套式/多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价

目的 与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR（UT-PCR）在疟疾监测中的应用价值。 方法 在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR 2～3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。 结果 400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%（370/400）,其中阴性154例,阳性216例（间日疟117例,恶性疟99例）。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份“假阳性”原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。 结论 采用更敏感的UT?鄄PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。     

一个红细胞内同时寄生不同期间日疟原虫输入性病例1例

2012年对云南省腾冲市1例间日疟患者血样采用Care Start~(TM)疟疾快速诊断试剂盒、吉氏染色镜检和巢式PCR方法进行鉴定。Care Start~(TM)疟疾快速诊断试剂盒检测结果判定为除恶性疟原虫以外的间日疟原虫、三日疟原虫或卵形疟原虫感染。镜检结果显示,患者血样厚、薄血片中可见间日疟原虫环状体多核、多重感染现象,1个环状体有2个及以上核的占14.68%(188/1 280);同时寄生2个及以上环状体的红细胞占22.50%(288/1 280);1个红细胞内同时寄生环状体和滋养体、环状体和配子体。巢式PCR结果显示,患者血样为间日疟原虫特异性DNA片段阳性。结合检测结果、流行病学资料和临床表现,确诊该患者为输入性间日疟原虫感染病例,且一个红细胞内同时寄生不同期间日疟原虫。     

标签引物-套式/多重PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的研究

目的 建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应（PCR）系统。 方法 应用标签引物扩增技术、Primer Premier 5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR，检测疟疾患者滤纸血样并与镜检结果进行比较。 结果 新建立的标签引物套式/多重PCR，检测模拟现场滤纸血样的敏感性为恶性疟原虫1～2个虫/μl血，间日疟原虫5～10个虫/μl血。检测71份现场采集的镜检疟原虫阳性滤纸血样（恶性疟24份和间日疟47份）的结果与镜检结果的符合率分别为87.5%和100%。 结论 通过标签引物扩增技术优化的套式/多重PCR系统，适用于检测现场采集的滤纸血样，其检出低原虫血症的敏感性和鉴定虫种的准确性均优于镜检法，是很有潜力的疟疾诊断技术。     

贵州省县级和省级疟疾诊断实验室检测结果比较分析

贵州省省级疟疾诊断实验室通过PCR法和镜检法对各县级疟疾诊断实验室上报的疟疾网报病例进行复核,以PCR和镜检一致的结果作为判定依据,对县级疟疾诊断实验室镜检结果进行评价。共对89份血样进行复核,PCR检出24份阳性,15份为恶性疟原虫,7份为间日疟原虫,2份为卵形疟原虫,均为输入性病例;省级镜检和PCR结果一致的有21份。县级与省级检测结果的总符合率为79.8%(67/84),县级漏检率为9.5%(2/21),误检率为23.8%(15/63),两级实验室检测的Kappa值为0.6,属于中、高度一致。     

山东省泰安市2015—2019年输入性疟疾病例实验室诊断与复核结果分析

省、市、县三级实验室分别采用镜检法、胶体金法及巢式PCR法对泰安市2015-2019年输入性疟疾进行诊断与复核。共诊断与复核输入性疟疾病例122例,其中镜检法和胶体金法的符合率分别为94.3%(115/122)和95.9%(117/122),镜检阴性率为5.7%(7/122),均为恶性疟;胶体金法阴性率为4.1%(5/122),3例非恶性疟和2例恶性疟阴性,3种检验方法符合率差异有统计学意义(P <0.05)。其中恶性疟和间日疟诊断符合率最高,均达100%,对卵形疟诊断符合率最低,仅为12/18,对4种疟原虫实验室诊断符合率差异有统计学意义(P <0.01)。医疗机构中初诊合格率为94.3%(115/122),市、县级疾病预防控制机构复核合格率分别为97.5%(119/122)和95.1%(116/122),差异无统计学意义(P> 0.05)。今后应继续加强市、县级疟疾实验室镜检人员技能培训,积极开展疟疾核酸检测,以进一步提升医疗及疾病预防控制机构的疟疾诊断水平。     

中缅边境疟疾流行情况调查

回顾性分析2012-2013年云南省盈江县和缅甸克钦邦第二特区拉咱市疟疾疫情资料,并对双边居民开展带虫率调查。2012-2013年盈江县共报告疟疾病例179例,疟疾年均发病率为2.9/万。其中,输入性病例占77.7%(139/179),本地感染病例占22.3%(40/179);间日疟占79.3%(142/179),恶性疟占20.1%(36/179),未分型病例占0.6%(1/179)。缅甸拉咱市共报告疟疾病例2 069例,年均发病率为322.5/万。其中间日疟占73.4%(1 519/2 069),恶性疟占20.1%(415/2 069),未分型病例占6.5%(135/2 069)。血片镜检结果显示,盈江县居民未发现带虫者,拉咱市居民带虫率为1.5%(9/589)。     

云南省边境地区疟原虫18S rRNA基因种类鉴定与序列分析

目的使用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对云南省边境地区镜检为恶性疟和间日疟的患者血样进行鉴定,分析该地区疟原虫18S rRNA基因序列之间的差异。方法 2004-2011年在云南省边境地区西双版纳勐腊、保山腾冲和德宏盈江,及缅甸那威、南卡江、芒东和拉咱等7个县(市)收集镜检为单一感染恶性疟原虫或间日疟原虫的全血或滤纸血样品。采用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对所有血样进行鉴定,阳性PCR产物进行测序。所获序列进行Blastn比对。应用MEGA 6.06软件采用邻接法构建系统进化树。结果 475份镜检为恶性疟原虫(256份)和间日疟原虫(219份)感染的血样中,经18S rRNA基因检测为恶性疟原虫感染的有242例,间日疟原虫感染176例和混合感染57例。镜检法和巢式PCR法检测结果一致的血样占81.7%(388/475)。两法检测不一致的血样发生频率与其原虫密度显著相关(Spearman’s r=-0.408,P0.05)。多序列比对分析结果显示,共计得到11条、10条恶性疟原虫、间日疟原虫18S rRNA基因同源序列,变异位点分别占2.9%(6/205)和22.5%(27/120)。所获恶性疟原虫18S rRNA基因序列与来自喀麦隆(Gen Bank登录号KC428742)等基因序列聚在一个大的分支,与来自荷兰和巴西的3个恶性疟原虫S型18S rRNA基因序列(GenBank登录号U36465、U36466和U36467)的亲缘关系较远。所获间日疟原虫序列与来自泰国的间日疟原虫A型小亚单位核糖体核糖核酸(SSU r RNA)基因序列(Gen Bank登录号U07367)等聚在一支,与来自泰国的间日疟原虫C型基因序列(Gen Bank登录号U07368)等参考序列亲缘关系较远。结论镜检为单一感染的血样中,巢式PCR检出57例混合感染。云南省边境地区7个县(市)疟原虫18S rRNA基因序列之间无明显差异。     

逆转录聚合酶链反应检测和鉴定疟原虫的研究

在同一反应体系中建立能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟及混合感染的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并用于现场采集血样检测。先以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计1对针对恶性疟原虫的特异性引物,建立RT-PCR检测恶性疟原虫方法,在此基础上,增加1条针对间日疟原虫的种特异性引物,使在同一反应体系中,能够同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段。恶性疟原虫和间日疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小为359bp和449bp特定扩增带,健康人血样和空白对照均未见扩增带。用建立的RT-PCR检测方法对现场采集128份血样进行检测,与镜检的阳性符合率为9609%,14份镜检为阴性的发热病人全血标本中2份RT-PCR检测为间日疟阳性。RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。     

巢式PCR技术在输入性疟疾监测中的应用

目的评价巢式PCR技术在高疟区回国人员疟疾监测中的应用价值。方法收集2007-2009年自非洲、东南亚等疟疾流行区回国人员中疟疾现症患者及其他无症状高危人群的滤纸血,采用巢式PCR技术检测疟原虫ssRNA基因,并与血片镜检结果进行比对。结果巢式PCR检测53例血检确诊的疟疾现症患者均为阳性,两法的阳性符合率为100%,其中PCR检出恶性疟、间日疟混合感染6例,高于镜检检出的3例。检测疟疾流行区返回的高危人群157人,镜检阳性3例,阳性率1.91%;巢式PCR阳性5例,阳性率为3.18%;其中,镜检阳性、巢式PCR阴性的1例,镜检阴性、巢式PCR阳性的3例,两种方法的阳性符合率为66.7%,阴性符合率为98.1%,两法检测结果一致的血样占检测血样的97.5%。结论巢式PCR技术对输入性疟疾的监测具有实用价值。     

2017-2019年上海市各区疟疾实验室检测能力分析

目的上海市疾病预防控制中心(简称上海市疾控)对各区疾控送检的疟疾病例血样进行复核,并对复核结果进行分析,为进一步提升各区疾控疟疾诊断水平提供依据。方法 2017—2019年上海市疾控通过镜检和疟原虫核酸检测(巢式PCR)分别对各区疾控疟疾实验室送检的血涂片和血样进行复核。以市疾控结果为标准,分析各区疾控疟疾实验室镜检和疟原虫核酸检测的符合率,以及核酸检测敏感性和特异性。并于2019年对各区疾控进行了一次疟原虫核酸检测盲样考核。结果 2017—2019年区疾控共送检疟疾复核病例样品232份,其中完整的样品225份(同时具备血涂片和血样),完整率99.1%(225/227)。225份完整的样品中,金山区占44.0%(99/225),静安区占15.6%(35/225),浦东新区占7.6%(17/225),虹口区占6.7%(15/225),青浦区和崇明区较少,分别为0份和1份,其余各区送样量均占比6.0%以下。225份样品中,区疾控与市疾控的镜检总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为96.0%(216/225)、 98.8%(170/172)和86.8%(46/53),疟原虫核酸检测的符合率为88.8%(103/116)。区疾控疟疾核酸检测采用实时荧光PCR (qPCR)法,敏感性为76.6%(85/111),与市疾控巢式PCR法87.4%(97/111)的敏感性差异有统计学意义(P 0.05);市区两级疾控的两种核酸检测方法的特异性均为100%。上述2种检测方法对225份样品进行综合评价,区疾控的符合率为96.9%(218/225);误判率3.1%(7/225),其中定性错误5份,定种错误2份。2019年,市疾控对区疾控进行的疟疾核酸盲样考核的总正确率为97.5%(78/80),其中恶性疟原虫样品的正确率为94.1%(32/34),与间日疟、卵形疟、三日疟原虫和阴性样品的正确率差异均无统计学意义(P 0.05)。结论 2017—2019年上海市各区疾控疟疾实验室的镜检能力较强,但疟原虫核酸检测的敏感性尚待提高。     

质粒型pBF_4DNA探针用于疟疾诊断的研究

质粒pBF_4DNA 用~(32)P 标记后,与现场采集的50份疟疾病人血样进行斑点杂交,9份镜检为恶性疟者杂交全为阳性,与镜检符合率为100%;41份镜检为间日疟的标本,有3份出现杂交弱阳性;10份正常人血两者检查均为阴性。DNA 探针检测恶性疟原虫的灵敏度为0.001%原虫血症。血样存放2年之久,仍可用于 DNA 杂交。     

2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果分析

目的 分析2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果,为巩固江苏省疟疾诊断水平提供科学依据。方法 由江苏省疟疾诊断参比实验室收集2017年疟疾网报病例诊断结果和样本;对每份病例样本分别采用镜检、核酸检测复核和疟疾快速诊断试纸条（RDT）检测;比较分析不同地区和不同疟原虫虫种样本检测结果符合情况。结果 2017年江苏省共有疟疾网报病例242例,经复核确定疟疾病例共239例,其中恶性疟163例、间日疟21例、三日疟11例、卵形疟43例、恶性疟和卵形疟原虫混合感染1例。13个设区市疟疾网报病例的诊断符合率均＞80%,总符合率为88.8%;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫检测符合率分别为98.8%、57.1%、63.6%、81.4%,RDT对4种疟原虫感染检出率分别为95.7%、85.0%、63.6%、79.1%。结论 2017年江苏省疟疾网报病例诊断质量总体较高,对非恶性疟人体疟原虫的虫种鉴别能力有待提高,RDT对非恶性疟人体疟原虫感染检测效果不理想。在当前消除疟疾阶段,应加强和保持各部门的疟疾诊断能力。     

2011-2017年江苏省疟疾镜检工作质量分析

目的 了解消除疟疾阶段江苏省发热病人疟原虫血涂片制作质量和实验室人员疟原虫镜检能力,为各级疟疾诊断实验室建设和消除疟疾效果评价提供科学依据。方法 对2011-2017年江苏省全部网报疟疾病例血涂片和随机抽取的县级疟疾中心镜检站已复核阴性血片,以及辖区内门诊镜检站已检阴性血片进行镜检复核,从血片制作、染色、清洁度、镜检结果及虫种符合情况进行综合分析。结果 2011-2017年共抽检复核已检血片19 109张,血片制作、染色、清洁度合格率分别为87.5%、89.3%、87.6%,不同年份血片质量差异有统计学意义（P均< 0.05）,并有逐年增高的趋势。不同设区市血片质量差异有统计学意义（P < 0.05）。复核2012-2017年网报疟疾病例血片1 860张,总符合率为87.4%,阳性符合率为98.9%。恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟、混合感染虫种符合率分别为95.4%、33.3%、56.0%、76.5%、9.1%,差异有统计学意义（P < 0.05）。2012-2017年不同年份网报疟疾病例血片复核总符合率分别为85.0%、90.1%、86.0%、85.3%、90.0%、87.6%,差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 江苏省基层门诊镜检站的血片质量达到省疟疾诊断参比实验室制定的判定标准,血片诊断符合率较高,但虫种鉴别能力有待进一步提高。     

2016—2020年湖北省各级疟疾实验室检测能力评价

目的湖北省省级疟疾诊断参比实验室对各级疟疾实验室上送的输入性疟疾病例留存血样进行复核,并对诊断和复核结果进行分析,评估全省各级疟疾实验室的检测能力。方法收集中国疾病预防控制信息系统中2016—2020年湖北省报告的输入性疟疾病例诊断单位、诊断结果和留存样品,对诊断单位进行描述性分析,并由省级疟疾诊断参比实验室对疟疾病例样品采用血涂片镜检和巢式PCR进行复核,比较各级疟疾实验室诊断结果与省级疟疾诊断参比实验室复核结果的阳性和虫种符合情况,分析不同疟原虫虫种诊断符合情况,应用SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果2016—2020年湖北省共报告疟疾病例608例,疟疾病例诊断单位医疗机构占89.5%(544/608),疾病预防控制中心占10.5%(64/608),其中地市级医疗机构诊断病例占54.6%(332/608)。2016—2020年医疗机构占疟疾病例诊断单位的比例分别为84.1%(132/157)、 84.4%(92/109)、 90.4%(122/135)、95.2%(157/165)和97.6%(41/42)(χ2=16.815, P 0.05)。省级疟疾诊断参比实验室共复核604例留存样品,其中92.4%(558/604)的病例被各级疟疾实验室确诊为疟疾,88.5%(494/558)感染虫种判定正确。不同年份疟疾病例诊断疟原虫阳性符合率为82.9%(34/41)～96.2%(151/157)、虫种符合率为79.4%(77/97)～94.4%(118/125),差异均有统计学意义(χ2=9.273、 13.787, P 0.05)。医疗机构的诊断疟原虫阳性符合率(93.2%, 503/540)和虫种符合率(89.5%, 450/503)均高于疾病预防控制中心的(85.9%, 55/64)和(80.0%,44/55),省、市、县、乡级医疗机构诊断疟原虫阳性符合率分别为100%(74/74)、 93.3%(308/330)、 90.2%(110/122)、和11/14,虫种符合率分别为100%(74/74)、 88.3%(272/308)、 86.4%(95/110)、 9/11,呈现级别越高诊断正确率越高的趋势(χ2=13.092、 15.598, P 0.05)。恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、混合感染诊断虫种符合率分别为96.9%(373/385)、 96.0%(72/75)、 10/16、 48.8%(39/80)和0,差异有统计学意义(χ2=132.880, P 0.05)。结论湖北省疟疾病例的诊断单位主要是医疗机构,各级疟疾实验室检测能力总体较高,对非恶性疟原虫的虫种鉴别能力有待提高。     

云南省10州（市）消除疟疾考核评估镜检 和血片复核结果分析

［摘要］　目的 了解通过省级消除疟疾考核评估的云南省10个州（市）检验人员血片制作水平和镜检能力,为消除疟疾监测和疟原虫检测提供依据。方法 在云南省通过省级消除疟疾考核评估的10个州（市）,每个州（市）随机抽取30张阴性血片进行血片涂制质量、染色质量、清洁度和结果判定复核;随机抽取每州（市）及所辖2个县（区）医院和疾病预防控制中心4名检验人员进行疟原虫显微镜检查技能考核,并对考核结果进行统计分析。结果 共复检阴性血片869张,复检符合率为100%,其中血片涂制质量、染色质量和清洁度好和中等级血片分别占96.09%、91.71%和96.89%;镜检技能考核共镜检读片576张,正确率为87.67%,其中间日疟原虫、恶性疟原虫和混合感染血片镜检读片正确率分别为87.76%、87.50%和47.62%,镜检人员对不同疟原虫虫种的检测能力差异有统计学意义（[χ2] = 37.169,P < 0.05）,来自疾病预防控制中心、医院和卫生院的镜检人员对疟原虫的检测能力差异无统计学意义（[χ2] = 2.782,P > 0.05）,来自州（市）级、县（区）级和乡（镇）级机构的检验人员疟原虫镜检能力差异无统计学意义（[χ2] = 0.358,P > 0.05）。结论 云南省10个州（市）疟原虫血片制作和镜检技能考核已达到省级消除疟疾考核评估中的指标要求,但还需进一步提高各级医疗卫生机构检验人员的疟原虫血片制作和镜检技能。     

云南省10州（市）消除疟疾考核评估镜检 和血片复核结果分析

［摘要］　目的 了解通过省级消除疟疾考核评估的云南省10个州（市）检验人员血片制作水平和镜检能力，为消除疟疾监测和疟原虫检测提供依据。方法 在云南省通过省级消除疟疾考核评估的10个州（市），每个州（市）随机抽取30张阴性血片进行血片涂制质量、染色质量、清洁度和结果判定复核；随机抽取每州（市）及所辖2个县（区）医院和疾病预防控制中心4名检验人员进行疟原虫显微镜检查技能考核，并对考核结果进行统计分析。结果 共复检阴性血片869张，复检符合率为100%，其中血片涂制质量、染色质量和清洁度好和中等级血片分别占96.09%、91.71%和96.89%；镜检技能考核共镜检读片576张，正确率为87.67%，其中间日疟原虫、恶性疟原虫和混合感染血片镜检读片正确率分别为87.76%、87.50%和47.62%，镜检人员对不同疟原虫虫种的检测能力差异有统计学意义（[χ2] = 37.169，P < 0.05），来自疾病预防控制中心、医院和卫生院的镜检人员对疟原虫的检测能力差异无统计学意义（[χ2] = 2.782，P > 0.05），来自州（市）级、县（区）级和乡（镇）级机构的检验人员疟原虫镜检能力差异无统计学意义（[χ2] = 0.358，P > 0.05）。结论 云南省10个州（市）疟原虫血片制作和镜检技能考核已达到省级消除疟疾考核评估中的指标要求，但还需进一步提高各级医疗卫生机构检验人员的疟原虫血片制作和镜检技能。     

两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析

目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012～2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6%、25.4%、0%和63.4%、29.6%、7%,符合率为81.7%;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100%,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8%、43.8%和10.4%,镜检与巢式PCR符合率为72.9%;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种wallikeri和混合感染分别占80.8%、11.5%和7.7%,检出变种wallikeri总数占卵形疟19.2%。结论巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平。     

PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究

为探讨通过PCR技术检测Pf60.1基因来诊断恶性疟的可行性,采用PCR技术检测了4年前采集贮存的20例疑似疟疾病人的血样。阳性对照为恶性疟原虫FCC1／HN培养株;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为FCC1／HN株、12例镜检定为恶性疟和2例混合感染的血样扩增出长度为313bp～320bp的特定Pf60.1基因片段;而阴性对照均未产生DNA带型。此结果说明检测Pf60kD中的Pf60.1基因片段的方法稳定性好,特异性强和敏感性高,是恶性疟诊断的理想方法之一。     

疟疾诊断参比实验室:疟原虫显微镜检测能力外部评估结果分析

目的评价国家疟疾诊断参比实验室的疟原虫显微镜检测水平。方法综合分析该实验室参与2013—2014年世界卫生组织西太区组织的疟原虫血涂片显微镜检测外部质量评估结果。结果疟原虫虫种鉴定水平在2013年和2014年的得分率分别为91.11%(82/90)和93.33%(84/90)。但间日疟原虫与卵形疟原虫之间误判率较高。2014年原虫计数的成绩(得分率:93.94%,31/33)好于2013年(得分率:60.61%,20/33)。结论该实验室疟原虫镜检能力不断提高,但仍需加强卵形疟原虫的镜检能力,同时提高原虫计数能力。     

PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究

为探讨通过PCR检测Pf60.1基因来诊断恶性疟的可行性,采用PCR检测了4年前采集贮存的20例疑似疟疾病人的血样,阳性对照为生疟原虫FCC1／HN培养株;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为FCC1／HN株、12例镜检定为恶性疟和2例混合感染的血样扩增出长度为313bp-320bp的特定Pf60.1基因片段,而阴性对照均未产生DNA带型。此结果说明检测Pf60kD中的Pf60.1基因片的方法稳定性好,特异性强和敏感性高,是恶性疟诊断的理想方法之一。