生凋亡:具有典型的凋亡形态,细胞固缩,核染色质呈周边凝聚,形成凋亡小体,胞膜完整;DNA凝胶电泳呈凋亡特有的ladder带;FCM检测出现Sub-G1峰,0·1μmol/L多西他赛作用72h的apo%最高为33·46%;凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强,bcl-2和c-myc无明显变化;结论:多西他赛可诱导HL60细胞凋亡,可能主要与促进Fas基因表达有关。     

多西紫杉醇对胃癌细胞作用及其机制的研究

目的:研究多西紫杉醇对人胃癌中分化细胞株SGC7901的作用效果及机制。方法:MTT法检测多西紫杉醇对胃癌细胞株SGC7901的增殖抑制作用。AnnexinV方法检测药物作用后胃癌细胞的凋亡。PI染色法检测凋亡晚期的胃癌细胞。采用流式细胞仪检测多西紫杉醇作用前后细胞凋亡相关分子Fas蛋白、Bcl2蛋白表达水平的变化。结果:0.92、3.7、14.8、59.2μg/mL多西紫杉醇作用于SGC7901细胞72h,抑制率分别为13.3%、21.6%、57.5%、61.0%。多西紫杉醇可诱导胃癌细胞株SGC7901发生细胞凋亡。多西紫杉醇使SGC7901凋亡分子Fas表达增加,作用前后分别为(26.5±7.2)%、(37.9±7.0)%;多西紫杉醇作用SGC7901前后Bcl2表达分别为(38.9±9.1)%、(31.2±5.6)%,差异无显著性。结论:多西紫杉醇对胃癌中分化细胞株SGC7901生长有明显的抑制作用,可诱导胃癌细胞系SGC7901凋亡,凋亡作用的发生可能与多西紫杉醇诱导Fas分子表达有关。     

多西他赛诱导HL60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨多西他赛诱导HL60细胞凋亡的作用机制。方法：应用形态学方法、流式细胞术、DNA凝胶电泳和Annexin V标记等方法检测细胞凋亡的发生，应用RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2和c-myc表达的变化。结果：多西他赛对HL60细胞的生长有明显的抑制作用。多西他赛使细胞分裂阻滞于G2M期，并诱导肿瘤细胞发生凋亡：具有典型的凋亡形态，细胞固缩，核染色质呈周边凝聚，形成凋亡小体，胞膜完整；DNA凝胶电泳呈凋亡特有的ladder带；FCM检测出现Sub-G1峰，0．1μmol／L多西他赛作用72h的apo％最高为33．46％；凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强，bcl-2和c-myc无明显变化；结论：多西他赛可诱导HL60细胞凋亡，可能主要与促进Fas基因表达有关。     

外源性p27kipl对肺癌细胞系A549的影响

目的：研究外源性p27基因对肺癌细胞系A549的影响。方法，将p27基因重组入腺病毒表达载体pAdCMV中，得到重组腺病毒，感染人肺癌细胞系A549，用激光共聚焦，打点杂交方法检测p27基因在细胞感染前后的表达情况，应用MTT、流式细胞术、细胞软琼脂克隆形成等方法研究p27基因对A549细胞周期，形态、生长等特性的影响。结果：转染p27基因的A549细胞内确有外源性p27基因的表达，p27蛋白表达量明显提高，转染p27基因可使549细胞发生凋亡并发生G1期阻滞。结论：p27基因可诱导肺癌细胞出现凋亡及周期阻滞，为肺癌的基因治疗提供了一个新的思路。     

survivin和caspase-3在非小细胞肺癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系

背景与目的survivin是新近发现的凋亡抑制因子,在肿瘤的发生中起重要作用。survivin可直接抑制caspase3和caspase7的活性。本研究旨在探讨survivin和caspase3在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及其与肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测88例NSCLC患者手术标本和29例正常肺组织标本中survivin和caspase3的表达,分析其与NSCLC临床病理参数之间的关系,同时用原位末端标记法(TUNEL)标记肺癌组织中的凋亡细胞。结果88例NSCLC患者标本中survivin的阳性表达率为61.4%(54/88),明显高于正常肺组织(13.8%,4/29)(P<0.01);survivin在NSCLC中的表达与肿瘤的组织学分型、病理分级和淋巴结转移均无明显相关性(P>0.05),但与TNM分期有相关性(P<0.05)。caspase3在正常肺组织和NSCLC中阳性表达率分别为89.7%(26/29)和73.9%(65/88),但二者差异无显著性(P>0.05);caspase3在NSCLC中的阳性表达率随肿瘤的病理分级增高而降低,差异有显著性(P<0.05)。survivin蛋白阳性表达的肺癌组织中平均细胞凋亡指数(1.63±0.58)明显低于阴性表达组(3.29±0.76)(P<0.05),caspase3阳性组平均细胞凋亡指数(2.42±0.59)明显高于阴性组(1.28±0.65)(P<0.05);survivin和caspase3呈负相关(P<0.05)。结论凋亡抑制蛋白survivin在NSCLC组织中高表达,caspase3与survivin的表达呈负相关,survivin可能通过抑制caspase3的激活来发挥其抑制细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷对人肺癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对人肺癌的潜在性治疗作用及可能的机制。方法 选用人肺癌细胞株ＧＬＣ－８３,运用细胞培养法、ＭＴＴ法、流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞生长曲线、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。结果 三氧化二砷可明显抑制ＧＬＣ－８２细胞的增殖,其抑制作用具有时－效和量－效关系。当４．０μｍｏｌ／Ｌ三氧化二砷处理ＧＬＣ－８２细胞９６小时,增殖抑制率达８１．０５％,ＦＣＭ检测肿瘤细胞ＤＮＡ含量,观察到三氧化二砷ＧＬＣ－８２细胞周期阻滞于Ｇ２／Ｍ期,细胞周期进程变慢,同时出现剂量依赖性Ｇ１峰。结论 三氧化二砷能有效地抑制人肺癌细胞株ＧＬＣ－８２的增殖,其可能的机制与三氧化二砷使细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期并诱导其调亡有关。     

Ⅳ型胶原对耐顺铂人肺腺癌细胞化疗诱导凋亡的影响

目的:探讨细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)成分中Ⅳ型胶原对耐药NSCLC细胞的药物敏感性和凋亡的影响,及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3′kinase,PI3K)在其信号转导通路中的作用。方法:体外培养顺铂耐药人肺腺癌细胞株A549(A549/DDP),应用MTT比色法测定细胞增殖抑制率;通过细胞粘附实验观察细胞粘附状况;流式细胞仪检测DDP作用前后Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,CⅣ)及PI3K抑制剂LY294002对细胞凋亡的影响。结果:CⅣ组及多聚赖氨酸(polylysine,PLL)组与不包被组相比,细胞粘附明显增加(P<0.001);而纤连蛋白(fibronectin,FN)的粘附与不包被组相比无明显差异(P>0.05)。CⅣ包被后DDP对A549/DDP的IC50由169.9μmol/L升高至258.3μmol/L,再联合LY294002则DDP对A549/DDP的IC50降至87.1μmol/L;CⅣ明显降低DDP引起的A549/DDP细胞凋亡,LY294002则可阻断CⅣ的这种保护作用(均为P<0.05)。结论:Ⅳ型胶原可能参与NSCLC耐药形成,PI3K可能是其信号转导通路之一。     

凋亡相关基因产物Fas/APO-1和Bcl-2蛋白在肺癌组织中的表达及意义

目的　探讨凋亡相关基因Fas/APO1和Bcl2在肺癌发生发展中的作用。方法　采用免疫组织化学方法对65例肺癌组织和46例远离肺癌正常肺组织Fas/APO1和Bcl2蛋白的表达进行检测。结果　肺癌组织Fas/APO1蛋白阳性表达率(56.92%)明显低于正常肺组织的阳性表达率(82.61%)(P<0.01),而Bcl2蛋白阳性表达率(46.15%)明显高于正常肺组织的阳性表达率(6.52%)(P<0.01)。结论　Fas/APO1与Bcl2基因可能参与了肺癌的发生和发展     

外源性p16基因对wtp53型人肺腺癌细胞生长的影响

目的 探讨Ｐ１６对人肺腺癌的作用及Ｐ１６基因治疗肺癌的可能性。方法 运用分子克隆技术构建重组人Ｐ１６基因表达载,以电穿孔法将Ｐ１６基因导入到该基因缺失的ｗｔｐ５３型的人肺腺癌Ａ５４９和Ｈ４６０细胞中,得到稳定表达Ｐ１６的人肺腺癌细胞。详细研究Ｐ１６基因对ｗｔｐ５３型人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用。结果 导入Ｐ１６基因能使人Ａ５４９和Ｈ４６０细胞生长速度较对照细胞明显减慢,细胞周期阻滞在Ｇ１