壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

[目的]观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。[方法]取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40%的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。[结果]成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。[结论]壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

牛膝含药血清对体外培养人间充质干细胞增殖与分化的影响

目的研究牛膝对体外培养人间充质干细胞的增殖与分化的影响及其可能的分子机制。方法制备牛膝含药血清,分离与扩增人间充质干细胞,MTT法检测牛膝含药血清对体外培养的间充质干细胞增殖作用的影响,检测碱性磷酸酶与骨钙素以反映细胞分化水平的改变,RT-PCR检测成骨相关转录因子的表达。结果间充质干细胞的增殖速度加快,并能上调转录因子Msx2的表达,而碱性磷酸酶与骨钙素的表达没有变化。结论牛膝在体外有促进人间充质干细胞细胞增殖的作用,而不影响其分化。     

神经干细胞增殖分化的影响因素

神经干细胞（neural stem cells,NSCs）是具有高度自我更新能力并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的神经前体细胞。它能增殖成恰当数量的细胞,在脑部各个区域按正确顺序排列组合,分化为神经元,星形胶质细胞、少突胶质细胞,这是发育过程中必不可少的过程。     

穴位敷贴含药血清促进神经干细胞增殖作用研究

目的:探讨安宫牛黄贴含药血清对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响以及对分泌型血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的作用。方法:将未分化状态的C17.2细胞培养并传代,按含药血清10%给药,分为穴位敷贴高剂量组,穴位敷贴中剂量组,穴位敷贴低剂量组,药物组,以及空白组。MTT法检测NSCs增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白表达。结果:MTT数据显示,安宫牛黄贴穴位敷贴能有效促进NSCs的增殖,以穴位敷贴低剂量、中剂量组效果较为显著(P0.05)。ELISA结果显示,穴位敷贴低剂量、中剂量、高剂量均能不同程度升高神经干细胞表达分泌型VEGF蛋白,其中穴位敷贴中剂量组增高分泌型VEGF蛋白含量的效果最好(P0.05)。结论:VEGF分泌增多对体外培养的神经干细胞增殖有明显促进作用,穴位敷贴含药血清正是由于增加了神经干细胞表达分泌型VEGF蛋白,从而促进了神经干细胞的增殖。     

补肾壮骨方剂含药血清调控牙周膜干细胞增殖分化的效能研究

目的：探讨补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用。方法采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同剂量的补肾壮骨方剂含药血清处理细胞,通过四唑盐（ MTT）比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测补肾壮骨方剂含药血清对细胞体外增殖分化的影响。结果体外实验补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖有明显促进作用,且能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达。结论补肾壮骨方剂含药血清促进牙周膜细胞的增殖活性,可明显促进牙周膜细胞骨向分化。     

活血化瘀药物苏木、川芎含药血清对PG细胞增殖影响的实验研究

目的探讨苏木、川芎含药血清对常氧、低氧环境下培养的人高转移性巨细胞肺癌(PG)细胞增殖的影响,筛选合适的含药血清浓度,明确最佳作用时间。方法制备苏木、川芎含药血清,分别用含药血清干预常氧、低氧环境下培养的PG细胞,按照含药血清浓度不同分为6组,同时设对照组。采用噻唑蓝(MTT)法观察苏木、川芎含药血清对PG细胞增殖的影响。结果在常氧环境下,苏木含药血清各浓度之间(除浓度为0.625%)、川芎含药血清各浓度之间(除浓度为1.25%)差异均有统计学意义(P<0.05);在低氧环境下,苏木、川芎含药血清各浓度之间差异均没有统计学意义(P>0.05)。结论苏木、川芎含药血清在常氧环境下作用24 h时能抑制PG细胞的增殖,并呈浓度依赖,浓度越高,抑制作用越明显,但在低氧环境下则促进PG细胞增殖;随着苏木、川芎含药血清作用时间的延长(48、72 h),在常氧、低氧环境下其含药血清均有促进PG细胞增殖的作用(72 h时作用最明显),并且呈浓度依赖,浓度越高,越有利于PG细胞增殖(苏木、川芎浓度为20%的时候作用最明显)。低氧环境更有利于苏木、川芎含药血清促进PG细胞增殖。     

六味地黄丸含药血清对OS-732细胞增殖分化的影响

目的：观察补肾中药对成骨样细胞增殖分化的影响。方法：制备低、中、高剂量的六味地黄丸含药血清。10％低、中、高剂量的六味地黄丸含药血清培养OS-732细胞，显微镜下观察细胞生长情况；进行细胞计数和绘制生长曲线；用MTT法检测细胞增殖；进行细胞碱性磷酸酶（ALP）活性测定。结果：含药血清组细胞生长良好，中剂量组与对照组相比P〈0．05，统计学有明显差异；在细胞增殖和细胞碱性磷酸酶（ALP）活性测定方面，中剂量组与对照组相比P〈0．05，统计学有明显差异。结论：合适剂量的补肾中药对成骨样细胞的增殖和分化有明显的促进作用。     

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法 取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果 加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论 补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。      

MTT法分析中药含药血清对体外软骨细胞增殖影响的研究

以ＭＴＴ法观察补肾和柔肝中药含药血清对体外软骨细胞的影响。结果：在两次连续灌胃３ｈ后所取血清浓度为５％和１０％时,对软骨细胞有促进增殖的作用;血清浓度为５％时,两药之间作用无差异,而１０％时,补肾方作用优于柔肝方。为便于以下比较,将血清浓度定在５％;长时间（８ｄ）灌胃和短时间（１ｄ）所取血清对软骨细胞的增殖作用无差异;以０．５、１、５倍等效剂量灌胃所取务清对软骨细胞的增殖作用未呈量效依赖关系,其中     

马钱子含药血清的制备与鉴定

马钱子，始载于《本草纲目》，其味苦性温，有大毒，人肝经，善于活血散结，通络止痛，它具有兴奋中枢、脊神经以及增强横纹肌、平滑肌、心肌的肌力与强筋骨，利关节，通经脉等功效。在临床上常用于痹证、痿证等治疗。笔者发现马钱子在保护软骨上起有一定的药效学作用。为了进一步深入研究马钱子对体外培养的软骨细胞保护作用，本实验着重进行马钱子含药血清的制备与鉴定。[第一段]     

神经胶质细胞对神经干细胞增殖和分化影响的研究进展

神经干细胞具有自我更新和多项分化的潜能,在体内外不同的微环境下分化为神经元的比例和种类不同.神经胶质细胞广泛分布于中枢神经系统,为决定神经干细胞增殖、分化和存活的微环境起着至关重要的作用.近年来,研究发现嗅鞘细胞、雪旺细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞等神经胶质细胞能促进神经干细胞的增殖和分化,并取得了一定的进展.     

茶氨酸对神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨茶氨酸对神经干细胞增殖和分化的影响。方法采用机械吹打结合200目钢网滤过的方法,从12.5 d的昆明胎鼠大脑中分离NSCs并培养;用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色鉴定NSC;加入不同浓度茶氨酸(theanine),MTS法检测不同时间点活性,选定茶氨酸最终加药浓度(100μmol/L);将NSCs分为两组:对照组、加药组(茶氨酸浓度为100μmol/L);培养后进行Brd U染色和微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色;利用Q-PCR以及Westen blotting检测MAP2和GFAP表达。结果 100μmol/L茶氨酸处理组M TS检测的吸光度值显著增高(P<0.05);加药组Brd U阳性细胞比率、M AP2阳性细胞比率明显高于对照组(P<0.05),两组GFAP阳性细胞比率无统计学差异;加药组MAP2表达明显高于对照组(P<0.05),两组GFAP表达无统计学差异。结论茶氨酸可促进NSCs增殖及其向神经元方向分化。     

丙泊酚对大鼠胚胎神经干细胞增殖及分化的影响

目的探讨丙泊酚对体外培养大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法采用孕14～16 d Wistar大鼠,进行NSCs原代培养并用Nestin鉴定,按以下给药分成六组:空白对照组(control)、脂肪乳对照组(introlipid)、丙泊酚不同浓度组[5、25、50、100μmol/l],用5-溴脱氧尿(Brdu)掺入法观察丙泊酚对胚胎神经干细胞增殖的影响。胚胎神经干细胞诱导分化过程中加入50μmol/l丙泊酚,采用NeuN、GFAP免疫组化法观察丙泊酚对胚胎神经干细胞分化的影响。结果分离培养的神经干细胞95%以上呈Nestin阳性,不同浓度丙泊酚组Brdu阳性细胞百分数没有差异,丙泊酚NeuN阳性细胞百分数(23.1±0.9%)明显高于对照组(13.4±0.8%)(P<0.05),而GFAP细胞阳性细胞数与对照组相比没有明显差异。结论临床相关剂量丙泊酚对体外培养大鼠神经干细胞增殖没有影响,但能诱导神经干细胞向神经元细胞分化。     

当归多糖含药血清对巨噬细胞释放M-CSF的影响

目的：考察当归多糖含药血清对巨噬细胞（Mφ）释放巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的影响。方法：常规提取当归多糖组份,分别以大、中、小剂量当归多糖和生理盐水罐服小鼠,连续给药7天后制备各组含药血清,采用ELISA法检测各含药血清在体外对小鼠腹腔Mφ释放M-CSF的影响。结果：与生理盐水对照组比较,当归多糖一定剂量含药血清组M-CSF水平明显升高（P〈0.05或P〈0.01）,且具有浓度差异性（P〈0.01）。结论：当归多糖含药血清能显著提高Mφ释放M-CSF的水平,这可能是当归调节机体免疫功能的部分机制。     

马钱子含药血清的制备与鉴定

马钱子,始载于《本草纲目》,其味苦性温,有大毒,入肝经,善于活血散结,通络止痛,它具有兴奋中枢、脊神经以及增强横纹肌、平滑肌、心肌的肌力与强筋骨,利关节,通经脉     

白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖影响的实验研究

目的：观察中药白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：取1月龄的SD大鼠膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,甲苯胺蓝染色鉴定后,取体外培养第3代软骨细胞随机分为6组,分别加入不同浓度空白血清（5％、10％、15％）,不同浓度白附片含药血清（5％、10％、15％）,继续培养24、48、72h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖的变化。结果：白附片含药血清组吸光度值（OD值）显著高于空白血清组,两组比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）。结论：白附片含药血清能有效促进大鼠膝关节软骨细胞的增殖。     

缺氧预处理对不同鼠龄大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响

目的:探讨缺氧预处理对不同鼠龄大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法:随机选取新生1天(Q1组)、新生7天(Q7组)、新生14天(Q14组)大鼠各6只,分别缺氧2小时.将各组大鼠海马在无血清培养液中,进行原代、单克隆和传代培养;单克隆培养细胞进行巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色;传三代细胞诱导分化3d后...     

补肾方和柔肝方含药血清对软骨细胞增殖动力学研究

目的：探讨补肾方和柔肝方对软骨细胞增殖的影响。方法：补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞,测定H^3-TdR的掺入量CPM和MTT法测定OD值。结果：通过MTT法观察确定补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞观察点在第5－7天;采血时间点确定为末次灌胃后3h,而血清浓度确定为5％为宜;采血时间点确定为1d-3h,采血灌胃剂量确定为等效剂量;通过H^3-TdR掺入,补肾方兔血清和柔肝方兔血清有明显促进DNA的合成作用。结论：补肾方和柔肝方有促进软骨细胞增殖的作用。     

皮质酮大鼠神经干细胞增殖分化的变化

目的观察皮质酮(corticosterone,CORT)大鼠神经干细胞增殖分化的变化,探讨肾阳虚证与CORT大鼠神经干细胞增殖分化的联系.方法成年雄性SD大鼠连续14 d皮下注射CORT(10mg·kg-1·d-1),采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞.给予CORT大鼠右归饮水煎剂灌胃,观察CORT大鼠神经干细胞增殖分化的变化.结果与正常对照组相比,CORT大鼠大脑皮层、海马及下丘脑区BrdU阳性细胞数明显减少,BrdU NF200,BrdU NeuroD,BrdU GFAP免疫荧光双标细胞数也显著减少(P＜0.01).给予右归饮后CORT大鼠BrdU阳性细胞以及免疫荧光双标细胞数明显增加(P＜0.01).结论CORT大鼠神经干细胞增殖分化能力显著下降,右归饮可显著增加CORT大鼠神经干细胞增殖分化能力.     

大鼠孕期染邻苯二甲酸二丁酯对子代神经干细胞增殖分化的影响

目的 探讨大鼠孕期染环境雌激素邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)对子代神经干细胞增殖和分化的影响.方法 40只SD孕鼠随机分为3个不同DBP剂量[25、75、225 mg/(kg·d)]的实验组和对照组,各组孕鼠自E0起分别给予不同剂量DBP或玉米油溶剂灌胃直至生产.取新生大鼠进行神经干细胞培养,检测计数细胞克隆形成率、克隆球直径大小;分离的神经干细胞进行分化培养,以Neu-N和GFAP免疫荧光检测DBP干预后的神经干细胞分化为神经元与星形胶质细胞的比例差别与形态变化.结果 大鼠孕期染DBP致子代神经干细胞增殖能力降低.与对照组相比,中、高剂量染毒组新生鼠神经干细胞克隆率明显低于对照组[实验对照组克隆率为(40.53±4.65)%;药物处理组克隆率分别为(30.96±3.80)%、(15.35±5.29)%、(6.58±1.43)%,P<0.01].高剂量处理组克隆球的直径也明显小于对照组.DBP高剂量组神经干细胞分化为星形胶质细胞比例显著增加[高剂量组为(36.8±3.5)%,而对照组为(30.8±2.4)%,P<0.01 ].分化后的神经元和神经胶质细胞形态随着染毒浓度增大,形态变化明显.星形胶质细胞的细胞突起逐渐变短,变粗,以高剂量染毒后为明显.结论 大鼠孕期染DBP会影响子代神经干细胞的增殖与分化,从而影响神经系统的发育.