缺氧对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞5—羟色胺转载体基因表达 …

目的：探讨无氧（０％Ｏ２＋９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）和低氧（２．５￣３％＋９％Ｎ２＋５％ＣＯ２）对新生小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）５－羟色胺转载体基因表达的影响。方法：应用细胞培养，核到分子杂交技术。结果：无氧组和低氧组（１．５ｈ、３ｈ、６ｈ）ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮＡ表达显著同于常氧组（Ｐ〈０．０５），而无氧和低氧１２ｈ至４８ｈ对ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮ     

缺氧对肺动脉内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞5-羟色胺转载体基因表达的影响

缺氧对肺动脉内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞５－羟色胺转载体基因表达的影响第三军医大学新桥医院心内科（重庆６３００３７）；１第三军医大学病理生理教研室刘健王培勇１何作云目的：观察肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）在无氧（０％Ｏ２＋９...     

一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞低氧性增殖反应的作用

目的：观察低氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）受血管舒张因子一氧化碳的作用。方法：随机分为常氧组、低氧组（１％Ｏ２＋５％ＣＯ２＋９４％Ｎ２）、一氧化碳组（３％ＣＯ＋５％ＣＯ２＋９２％Ｎ２）,采用流式细胞仪、增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）、「６３Ｈ」－胸腺嘧啶「＾３Ｈ」－ＴｄＲ摄取量,检测ＰＡＳＭＣ增生的情况。结果：（１）流式细胞仪检测低氧组ＰＡＳＭＣＣ２／Ｍ期细胞比例明显增多,Ｇ０／Ｇ１期细胞比例明     

缺氧时体外培养的肺动脉内皮细胞增殖和活力的改变

目的：探讨无氧和／或低氧对肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）活力和增殖的影响。方法：应用２形态学观察、细胞活力测定、流式细胞技术、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、免疫组化染色等方法，结果：缺氧使ＰＡＥＣ胞浆内的线粒体和粗面内质网增多，随缺氧时间的延长，线粒体肿胀，空泡化、内质网扩张。ＭＴＴ法细胞活力测定显示无氧６ｈ末ＰＡＥＣ的细胞活力无明显变化，无氧１２ｈ至２４ｈ末ＰＡＥＣ的细胞活力明显增加，在６ｈ、１２ｈ、１８ｈ、     

慢性缺氧影响肺脏内皮素和一氧化氮合成酶mRNA的表达

以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了慢性缺氧大鼠肺组织内内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ．内皮素受体－Ａ（ＥＴＲ－Ａ）ｍＲＮＡ和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达水平。结果显示：缺氧１，２．３周时，肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ分别较正常对照上升６３．８％，１０５．５％和４０．９％（Ｐ均＜０．０５）。ＥＴＲ－ＡｍＲＮＡ分别上升５０．６％．５７．４％和５６．３％（Ｐ均＜０．０５），而ＮＯＳｍＮＲＡＲ则分别较正常对照下降３４．２％．４９．６％和３３．５％（Ｐ均＜０．０５）。提示缺氧时肺内ＥＴ水平上升和ＮＯ减少与缺氧刺激肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增加和ＮＯＳｍＲＮＡ表达减少有关。     

兔盲肠结扎穿孔早期一氧化氮抗肺动脉压增高和抗氧化作用

目的和方法：采用家兔盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）模型观察了ＣＬＰ前后以及一氧化氮（ＮＯ）合成抑制剂左旋硝基精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）对平均动脉血压（ＭＡＰ），肺动脉压（ＰＡＰ），入、出肺血ＮＯ、丙二醛（ＭＤＡ）含量和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的改变。结果：兔ＣＬＰ后１～５ｈＭＡＰ明显下降，而在２、２５ｈ出现ＰＡＰ明显升高。ＣＬＰ前出肺血ＮＯ含量显著低于入肺血，ＣＬＰ后２５ｈ入肺血ＮＯ含量低于ＣＬＰ前，而出肺血ＮＯ含量与ＣＬＰ前相比无明显差异，且入、出肺血ＮＯ含量无明显差异。ＣＬＰ后２５ｈ入肺血ＭＤＡ含量比ＣＬＰ前有明显增加，出肺血无显著改变；而出肺血ＳＯＤ活性比ＣＬＰ前有明显增高，入肺血无显著改变。注入Ｌ－ＮＮＡ后入、出肺血ＮＯ含量明显降低，各时点ＰＡＰ都明显增高，５ｈ生存率降低，同时入、出肺血ＭＤＡ含量明显升高，ＳＯＤ活性明显下降。结论：肺内ＮＯ含量改变可能与氧自由基有关，在兔ＣＬＰ后早期阶段ＮＯ具抗肺动脉高压和抗氧化的作用     

慢性缺氧影响肺脏内皮素和一氧经氮合成酶mRNA的表达

以逆转录多聚酶链反庆（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了慢性缺氧大鼠肺组织内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ内皮素受体－Ａ（ＥＴＲ－Ａ）ｍＲＮＡ和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达水平，结果显示：缺氧１、２、３周时，肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ分别较正常对照上升６３．８％，１０５．５％，和４０．９％（Ｐ均〈０．０５），ＥＴＲ－ＡｍＲＮＡ分别上升５０．６％，５７．４％和５６．３％（Ｐ均〈０．０５）而ＮＯＳｍＲＮＡ则分别较     

环核苷酸及［Ca~（2＋）］i介导β－内啡肽刺激大鼠巨噬细胞IL－1的分泌

本实验初步观察β－ＥＰ刺激ＩＬ－１分泌的第二信使，培养的大鼠腹腔巨噬细胞，分别加入β－ＥＰ（１）组、β－ＥＰ＋ＮＬＸ（２）组、β－Ｅｐ＋ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（３）组、β－ＥＰ＋亚甲兰（１）组、β－ＥＰ＋尼凡地平（５）组、β－ＥＰ＋ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ＋亚甲兰＋尼凡地平（６）组、主理盐水（７）组。２４ｈ后收集巨噬细胞及上清液检测有关指标，发现：第１组细胞内ｃＡＭＰ显著降低，ｃＧＭＰ、［Ｃａ￣（２＋）］ｉ明显升高，上清液呈强烈的ＩＬ－１活性；第２、６、７组细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、［Ｃａ￣（２＋）］无明显变化，上清液无ＩＬ－１活性；第３、４、５组上清液们有较强的ＩＬ－１活性，而细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ及［Ｃａ￣（２＋）］ｉ呈不同变化，提示：ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ及［Ｃａ￣（２＋）］ｉ可能是β－ＥＰ刺激巨噬细胞分泌ＩＬ－１的第二信使。     

牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca2+-Mg2+-ATP酶活性与MDA含量影响

目的和方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ,５ｍｇ／ｋｇ）诱导心肌缺血模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）中丙二醛（ＭＤＡ）含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性及牛磺酸（Ｔａｕ）的影响。结果：缺血组大鼠心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ升高８７８３％、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低３７５６％和５０２０％（Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０．８７,Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０７９,Ｐ＜０．０１）。在注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ）前３０ｍｉｎ腹腔注射Ｔａｕ（２００ｍｇ／ｋｇ）则Ｍｉｔ中ＭＤＡ含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性均未见显著异常改变。结论：Ｔａｕ可能通过抑制ＭＤＡ的生成实现其保护Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的作用。     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响

目的：观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）于缺氧时对细胞内环核苷酸的影响。结果：ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ共培养２４ｈ，ＰＡＥＣ细胞内ｃＡＭＰ含量显著降低（Ｐ＜００１），而ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ含量显著增加（Ｐ＜００１），二种细胞内ｃＧＭＰ含量均显著降低（Ｐ＜００１）。缺氧对二种细胞内ｃＡＭＰ含量无显著影响，但能增加ＰＡＳＭ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ＜００１），降低ＰＡＥＣ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ＜００１）。ＮＯ合酶抑制剂硝基精氨酸对二种细胞的ｃＡＭＰ含量均无显著影响，但能使常氧培养的ＰＡＥＣ和缺氧培养的ＰＡＳＭ细胞内的ｃＧＭＰ含量显著降低（Ｐ＜００１）。结论：ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ的相互作用可引起第二信使系统传递的变化；缺氧可抑制ＰＡＥＣ的ＮＯ合酶活性而诱导ＰＡＳＭ的ＮＯ合酶活性     

高胆固醇血症大鼠LDL受体与apoA－1mRNA的水平变化及苯甲酸雌二醇对其影响

本文研究了实验性高胆固醇血症大鼠肝及小肠中低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体ｍＲＮＡ和载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ－１ｍＲＮＡ的水平变化以及苯甲酸雌二醇（ＥＢ）对二者的影响。发现高脂（ＨＣ）组肝及小肠ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平分别低于正常组５０％和６０％（Ｐ＜０．０５），小肠ａｐｏＡ－１ｍＲＮＡ水平低于正常组５８％（Ｐ＜０．０５），此时血清总胆固醇（ＴＣ）及ＬＤＬ胆固醇（ＬＤＬ－ｃ）均明显高于正常组（Ｐ＜０．０１），血清ａｐｏＡ－１低于正常组（Ｐ＜０．０５）。ＨＣ＋ＥＢ组血清ＴＣ及ＬＤＬ－ｃ明显低于ＨＣ组，而肝ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平则显著高于ＨＣ组，为ＨＣ组的３．５倍（Ｐ＜０．００２）。结果提示：（１）高胆固醇负荷时细胞可通过转录水平下行调节ＬＤＬ受体；（２）小肠可能在ａｐｏＡ－１的代谢中起重要作用；（３）ＥＢ可能通过诱导肝ＬＤＬ受体基因表达而降血脂。     

一氧化氮在缺氧肺动脉内皮细胞增殖中的作用

一氧化氮在缺氧肺动脉内皮细胞增殖中的作用第三军医大学新桥医院心内科（重庆６３００３７）刘健王培勇罗德成１王俊元１孙秉庸１本实验应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入和流式细胞技术探讨一氧化氮在常氧、无氧（０％Ｏ２）和低氧（２．５％Ｏ２）条件下对肺动脉内皮细胞（ＰＡＥ...     

红细胞生成素3‘—增强子片段对内皮细胞缺氧时环加氧酶—2？…

目的和方法：体外合成红细胞生成素（Ｅｐｏ）３‘－增强子野生型及突变型片段，借助脂质全，转入内皮细胞用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法测定分离细胞在常氧或缺氧条件下培养４ｈ的环加氧酶２（ＣＯＸ－２）ｍＲＮＡ。结果：（１）大鼠主主动脉内皮细胞、肺微血管内皮细胞在常氧下培养，有ＣＯＸ－２基因表达；（２）缺氧能诱导这两种细胞ＣＯＸ－２基因表达增加；（３）野生型Ｅｐｏ３’－增强子片段能阻断缺氧地内皮细胞ＣＯＸ－２基因     

乙酰胆碱对大鼠腹腔巨噬细胞内钙离子浓度和表面Ia抗原表达的影响

用Ｆｕｒａ－２作为荧光探针测定大鼠腹腔巨噬细胞（Ｍ）内钙离子浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ），ＡＰＡＡＰ桥联酶标法检测Ｍ表面Ｉａ抗原的表达。结果表明：５×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ的乙酞胆碱（Ａｃｈ）可使Ｍ［Ｃａ￣（２＋）］ｉ；明显上升，可促进Ｍ表面Ｉ－Ａ和Ｉ－Ｅ抗原的表达，而阿托品（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）可阻断Ａｃｈ升高［Ｃａ￣（２＋）］ｉ的作用。阿托品、三氟啦嚎（ＴＦＰ，５０μｍｏｌ／Ｌ）、ＥＧＴＡ（６ｍｍｏｌ／Ｌ）均可阻断Ｍ促进ＭＩａ抗原表达的作用，ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶抑制剂（ＰＫＩ，２５μｇ／ｍｌ）对Ａｃｈ促进ＭＩａ抗原表达的作用无影响。     

钙调素基因在低氧大鼠脑皮质神经细胞中表达的变化

用原位杂交技术检测了钙调素基因（ＣａＭ－ｃＤＮＡ）在急性低氧、低氧适应和常氧对照大鼠脑皮质神经细胞内表达的变化，以图像分析所得胞体金颗粒面积（ａｒｅａ）和积分光密度（Ｉ·ＯＤ）表示基因表达水平。与常氧对照组比，急性低氧组的ａｒｅａ和Ｉ·ＯＤ分别升高５０．１％（Ｐ＜０．０１）和４５．９％（Ｐ＜０．０１），低氧适应组的ａｒｅａ和Ｉ·ＯＤ分别升高６８．６％（Ｐ＜０．０１）和６０．０％（ｐ＜０．０１）；与急性低氧组比，低氧适应组的ａｒｅａ和Ｉ·ＯＤ分别升高５．６％（ｐ＜０．０５）和９．７％（Ｐ＜０．０１）。结果提示，低氧可引起ＣａＭ基因表达增强，提高ｍＲＮＡ转录水平，而低氧适应的作用更明显。     

环核苷酸及[Ca^2＋]i介导β—内啡肽刺激大鼠巨噬细胞IL—1的分泌

本实验初步观察β－Ｅ刺激ＩＬ－１分泌的第二信使，培养的在鼠腹腔巨噬细胞，分别加入β－ＥＰ（１）组、β－ＥＰ＋ＮＬＸ（２）组、β－ＥＰ＋ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（３）组、β－ＥＰ＋亚甲兰（４）组、β－ＥＰ＋尼凡地平（５）组、β－ＥＰ＋ｆｏｒｓｋｌｉｎ＋亚甲兰＋尼凡地平（６）组、主理盐水（７）组。２４ｈ后收集后巨噬细胞及上清液检测有关指标，发现：第１组细胞内ｃＡＮＭＰ显著降低，ＣＧＭＰ、「Ｃａ＾２＋」ｉ明显     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其传递途径

本文观察了低氧对离体培养成年牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）＾３Ｈ－ＴｄＲ参入的影响，并用异搏定、Ｈ７、ＰＭＡ和ＥＧＦ进行干预实验，对ＭＳＣ增殖中信息传递途径作了初探。结果显示：（１）缺氧２４ｈ，ＰＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入显著增高。（２）异搏定及Ｈ７显著降低低氧Ｈ－ＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，而ＰＭＡ及ＥＧＦ显著增加ＨＳＭＣ＾３ＨＴｄＲ参入。（３）Ｈ－ＳＭＣ对ＰＭＡ和ＥＧＦ反应强于常氧Ｎ－ＳＭＣ；     

活化条件对细胞内免疫染色IFNγ和IL-4法检测人外周血Th1和Th2细胞的影响

目的：研究细胞活化条件对Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞测定的影响。方法：采用酶联免疫斑点法（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔａｓａｙ,ＥＬＩＳＰＯＴ）测定活化细胞胞浆内的细胞因子。ＩＦＮγ阳性者为Ｔｈ１细胞,ＩＬ４阳性者为Ｔｈ２细胞。结果：ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ＋ＰＭＡ,ＰＨＡ＋ＰＭＡ或Ｃａ２＋载体＋ＰＭＡ刺激５ｈ,ＩＬ４阳性率均在１３％～１４％;ＩＦＮγ阳性细胞分别为（７３４±４７１）％、（７５６±４７０）％和（８９７±５６０）％,而刺激１６ｈ时,ＩＦＮγ阳性率分别变为（１１１９±４７２）％、（６８８±１７５）％和（５９４±２８４）％,有明显差异。结论：活化条件影响Ｔｈ细胞亚群的测定。     

抗APO-1单抗促进SEB活化的淋巴细胞凋亡及其与胞内游离Ca2+浓度相关性研究

为探讨抗ＡＰＯ－１单抗处理的金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）活化的淋巴细胞胞浆中游离Ｃａ２＋浓度的变化，用形态学观察、流式细胞光度术观测了鼠抗人ＡＰＯ－１单克隆抗体对ＳＥＢ活化不同天数的人外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用，同时采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光探针检测了ＡＰＯ－１单抗处理的淋巴细胞胞浆内游离Ｃａ２＋浓度。结果表明，抗ＡＰＯ－１单抗对ＳＥＢ活化１ｄ和对照组淋巴细胞无明显的促凋亡作用，但对ＳＥＢ活化５ｄ的淋巴细胞不仅可明显促进其凋亡，而且可使其胞浆游离Ｃａ２＋浓度升高，而Ｚｎ２＋则抑制了抗ＡＰＯ－１单抗的凋亡诱导作用。由此可见，抗ＡＰＯ－１单抗与其特异性抗体结合后可能是通过使胞浆中游离Ｃａ２＋浓度升高，激活了Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋依赖的内源性核酸内切酶而导致ＳＥＢ活化的淋巴细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ对培养新生大鼠心肌细胞MHC基因表达的影响

目的：本研究新生大鼠原代培养心肌细胞上，观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞ＭＨＣ基因表达的影响。方法和结果：（１）在培养新生大鼠心肌细胞中，用１０－７ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ处理后，６ｈ就引起α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平的迅速增加，１２ｈ达峰值，为对照组的１７５倍（Ｐ＜００５）。β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平也有所增加，为对照组的１２５倍（Ｐ＜００１），两者均呈量效关系。（２）ＡｎｇⅡ受体阻断剂ｓａｒａｌａｓｉｎ可阻断ＡｎｇⅡ诱导的α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因的表达。结论：ＡｎｇⅡ可能通过ＡｎｇⅡ受体的介导作用，诱导心室肌细胞α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因表达增加