Fas通路的激活促进结肠癌细胞迁移侵袭

目的探讨Fas通路激活对结肠癌细胞SW480和DLD1产生的非凋亡效应。方法流式细胞学检测结肠癌SW480及DLD1细胞系的Fas、FasL、抗凋亡蛋白c-FLIP、Bcl-2、Bcl-xl、XIAP等在细胞膜上的表达水平;对结肠癌SW480及DLD1细胞系予以梯度浓度（0ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml）的FasL刺激,计数并比较各组细胞的增殖速率变化;对结肠癌SW480及DLD1细胞系予以低剂量FasL处理,分别对实验组和对照组进行细胞增殖速率及迁移侵袭能力测试,探讨低剂量FasL刺激对结肠癌细胞活力的影响;稳定敲除SW480和DLD1细胞的Fas基因表达,重复上述实验,以明确低剂量FasL刺激对结肠癌细胞活力的影响是否依赖于Fas通路的激活。结果 SW480及DLD1细胞系中均可检测到中等程度的Fas表达及抗凋亡蛋白FLIP、Bcl-2的表达,未检测到FasL表达,在SW480中可测到Bcl-xl表达;低剂量FasL不影响结肠癌SW480和DLD1细胞的增殖速率,但可促进两种细胞的迁移侵袭能力;稳定敲除Fas基因后,低剂量FasL对结肠癌细胞迁移侵袭能力的促进作用受到抑制。结论低剂量FasL可激活Fas通路的非凋亡途径从而增强结肠癌SW480和DLD1细胞的迁移侵袭能力。     

奥沙利铂对人结肠癌细胞凋亡及FADD的影响

以不同浓度（0、25、50和100μg/ml）的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株（SW480）,分别于12、24和48 h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）mRNA水平,Western blotting检测FADD蛋白水平。结果奥沙利铂对SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性,SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率呈浓度依赖性的增加（P〈0.05）。不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24 h后,FADD mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性增加。提示奥沙利铂能诱导SW480细胞凋亡,其作用机制可能与其激活凋亡死亡受体途径使FADD表达上调有关。     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480作用的体外实验研究

目的 研究姜黄素促进人结肠癌细胞系SW480凋亡的作用.方法 人结肠癌细胞系SW480与不同浓度的姜黄素共孵育48 h,MTT法检测细胞存活率,并用相差显微镜观察细胞形态学改变.用流式细胞术(检测细胞凋亡相关指标Annexin V/PI)和Ho-echst3258染色检测细胞凋亡.结果 姜黄素能够不同程度地抑制人结肠癌细胞系SW480的生长.姜黄素对SW480细胞的IC50(半数抑制浓度)为65 mg/mL.Hoechst3258荧光染色与流式细胞术分析SW480细胞的结果一致.结论 姜黄素可促进SW480细胞凋亡,为姜黄素治疗结肠癌提供依据.     

芥菜籽提取物对人结肠癌细胞系SW480凋亡的影响

目的观察芥菜籽提取物（MSE）对人结肠癌细胞系SW480细胞凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法采用体外细胞培养技术,用CCK-8法观察MSE对人大肠癌SW480细胞生长的影响;Hoechest3325荧光染色显微镜下观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制。结果在浓度0．2—1．0mg／ml作用24—72h范围内,MSE对SW480细胞增殖具有明显抑制作用（P〈0．01）。24h内其凋亡率随着药物浓度的增加而增加,且逐渐从早期凋亡走向晚期凋亡,呈浓度依赖性;24h内Caspase-3活性较对照组显著提高（P〈0．05）。结论MSE能有效抑制体外培养的人结肠癌细胞SW480的生长,这种抑制作用与MSE促进肿瘤细胞凋亡、激活凋亡蛋白酶Caspase-3的活性有关。     

蜂胶黄酮对人结肠癌细胞PDE4D及Gadd45G基因表达的影响

目的：探讨蜂胶黄酮（PB3A）对人结肠癌SW480细胞生长的抑制作用及机制。方法将培养的人结肠癌SW480细胞分为PB3A组及对照组。 PB3A组予100μg/mL PB3A干预,对照组不干预。干预后两组均培养24 h,倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测细胞磷酸二酯酶4D（PDE4D）、生长阻滞和DNA损伤诱导基因G（ Gadd45G） mRNA和蛋白表达。结果干预后倒置显微镜下可见PB3A组细胞缩小、皱缩、折光性减弱,细胞内出现颗粒状物质;对照组无明显变化。 PB3A组PDE4D mRNA及蛋白表达水平均低于对照组, Gadd45G mRNA及蛋白水平表达均高于对照组（P均＜0．01）。结论 PB3A能抑制SW480细胞生长,诱导其凋亡;其作用机制可能为下调PDE4D mRNA和蛋白表达,上调Gadd45G mRNA和蛋白表达。     

姜黄素抑制k562细胞生长并诱导凋亡机制的研究

目的探讨姜黄素抑制人类红白血病细胞（k562细胞）生长并诱导凋亡的机制及其对细胞凋亡相关基因BCL-XL和BAK表达的影响。方法把不同浓度姜黄素加入k562细胞,流式细胞仪检测其凋亡及其细胞周期的变化,RT-PCR方法检测BCL-XL和BAK mRNA的表达,免疫组化方法检测BCL—XL和BAK蛋白的表达。结果姜黄素可以对k562细胞有较明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖,流式细胞术结果显示姜黄素浓度在100μmol／L时作用24、48h后,凋亡率高于对照组（P〈0．05）;随着姜黄素浓度增加,作用于k562细胞后可以使其倍增时间明显延长,G1期细胞增多,S期细胞减少;RT-PCR结果显示姜黄素能下调k562细胞BCL-XL表达,上调BAK mRNA的表达（P〈0．05）,免疫组化法发现姜黄素可以降低BCL-XL表达,升高BAK的表达（P〈0．05）。结论姜黄素对k562细胞的生长有较明显的抑制作用,且呈一定时间与剂量关系,并促进k562细胞凋亡,可能和下调BCL—XL的表达和上调BAK的表达相关。     

双刺激活化的PBMC和胃泌素拮抗剂合用对结肠癌细胞作用的研究

目的研究胃泌素受体拈抗剂和CD28／CpG ODN活化PBMC在体外对结肠癌细胞株SW480杀伤作用机理。方法用含共刺激活化PBMC或（和）C1-988（胃泌素受体拈抗剂）的100mL／L胎牛血清的RPM1 1640培养基培养细胞，测生长曲线；MTY法检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用，并用电镜观察效应细胞杀伤的结肠癌细胞超微结构及用流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡指数。结果胃泌素拮受体抗剂本身对SW480细胞有一定的杀伤作用（P＜0．05），CD28／CpG ODN共刺激活化PBMC在体外对结肠癌细胞株SW480杀伤作用明显（P＜0．01），胃泌素受体拮抗剂与CD28／CpG ODN共刺激活化PBMC合用，对SW480 CEA的杀伤作用显著大于胃泌素受体拮抗剂本身对SW480细胞杀伤作用（P＜0．01），亦大于单独应用CD28／CpG ODN共刺激活化PBMC对SW480细胞的杀伤作用（P＜0．05），胃泌素受体拮抗剂增加了SW480细胞对共刺激活化PBMC的敏感性。电镜结果显示，效应细胞作用24小时肿瘤细胞就部分发生坏死，部分肿瘤细胞可见凋亡。流式细胞仪检测效应细胞SW480 CEA细胞72小时明显凋亡。结论胃泌素受体拮抗剂与共刺激活化PBMC联合应用，提高了CD28／CpG ODN共刺激活化PBMC对结肠癌细胞SW480的靶向性杀伤作用。活化的淋巴细胞杀伤结肠癌细胞是通过坏死及凋亡实现的。     

苦参碱诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡及机制探讨

目的观察苦参碱（Ma）诱导结肠癌SW1116细胞凋亡的作用，并探讨其机制。方法采用不同浓度的Ma处理SW1116细胞48h，并设正常对照组，MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，半定量RT-PCR检测Fas和Bax mRNA表达水平。结果与正常对照组相比，不同浓度Ma处理的SW1116细胞抑制率、胞凋亡率显著升高（P均〈0.01），Fas和Bax mRNA表达上调（P〈0.05，P〈0.01）。结论Ma可诱导SW1116细胞凋亡，其作用机制可能与上调Fas和Bax mRNA表达有关。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响

目的探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响及抗动脉粥样硬化可能的分子机制。方法体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞，应用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术，测定罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体mRNA和蛋白表达的剂量、时间依赖的影响。结果基础状态下，血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体均有少量的表达。血管紧张素Ⅱ显著上调血管紧张素Ⅱ1型受体（P〈0.01）和下调2型受体的表达（P〈0．05）。浓度依赖实验表明，不同浓度罗格列酮（20、30和50μmol／L）干预12h均显著下调血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），上调2型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01和0．05）。时间依赖实验表明，30μmol／L的罗格列酮干预后，6h即出现明显的干预效应，24h时下调血管紧张素Ⅱ1型受体和上调2型受体mRNA和蛋白的作用最大，与血管紧张素Ⅱ组比差异有显著性（P〈0．01）。结论罗格列酮可呈浓度依赖和时间依赖性地下调血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达，上调血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达，这可能是过氧化体增殖物激活型受体7激动剂罗格列酮发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用的重要机制。     

结肠癌组织MTH1表达及下调MTH1通过诱导自噬逆转结肠癌细胞对安罗替尼耐药性研究

目的探究MutT同源蛋白1(MutT homolog protein 1,MTH1)在结肠癌组织中的表达情况,以及下调MTH1对人结肠癌细胞SW480安罗替尼耐药的作用及其与自噬的关系。方法免疫组化染色法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中MTH1表达;通过低剂量反复刺激法构建安罗替尼的SW480耐药细胞株(SW480/Anl细胞);利用RNA干扰技术下调SW480/Anl细胞中MTH1表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率;免疫荧光染色检测细胞中LC-3表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测MTH1蛋白及自噬蛋白表达水平。结果结肠癌组织中MTH1表达水平较癌旁组织显著升高(P0.05);经不同浓度安罗替尼处理后,SW480/Anl细胞存活率较SW480细胞显著升高(P0.05)。与对照组比较,转染siRNA-MTH1后SW480/Anl细胞中MTH1 mRNA与蛋白表达显著下降(P0.05),在安罗替尼(浓度为25、50、100、150、200μmol/L)作用下细胞存活率均显著下降(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),LC3荧光染色较弱,P62蛋白表达水平显著增加,同时LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 MTH1在结肠癌组织中高表达,下调MTH1表达可抑制自噬的发生,从而逆转SW480细胞对安罗替尼的耐药。     

雌激素受体β过表达对大肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的观察雌激素受体β（ERβ）过表达对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆（SW480-C1-ERβ）。RT—PCR及WesternBlot鉴定ERβ的过表达。以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞（SW480-pEGFP—C1）作为对照,在无雌激素或有雌激素作用的条件下,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT—PCR方法检测凋亡相关基因survivin和Bax表达。结果SW480和SW480-pEGFP—C1细胞中ERβ mRNA和蛋白表达较低,而稳定转染的SW480-C1-ERβ细胞中ERβmRNA和蛋白表达明显增加。在有或无雌激素作用的条件下均可发现,与SW480细胞或SW480-pEGFP—C1细胞比较,SW480-C1-ERβ细胞增殖速度减慢,凋亡率明显增高,survivin表达减低,Bax表达增高;在SW480-C1-ERβ细胞中,有雌激素作用者较无雌激素作用者以上变化更明显。结论ERβ过表达可以同时以配体非依赖性和配体依赖性的方式抑制细胞增殖和增加细胞凋亡,可能与调控凋亡相关基因survivin和Bax表达有关。     

氧化苦参碱对人结肠癌细胞株SW1116细胞周期通路相关调控因子的影响

背景：氧化苦参碱为中药苦参的主要有效成分，研究显示其对结肠癌细胞具有杀伤作用。目的：观察氧化苦参碱对人结肠癌细胞株SW1116细胞周期通路相关调控因子的影响，阐明其抗结肠癌作用的分子机制。方法：分别以2、3、4mg／m1氧化苦参碱干预SW1116细胞24h或48h，以流式细胞仪检测细胞周期，以逆转录聚合酶链反应（RTPCR）和蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白（cyclin）D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）、CDK抑制剂p53、核转录岗子E2F1和S期激酶相关蛋白2（Skp2）mRNA和蛋白水平的表达。结果：氧化苦参碱干预可使SW1116细胞周期阻滞于G0／G1期，cyc1inD1、CDK4、E2F1和Skp2mRNA和蛋白表达显著下降，p53mRNA和蛋白表达显著上升，作用呈剂量和时间依赖性（P〈0．05）。结论：氧化苦参碱可通过影响细胞周期相关通路以抑制人结肠癌细胞增殖。     

siRNA沉默PPARα减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡

背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题。目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用。方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果。经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡。以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响。结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%。稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L。在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg/L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%)。miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显。结论:成功构建了针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关。     

重楼醇提物对恶性胸腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用

目的研究中药重楼醇提物对恶性胸腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用。方法收集25例经病理确诊的恶性胸腹水并分离原代肿瘤细胞，用CCK8法检测原代细胞对重楼醇提物及化疗药的药物敏感性，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测重楼醇提物对凋亡相关蛋白survivin mRNA表达的作用。结果重楼醇提物对人胃癌、肝癌、肺癌、大肠癌等4株细胞系的半数抑制浓度（IC50）平均值为41．13μg/ml，对25例恶性胸腹水中原代肿瘤细胞IC50平均值为82．33μg/ml，两者无显著差异（P〉0．05）。重楼醇提物对大肠癌来源的腹水中原代肿瘤细胞的IC50值显著高于其他组（P〈0．05），对胃癌、肺癌及其他消化道肿瘤来源的胸腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用无明显差异（P〉0．05）。8例对重楼醇提物耐药的原代肿瘤细胞对多西紫杉醇、氟尿嘧啶、顺铂存在交叉耐药，而对化疗药物耐药的原代肿瘤细胞对重楼无交叉耐药。重楼醇提物对部分细胞系及原代细胞中凋亡相关蛋白survivin mRNA有下调作用（P〈0．05）。结论重楼醇提物对恶性胸腹水中原代肿瘤细胞，尤其是对化疗药物耐药的肿瘤细胞仍有一定的抗肿瘤作用。     

C-FLIPsiRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的探讨C-FLIP siRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响。方法常规方法培养大肠癌SW480细胞,待细胞处于对数生长期时,进行转染,分别转染C-FLIP siRNA重组体(观察组)和nonsilencing空载体(NC组),转染后24 h,将细胞传至96孔板中,两组转染细胞各传32孔,每8孔为一组平行孔,分别检测16 h、24 h、48 h、72 h细胞的增殖情况,并检测两种转染细胞中GHR受体mRNA和蛋白的表达情况。结果 C-FLIP siRNA重组体转染率达75%;大肠癌SW480培养后各时间点的吸光度值相比,差异有统计学意义(F=7.329,P=0.016),观察组的吸光度值均小于对照组,并且随着时间的延长,观察组吸光度值增加越来越慢,直至不增加;两组GHR受体蛋白水平相比,对照组高于观察组,差异有统计学意义(t=73.140,P=0.000);GHR mRNA表达观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=12.685,P=0.000)。结论 C-FLIP siRNA重组体能够有效抑制大肠癌细胞株中SW480的增殖。     

PDCD5因子增强顺铂抑制结肠癌细胞生长作用的体内研究

目的通过体内实验研究稳定转染程序性细胞死亡5(PDCD5)因子的结肠癌细胞对顺铂的敏感性,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗结肠癌的可行性。方法稳定转染PDCD5因子的结肠癌细胞SW480/PDCD5、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/Neo及正常结肠癌细胞SW480分别接种到裸鼠皮下,形成皮下移植瘤后,顺铂(10 mg/kg)腹腔内注射,绘制移植瘤生长曲线;组织学观察皮下移植瘤,TUNEL法检测皮下移植瘤的凋亡情况;Western印迹法检测皮下移植瘤caspase-9和caspase-3的表达水平。结果 SW480/PDCD5对顺铂更加敏感,肿瘤体积增加幅度低于SW480和SW480/Neo(P0.05);SW480/PDCD5有更多的细胞出现变性坏死,更多的细胞染色体边集并出现凋亡小体,出现凋亡细胞的比例高于SW480和SW480/Neo(P0.05);SW480/PDCD5中caspase-9和caspase-3的活化片段较SW480和SW480/Neo更多(P0.05)。结论稳定转染PDCD5因子可以增加结肠癌细胞对顺铂的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值。     

巨噬细胞游走抑制因子通过PI3K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞株HT-29增殖和血管生成因子表达

背景：巨噬细胞游走抑制因子（MIF）是-种多功能细胞因子,其在结直肠癌发生、发展中的作用机制尚不明确。目的：探讨MIF是否通过P13K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达。方法：人结肠癌细胞株HT-29分为对照组（RPMI-1640）、重组人MIF（rhMIF）组、PI3K抑制剂LY294002组和LY294002预处理联合rhMIF组,并予相应干预。以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测HT-29细胞增殖状态,分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-8（IL-8）mRNA表达和蛋白分泌,蛋白质印迹法检测Akt和磷酸化Akt（p—Akt）蛋白表达。结果：rhMIF对HT-29细胞具有促增殖作用,能增加细胞VEGF、IL-8 mRNA表达和蛋白分泌,并促进Akt蛋白磷酸化（P＜0．05）;而先予LY294002预处理可显著抑制rhMIF的上述作用．HT-29细胞增殖显著受抑（P＜0．05）,VEGF、IL-8mRNA表达、蛋白分泌以及p-Akt蛋白水平与对照组相比无明显差异。各组总Akt蛋白水平均无明显差异。结论：MIF诱导人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达可能是通过活化PI3K／Akt信号通路实现的。