孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡及Fas mRNA表达的影响

目的研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特(montelukast,MK)对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞(eosinophil,Eos)凋亡和Fas mRNA表达的影响。方法以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度离心法分离并计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞；采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡；通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达。结果孟鲁司特能显著降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量；在孟鲁司特治疗组，嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高，Fas mRNA的表达显著增强，与模型组比较均有显著性差异。结论嗜酸性粒细胞凋亡与Fas mRNA表达增加高度相关；增强气道嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达，促进其凋亡，可能是孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

地塞米松对哮喘豚鼠气道白介素-5、白介素-10mRNA表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：检测地塞米松对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-5（IL-5）mRNA及IL-10 mRNA表达水平及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡率。方法：健康雄性Hartley系豚鼠随机分为地塞米松组、哮喘组和正常对照组。采用原位细胞凋亡（TUNEL）、RTPCR技术检测BALF中EOS凋亡、IL-5 mRNA及IL-10 mRNA表达水平。结果：地塞米松组BALF中的EOS较哮喘组明显下降，EOS凋亡明显上升（P〈0．01）；IL-5 mRNA水平较哮喘组明显下降，IL-10 mRNA水平较哮喘组明显升高（P〈0.05）。结论：地塞米松可以通过减少IL-5 mRNA的表达，增加IL-10 mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升，增加EOS的凋亡。     

异丁斯特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡的作用及机制

目的：研究异丁斯特（Ibudilast）对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS）凋亡的作用及机制。方法：Hartley豚鼠,随机分为正常对照组、哮喘模型组、异丁斯特10、20、30mg／kg组及地塞米松（DXM）给药组。采用卵白蛋白致敏法制备豚鼠哮喘模型。给药后,收集支气管肺泡灌洗液（BLAF）并进行白细胞计数及分类计数;TUNEL技术原位检测EOS凋亡;逆转录．多聚酶链反应（ImPCR）技术检测EOSFasmRNA的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法测定BLAF中粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）及白介素-5（IL-5）的含量。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸粒细胞炎症的抑制作用

目的　研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特 (mon telukast,MK )对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (Eosinophil,Eos)炎症的影响 ,探讨孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的可能机制。方法　以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度分离法分离并计数支气管肺泡灌洗液 (BALF)中不同密度的嗜酸性粒细胞 ;采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡 ;通过ELISA法检测BALF中IL 5的含量 ;采用荧光酶标记法在PharmaciaUnicap 10 0System中测定BALF中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 (ECP)的水平。结果　孟鲁司特能降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量 ;在孟鲁司特治疗组 ,嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高 ,BALF中IL 5和ECP的含量降低 ,与模型组比较差异均有显著性。结论　降低气道IL 5和ECP的水平 ,促进嗜酸性粒细胞凋亡 ,减少嗜酸性粒细胞浸润 ,可能是白三烯受体拮抗剂孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

银杏叶总黄酮对哮喘小鼠模型支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞凋亡的影响

本研究考察了银杏叶总黄酮(FG)对哮喘小鼠模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡的影响。采用卵白蛋白致敏的方法建立小鼠的哮喘模型，雾化给药2周后处死小鼠，收集BALF，白细胞分类计数，纯化细胞后进行AO/EB荧光染色考察FG对EOS凋亡形态的影响，细胞分离后进行流式细胞检测考察FG对EOS凋亡比例的影响。FG可明显减少哮喘小鼠的白细胞总数和EOS数目；FG治疗组EOS凋亡形态的细胞明显增多，凋亡细胞的比例明显增加，与模型组比较有显著性差异。FG能通过诱导EOS的凋亡来减少BALF的EOS数目，可能是FG拮抗哮喘炎症的一个重要机制。     

哮喘豚鼠嗜酸细胞凋亡与ICE、Fas基因表达关系的研究

目的 探讨哮喘豚鼠EOS凋亡与ICE和Fas基因表达的关系。方法 实验分为哮喘组和正常对照组,各15只豚鼠,采用原位细胞凋亡方法检测豚鼠BALF中EOS的凋亡率;应用免疫细胞化学方法检测豚鼠肺组织的ICE和Fas基因表达。结果 哮喘组EOS凋亡率为2.1％±1.3％,显著低于对照组10.1％±1.4％(P<0.01)。哮喘组ICE、Fas基因表达强度分别为21±5和17±6,对照组分别为36±8和38±9,哮喘组显著低于对照组(P<0.01)。哮喘组EOS凋亡率与ICE和Fas基因表达呈正相关(r=0.65和0.68,P<0.05)。结论 哮喘豚鼠肺组织的ICE、Fas基因表达均降低,可能在抑制哮喘EOS凋亡中起重要作用。     

止嗽散及其改进方对哮喘豚鼠作用的比较

目的:比较止嗽散及其改进方对由卵蛋白致敏哮喘豚鼠作用的异同。方法:用Wright染色法计血液和肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)的数目。采用放射免疫法和硝酸还原酶法分别测定哮喘豚鼠血清和BALF中内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)的含量。在光镜和电镜下观察哮喘豚鼠肺组织的病理变化。结果:与止嗽散比较,止嗽散改进方(MZ)能够明显减少血液和BALF中EOS的数目,降低哮喘豚鼠血清和BALF中ET-1、NO的含量,减轻哮喘豚鼠肺组织的病理改变。结论:MZ减少哮喘豚鼠体内EOS数目和降低ET-1、NO含量的作用可能与其加入地龙、杏仁等中药有关。     

地塞米松抑制哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶的表达

目的:探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)表达的变化以及地塞米松对其影响.方法:复制大鼠哮喘模型,随机分成3组:正常对照组、哮喘对照组和地塞米松(DEX)干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量和肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察气道阻力、BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化.结果:哮喘对照组大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平及气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P＜0.01);DEX干预组上述指标较哮喘对照组显著降低(P＜0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻.肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.77、0.63、0.65,P＜0.01).结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.DEX对哮喘的治疗作用至少部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关.     

氮卓斯汀对豚鼠哮喘的拮抗作用及相关机制

目的:研究组胺H1受体拮抗剂——氮卓斯汀(azelastine,AZT)对豚鼠哮喘的拮抗作用,探讨氮卓斯汀拮抗哮喘的可能机制。方法:以卵白蛋白致敏豚鼠,制备哮喘模型,通过豚鼠引喘潜伏期和跌倒率的变化评价氮卓斯汀对哮喘的拮抗作用;分别计数外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞的数量;采用ELISA法检测血清和BALF中IL-4和IL-5的质量浓度。结果:与模型组相比,氮卓斯汀能显著延长致敏豚鼠的引喘潜伏期,降低跌倒率;氮卓斯汀显著减少哮喘豚鼠血清和BALF中嗜酸性粒细胞的数量,降低血清和BALF中IL-4和IL-5的水平。结论:降低IL-4和IL-5的水平,减少血中嗜酸性粒细胞的数量及其在气道中的浸润,可能是组胺H1受体拮抗剂——氮卓斯汀拮抗哮喘的机制之一。     

布地奈德对哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用

目的:研究布地奈德(BUD)对支气管哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用.方法:30只清洁级幼年健康雄性Wisar大鼠经造模后,随机分为对照组、哮喘组和BUD组.实验结束后对支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用ELISA法测定血清中IL-4的含量;采用免疫组化法检测STAT6蛋白表达的变化.结果:(1)哮喘组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于对照组(P＜0.01),BUD组BALF中上述各项指标较哮喘组均显著降低(P＜0.01);(2)哮喘组BALF中IL-4的浓度显著高于对照组(P＜0.01),BUD组较哮喘组显著降低(P＜0.01);(3)哮喘组支气管上皮细胞STAT6蛋白阳性表达较对照组明显增强(P＜0.01).结论:哮喘大鼠支气管STAT6较强表达,BUD有抑制气道炎症的作用,使IL-4合成减少,从而下调STAT6及其基因表达.     

氨茶碱对哮喘豚鼠嗜酸细胞IL-3、IL-5及GM-CSF受体表达的影响

目的　观察氨茶碱(AM)对嗜酸细胞(Eos)上白介素 5受体α(IL 5Rα)、白介素 3受体α(IL 3Rα)、粒 巨噬细胞集落刺激因子受体α(GM CSFRα)及共同β链(βcR)mRNA表达的影响,探讨茶碱促进哮喘Eos凋亡的机制。方法　 18只健康豚鼠随机分为正常组、哮喘组、茶碱组,每组 6只,以卵蛋白致敏激发制作豚鼠哮喘模型,密度梯度分离法分离支气管灌洗液(BALF)中的低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos),以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,原位杂交检测各受体mRNA表达,RT PCR法检测EosIL 5Rα、IL 3Rα相对含量。结果　哮喘组HEos及NEos凋亡 (4±2, 3±2)明显低于正常组(8±2, 7±2,P<0 01),而哮喘组细胞数 (75±13, 51±11 )明显高于正常组(5±2, 10±3,P<0 01)。用AM 24h后不同密度Eos数量 ( 36±14, 33±8 )均明显低于哮喘组 (P<0 01, 0 05),AM组Eos凋亡 ( 15±5, 14±4 )明显高于哮喘组(P<0 01);哮喘组Eos表达IL 5、IL 3及GM CSFα受体mRNA,明显低于正常组 (P<0 01, 0 05 ),AM组中低密度Eos表达各受体mRNA均明显高于哮喘组 (P<0 05 );而哮喘组βcR表达(41±6, 39±7)表达显著高于正常组 (28±5,26±5,P<0 01),AM组βcR表达与哮喘组比较差异无显著性(P>0 05)。HEos表达各受体与NEo     

火把花根片对哮喘豚鼠抗炎机制及其对肺泡灌洗液IL-5受体mRNA表达的影响

目的　探讨火把花根片对哮喘豚鼠抗炎作用机制及其对肺泡灌洗液 (BALF)白介素 5(IL 5)受体mRNA表达的影响。方法　 3 2只健康豚鼠随机分为 4组 :正常对照组 ,哮喘组 ,地塞米松治疗组 ,火把花根片治疗组。后 3组制作成哮喘豚鼠模型 ,再激发用药。测定肺泡灌洗液的细胞总数和细胞分类 ,观察肺组织的病理改变 ,进行BALF的IL 5受体mRNART PCR半定量分析。结果　火把花根片治疗组BALF的嗜酸性粒细胞 (Eos)数较正常组和哮喘组 ,差异均有显著性 ,分别为P <0 0 5和P <0 0 1。肺组织病理切片 ,火把花根片组充血水肿明显 ,但Eos肺组织浸润较哮喘组有明显减少。BALF的IL 5受体mRNART PCR半定量分析显示 ,火把花根片治疗组与地塞米松治疗组差异无显著性 ,P >0 0 5,但和正常组与哮喘组比较差异有显著性 ,P <0 0 1。结论　火把花根片能抑制哮喘豚鼠的气道炎症 ,为临床治疗哮喘提供初步的理论基础     

氨茶碱对体外嗜酸性粒细胞凋亡及Fas mRNA表达的影响

目的　通过观察氨茶碱对体外不同密度嗜酸性粒细胞 (Eos)凋亡及FasmRNA表达的影响 ,探讨其促进哮喘Eos凋亡的机制。方法　卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型 4 8h后行支气管肺泡灌洗 ,分离不同密度Eos。氨茶碱 (AM )( 10 -6 ～ 10 -3mol·L-1)干预 2 4h ,原位杂交检测Eos的FasmRNA表达 ,TUNEL法检测细胞凋亡。结果　AM干预 2 4h ,可见Eos凋亡增加 ,以低密度Eos(HEos)为明显 ,与不加药物相比 ,在 10 -5mol·L-1时差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,FasmRNA表达降低 ,呈剂量依赖性 ,HEos与正常密度 (NEos)相比 ,其FasmRNA表达无差别。FasmRNA的表达与Eos凋亡呈正相关。结论　AM可提高FasmRNA表达 ,促进Eos凋亡。Fas可能是AM调节Eos凋亡的通路之一。     

白细胞介素-1受体拮抗剂对卵白蛋白致敏的哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)，对慢性哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡及相关机制的影响。方法建立致敏豚鼠模型，连续吸入不同浓度IL-1ra,用卵白蛋白引喘豚鼠，连续8 d，分离血液、肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞，计数嗜酸性粒细胞，用放射免疫法测定上清液中阳离子蛋白（ECP），酶连免疫法（ELISA）测血清中IL-5，荧光显微镜观察嗜酸性细胞凋亡。结果IL-1ra能明显减少肺部嗜酸性粒细胞浸润，降低血清、肺泡灌洗液中ECP水平及血清中IL-5的含量，促进嗜酸性细胞凋亡。结论雾化吸入IL-1ra可以通过改变嗜酸性粒细胞的活性及浸润程度，达到治疗哮喘的目的。     

银杏内酯吸入剂对哮喘模型豚鼠气管嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的:探讨银杏内酯吸入剂对哮喘模型豚鼠气道嗜酸性粒细胞浸润的影响。方法:将豚鼠随机分为7组,每组8只,分别为哮喘模型组,银杏内酯吸入剂低、中、高剂量组(剂量分别为5、10、20mg·kg-1),银杏内酯腹腔注射(ip)组(剂量为20mg·kg-1),地塞米松组(剂量为10mg·kg-1)和正常对照组,计数肺灌注液(BALF)和支气管中的嗜酸性粒细胞(EOS)数。结果:与正常对照组比较,模型组BALF中的EOS显著增多,银杏内酯吸入剂组可显著减少BALF和支气管中的EOS浸润数(P<0.05)。结论:银杏内酯吸入剂能对抗哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞浸润,可作为治疗支气管哮喘的一种新方法。     

卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的观察卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠哮喘胸腺活化调节趋化因子(thymus and activation regulated chemo-kine,TARC)及mRNA表达的影响。方法以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。30只清洁级♂Balb/c小鼠随机分为3组,每组10只:正常对照组、哮喘组、BCG-PSN治疗组。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行细胞计数及分类;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中TARC、IL-4和IFN-γ蛋白的浓度;光镜观察肺组织病理变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中TARC mRNA的表达;采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果与正常对照组相比,哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)绝对值及百分比、TARC和IL-4浓度、肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达均增高,BALF中IFN-γ浓度低于正常对照组。经BCG-PSN干预后,BALF中细胞总数、EOS绝对数及百分比,TARC、IL-4浓度较哮喘组均下降,肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达较哮喘组均下调,BALF中IFN-γ浓度较哮喘组增高。免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度呈正相关。结论卡介菌多糖核酸可降低TARC在肺组织中的表达,降低气道炎症。