BAFF及其特异性受体BAFF—R对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨B淋巴细胞刺激因子（BAFF）及其特异性受体BAFF—R对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖及凋亡的影响。方法采用流式细胞术（FCM）、RT—PCR、WesternBlot、荧光免疫细胞化学技术检测BAFF及其受体BAFF—R的表达与定位;wsT细胞增殖实验及TUNEL法检测BAFF及其受体BAFF—R对MM肿瘤细胞生长、存活与凋亡的影响。结果①MM细胞能够表达BAFF及其特异性受体BAFF—R;②BAFF及其受体BAFF—R定位表达于KM3细胞的浆膜上;③BAFF及其受体BAFF—R促进MM细胞的增殖、存活,抗细胞凋亡。结论BAFF及其受体BAFF—R对于骨髓瘤发生、发展可能起着重要的作用。     

B淋巴细胞刺激因子及其受体在多发性骨髓瘤中的表达及其意义

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BLyS)及其受体在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及其意义.方法 采用流式细胞术(FCM)分析人MM肿瘤细胞系KM3及CZ-1细胞表面BLyS及其受体的表达;RT-PCR及Western blot进一步验证Blys及其受体的表达;采用荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定KM3细胞中Blys蛋白的表达与定位;WST细胞增殖实验检测Blys对MM肿瘤细胞生长与存活的影响.ELISA及荧光定量.聚合酶链反应(RTQ-PCR)测定MM患者BLyS蛋白与mRNA的表达水平.同时分析乳酸脱氢酶(LDH)、β2微球蛋白浓度与BLyS蛋白及mRNA表达水平的关系.结果 ①MM细胞能够表达BLyS及其受体;②BLyS定位表达于KM3细胞的浆膜上;③Blys促进MM细胞的生长与存活;④MM患者BLyS蛋白或mRNA表达水平显著高于正常对照组(P值均<0.01);⑤直线相关分析显示LDH、β2微球蛋白浓度与BLyS蛋白及mRNA表达水平呈显著相关性.结论 BLyS及其受体对于MM发生、发展可能起着重要的作用.     

氟达拉滨诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其基因表达分析

目的 探讨氟达拉滨诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡及其分子机制.方法 用MTT法检测氟达拉滨对MM细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡蛋白表达;采用细胞凋亡基因芯片技术检测并分析对照组与氟达拉滨处理组间的基因表达差异.结果 氟达拉滨显著抑制RPMI8226和KM3细胞生长,呈时间和剂量依赖性.24 h半数生长抑制值(IC50)分别为2.13μg/ml和0.36 μg/ml.流式细胞术分析显示,氟达拉滨作用24 h后MM细胞凋亡呈剂量依赖性,同时伴有caspase-3和PRAP激活,具有典型的细胞凋亡生物学特征.在97个凋亡相关基因中,筛选出25个差异表达基因.氟达拉滨处理组与对照组比较,表达上调的基因有13个,主要涉及Bcl-2家族促凋亡基因、肿瘤坏死因子及其受体超家族基因,以及胱天蛋白酶募集结构域家族.表达下调的基因有12个,主要涉及Bcl-2家族抗凋亡基因、肿瘤坏死因子超家族及其受体相关因子基因,以及凋亡抑制蛋白家族.结论 氟达拉滨显著抑制MM细胞生长,诱导细胞凋亡;其作用机制涉及多个凋亡相关基因表达改变.     

IL-6通过STAT3/Notch信号通路调控多发性骨髓瘤耐药细胞株对硼替佐米的化疗敏感性

目的：探讨白细胞介素-6(IL-6)调控多发性骨髓瘤（MM）耐药细胞株对硼替佐米（bortezomib,BTZ）的化疗敏感性及相关作用机制。方法：收集临床BTZ耐药MM患者治疗前后的外周血样本,体外培养人KM3和KM3/BTZ细胞,ELISA法检测MM患者外周血、KM3和KM3/BTZ细胞中IL-6的含量,CCK-8法检测KM3和KM3/BTZ细胞对BTZ的药物敏感性。将KM3/BTZ细胞分为KM3/BTZ对照组（细胞正常培养48 h）,IL-6中和抗体Anti-IL-6组（500 ng/ml Anti-IL-6处理细胞48 h）,BTZ组（300 ng/ml BTZ处理细胞48 h）,BTZ+Anti-IL-6组（300 ng/ml BTZ和500 ng/ml Anti-IL-6处理细胞48 h）。采用CCK-8法检测KM3/BTZ细胞增殖活性,流式细胞术检测KM3/BTZ细胞周期分布情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测KM3/BTZ细胞凋亡,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测KM3/BTZ细胞IL-6、Notch1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRN...     

JNK信号通路活化与BCMA表达对MM细胞的作用研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)细胞中B细胞活化因子(BAFF)及B细胞成熟抗原(BCMA)的表达及作用,JNK信号通路的表达及活化情况,探讨JNK信号通路活化与BCMA表达间的相互作用。方法采用实时荧光定量(QRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测MM患者及健康对照者单核细胞(PBMCs)中BAFF及其受体BCMA、TACI、BAFF-R的表达。采用Western Blot方法检测MM细胞中BCMA蛋白的表达及信号通路蛋白ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、p38及p-p38的表达及活化情况;采用WST-1法检测MM细胞的增殖与存活。结果 MM患者PBMCs中BAFF及BCMA的表达显著高于健康对照者。人BAFF重组体(rhBAFF)促进MM细胞的增殖,Si-BCMA可抑制rhBAFF对MM细胞的增殖作用。除了ERK、JNK及p38的表达外,MM细胞中还有活化蛋白p-JNK的表达。Si-BCMA可下调p-JNK的表达,JNK信号通路抑制剂可下调p-JNK及BCMA的表达。结论 MM细胞中,BAFF通过BCMA促进MM细胞增殖。JNK信号通路活化与BCMA表达相互作用,共同促进MM细胞的增殖与存活。     

G蛋白偶联受体激酶6对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用的机制。方法:收集多发性骨髓瘤患者标本及健康对照组标本作为体内试验研究对象。分离获得的原代多发性骨髓瘤浆细胞和骨髓瘤细胞系U266、NCI H929为体外试验细胞组。分别用Western blot和quantitative real-time PCR检测GRK6的蛋白表达和mRNA表达。用Brd U试剂盒测定骨髓瘤细胞在GRK6抑制剂CX-4945的处理条件下的增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测其凋亡水平。结果:多发性骨髓瘤组中GRK6的表达明显高于对照组(P0.05),在Ⅰ期的表达高于对照组,Ⅱ期高于Ⅰ期,Ⅲ期高于Ⅱ期(P0.05)。GRK6在多发性骨髓瘤患者标本中蛋白和mRNA的表达均显著高于健康对照组。U266和MM细胞对抑制剂CX-4945呈现高敏性,而NCI H929对其敏感性低。GRK6 siRNA处理细胞后,GRK6在3组骨髓瘤细胞中的表达均显著下调。在细胞增殖检测实验中,CX-4945处理组U266、NCI H929和MM细胞增殖率分别为(58.25±18.24)%、(64.32±20.03)%和(45.42±25.01)%;凋亡检测中,U266、NCI H929和MM细胞凋亡率为(62.82±53.21)%、(43.25±47.05)%和(85.67±40.32)%。结论:多发性骨髓瘤GRK6的表达增强。GRK6抑制剂CX-4945能调节Rac1分子并抑制骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡。GRK6参与骨髓瘤细胞的增殖和凋亡通路。     

重组人血管内皮抑素体外抗多发性骨髓瘤的初步研究

本研究旨在探索重组人血管内皮抑素（recombinant human endostatin,rhES）体外对多发性骨髓瘤（MM）细胞生长的抑制作用及其机制。采用台盼蓝拒染法、MTT法检测rhES对MM细胞的增殖抑制作用,用透射电子显微镜及Annexin V—PI双标记流式细胞术检测rhES对MM细胞的凋亡诱导作用。结果表明：rhES在体外浓度为50、100和200μg／ml时,与多发性骨髓瘤细胞株CZ-1细胞作用72小时,抑制率分别为10．5％、17．9％和23．5％,其抑制CZ-1细胞增殖作用呈浓度及时间依赖性;rhES体外浓度为0—400μg／ml时对正常人骨髓单个核细胞的生长活性无明显抑制作用;而体外浓度为50—200μg／ml时rhES对多发性骨髓瘤原代细胞生长活性有抑制的作用,并且其抑制作用呈浓度及时间依赖性。rhES在体外浓度为100μg/ml时,与CZ-1细胞作用72小时,在透射电子显微镜检测可见典型的细胞凋亡的表现,流式细胞术检测其凋亡率为21．37％。结论：rhEs在体外有抑制多发性骨髓瘤细胞生长的作用,其作用机制是诱导细胞凋亡。rhES可能是用于治疗多发性骨髓瘤的潜在药物。     

DOCK1通过AMPK/mTOR通路对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的调控机制研究

目的 探讨胞质分裂作用因子1(dedicator of cytokinesis 1,DOCK1)在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及相关机制。方法 选取MM患者骨髓组织及人MM细胞株U266和RPMI 8266进行研究,采用实时荧光定量PCR(real time-quantitative PCR,RT-qPCR)法检测MM骨髓组织及细胞中DOCK1相对表达;构建敲低DOCK1表达细胞系,采用CCK-8法和流式细胞术检测DOCK1对MM细胞增殖与凋亡的影响;Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白（c-Myc,cyclin D1）、凋亡相关蛋白（Bax,Bcl-2）、自噬相关蛋白（LC3-II/LC3-I,P62）及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果 LV-DOCK1-shRNA2组的U266和RPMI8266细胞增殖率在24,48和72h均显著低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义（FU266=21.130～100.108,FRPMI8266=35.067～95.677,均P<0.001）...     

沙利度胺联合地塞米松对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用

为了探讨沙利度胺（thalidomide,THD）联合地塞米松（Dx）对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（MTT法）观察不同浓度、不同作用时间的THD或THD＋地塞米松（Dx）作用于KM3细胞后细胞的抑制率,以选取最佳药物干预条件。使用该条件处理KM3细胞,并采用间接ELISA法检测细胞上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、内皮抑素（ES）、凋亡抑制蛋白survivin的表达。结果表明：随着THD浓度的加大、作用时间的延长,KM3细胞生长的抑制也呈增强的趋势,同时THD与Dx联用可显著提高药物对KM3细胞的生长抑制作用。80μg／ml或100μg／mlTHD联合Dx（4μg/ml）可使KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin表达下降,ES表达增加,而对VEGF的表达无影响,结论：THD联合Dx对KM3细胞有协同抑制作用,THD联合Dx可能通过下调KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin的表达,上调ES的表达而发挥抗多发性骨髓瘤的作用。     

姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子所诱导的血管新生作用

为了研究姜黄素对多发性骨髓瘤（MM）细胞脑源性神经营养因子（BDNF）、内皮细胞株TrkB的表达及内皮细胞血管新生的影响，以初步探讨姜黄素通过抑制血管新生治疗多发性骨髓瘤的可能性，采用RT—PCR法分别检测姜黄素处理前后多发性骨髓瘤细胞株KM3中BDNF的基因表达变化与内皮细胞株ECV304中TrkB的基因表达变化，应用内皮细胞迁移试验和内皮细胞小管形成试验评价姜黄素对内皮细胞血管新生的影响。结果显示：外源性BDNF能够有效地促进内皮细胞的迁移和小管形成，但这两个效应均能被姜黄素明显阻断；KM3细胞表达BDNFmRNA，ECV304细胞表达TrkBmRNA，姜黄素对两者的表达均具有抑制作用，并呈剂量-时间依赖性。结论：BDNF是一种具有促进血管增殖活性的细胞因子，姜黄素可以分别下调MM细胞BDNF与内皮细胞T她的表达，阻碍两者间的相互作用，继而抑制血管新生，这可能成为治疗MM潜在的作用靶点。     

米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0.924）和浓度（r=0.947）依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期（P〈0.05）,在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0.05）,BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。     

多西他赛对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究旨在观察多西他赛对人骨髓瘤细胞系RPM18226增殖和凋亡的影响,探讨其作用的分子机制。采用MTT法检测骨髓瘤细胞增殖抑制率,光学显微镜及电子显微镜观察多西他赛对骨髓瘤细胞形态的影响,Annex-in-VFITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,PI染色流式细胞术检测骨髓瘤细胞周期分布情况,半定量RT-PCR检测多西他赛对B观-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达影响,Westernblot法检测多西他赛作用前后骨髓瘤细胞BCL-2蛋白表达变化。结果显示：0．25-8．0μg／ml终浓度的多西他赛均可抑制RPM18226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．927）和浓度（r=0．726）依赖性;多西他赛处理组光学显微镜下可见细胞数量明显减少,排列紊乱,高倍镜可见凋亡细胞,偶见坏死细胞;电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变以及少数坏死细胞;多西他赛可明显诱导骨髓瘤细胞凋亡（P〈0．01）,主要将细胞阻滞于G2／M期（P〈0．01）,作用48h时BCL-2mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0．05）,caspase-8、caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：多西他赛通过诱导细胞凋亡可抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡通路有关。     

膜联蛋白A2基因对多发性骨髓瘤细胞的诱导凋亡作用及相关机制研究

本研究探讨膜联蛋白A2（AnxA2）基因诱导骨髓瘤U266、RPMl8226细胞凋亡的作用及相关机制。采用AnxA2siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMl8226细胞,应用实时PCR和Westernblot检测AnxA2基因和蛋白的表达。应用流式细胞术检测细胞凋亡,应用实时PCR检测凋亡相关基因的表达水平。结果表明,AnxA2siRNA转染U266和RPMl8226后,AnxA2基因和蛋白表达水平均明显下调;细胞凋亡率增高（P〈0．05）,同时降低凋亡相关基因p65NF-κB、儿_2、IL-6的表达（P〈0．05）,增强P53基因的表达（P〈0．05）。结论：AnxA2基因沉默在骨髓瘤细胞U266和RPMl8226凋亡中起促进作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对多发性骨髓瘤细胞MM1R的抑制作用

本研究探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或者联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米,对多发性骨髓瘤(MM)细胞的抗瘤效应。采用MTT法检测LBH589(10、20、50 nmol/L)及50 nmol/L分别联合硼替佐米(10、20 nmol/L)作用于人多发性骨髓瘤MM1R细胞24,48 h后的细胞增殖抑制作用;采用流式细胞术检测LBH589对MM1R细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Western blot分析LBH589(10、20、50 nmol/L)作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度。结果表明,LBH589单药及与硼替佐米联合均能够抑制MM1R细胞增殖,并与药物浓度和作用时间呈正相关。MM1R细胞经药物作用48 h后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期及S期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期,同时可见MM1R细胞的凋亡率增加,作用呈浓度依赖性,且LBH589与硼替佐米联合作用均较单药作用更加明显(均P<0.001);Western blot分析显示,不同浓度LBH589作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度上调,呈浓度依赖性。结论:LBH589能够抑制MM1R细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,且与硼替佐米联合对骨髓瘤细胞有协同作用。     

多发性骨髓瘤患者骨髓中BAFF的含量及B细胞表面BAFF受体表达的研究

本研究旨在分析多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中B细胞活化因子(BAFF)、增殖诱导配体(APRIL)的含量,B细胞、初始B细胞和记忆B细胞表面BAFF受体的表达,以探讨MM骨髓中B细胞的特点。采用流式细胞术检测19例初治MM(初治组)、17例平台期MM(平台期组)、10例对照组骨髓中B细胞(CD19+)、初始B细胞(CD19+IgD+)、记忆B细胞(CD19+CD27+)的表面BAFF受体(BAFF-R、TACI)的表达,ELISA法测定各组骨髓上清中BAFF、APRIL的含量。分析各组结果数据的差异及它们之间的相互关系。结果表明,初治组患者CD19+细胞表面BAFF-R受体表达明显高于平台期组和对照组;初治组患者CD19+IgD+细胞表面BAFF-R受体表达与平台期组无差别,但明显高于对照组;初治组患者CD19+CD27+细胞表面BAFF-R受体表达明显高于平台期组和对照组;各种B细胞表面BAFF-R受体表达在平台期组与对照组之间无差别;TACI受体表达总体水平低,初治组患者与平台期组、对照组比较,CD19+细胞、CD19+IgD+细胞、CD19+CD27+细胞表面TACI受体表达均无明显差异;初治组骨髓上清中BAFF含量明显高于平台期组和对照组,但平台期组与对照组间无明显差异;各组骨髓中APRIL的含量均无明显差异。结论:MM患者骨髓中BAFF含量增高,CD19+细胞、CD19+IgD+细胞和CD19+CD27+细胞表面BAFF受体的表达均增加,这可能有助于促进B细胞的增殖,因而可能与MM发病机制有关。     

三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）作用不同时间段后对乳腺癌细胞MCF-7的诱导凋亡作用和对β3GnT2 及β3GnT8表达的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 不同浓度As2O3作用于乳腺癌细胞后,观察其对乳腺癌细胞生长状态的影响;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察其对MCF-7细胞凋亡的影响;同时采用RT-PCR 和Western Blot 检测相关基因mRNA及蛋白的表达水平变化.结果 不同浓度的As2O3 均可抑制乳腺癌细胞株MCF-7生长,其抑制作用随剂量增大而加强,呈时间剂量依赖性.RT-PCR 结果显示：β3GnT2、β3GnT8在各个浓度As2O3剂量组作用下,与空白组比较,均有不同程度的变化.1μg/mL和2μg/mL浓度组、4μg/mL和40μg/mL浓度组在相同时间段下分别比较,均有统计学差异（P ＜0.05）.Western Blot 检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致.β3GnT2蛋白表达中,4μg/mL（4h）组、40μg/mL（4h） 组分别与4μg/mL（48h）浓度组比较,均有明显差异（P＜0.05）;而在β3GnT8蛋白表达中,40μg/mL（4h）、4μg/mL（48h） 浓度组分别与空白组比较,有显著性差异（P＜0.05）.结论 As2O3对MCF-7细胞有显著的体外生长抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性;As2O3在体外能诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡效应与剂量呈正相关;As2O3还能下调β3GnT2和β3GnT8基因的表达.     

丙戊酸钠联合三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡及其机制研究

本研究旨在探索丙戊酸钠联合三氧化二砷对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制.利用CCK-8法检测不同浓度的丙戊酸钠、三氧化二砷单药和两药联合应用对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.半定量RT-PCR和Western blot分别检测各组BCL-2、BAX、caspase-8及caspase-9的mRNA和蛋白表达水平的变化.结果表明：丙戊酸钠及三氧化二砷均可抑制RPMI 8226细胞增殖,两者联合应用有协同作用（Q值大于1.15）.联合用药组RPMI 8226细胞凋亡率较单药组明显增加（P＜0.05）.与丙戊酸钠或三氧化二砷单药组相比,联合用药组RPMI 8226细胞BCL-2 mRNA及蛋白表达水平下降,BAX、caspase-8及caspase-9mRNA及蛋白表达水平上调.结论：丙戊酸钠和三氧化二砷有协同抑制RPMI 8226细胞增殖和诱导凋亡的作用,这可能与BCL-2表达下调,BAX、caspase-8及caspase-9表达上调有关.     

骨髓微环境对多发性骨髓瘤瘤细胞AP-1家族成员基因表达的调节作用

本研究旨在探讨骨髓微环境对多发性骨髓瘤(MM)细胞AP-1家族成员基因的调节作用。采用免疫磁珠方法分选8例多发性骨髓瘤患者CD138+的瘤细胞并与破骨细胞共培养,用实时定量PCR方法检测与破骨细胞共培养的瘤细胞和与破骨细胞共培养的瘤细胞AP-1家族成员c-jun、junD、fos和fosB的表达量。结果显示,多发性骨髓瘤患者的外周血单个核细胞经破骨细胞培养液培养后10-14天形成破骨细胞,瘤细胞与破骨细胞共培养后与未与破骨细胞共培养相比较,细胞活力明显增高,c-jun、junD、fos和fosB表达量均降低。结论:骨髓微环境可抑制AP-1家族成员的表达,促进MM瘤细胞存活,抑制瘤细胞凋亡。     

重组人红细胞生成素对人多发性骨髓瘤患者铁调节蛋白Hepcidin mRNA表达的影响

本研究探讨人多发性骨髓瘤血清对肝腺瘤细胞系Hep-3b细胞铁调节蛋白hepcidin表达的影响,及白介素-6(IL-6)单克隆抗体或重组人红细胞生成素(rhEPO)对其的抑制作用。在Hep-3b细胞培养液中按10%终浓度加入人多发性骨髓瘤患者血清,共培养后用逆转录聚合酶链式反应半定量方法检测Hep-3b细胞hepcidin mRNA的表达水平。在上述培养体系中,加入人IL-6单克隆抗体或rhEPO观察hepcidin mRNA表达的变化。结果表明,未治疗的多发性骨髓瘤组hepcidin mRNA表达量高于正常对照组及缺铁性贫血组,这种升高作用能被IL-6单克隆抗体或rhEPO完全抑制。对多发性骨髓瘤患者短期随访中,规律治疗能稳定血红蛋白,降低患者血清对Hep-3b细胞hepcidin mRNA的影响。结论:未治疗的多发性骨髓瘤患者血清能促进肝腺瘤细胞系Hep-3b细胞hepcidin表达,这种促进作用可被人IL-6单克隆抗体拮抗,提示IL-6可能导致Hep-3b细胞hepcidin表达量升高,从而造成慢性病性贫血(anemia of chronic disease,ACD)。这种促进作用也能被rhEPO抑制,提示rhEPO可能对ACD有治疗作用。在多发性骨髓瘤患者短期随访中,血红蛋白水平稳定,患者血清对Hep-3b细胞hepcidin mRNA的影响减小,这表明治疗使病情稳定,改善了ACD。     

辛伐他汀对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测不同浓度SIM作用不同时间对SHI-1细胞生长的抑制作用;实验分为阴性对照及辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、20μmol/L),处理48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;半定量RT-PCR法检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达;Western blot法检测caspase-3、BCL-2蛋白表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间与剂量依赖性。与对照组相比,辛伐他汀处理SHI-1细胞48小时后,各浓度组S期细胞百分比明显增多,5μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞能明显阻滞细胞周期进程,但不能诱导细胞凋亡。细胞中BCL-2mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而下降,caspase-3mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而增高(p<0.05)。SHI-1细胞中BCL-2蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而降低,caspase-3蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而增加(p<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调BCL-2和上调caspase-3表达有关。