CpG ODN对卡铂治疗Lewis肺癌小鼠移植瘤的增敏效应

目的：探讨含胞嘧啶-磷酸盐-鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸（cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpGODN）对卡铂治疗Lewis肺癌荷瘤小鼠的化疗增敏作用。方法：在小鼠右前肢腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型,将32只荷瘤小鼠随机分为4组：对照组,不做任何处理;卡铂治疗组,第1~5天每天腹腔注射卡铂注射液0.32mg;CpG组,第1~5天每次腹腔注射CpGODN（1826）0.05mg;CpG＋卡铂组,每次卡铂注射前6h腹腔注射CpGODN（1826）。观察各组移植瘤生长速度和重量,HE染色法观察移植瘤组织病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果：成功建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。各治疗组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小（P〈0.01）,其中CpG＋卡铂组移植瘤体积最小;卡铂组、CpG组、CpG＋卡铂组的抑瘤率分别为23.35%、21.47%、48.43%;HE染色法观察到各治疗组移植瘤的坏死均较对照组明显,其中CpG＋卡铂组最明显。TUNEL法检测对照组瘤组织细胞凋亡率为2.75%±0.89%,卡铂组为4.87%±1.13%,CpG组为7.63%±1.41%,CpG＋卡铂组为32.63%±4.66%,各治疗组瘤细胞凋亡率均明显高于对照组（P均〈0.01）,其中CpG＋卡铂组显著高于单独卡铂组和单独CpG组（P均〈0.01）。结论：CpGODN（1826）能明显提高Lewis肺癌移植瘤对卡铂治疗的化疗敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。     

四碘酸卟啉镁对小鼠Lewis肺癌的放射增敏效应

目的 探讨四磺酸卟啉镁的放射增敏效应。材料与方法 将菏Lewis肺癌的C57BL/6小鼠随机分为4组；对照组、单药组、单放组及用药加放射组，其中单药组和用药加放射组小鼠腹腔单次注射四磺酸卟啉镁13.75mg/kg体重，单放组和用药加放射组各分10、15、20Gy3个剂量小组进行单次放射，每组各8只鼠。结果 （1）当肿瘤体积极达原照射体积4倍时，测得四磺酸卟啉镁的增敏比为1.45-1.70，平均1.58,(2)各组小鼠生存时间无显著差异。结论 四磺酸卟淋镁对Lewis肺癌具有放射增敏效应。     

siRNA沉默ATM增强CpG ODN 7909对肺癌A549细胞的放射增敏作用

目的： 研究siRNA沉默毛细血管扩张—共济失调突变（atxia-telangiectasia mutated,ATM）基因的表达增强胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(cytosine-phophate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 7909对人非小细胞肺癌A549细胞的放射增敏作用。 方法: 将ATM-siRNA转染至A549细胞中,Western blotting检测A549细胞中ATM蛋白的表达。A549细胞随机分为6组：对照组、CpG组、X射线（IR）组、CpG+IR组、ATM-siRNA+CpG+IR组和NC-siRNA+CpG+IR组,克隆形成分析法检测各组细胞克隆形成率,Graphpad prism 5.0软件进行单击多靶模型和L-Q 线性模型拟合辐射后A549细胞的生存曲线,以D0、Dq、N、α/β及SF2等参数分析A549细胞辐射损伤修复能力,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。 结果: ATM-siRNA转染可明显抑制A549细胞中ATM蛋白的表达（P<0.01）。X射线可剂量依赖性抑制A549细胞的克隆形成能力（P<0.05）;且CpG+IR组A549细胞的克隆形成能力进一步降低（P<0.01）;ATM-siRNA转染后,CpG处理的A549细胞克隆形成能力再度降低\[10 Gy时,（0.05±0.00）% vs （0.71±000）%,P<0.01\]。辐射损伤剂量生存曲线结果显示,ATM-siRNA转染后,ATM-siRNA+CpG+IR组较CpG+IR组A549细胞的α/β值明显增大（1.48 vs 0.97,P<0.05）,对放射损伤修复能力明显减弱。CpG+IR组较IR组细胞凋亡率显著升高\[（9.18±0.16）% vs （6.56±0.33）%,P<0.01\]; ATM-siRNA+CpG+IR组A549细胞凋亡率进一步升高\[（10.45±0.40）% vs （9.18±0.16）%,P<0.05\]。 结论： siRNA 沉默ATM 的表达可增强CpG ODN 7909对A549细胞的放射增敏作用,ATM可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

葡萄糖酸锗对小鼠Lewis肺癌放射增敏效应实验研究

采用动物肿瘤模型实验方法探讨葡萄糖酸锗对肿瘤的放射增敏效应。结果显示 :治疗后单药组与对照组肿瘤平均体积比较无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,用药加放射 2 0 ,2 5 Gy组肿瘤平均体积分别明显小于单放 2 0 ,2 5 Gy组 (P<0 .0 1) ,当肿瘤体积达到 4 .4 cm3 时 (原照射体积的 4倍 )测得放射增敏比为 1.5 8～ 1.7。说明本药具有放射增敏作用 ,并能使肿瘤放射敏感性提高 5 8%～ 70 %。     

四磺酸卟啉镁对小鼠Lewis肺癌的放射增敏效应

探讨四磺酸卟啉镁的放射增敏效应。材料与方法将荷Ｌｅｗｉｓ肺癌的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠随机分为４组：对照组、单药组、单放组及用药加放射组。其中单药组和用药加放射组小鼠腹腔单次注射四磺酸卟啉镁１３．７５ｍｇ／ｋｇ体重，单放组和用药加放射组各分１０、１５、２０Ｇｙ３个剂量小组进行单次放射，每组各８只鼠，结果（１）当肿瘤体积达原照射体积４倍时，测得四磺酸卟啉镁的增敏比为１．４５～１．７０，平均１．５８。（２）各组小鼠生存时间无显著差异。结论四磺酸卟啉镁对Ｌｅｗｉｓ肺癌具有放射增敏效应。     

枸杞多糖对急性乏氧Lewis肺癌放射增敏效应的研究

选用Ｃ５７ＢＬ纯系小鼠及可移性Ｌｅｗｉｓ肺癌制作成肿瘤模型，观察了枸杞多糖对急性乏氧Ｌｅｗｉｓ肺癌的放射增敏效应。结果表明，枸杞多糖结合放疗对急性乏氧Ｌｅｗｉｓ肺癌有较明显的放射增敏效应，得到的剂量修饰因子平均为１．７２。     

Celecoxib对人癌裸鼠移植瘤的抗癌与放射增敏作用

通过观察选择性COX-2抑制剂celecoxib和(或)单次大剂量照射后人宫颈癌裸鼠异种移植瘤的肿瘤生长延长时间，研究celecoxib在人宫颈癌裸鼠异种移植瘤的抗癌与照射增敏作用。     

羟基红花黄色素A对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用

目的 研究羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤的血管抑制作用.方法 C57BL/6近交系小鼠30只,造模后,分为5组,每组6只,分别使用生理盐水、环磷酰胺(CTX)及HSYA(分低、中、高3个剂量)作用于动物模型.观察各组肿瘤体积大小,分析小鼠生长曲线,并在造模第22天处死所有小鼠,无菌条件下剥取瘤组织进行HE染色,观察不同浓度HSYA在不同视野下对肿瘤血管的抑制情况.结果 HSYA中、小剂量组对小鼠移植瘤血管生成有一定抑制作用.结论 中药羟基红花黄色素A(HSYA)对Lewis肺癌小鼠移植瘤血管生成有一定的抑制作用.     

白细胞介素-18对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长及移植瘤细胞凋亡的作用

 目的 探讨IL-18对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长及移植瘤细胞凋亡的作用。 方法 复制Lewis肺癌小鼠模型16只,随机分为IL-18治疗组与荷瘤模型组,每组8只,分别予IL-18、生理盐水于接种第7日起每日1次腹腔注射,连续7次。观察IL-18对小鼠健康状况、移植瘤变化的影响,并用TUNEL方法检测其对移植瘤细胞凋亡的作用。 结果 IL-18对小鼠健康状况无明显影响, 对移植瘤的生长有抑制作用,肿瘤抑制率为75%,对移植瘤细胞的凋亡有促进作用。 结论 IL-18可通过促进肿瘤细胞凋亡等途径对Lewis肺癌产生抑制作用,有望成为肺癌治疗的新策略。     

三氧化二砷对肺癌移植瘤的放疗增敏效应

目的：探讨三氧化二砷（As_2O_3）对肺癌移植瘤的放疗增敏作用及其可能机制。方法：在C57BL/6小鼠右前肢腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞,建立肿瘤小鼠模型。将40只荷瘤小鼠随机分成4组：对照组（腹腔注射生理盐水0.2 ml）;单纯照射组（腹腔注射生理盐水0.2 ml,6 MeV电子线照射,10 Gy）;As_2O_3组（2.0 mg/kg,溶于0.2 ml生理盐水中,腹腔注射）;As_2O_3＋照射组（2.0 mg/kg腹腔注射As_2O_3后,6 MeV电子线照射,10 Gy）。实验结束后,处死各组动物,分离肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率。用RT-PCR法测定肿瘤组织中VEGF和Ku70 mRNA水平,免疫组织化学法测定肿瘤组织中VEGF和Ku70蛋白的表达。结果：成功建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。与对照组、As_2O_3组及单纯照射组比较,As_2O_3＋照射组的抑瘤率明显增高,而VEGF和Ku70 mRNA和蛋白表达均显著下调（P均〈0.05）。结论：As_2O_3能增加肺癌移植瘤的放射敏感性,其辐射增敏作用可能与下调照射后肿瘤组织VEGF和Ku70的表达有关。     

局部应用内皮抑素对小鼠Lewis肺癌抑瘤作用的研究

目的我们通过局部应用内皮抑素治疗小鼠Lewis肺癌,观察内皮抑素对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用,及内皮抑素对VEGF表达的影响.方法用小鼠Lewis肺癌细胞种植于15只C57小鼠体内,建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,当移植瘤体积生长至400～600mm3时分组并开始给药.小鼠随机分为三组,A组为空白对照组,B组每日尾静脉注射内皮抑素20μg,C组每日于肿瘤部位局部注射内皮抑素20μg,共11天.测定抑瘤率及微血管密度评价疗效,免疫组化(S-P)法测定VEGF在各组的表达水平.结果试验组较对照组抑瘤率增高(P＜0.05),微血管密度降低(P＜0.05),试验组VEGF水平较对照组低(P＜0.01).结论内皮抑素对小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长有明显抑制作用,局部用药较全身用药的作用增强,内皮抑素可以通过降低VEGF在肿瘤组织中的表达抑制肿瘤生长.     

CpG ODN加强树突状细胞疫苗抗Lewis肺癌的研究

目的　探讨CpGODN对树突状细胞 (DC)疫苗抗肿瘤作用的影响。方法　应用ODN182 6作为DC的成熟刺激信号 ,体外控制DC充分成熟 ,以混合或融合的方式将肿瘤抗原负载于DC制备DC疫苗。以特异性杀伤细胞活性和淋巴细胞增殖反应测定疫苗的体外免疫活性 ,并将疫苗经小鼠腹腔注射 ,观察治疗和预防实验肿瘤的生长情况。结果　经ODN 182 6刺激后的DC细胞形态呈成熟状态 ,流式细胞仪分析检测刺激前后DC细胞表面分子CD4 0的表达分别为 11和 2 4 (MFI) ,CD86的表达分别为 33和 75 (MFI) ,刺激后的DC培养上清中IL 12的分泌水平为刺激前的 10倍。刺激后DC融合疫苗组CTL活性、T淋巴细胞增殖活性及体内Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率均明显高于未刺激的DC融合组 (P <0 .0 5 )。结论　CpGODN能通过诱导DC成熟 ,增强DC疫苗的抗肿瘤作用 ,有效诱导机体产生特异的抗肿瘤反应。未成熟的DC可通过与肿瘤细胞混合的方式 ,获得较好的抗原捕获效果 ,产生一定的抗肿瘤效应 ,而对于刺激成熟的DC则需通过融合手段负载抗原 ,达到有效的抗肿瘤活性。     

CpG oligodeoxynucleotide 1826 enhances the Lewis lung cancer response to radiotherapy in murine tumor

CpG oligodeoxynucleotides (ODNs) are synthetic DNA sequences containing unmethylated cytosine-guanine motifs with potent immune modulatory effects. Via Toll-like receptor 9 agonists of dendritic cells and B cells, CpG ODNs induce cytokines, activate natural killer cells, and elicit vigorous T-cell responses that lead to significant antitumor effects. On the basis of these properties of CpG ODNs, a previous study has tested that they could enhance tumor response to single-dose radiotherapy. The present study extended this finding to the fractionated radiotherapy of the Lewis lung cancer and assessed the ability of CpG ODN 1826 to increase the immune function of mice and the effect of CpG ODN 1826 on the apoptosis of Lewis lung cancer. First, tumor growth delay was observed, and the enhancement ratio of CpG ODN 1826 was found to be 2.4; decreased tumor weight was found after combined treatments with CpG ODN 1826 and X-ray radiation compared with either treatment alone (P < 0.01). Second, enhanced cell apoptotic index was found after combined treatments with CpG ODN 1826 and X-ray radiation compared with either treatment alone (p < 0.01). Increased tumor necrosis factor-α and decreased interleukin-10 concentration in serum and enhanced spleen exponent were observed after combined treatments with CpG ODN 1826 and X-ray radiation compared with X-ray radiation treatment alone (p < 0.01). Results suggest that CpG-ODN1826 can increase the radiosensitivity of Lewis lung cancer, which may be associated with stimulation of immune system and enhanced cell apoptosis.     

2-硝基咪唑-卟啉-二乙撑三氨四乙酸对小鼠Lewis肺癌的放射增敏效应

目的 采用动物肿瘤模型探讨2-硝基咪唑-卟啉-二乙撑三氨四乙酸（MISO-卟啉-DTTA）的放射增敏效应.方法 将移植有Lewis肺癌的C57BL/6小鼠随机分为7个组：空白对照组、乏氧对照组（阻断小鼠荷瘤肢体血流10min）、单纯用药组（分为8.58、17.15mg/kg体重2个亚组腹腔内单次注射给药）、单纯放射组（分为7.5、15.0、25.0Gy3个亚组单次照射）、乏氧放射组（乏氧条件下分为7.5、15.0、25.0Gy3个亚组单次照射）、放射＋药物组（分6个亚组）、乏氧放射＋药物组（分6个亚组）.每组8只小鼠.采用肿瘤生长延缓方法进行放射增敏实验.结果 当肿瘤体积达到实验开始时体积4倍时,分别测得8.58、17.15 mg/kg体重的MISO-卟啉-DTTA在有氧状态下的放射增敏比平均为1.62和1.89,在乏氧状态下的平均为1.57和1.77.空白对照组、乏氧对照组、单纯用药1组和单纯用药2组的平均存活时间分别为（31.8＋4.6）、（29.1＋4.3）、（29.5＋3.8）、（33.4＋5.1）d（F=1.63,P=0.205）.结论 8.58、17.15mg/kg体重的MISO-卟啉-DTTA对Lewis肺癌具有放射增敏效应,且对小鼠无毒性.     

地塞米松对姑息性手术术后小鼠残存Lewis肺癌细胞复发的抑制作用

目的 研究地塞米松对姑息性手术术后小鼠残存Lewis肺癌细胞复发的抑制作用.方法 构建C57 BL小鼠Lewis肺癌姑息性手术切除术后模型,并采用随机数字表法将18只小鼠分为生理盐水组、地塞米松组、顺铂组,每组6只,术后第4～10天用游标卡尺(0.1 mm)测量每组小鼠皮下肿瘤结节.用石蜡免疫组织化学法检测3组小鼠术后残存Lewis肺癌细胞复发肿瘤组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、平均微血管密度(MVD)染色情况.用实时荧光定量PCR和Western blotting检测3组小鼠术后复发肿瘤细胞中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)基因和蛋白的表达.结果 肿瘤生长曲线显示,接受顺铂和地塞米松治疗的小鼠肿瘤体积分别为(200.34±20.94) mm3和(436.58±37.94) mm3,比生理盐水组(1 398.81±192.85) mm3明显减小,差异均有统计学意义(t=-1201.75,P＜0.001;t=-921.52,P＜0.001).石蜡免疫组织化学结果显示,地塞米松组和顺铂组HIF-1α表达(2.67 ±0.43,1.67 ±0.43)和MVD计数(17.01 ±3.24,9.89 ±2.25)都明显低于生理盐水组(4.21 ±0.35,29.75 ±5.64),差异均有统计学意义(t=-1.55,P＜0.001;t=-1.83,P＜0.001;t=-12.68,P＜0.001;t=-18.35,P＜0.001).实时定量PCR检测显示,HIF-1α(0.56±0.11)、VEGF(0.61±0.18)和PCNA(0.38±0.07) mRNA表达在地塞米松组较生理盐水组(1.21±0.13,1.13 ±0.26,1.06±0.08)明显减少,差异具有统计学意义(t=-0.55,P＜0.001;t=-0.62,P＜0.001;t=-0.69,P＜0.001);HIF-1α(0.31 ±0.12)、VEGF(0.30 ±0.13)和PCNA(0.18±0.06) mRNA表达在顺铂组较生理盐水组也明显减少,差异具有统计学意义(t=-0.73,P＜0.001;t=-0.76,P＜0.001;t=-0.81,P＜0.001).Western blotting结果显示,地塞米松组HIF-1α(85.98±20.86)、VEGF(173.28 ± 30.98)和PCNA蛋白(228.96±22.97)的表达较生理盐水组(198.98±29.89,378.98±28.98,357.98±35.98)明显减少,差异具有统计学意义(t=98.78,P＜0.001;t=85.68,P＜0.001;t=120.86,P＜0.001);顺铂组HIF-1α(65.78±18.62)、VEGF(109.43士19.86)和PCNA蛋白(176.86 ±22.76)的表达较生理盐水组明显减少,差异具有统计学意义(t=132.86,P＜0.001;t=108.68,P＜0.001;t=154.74,P＜0.001).结论 地塞米松对姑息性手术切除术后残存的Lewis肺癌细胞复发有明显抑制作用,有望为姑息性手术切除患者术后治疗提供一种新的辅助治疗方法.     

低剂量辐射对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境的影响

目的 探讨低剂量辐射(LDR)对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境(TME)的影响,以及高剂量辐射(HDR)前LDR预处理在TME中发挥的效应机制.方法 接种Lewis肺癌细胞(1×106)于雄性C57BL/6小鼠左侧腋下,待小鼠肿瘤直径1 cm左右(12 d),随机分为假手术Sham(1)组、LDR(2)组、HDR(3)组...     

双氢青蒿素对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及其机制探讨

目的探讨双氢青蒿素对Lewis肺癌小鼠的抑瘤效应及其作用机制。方法C57BL/6J小鼠皮下接种3LL细胞（2&#215;10^6）50只,随机分为5组,分别为生理盐水组、阳性对照顺铂组、双氢青蒿素高、中、低剂量组,检测各组小鼠的体重变化和抑瘤率,应用流式细胞术进行TUNEL分析和凋亡相关基因及其表达改变的检测。结果双氢青蒿素中、高剂量组体重较生理盐水组增加明显,其抑瘤率分别为53.5%及59.2%;流式细胞术TUNEL检测结果显示,其作用细胞凋亡和坏死同时存在。FCM法分析其对肺癌组织凋亡相关基因检测表明中、高剂量组Fas、p53等凋亡基因上调,Bcl-2抑制凋亡基因下调。结论双氢青蒿素对Lewis肺癌小鼠肺癌生长具有一定的抑制作用,能促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调控细胞凋亡相关基因的表达有关。     

温下方对Lewis肺癌的抑制作用及对细胞周期的影响

目的:观察温下方对Lewis肺癌的抑制作用及对细胞周期的影响。方法:C57BL/6小鼠皮下接种Lewis肺癌,随机分组,口服给药后计算抑瘤率、脾及胸腺指数;流式细胞技术分析肿瘤细胞周期变化及凋亡百分率。结果:温下方质量分数在生药2.8、5.57和11g/(kg.d)时,对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为31.0%、34.3%和37.6%;肺癌细胞凋亡率增加至(11.13±4.52)%、(16.31±6.12)%和(20.08±5.13)%;G0/G1期细胞比例增加至(50.40±5.37)%、(56.01±5.91)%和(62.38±5.22)%,呈明显的剂量依赖关系。结论:温下方抑制肿瘤生长的机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。