乳腺癌相关基因过甲基化的研究进展

抑癌基因失活包括基因内突变、染色体丢失和启动子甲基化。DNA甲基化是目前抑癌基因的研究热点之一，是肿瘤发生的早期事件。甲基化表型早于恶性表型的出现。并且每种肿瘤具有独特的甲基化谱，检测乳腺癌抑癌基因过甲基化有助于早期发现有癌变倾向的乳腺细胞，对早期诊断和逆转因甲基化失活的抑癌基因，从而在一定程度上逆转具有恶性倾向的肿瘤有一定意义。     

乳腺癌相关基因过甲基化的研究进展

抑癌基因失活包括基因内突变、染色体丢失和启动子甲基化。DNA甲基化是目前抑癌基因的研究热点之一,是肿瘤发生的早期事件。甲基化表型早于恶性表型的出现,并且每种肿瘤具有独特的甲基化谱,检测乳腺癌抑癌基因过甲基化有助于早期发现有癌变倾向的乳腺细胞,对早期诊断和逆转因甲基化失活的抑癌基因,从而在一定程度上逆转具有恶性倾向的肿瘤有一定意义。     

RUNX3基因甲基化和去甲基化与肿瘤的研究进展

人RUNT相关转录因子3(RUNX3)属于RUNT家族成员之一,是目前热门研究的一个抑癌基因。阐述RUNX3基因的结构特点,综述RUNX3基因的甲基化和去甲基化情况与肿瘤发生发展的关系,得出通过甲基化抑制剂可以诱导抑癌基因的重新表达,从而达到治疗肿瘤的目的。     

乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:对乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1(thyroid hormone receptorβ1,TRβ1)基因沉默机制进行初步探讨.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)和直接测序法检测40例乳腺癌、癌旁组织及10例正常乳腺组织中TRβ1基因启动子甲基化状态;分析其与临床病理特征间的关系.结果:乳腺癌及癌旁组织中TRβ1 基因启动子甲基化率分别为80.0%、72.5%,而正常乳腺组织仅10%;直接测序结果显示至少3个CG位点有甲基化改变.TRβ1基因启动子甲基化与患者的年龄、淋巴结转移、临床分期不相关.结论:甲基化可能是乳腺癌中TRβ1基因表达沉默的重要机制之一,在乳腺癌发生发展中起一定作用.     

Syk基因启动子甲基化与肿瘤

随着表遗传学的发展，人们认识到肿瘤不仅仅是遗传性疾病，同时也是由DNA甲基化作用引起的转录沉默的表遗传性疾病。肿瘤中的表遗传改变主要包括普遍性低甲基化、个别基因的低甲基化、区域性CpG岛的高甲基化以及印记丢失。     

RASSF1A基因甲基化在乳癌中的研究进展

随着人们对肿瘤的深入研究．发现多数实体肿瘤存在3号染色体短臂（3p）缺失，提示3p区域所含的基因对肿瘤发生发展起着重要作用，可能隐含肿瘤抑制基因。因此，人们从染色体3p上发现了BLU、FUS1、RASSF1A等抑癌基因。现将RASSF1A甲基化在乳癌中的研究进展综述如下。     

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子（TSLC1）基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织（χ2=16.673,P〈0.01）。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性（P=0.046）。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

乳腺癌中 PALB2基因启动子甲基化情况及其临床预后价值

【目的】探讨乳腺癌易感基因PALB2启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征、预后的关系。【方法】采用MSP法检测128例乳腺癌石蜡组织中PALB2启动子甲基化情况,分析其与乳腺癌临床病理特征及临床预后的相关性。【结果】128例乳腺癌中有淋巴结转移的患者中14．04％（8／57）检测出PALB2启动子甲基化,高于无淋巴结转移患者的2．82％（2／71）,且差异具有显著性（ P ＜0．05）。PALB2启动子甲基化组的中位无瘤生存时间与中位总生存时间分别为50个月和51．5个月,无甲基化组的中位无瘤生存时间与总生存时间分别为54个月和88个月,两者相比较差异均具有显著性（ P ＜0．01）。乳腺癌患者预后相关因素分析提示N分期及PALB2启动子甲基化情况均是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。【结论】乳腺癌组织PALB2基因启动子甲基化情况与是否有淋巴结转移相关。与PALB2启动子无甲基化组比较,有甲基化组乳腺癌患者的预后更差。PALB2启动子甲基化作为影响乳腺癌患者预后的独立危险因素,对于评估患者临床预后有着重要意义。     

胃癌组织中抑癌基因RUNX3和CHFR启动子异常甲基化的临床意义

目的检测胃癌患者肿瘤组织中RUNX3和CHFR基因启动子区域甲基化状态,并探讨它们甲基化状态的改变与胃癌临床病理特征的关系。方法收集61例胃癌患者的肿瘤组织标本,胃癌患者术前均未行放疗和化疗。采用甲基化特异性PCR方法 (MSP法)检测RUNX3、CHFR基因启动子区的甲基化状态。分析这两个基因甲基化与胃癌患者临床病理特征之间的关系。结果 54.0%和40.9%的胃癌组织中分别存在RUNX3和CHFR基因启动子的异常甲基化,在≥5cm的胃癌组织中,RUNX3和CHFR的甲基化频率分别显著高于它们在<5cm胃癌组织的甲基化频率;RUNX3和CHFR基因的异常甲基化与其他临床病理特征如年龄、性别、病理分期、浸润深度、组织分化程度以及淋巴结转移无相关性。结论 RUNX3和CHFR基因的甲基化状态可作为评估胃癌患者临床病理特征的分子标志物。     

结直肠癌中p16基因的甲基化改变与蛋白表达的关系

目的 检测结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因启动子区异常甲基化改变及蛋白表达情况,探讨其与结直肠癌发生发展与临床的关系。方法 采用甲基化特异PCR(MSP)和免疫组织化学链霉素过氧化物酶(SP)方法,对32份结直肠癌标本p16基因甲基化改变及蛋白表达情况进行检测分析。结果 p16甲基化阳性率为40.6％;p16蛋白表达阳性率75.0％;在病理分期中,DukesC、D期患者肿瘤组织中p16甲基化发生率63.0％,p16蛋白表达发生率为69.0％;DukesA、B期患者p16甲基化发生率为25.0％,p16蛋白表达阳性率为81.0％;在组织分化程度中,低分化癌中的p16甲基化阳性率为100.0％,p16蛋白表达阳性率为20.0％;在高、中分化癌中,p16甲基化的阳性率为30.0％,p16蛋13表达阳性率为85.0％;淋巴结转移癌患者肿瘤组织中p16基因甲基化阳性率为63.0％,淋巴结未转移的阳性率为25.0％;在肿瘤部位中,直肠癌p16蛋白表达阳性率为65.0％,结肠癌的阳性率为100.0％。结论 p16甲基化的改变可能影响p16蛋白的表达;p16甲基化、蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关,p16甲基化和蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物之一。     

胃癌中p16蛋白表达和p16基因启动子甲基化的研究

目的:探讨胃癌中p16基因的失活机制。方法:采用免疫组织化学SP方法检测40例胃癌组织和43例正常胃黏膜组织中p16蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究40例胃癌组织和35例正常胃黏膜组织p16基因启动子的甲基化状况。结果:23例胃癌组织的p16基因启动子发生了甲基化,甲基化发生率为58%,正常胃黏膜组织中未发现甲基化,两组间比较差异有显著性(P<0.01)。31例胃癌组织中的p16蛋白表达阴性,正常胃黏膜组织中6例表达阴性,两组间差异有显著性(P<0.01)。胃癌组织中,MSP方法和免疫组织化学方法结果间差异无显著性(P>0.05)。结论:胃癌的发生与p16基因失活关系密切,启动子甲基化可能抑制了蛋白的表达,这种途径可能是胃癌中p16基因失活的重要机制。     

乳腺癌14-3-3 sigma基因表达及其临床意义

目的 探讨乳腺癌14—3—3sigma基因表达及其临床意义。方法 采用RT—PCR和western—blot方法,分别对40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变的乳腺组织,半定量检测14—3—3sigma基因的表达情况。结果 40例乳腺癌患者中,有35例（35／40,87．5％）没有检测出14—3—3sigma mRNA;western—blot也证明,40例中有32例14—3—3sigma蛋白表达缺失（32／40,80．0％）,两种试验同时阴性的有31例（77．5％）,另各有2例低表达。而在18例乳腺良性病变的患者,RT—PCR和western—blot均检测出14—3—3sigma基因表达。结论 14—3—3sigma基因表达缺失或低表达是乳腺癌的经常性事件,研究乳腺癌14—3—3sigma基因表达情况,可为乳腺癌的诊断提供实验室依据。     

乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系

目的 探讨乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系.方法 取经病理确诊的52例乳腺癌组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应( MSP)、免疫组织化学法(IHC)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测C-erbB-2启动子CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平和C-er6B-...     

TFPI-2基因CpG岛甲基化与胰腺癌的关系

目的:检测胰腺癌组织组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因CpG岛甲基化的状态,并分析甲基化改变与胰腺癌的关系。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测45例胰腺癌组织、相应癌旁组织中TFPI-2基因的甲基化状态。结果:胰腺癌组织中TFPI-2基因的甲基化阳性率为71.1%(32/45),明显高于癌旁组织的31.1%(14/45)(P<0.01)。8例正常胰腺组织中均未发生甲基化。TFPI-2基因甲基化阳性率还与胰腺癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤直径有相关性(P<0.05)。结论:TFPI-2基因在胰腺癌组织中出现异常甲基化,可能与胰腺癌的发生发展关系密切。     

新型高通量肺癌相关基因甲基化检测方法的建立

目的 建立一种包含甲基化标准品的新型高通量肺癌相关基因的甲基化检测系统.方法 2009年3-6月上海交通大学医学院附属胸科医院经病理学和影像学确认的非小细胞肺癌患者8例,其中男7例,女1例,平均年龄(57±11)岁,手术后留取肺癌组织及外周血.男性健康志愿者1名,年龄35岁,抽取外周血20 ml,用以分离单个核细胞提取DNA制备质粒.对7个肺癌相关基因的启动区进行克隆,用各基因的特异性引物对克隆到质粒中的各基因片段再次进行扩增,PCR产物用甲基化酶M.sss Ⅰ和亚硫酸盐处理.通过设计3'末端CpGpCpG探针来识别甲基化模板,并经最佳连接酶、最佳退火温度及连接温度的选择,建立一套多重连接PCR体系,最后运用液相芯片平台对扩增的标准品和临床标本进行检测.利用甲基化特异性PCR检测新系统的可靠性.结果 成功的构建了7个基因的甲基化和非甲基化标准品,并建立了多重PCR偶联液相芯片的快速检测系统,p16INK4A、APC、DAPK、RARβ、RASSF1 A、MGMT和GSTP1甲基化标准品的荧光信号值分别为863、909、703、701、901、1 060和885,与非甲基化标准品区分明显.抽提8例患者的肺癌组织DNA,对其中检测出阳性频率较高的基因进行甲基化特异性PCR,产物电泳结果 与新建甲基化检测系统检测结果 完全一致.结论 本研究建立的新型检测系统能同时准确地检测7个基因甲基化状态,有望应用于临床标本的检测.     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测survivin甲基化状态

目的建立SYBR Green Ⅰ实时荧光聚合酶链反应（PCR）检测survivin甲基化的方法。方法25例胃癌组织标本及与其配对的正常胃组织经甲基化敏感性限制性内切酶HpaⅡ和MspⅠ处理后，再用SYBR GreenⅠ实时荧光PCR对survivin外显子1进行检测。实时荧光定量PCR检测survivin基因内含子2，用于监测经限制性酶消化的基因组DNA浓度变化，10倍系列稀释的基因组标准物用于检验实时PCR的敏感度，PCR产物通过凝胶电泳分析证实。结果经Hpa Ⅱ酶切后，甲基化的目的基因PCR产物在熔解曲线上有Tm值为（91．5&#177;0．5）℃的峰，电泳证实为338bp的条带。所有经酶消化的样本都能扩增出以Tm值（79．5&#177;0．5）℃为特征的对照基因（survivin基因内含子2），表明基因组DNA未产生严重的非特异性降解。SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测甲基化目的基因的灵敏度为10^0拷贝／μL。用以上新建的体系检测25例胃癌标本，发现其survivin基因外显子1的去甲基化频率为96％。结论SYBR GreenⅠ荧光PCR法具有快速、准确、敏感、实时、简单和敏感的特点，是检测survivin外显子1甲基化状态的一种可靠的新方法。     

乳腺癌组织雄激素受体表达及其与启动子甲基化的关系

目的探讨女性乳腺癌组织中雄激素受体(AR)的表达与启动子甲基化的关系。方法应用免疫组化和实时荧光定量PCR方法检测38例乳腺癌组织中AR表达及其启动子甲基化情况,并结合临床病理资料进行分析。结果乳腺癌组织中AR表达和年龄、淋巴结转移、组织学分级、ER及HER-2表达无显著相关性(P0.05);AR表达阴性组AR基因甲基化水平显著高于阳性组(P=0.015),患者年龄与AR基因甲基化水平呈负相关(r=-0.3486,P=0.0372);淋巴结转移、组织学分级及ER与AR基因甲基化无显著相关性(P0.05)。结论 AR表达阴性的乳腺癌患者AR基因甲基化水平较高。     

人原发性肺癌组织中TSLC1基因甲基化检测及意义

目的探讨TSLC1基因启动子区甲基化状态与人原发性肺癌发生发展之间的关系方法采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对53例人原发性肺癌组织(肺癌组)、24例肺良性病变组织(良性病变组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行TSLC1基因5’-CpG岛甲基化状态检测。结果肺癌组、癌旁组和肺良性病变组的TSLC1基因甲基化率分别为35.8%(19/53)、13.3%(2/15)、0.0%(0/24),三组相比差异有统计学意义(P<0.05);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.2%(2/11)。TSLC1基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSLC1基因启动子区甲基化与肺癌的发生关系密切,可能出现在肺癌发生的早期阶段。     

钼钯乳腺X线摄影误诊病例分析

目的 分析乳腺钼钯X线摄影误诊的原因及探讨避免误诊的方法和经验。方法 回顾性分析69例经病理证实而乳腺钼钯X线摄误诊的乳腺疾病影像资料。结果 69例误诊中，良性诊断为恶性者24例，恶性诊断为良性者45例。误诊原因主要为乳腺致密肿块难以对比等客观原因，以及病变X线表现不典型所致。结论 规范乳腺的钼钯X线摄影方法以及加强读片一定程度可以减少误诊。