高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及降钙素基因相关肽的保护作用

目的 观察高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用.方法 将原代分离培养的孕19 d早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,实验随机分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21%的空气和60%的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP受体拮抗剂组在高氧CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP 8-37).培养24 h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA表达.结果 与空气组比较,高氧组ROS、MDA水平及细胞凋亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均显著降低(P均<0.01).与高氧组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞凋亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均明显增高(P均<0.01).高氧CGRP受体拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 暴露于60%氧24 h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SPC mRNA表达下降;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SPC mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体活性氧产生及相关通路的影响

目的探讨短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）线粒体Ca²⁺ /烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD⁺）/沉默信息调节因子3（SIRT3）/超氧化物歧化酶2（SOD2）通路及活性氧的影响。 方法将RLE-6TN细胞株细胞分为对照组、高氧组及线粒体钙通道拮抗剂组（拮抗剂组）。对照组细胞置于常规细胞培养箱中,高氧组细胞置于氧浓度为90%的培养箱中,拮抗剂组细胞加入钌红（2 μmol / L）后置于氧浓度为90%的培养箱中,各组均持续培养4 h。随后,对各组细胞线粒体内Ca²⁺、活性氧、NAD⁺、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）含量进行检测,并计算NAD⁺ / NADH比值;同时,采用实时荧光定量PCR检测SIRT3和SOD2信使RNA（mRNA）水平。 结果各组间细胞线粒体内Ca²⁺、活性氧、NAD⁺、NADH、NAD⁺ / NADH比值及SIRT3 mRNA、SOD2 mRNA表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 183.500、135.900、32.140、51.520、128.300、59.970、45.020,P均< 0.001）。且与对照组及拮抗剂组比较,高氧组细胞线粒体内Ca²⁺[（19.5 ± 0.8）、（17.2 ± 0.7）、（24.3 ± 0.3）nmol / L]、活性氧[（491 ± 9）、（480 ± 5）、（530 ± 6）相对荧光单位]及NADH[（0.85 ± 0.03）、（0.87 ± 0.04）、（1.06 ± 0.06）nmol / 10⁴ cells]含量均明显升高,而NAD⁺含量[（3.30 ± 0.12）、（3.24 ± 0.14）、（2.58 ± 0.29）nmol / 10⁴ cells]、NAD⁺ / NADH比值[（3.89 ± 0.15）、（3.71 ± 0.15）、（2.44 ± 0.27）]、SIRT3 mRNA[（1.01 ± 0.11）、（0.96 ± 0.08）、（0.45 ± 0.09）]及SOD2 mRNA[（1.01 ± 0.14）、（1.05 ± 0.11）、（0.48 ± 0.10）]表达水平均显著降低（P均< 0.05）。 结论短时间高氧可通过AECⅡ线粒体内Ca²⁺ / NAD⁺ / SIRT3 / SOD2通路导致活性氧蓄积。     

蒿甲醚对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA的影响

目的:蒿甲醚除了具有良好的临床治疗作用外,对正常组织有极大的副作用。实验拟观察蒿甲醚对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响。方法:实验于2005-09-20/2007-03-10在山东省泰山医学院生命科学研究所、中心实验室和机能实验室完成。①实验材料:蒿甲醚购自昆明制药厂,分析纯,使用前先进行预处理,处理方法:研磨后用溶液配成1g/L的母液,超声助溶解后供实验用。Wistar大鼠70只,体质量(70±15)g,雌雄不拘,由山东大学医学院实验动物中心提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:将大鼠随机分为普通饲料对照组(n=10)和实验组(n=60),实验组分6个亚组,分别在饲料中加入0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2mg/kg的蒿甲醚。采用单细胞凝胶电泳技术观察大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA的改变。结果:70只大鼠,饲养过程中实验组死亡6只,死亡原因为饲料添加蒿甲醚造成。当饲料中的蒿甲醚浓度为0.1mg/kg时,大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA损伤率与对照组相比,差异无统计学意义;饲料中的蒿甲醚浓度超过0.2mg/kg时,大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA损伤率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义。且损伤程度与饲料中蒿甲醚含量呈正相关。结论:当饲料中的蒿甲醚浓度超过0.2mg/kg时,蒿甲醚可在一定程度上改变肺泡Ⅱ型上皮细胞的DNA生物学特性。且随着蒿甲醚浓度的升高,这种损害更为明显。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞形态与功能的研究进展

肺泡 型上皮细胞 (type alveolarepithelial cell or type pneumocyte,AT )是一种多功能细胞 ,对维持肺泡结构和功能有重要意义。其主要功能有 :1增殖功能 :它是 型、 型上皮细胞的祖细胞 〔1 ,2〕,在正常细胞更新和损伤修复过程中 ,AT 可以分化为 型细胞 ,也可通过有丝分裂补充自身的数量 ,因此被认为是肺泡上皮的干细胞〔3,4〕 ;2合成和分泌肺表面活性物质 (pulm onarysurfactant,PS) ;3维持肺泡内外液体平衡 ;4近年还发现 AT 具有免疫调节的作用 〔5〕。AT 的位置比较特殊 ,容易受到来自空气和血液两方面的损害。空气中的各种有…     

内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响

目的:观察内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡpenumonocyte)水通道蛋白5(aquaporin-5)的影响。方法:对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,用1μg/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞4h,并将肺泡Ⅱ型上皮细胞随机分为正常对照组和LPS组。分别采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组织化学法(IHC)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞中水通道蛋白5的表达。结果:RT-PCR结果显示LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞后水通道蛋白5的信使核糖核酸(mRNA)水平明显低于正常对照组(P<0.01)。免疫组织化学法显示大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上水通道蛋白5呈阳性染色,且LPS刺激后肺泡Ⅱ型上皮细胞上水通道蛋白5阳性细胞率显著低于正常对照组(P<0.01)。结论:大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上存在水通道蛋白5,且水通道蛋白5表达减少可能与LPS引起的肺水肿有关。     

脂氧素A4对脂多糖攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ penumonoeyte,ATⅡ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)5的影响.方法 对大鼠ATⅡ细胞进行分离、纯化,以1 μg/mL的LPS刺激ATⅡ 4 h建立LPS攻击ATⅡ细胞模型.将ATⅡ随机分为:空白对照(无血清的培养基不含任何药物)组;溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;LPS(1μg/mL)组;LXA4(1×107mol/mL)组;LPS+LXA4组.用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠ATⅡ中AQP5的信使核糖核酸(mRNA)的变化,免疫组织化学方法(IHC)检测ATⅡ中AQP5蛋白表达.结果 1μg/mL的LPs刺激ATⅡ4 h后,ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P<0.01),而LPS+LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS组明显增高(P<0.01),且LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也明显增高(P<0.01).结论 大鼠ATⅡ上表达有AQP5,LXA4能促进AQP5 mRNA和蛋白表达上调,提示LXA4可能通过上调AQP5的表达起到促进肺泡水肿液清除作用.     

Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡在高氧肺损伤中的作用机制

凋亡有外源性途径和内源性途径。外源性途径通过人胱天蛋白酶8（caspase-8）和BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）间接作用于内源性途径.使死亡受体通路与线粒体通路联系起来,有效放大凋亡信号。Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）是肺组织中的重要细胞,AECⅡ的功能状态是决定肺损伤病理转归的主要因素。高氧导致AECⅡ凋亡在高氧肺损伤中起重要作用。本文就高氧肺损伤引起AECⅡ凋亡机制作一综述。     

HO-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的 研究血红素加氧酶-1(HO-1)对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC-Ⅱ)生长的直接影响.方法 免疫黏附法纯化SD大鼠AEC-Ⅱ,细胞进行活性和纯度鉴定后,随机分为七组:A组(正常对照组);B组(H2O2组,0.5 mmol/L H2O2);C1～5组(0.01～50 μmol/L HO-1).各组进行细胞形态学观察、细胞计数和以MTT法测定OD值.结果 ①免疫黏附法可收获AEC-Ⅱ(2～2.5)×107个/鼠,活性和纯度均＞90%;电镜下可见AEC-Ⅱ特征性结构--嗜锇性板层小体(Lb).②B组培养AEC-Ⅱ至29 h,发现贴壁细胞数量减少,胞内可见反光增强的空泡,上清液中可见较多的细胞碎片.③C组与A组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P＞0.05),细胞形态无明显改变;与B组比较细胞计数、OD值差异有统计学意义(P＜0.05).结论 0.01～50 μmol/L HO-1对原代培养AEC-Ⅱ的生长没有直接的细胞毒性,可以在体外AEC-Ⅱ培养中使用.     

生长激素抑制大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的机制

目的 研究生长激素(growth horlnone,GH)抑制脂多糖(Lipopolysaceharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AEC Ⅱ)凋亡的口I能机制.方法 原代培养成年雄性SD大鼠AECⅡ细胞,按如下方式分5组(每组8个复孔):I组:对照组(仅加DMEM培养基);Ⅱ组:LPS10ug/ml损伤组;Ⅲ组:GH1组(UPS 10 ug/ml+GH 50 ng/ml);Ⅳ组:GH2组(LPS 10 ug/ml+GH 100ng/ml);V组:GH3组(LPS 10 ug/ml+GH 200 ng/ml).IPS在其他试剂均加入并置37℃5%CO2培养箱培养1 h后再加入.培养24 h后,分别对AECⅡ细胞进行流式细胞仪检测细胞凋亡和免疫组化法检测Fas蛋白表达.统计方法 采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 (1)Ⅱ～V组的细胞凋亡率及坏死率均明显高于I组(g凋亡率Ⅰ.Ⅱ=12.26,q坏死率Ⅰ,Ⅱ=18.34,q调亡率Ⅰ.Ⅲ=9.63,q坏死率Ⅰ.Ⅲ=5.75,q凋亡率I,Ⅳ=9.15,q坏死率Ⅰ,Ⅳ:5.39,q凋亡率Ⅰ.Ⅴ=10.87,q坏死率Ⅰ,Ⅴ=5.91,P<0.05).但Ⅲ～Ⅴ比Ⅱ组均有明显下降(q凋亡率Ⅱ,Ⅲ=15.24,q坏死率Ⅱ,Ⅲ=16.38,q凋亡率Ⅱ.Ⅳ=15.95,q坏死率Ⅱ.Ⅳ=16.95,q凋亡率Ⅱ.Ⅴ:14.57,q坏死率Ⅱ,Ⅴ=15.61,P<0.05).(2)Ⅱ～Ⅴ组Fas阳性率明显高于Ⅰ组(qⅠ.Ⅱ=35.67,qⅠ,Ⅲ=14.32,qⅠ.Ⅳ=13.87,q Ⅰ,=26.16,P<0.05),但Ⅲ～V组Fas阳性率比Ⅱ组有明显降低(qⅡ,Ⅲ=12.54,qⅡ,Ⅳ=13.02,qⅡ,Ⅴ=6.96,P<0.05).结论 GH可能通过降低AECⅡ细胞的Fas抗原的表达而使LPS所诱导的AECⅡ细胞凋亡减少.     

脂氧素A4对内毒素攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞Na+-K+-ATP酶的影响

目的 探讨促炎症消退介质脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对内毒素(endotoxin)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ epithelial cells,ATⅡ)Na+-K+-ATP酶的影响.方法 AT Ⅱ成功分离纯化后随机(随机数字法)分为5组:①空白组(PBS);②溶剂对照组(乙醇,0.7μL/mL);③脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(1μg/mL)组;④LXA4(1×10-7mol/mL)组;⑤LPS(1μg/mL)+LXA4(1×10-7mol/mL)组.药物干预4 h后用RT-PCR法检测ATⅡ上Na+-K+-ATP酶α1,β1亚基的mRNA的表达,用高效液相法测定细胞ATP,ADP,AMP和腺嘌呤核苷酸总量(TAN),间接测得Na+-K+-ATP酶的活性和AT Ⅱ能荷.结果 RT-PCR结果显示:LPS组α1,β1亚基的mRNA表达较空白组明显降低(P＜0.05),而LPS+LXA4组的α1,β1亚基的mRNA表达较LPS模型组有明显增高(P＜0.05).酶活性检测结果显示:LPS组Na+-K+-ATP酶活性较空白组明显增高(P＜0.05).与LPS刺激组比较,LPS+LXA4组酶活性明显增高(P＜0.05).能荷结果显示:LPS组较空白组明显增高(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LXA4能上调内毒素攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Na+-K+-ATP酶α1,β1亚基mRNA表达,增强Na+-K+-ATP酶的活性,并能有效维持细胞的能量代谢平衡,提示LXA4可能通过上调Na+-K+-ATP酶的基因表达和功能活性,维持细胞代谢稳定,从而起到促进肺泡水肿液清除的作用.     

脂氧素A4对肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白1,3,5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxirA4,LxA4)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡpenumonocyte,AT Ⅱ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)1,3,5的影响.方法 每次取SPF级健康SD雄性大鼠,体质量200～250 g一只,对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,鉴定,得到纯度为≥90%的肺泡Ⅱ型上皮细胞,将细胞随机分为:①溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;②空白组(无血清的培养基不含任何药物);③LXA4(1×10-7moL/mL)组;④LPS(1μg/mL)组;⑤LPS+LXA4(1μg/mL LPS+1×10-7moL/mL LXA4)组.药物刺激4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA的表达,免疫组织化学方法(IHC)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5蛋白的表达.试验重复6次.采用方差分析进行统计学处理.结果 RT-PCR和免疫组织化学法结果显示,用1 μg/mL的LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞4 h后ATⅡ上AQP1,AOP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P＜0.01),而LPS+LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS模型组有明显增高(LPS+LXA4,AQP1:0.647±0.132,AQP3:0.900±0.856,AQP5:0.879±0.058;LPS.AQP1:0.297±0.133,AQP3:0.512±0.113,AQP5:0.647±0.110;P＜0.01),且LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也有明显增高(LXA4,AQP1:0.539±0.142,AQP3:0.818±0.176,AQP5:0.841±0.066;Blank Control,AQP1:0.518±0.139;AQP3:0.138±0.136,AQP5:0.766±0.066;P＜0.01).结论 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上表达有AQP1,AQP3和AQP5,LXA4能促进脂多糖攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5mRNA和蛋白表达上调.     

氧化应激诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及Bax和p53的表达变化

目的 探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)凋亡的变化规律及Bax和p53表达的变化.方法 用过氧化氢(H2O2,500 μmol/L)处理不同时间模拟机体活性氧攻击损伤ATⅡ细胞的体内情况,建立氧化损伤性细胞模型;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测Bax和p53的蛋白表达变化.结果 与对照组比较,随H2O2刺激时间延长,ATⅡ细胞存活率明显下降(F=85.211,P＜0.05),线粒体膜电位也明显下降(F=72.453,P＜0.05),凋亡率却明显增加(F=54.002,P＜0.05);同时发现Bax蛋白和p53蛋白表达均明显增加(F1=28.118,F2=43.456,P均＜0.05).结论 氧化应激能损伤ATⅡ细胞,使细胞线粒体膜电位下降,细胞凋亡率增加、存活率下降,Bax和p53可能参与了ATⅡ细胞的凋亡.     

早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化、原代培养及鉴定

【目的】建立一套可靠的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）分离、纯化和培养技术,用于体外研究早产儿肺部疾病。【方法】采用胰酶和胶原酶消化胎龄20d早产鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化早产鼠AECⅡ,并进行原代培养。用细胞角化蛋白（cytokeratin）进行二氨基联苯胺（DAB）及荧光免疫细胞化学显色,和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。【结果】AECⅡ体外培养24～48h,增殖代谢旺盛,进入对数生长期,生长状态最佳。cytokeratin在DAB免疫细胞化学及荧光免疫细胞化学中均有表达。透射电镜观察可见细胞内板层小体。【结论】该方法所得细胞产量大、纯度高,是一种可靠的早产鼠AECⅡ的分离纯化培养技术,对体外研究早产儿肺部疾病如高氧肺损伤等有重要意义。     

大鼠肠缺血灌注肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡坏死及继发性坏死与肺损伤

肺泡Ⅱ型上皮细胞（ＥＰⅡ）是肺泡膜的重要组成部分。我们观察了肠缺血再灌注时ＥＰⅡ凋亡率、坏死率及继发性坏死及其在肺损伤中的作用,现将结果报告如下。１　材料与方法１－１　动物分组与模型制作　健康雄性成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只,随机分为正常对照组（Ｎ）、肠缺血２ｈ组（Ｉ）、肠缺血２ｈ再灌注１５ｍｉｎ组（Ｒ１）、３０ｍｉｎ组（Ｒ２）、６０ｍｉｎ组（Ｒ３）共５组,每组８只。１％戊巴比妥０－３ｍｌ／１００ｇ背部皮下注射麻醉,无菌条件下开腹,微动脉夹闭肠系膜上动脉２ｈ后松夹再灌注。不同时间点活杀动物,留取血…     

生长激素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡抑制作用的观察

目的：观察不同剂量生长激素（GH）对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT－Ⅱ）凋亡的影响。方法：建立体外培养的大鼠AT－Ⅱ细胞盐酸损伤模型（pH值6．0－6．2）,加入不同剂量的GH,采用流式细胞仪（FCM）检测AT－Ⅱ细胞凋亡率和坏死率,并以2,3－二苯基溴化四唑（MTT）染色记数法绘制活细胞生长曲线。结果：盐酸可导致AT－Ⅱ细胞损伤,表现为AT－Ⅱ细胞坏死和凋亡发生率增高;GH能促进AT－Ⅱ细胞增殖并降低其凋亡率,在10－500mg/L范围内其抗凋亡和促增殖作用呈剂量依赖性增强。结论：GH对盐酸所致的AT－Ⅱ细胞凋亡有直接的抑制作用。     

谷氨酰胺抑制内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α释放

目的 研究谷氨酰胺(Gin)调节内毒素(LPs)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌及谷胱甘肽(GSH)在其中的作用.方法 原代培养成年雄性SD大鼠AECⅡ细胞,原代培养24 h后,分为空白对照、10.0 mmol/L Gin,1 μg/mL LPS、LPS+(0.5、2.0和10.0 mmol/L)Gln六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,Gln在LPS刺激前8 h加入;另一组实验分为l μg/mL LPS,LPS+10.0 mmol/L Gln,LPS+100 μmol/L丁硫氨酸哑砜胺(BSO)、LPS+Gln+(1、10和100 μmol/L)BSO六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,BSO和Gln在LPS刺激前8 h加入.以二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定细胞内GSH浓度,酶联免疫(ELISA)法测定细胞上清TNF-α水平.统计学方法用方差分析(LDS-t检验)比较各组间差异.结果 谷氨酰胺可以提高LPS诱导大鼠AECⅡ细胞的GSH浓度,降低TNF-α的水平,其作用随浓度的增加而增加,在10 mmol/L浓度最为显著,GSH水平从(50.69±3.04)pmol/mgcell上升到(126.74±7.13)pmol/mg cell(P<0.01),TNF-α水平从(1104.5±48.8)pg/mL下降到(329.67±48.27)pg/mL(P<0.01);同时,谷氨酰胺的作用可以被10 μmol/L以上浓度BSO显著阻断(P<0.01).结论 谷氨酰胺可以抑制LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞TNF-α的释放,其作用可能是通过促进GSH的合成而实现的.     

降钙素基因相关肽对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及蛋白激酶Cα信号途径的调控作用

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)的促增殖作用及其蛋白激酶Cα/核转录因子-κgB(PKCa/NF-κB)信号途径的调控机制.方法 将原代分离培养的孕21 d胎鼠AEC Ⅱ分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组.空气组和高氧组分别在21%O2或85%O2中暴露24 h;高氧CGRP组在高氧处理前加入CGRP,高氧CGRP拮抗剂组同时加入CGRP和CGRP受体拮抗剂CGRP8-37.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和流式细胞术测定细胞增殖能力和不同细胞周期细胞比例;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测胞膜和胞质PKCα的表达;激光共聚焦检测NF-κB p65的细胞核表达.结果 高氧组G0/G1期细胞比例明显高于空气组[(80.652±6.253)%比(45.825±2.899)%],而细胞增殖率[(68.752±5.766)%比(100.000±6.682)%]及S期、G2/M期细胞比例[分别为(14.198±4.785)%比(27.470±2.775)%,(5.148±1.688)%比(26.708±1.863)%]均低于空气组(均P<0.01).CGRP干预可提高高氧暴露AEC Ⅱ的增殖能力[(94.813±6.102)%],使S期和G2/M期细胞增多((30.547±9.861)%,(17.668±9.509)%,均P<0.01].高氧组胞膜与胞质PKCα比值显著低于空气组(0.63±0.10比1.00±0.09),而NF-κB p65的荧光强度高于空气组(22.98±2.20比14.54±2.35);高氧CGRP组胞膜与胞质PKCα比值(1.41±0.23)及核内NF-κB p65荧光强度(35.38±3.37)均高于高氧组(0.63±0.10,22.98±2.20)及高氧CGRP拮抗剂组(O.74±0.10,24.88±1.81,均P<0.01).结论 CGRP可促进高氧暴露下AEC Ⅱ的生长增殖;PKCα参与了CGRP对细胞作用的信号传递,而NF-κB是PKCα的下游分子之一,仅部分执行PKCα的效应.     

氨溴索对铜绿假单胞菌肺炎大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构的影响

目的 :研究铜绿假单胞菌 (PA)肺炎大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的超微结构变化 ,并观察盐酸氨溴索对上述变化的影响。方法 :将 30只雄性SD大鼠随机平均分为 3组 :感染组 ,气管内注射 2个麦氏单位PA标准菌株ATCC2 785 3菌液 0 .2ml,建立PA肺炎大鼠模型 ;治疗组 ,气管内注射菌液 6h后给以盐酸氨溴索 2 0mg/kg静脉注射 ;对照组 ,经气管注射等量生理盐水。 6h后处死大鼠 ,观察右肺组织病理学变化 ,并作中性粒细胞 (PMN)计数。结果 :受感染大鼠大体标本和病理切片均显示典型的感染征象。湿 /干比值分别为 :感染组 8.5 8± 0 .39,治疗组 7.4 7± 0 .2 2 ,对照组 4 .4 8± 0 .15 (P <0 .0 5 )。计数分别为 :感染组(111.4± 14 .8) ,治疗组 (38.3± 3.11) ,对照组 (4 .4± 2 .6 )个 /高倍视野 (P <0 .0 5 )。肺组织电镜观察 ,治疗组见肺泡Ⅱ型上皮细胞内的板层体空泡化较对照组减轻 ,肺泡表面的表面活性物质层分布较均匀 ,未见明显断裂。结论 :PA肺炎大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞内的板层体及肺泡表面活性物质层受到损害。氨溴索治疗可部分减轻肺表面活性物质系统的损害。     

血必净注射液对百草枯刺激培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的 探讨中药血必净注射液对百草枯(PQ)刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及其可能机制.方法 将肺泡Ⅱ型上皮细胞原代培养后,分为空白对照组、PQ组(加入含0.1 mmol/L PQ溶液)和血必净组(在PQ组的基础上加入血必净注射液40 g/L).测定细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)活性,丙二醛(MDA)含量,肺泡Ⅱ型上皮细胞成活率;用免疫组化法检测肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)表达.结果 与空白对照组比较,PQ组SOD活性显著下降((9.44±0.27)μU/L比(30.66±0.62)μU/L],MDA含量及LDH、AKP活性显著增加(MDA:(9.52±0.24)μmol/L比(2.94±0.21)μmol/L,LDH:(114.67±22.54)μmol·min-1·L-1比(44.00±16.73)μmol·min-1·L-1,AKP:(63.50±4.04)μmol·min-1·L-1比(52.67±3.33)μmol·min-1·L-1],肺泡Ⅱ型上皮细胞成活率明显下降((65.31±4.65)%比(100.00±2.00)%],SP-A表达明显降低(积分吸光度(IOD):16.338±10.210比23.092±9.275,平均吸光度(AOD):0.420±0.091比0.595±0.110,P<0.05或P<0.01].与PQ组比较,血必净组SOD活性((18.50±0.31)μU/L]显著上升,MDA含量((7.22±0.25)μmol/L]及LDH((83.17±18.66)μmol·min-1·L-1]、AKP活性((58.33±3.45)μmol·min-1·L-1]显著降低,细胞成活率显著增加((81.12±4.21)%],SP-A表达(IOD:18.498±7.493,AOD:0.513±0.103)明显增加(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液通过提高SOD活性、降低LDH、AKP活性及MDA含量,从而对PQ刺激的肺泡Ⅱ型上皮细胞起到保护作用,并增加SP-A的表达.     

钙通道与急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的研究进展北大核心CSCD

急性肺损伤（ ALI）是重症监护病房最常见的急危重症,由肺内外各种因素引起肺泡上皮细胞（ AEC）和肺毛细血管内皮细胞损伤,造成急性肺水肿,导致顽固性低氧血症,甚者并发严重呼吸衰竭。近年来研究发现,钙离子在细胞凋亡中发挥着重要的作用,本文就钙离子与ALI肺泡Ⅱ型上皮细胞（ AECⅡ）凋亡作以下论述。