豆根管食通口服液对人食管癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：观察中药复方制剂——豆根管食通口服液对体外培养的食管癌Eca－109细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法：随机取Eca－109细胞分为三组：实验组、阳性对照组和空白对照组，采用MTT分析法测定不同浓度的豆根管食通口服液对Eca－109细胞增殖的抑制作用；通过倒置显微镜、HE染色观察凋亡细胞；采用免疫组织化学法测定Eca－109细胞内Bcl－2和Bax蛋白的表达。结果：MTT结果显示。豆根管食通口服液对Eca－109细胞的增殖有明显的抑制作用。倒置显微镜、光学显微镜下可发现药物作用组出现细胞核固缩、核碎裂等。免疫组织化学结果显示药物作用组bcl—2蛋白表达降低，bax蛋白表达增高（P〈0．01）。结论：豆根管食通口服液对人食管癌Eca－109细胞系有抗增殖及诱导凋亡作用，其分子机制可能是下调bcl－2基因表达．上调bax基因表达。     

异丙酚对睾丸扭转/复位后生精细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨异丙酚对睾丸扭转/复位后睾丸细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法30只青春期Wistar大鼠随机等分为3组.组1为对照组(左侧睾丸扭转720°即刻复位);组2、3为睾丸扭转/复位模型组(左侧睾丸扭转720°、2h后复住).组3睾丸复位前5min静脉注射异丙酚20mg/kg,继之输入5%异丙酚50mg/(kg·h)1 h;组1、2以生理盐水代之.术后24 h取左侧睾丸标本分别以原位缺口末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学法检测凋亡细胞和Bcl-2、Bax基因蛋白表达.结果与组1比较,组2睾丸生精细胞凋亡指数升高和Bax表达增强(P＜0.01),而睾丸细胞Bcl-2表达下降(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值降低,睾丸病理损害明显.与组2比较,组3睾丸上述改变明显减轻(P＜0.01).结论异丙酚通过调节Bcl-2及Bax蛋白表达抑制睾丸扭转/复住所诱导的生精细胞凋亡增加.     

枸杞多糖诱导雄激素不依赖型人前列腺癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 研究枸杞多糖对诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸杞多糖作用后，采用MTT法测定细胞的增殖情况。采用TUNEL观察PC-3细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 一定剂量的枸杞多糖可明显抑制PC-3细胞的生长，并能渍导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，凋亡率为41．5％，同时PC-3细胞Bcl-2／Bax蛋白比值显著下降，呈明显的剂量／效应关系。结论 枸杞多糖能诱导人前列腺癌PC-3细胞的凋亡，其机制与调节人前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

川芎嗪联合阿糖胞苷对人白血病 U937细胞的增殖、凋亡影响及相关机制的研究

目的：探讨川芎嗪(TMP)联合阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞株 U937增殖、凋亡的影响及相关机制的研究,为临床寻找有效的化疗增敏剂提供实验依据和理论基础。方法实验分为对照组、TMP 组、Ara-c 组及 TMP 联合 Ara-c 组。应用CCK-8法检测各组细胞的增值抑制率;流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率;蛋白质印迹方法检测各组细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 的表达情况。结果TMP(0.5 mg·ml-1)组与 Ara-c(0.02,0.04,0.08,0.16μg·ml-1)组联合作用后,U937细胞的增殖抑制率明显高于相同浓度下 Ara-c 组,差异有统计学意义(t =5.38,t =8.23,t =14.61,t =17.31,P 均<0.05)。TMP(0.5 mg·ml-1)联合 Ara-c(0.08μg·ml-1)组的凋亡率(27.32±3.64)明显高于 Ara-c 组[(15.07±3.85)%]、TMP 组[(3.17±2.20)%]和对照组[(1.8±1.18)%](t=12.25,P <0.05;t=24.15,P <0.05;t=25.52,P <0.05)。蛋白质印迹结果显示,Ara-c 能在一定程度上下调 Bcl-2蛋白的表达,上调 Bax 蛋白的表达;联合用药后 Bcl-2、Bax 蛋白表达水平改变更明显(t=6.32,P <0.05,t=2.60,P <0.05;t=39.06,P <0.05,t=41.67,P <0.05)。结论TMP 能够增强 Ara-c 抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,从而提高 U937细胞对 Ara-c 的化疗敏感性,其机制可能与下调抑凋亡蛋白 Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax 表达有关。     

芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

放射治疗对直肠癌细胞凋亡及相关调控蛋白的影响

目的 探讨直肠癌术前放射治疗对癌细胞凋亡及及相关调控蛋白的影响.方法 分析56例接受术前放射治疗的直肠癌患者的临床资料.采用TUNEL法观察放疗前活检标本及放疗后手术切除标本的细胞凋亡情况.免疫组织化学方法检测放疗前后所取标本的Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果 56例直肠癌患者放疗前和放疗后,肿瘤细胞凋亡指数(AI)及凋亡阳性率均显著增加(均P＜0.001).放疗后Bcl-2蛋白的阳性表达率较放疗前显著升高(P=0.02),且与放疗后肿瘤细胞凋亡率成负相关(r=-0.68,P=0.016);而放疗后Bax蛋白的表达阳性率显著上升(P=0.01),且与放疗后肿瘤细胞凋亡率成正相关(r=0.89,P＜0.001).结论 直肠癌术前放射治疗对癌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达有显著影响,促进肿瘤细胞凋亡.     

当归对心肌梗塞后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的:探讨当归对大鼠心肌梗塞后梗塞灶边缘区心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、心梗组(MI组)、当归干预组(MI+Angelica 组)。经结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型,MI+Angelica组于造模24 h后,每日每只大鼠腹腔注射50%当归注射液3.5~4.0ml(含生药量1.75~2 g),MI组和 Sham组注射同等剂量的生理盐水,术后 1, 2, 3, 4 周处死动物。分别采用TUNEL染色及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡数、心肌细胞凋亡加速基因 Bax和凋亡抑制基因 Bcl 2 的蛋白表达水平。结果:① MI组和MI+Angelica组梗塞灶边缘区均有心肌细胞凋亡; 但MI+Angelica组心肌细胞凋亡数明显低于MI组(P< 0.01); ②与Sham组相比,MI组和MI+Angelica组Bax和Bcl 2基因的蛋白表达均明显升高,加入当归干预后,进一步增加Bcl 2基因的表达(与MI组比, P< 0.01),明显抑制Bax基因的表达(与MI组比, P< 0.01)。结论:心肌梗塞后梗塞灶边缘区有大量的心肌细胞凋亡,当归通过上调凋亡抑制基因Bcl 2和下调凋亡加速基因Bax的表达, 而抑制该区的心肌细胞凋亡, 进而减少梗塞灶边缘区心肌细胞的坏死, 有助于心肌梗塞的治疗和预防心肌梗塞后并发症的发生。     

黄芪甲苷对高糖所致小鼠足细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的 探讨黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对高糖（HG）所致小鼠足细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 将条件性永生的小鼠足细胞分为正常葡萄糖（NG）组、HG组、甘露醇高渗对照组（MA）及HG＋不同剂量（10、50、100 μg/ml）AS-Ⅳ干预组,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测足细胞凋亡,同时采用荧光试剂盒和实时定量PCR法分别检测足细胞Caspase 3活性及足细胞凋亡基因Bax/Bcl-2mRNA表达.结果 HG组足细胞凋亡率和Caspase 3活性均较NG组增高（均P〈0.05）;各剂量AS-Ⅳ组的足细胞凋亡率和Caspase 3活性均较HG组下降（均P〈0.05）,且呈剂量依赖关系.HG组足细胞促凋亡基因Bax mRNA表达水平较NG组增高.而抗凋亡基因Bcl-2 mRNA则较NG组下降（均P〈0.05）;各剂量AS-Ⅳ组的足细胞Bax mRNA水平均较HG组下降,而Bcl-2 mRNA水平则均较HG组增高（均P〈0.05）,且均呈剂量依赖性.结论 AS-Ⅳ可能通过调节足细胞Bax/Bcl-2 mRNA表达水平,从而抑制HG所致的足细胞凋亡.     

心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的变化及氯沙坦的影响

目的探讨慢性压力负荷性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡、凋亡蛋白Bcl-2、Bax的变化及氯沙坦对心肌细胞的影响。方法缩窄鼠的腹主动脉复制慢性压力负荷性心力衰竭模型,28只大鼠随机分为心力衰竭组(心衰组)10只、氯沙坦治疗组(治疗组)10只、对照组8只。手术后6周,充血性心衰模型形成。治疗组给予氯沙坦10mg·kg-1·d-1灌胃,心衰组和对照组给同量生理盐水灌胃。在3月末测量血流动力学指标后,处死大鼠。原位脱氧核糖核酸酶末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;免疫组化法测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达。结果心衰组与对照组相比,心功能明显的减退(P<0.01),心肌细胞凋亡指数明显增加(P<0.01),心肌细胞Bcl-2表达减低、Bax表达增加。治疗组与心衰组相比,心室重构改善(P<0.05);心肌细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2的表达增加、Bax减少。结论压力负荷诱导的心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与降低Bcl2蛋白、增加Bax蛋白的表达有关;氯沙坦可能通过改变Bcl-2和Bax在心肌细胞中的表达,减轻心肌细胞凋亡来改善心功能。     

大蒜素诱导THP-1细胞凋亡的作用及机制

目的:探讨大蒜素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1凋亡及凋亡基因Fas/FasL表达的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;AO/EB染色观察细胞凋亡形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;FCM检测细胞凋亡率和细胞周期分布;免疫细胞化学法和Western blot观察细胞Fas、FasL蛋白表达。结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,呈时间-剂量依赖性,72h中效浓度(IC50)为12.8mg/L。Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加。6.4、12.8mg/L大蒜素作用THP-1细胞72h后,FCM检测G0/G1期细胞比率明显上升,而S期比率明显下降,均出现凋亡峰,凋亡率分别为(22.93±2.93)%和(36.73±2.88)%,呈剂量依赖性,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。在荧光显微镜下可区分早、晚期凋亡细胞、活细胞和坏死细胞。免疫组化显示大蒜素作用后Fas/FasL蛋白上调,主要分布在细胞浆和细胞膜。Western blot结果显示Fas/FasL蛋白表达量随大蒜素浓...     

肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DN...     

结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响.方法:Mtb以10:1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型.采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达.结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%.结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加.     

低氧刺激THP-1细胞炎症因子的表达及其相关通路的研究

目的观察低氧是否促进人单核细胞炎症因子的分泌,以及探讨其是否通过PI3K/Akt和低氧诱导因子(HIF-1α)信号通路而发挥作用。方法 1体外低氧(1%O2)培养人源单核细胞系THP-1,24 h;2分别加入PI3K抑制剂(LY294002)和HIF-1α抑制剂(KC7F2)预处理THP-1细胞后再进行低氧干预;3在常氧下,分别加入Akt激动剂(胰岛素)和HIF-1α激动剂(二甲氧乙二酰甘氨酸,DMOG)对THP-1细胞进行干预。Western blot检测p-Akt和HIF-1α蛋白表达的水平,ELISA法检测IL-1β和TNF-α分泌的变化。结果与对照组(常氧培养)比较,低氧干预后THP-1细胞p-Akt、HIF-1α的蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α分泌增加,差异有统计学意义(P0.05);与低氧组(低氧培养)比较,PI3K抑制剂预处理能显著降低p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α抑制剂预处理能降低HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能减少IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,Akt激动剂能增加p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α激动剂能增加HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能增加IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05)。结论低氧可能是通过激活PI3K/Akt/HIF-1α信号通路,促进THP-1细胞炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌,从而促进慢性炎症的发展。     

雌激素替代治疗对去卵巢雌性大鼠萘性白内障晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察雌二醇及雌二醇联合孕酮对去卵巢雌性大鼠萘性白内障晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 将32只健康成年雌性SD大鼠随机分为4组,即对照组、卵巢切除组、雌二醇组(卵巢切除加雌二醇替代治疗组)、雌二醇加孕酮组(卵巢切除加雌二醇和孕酮替代治疗组).术后2周各组均用萘混悬液灌胃并行裂隙灯显微镜检查,观察各组大鼠晶状体变化;灌胃6周后处死大鼠,采用放射免疫法检测血清中雌二醇和孕酮浓度,免疫组化(S-P)法观察晶状体上皮细胞(LECs)中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 雌二醇组、雌二醇加孕酮组以及对照组晶状体浑浊程度较卵巢切除组轻,出现时间晚;雌二醇组和雌二醇加孕酮组血清雌二醇与孕酮水平接近对照组(P>0.05);除卵巢切除组外,3组间Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);卵巢切除组血清雌二醇与孕酮水平显著低于其余3组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达阳性率较其余3组低,Bax蛋白表达阳性率则较其余3组高(P<0.05).结论 抑制晶状体上皮细胞凋亡可能是雌二醇对萘处理去卵巢雌性大鼠晶状体保护作用的机制之一;雌二醇可能通过下调Bax蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达抑制LECs的凋亡而阻止晶状体混浊.     

冬虫夏草对乳腺癌细胞凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的:明确中药冬虫夏草(cordyceps sinensis,CS)对人乳腺癌细胞凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法:应用MTT比色法检测CS对乳腺癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果:CS对人乳腺癌细胞株MCF-7生长有抑制作用,且呈时间/浓度依赖性;CS使MCF-7细胞发生细胞凋亡,流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰,且凋亡率呈浓度依赖性;细胞NDA裂解成180～200bp及其倍数的片段,电泳得到特有的梯形条带;随着药物浓度的增加,Bcl-2表达逐渐减弱,Bax表达逐渐增强。结论:CS可诱导乳腺癌细胞凋亡,为CS的抗肿瘤应用提供了理论依据,CS可能通过调控Bcl-2、Bax基因表达而诱导凋亡。     

环孢素A对THP-1细胞多药耐药相关蛋白-1表达的影响

目的:观察环孢素A(Cyclosporin A,CsA)处理后急性单核细胞白血病细胞株THP-1多药耐药相关蛋白-1(Multidrug resistance associated protein-1,MRP1)表达量和活性的变化,探讨CsA逆转MRP1的相关机制及THP-1细胞对柔红霉素(Daunorubicin.DNR)的增敏作用.方法:免疫细胞化学法和Western blot法检测CsA处理后THP-1细胞MRP1表达量的改变,噻唑蓝(MTT)法、荧光分光光度法、共聚焦激光扫描显微镜(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)法分别检测CsA处理后50%THP-1细胞生长受抑的DNR浓度(IC50)、THP-1细胞内DNR含量及分布.结果:CsA处理组较对照组MRP1表达量定性、定量检测均增加(P＜0.05);IC50明显下降(0.558 4±0.0670与1.4997±0.2338,P＜0.01),细胞内DNR含量明显增加(126.500 0±14.781 5与20.9000 4-2.497 5,P＜0.01),分布更加均匀.结论:CsA增加MRP1的表达量,但降低其活性,提示CsA通过降低MRP1活性而非减少其表达量实现对MRP1的逆转作用和对THP-1细胞的增敏作用     

维拉帕米对肝星状细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究维拉帕米对人肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSCs)凋亡的影响以及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达的变化.方法:CCK-8法检测不同浓度的维拉帕米处理48 h对HSCs细胞增殖的抑制作用;漉式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HSCs细胞的凋亡率;免疫组化SABC法检测Bcl...     

大黄素诱导白血病KG-1a细胞凋亡及对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的本研究观察大黄素(emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用。方法采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化。结果大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系。结论大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关。     

结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白诱导THP-1细胞凋亡的研究

目的：观察结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白（Mtb P19）对THP-1细胞凋亡的影响。方法：从培养的结核杆菌H37Ra制备Mtb P19,以5、10、20μg/ml Mtb P19作用于佛波醇酯（PMA）分化的THP-1细胞,37℃、5%CO2孵箱孵育4 h。Wright-Giemsa染色观察细胞形态变化;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：终浓度为5μg/ml的Mtb P19即可诱导THP-1细胞凋亡,且凋亡率随Mtb P19作用浓度的升高而增加（P〈0.01）;Wright-Giemsa染色镜下可见部分细胞体积变小、圆缩,核固缩,核断裂。结论：结核分枝杆菌P19以剂量依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。