液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证

液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)是近年来发展极为迅速的新技术。该技术结合了液相色谱的高分离性能和质谱的高敏感性、高特异性等优势,被广泛应用于化工、生物、医药、食品、临床医学、环境等领域。在临床检验和诊断领域,LC-MS/MS作为传统诊断技术的补充,可提供更为准确、可靠的依据,使许多疾病得到准确、快速的诊断。文章结合目前已公布的LC-MS/MS方法相关验证指南、文献及实际操作经验,系统介绍了LC-MS/MS方法开发的关键流程,并以25-羟基维生素D3 [25(OH)D3]为实例介绍方法验证的关键要素,为LC-MS/MS技术临床应用方法的建立、验证和实施提供参考。     

液相色谱-串联质谱技术的临床应用进展

液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)与免疫学方法相比具有特异性高、灵敏度高、多组分检测能力等方面的优势,已经成为临床检验领域重要的新技术之一。目前LC-MS/MS主要在激素检测、新生儿筛查、治疗药物监测、维生素D代谢物检测、蛋白质与多肽定量等项目应用比较成熟。虽然LC-MS/MS技术凭借其独特的优势,已经在临床检验领域占得一席之地,但也存在自动化及标准化程度低、仪器操作复杂等不足。自动化、标准化、蛋白质定量、高分辨质谱等将是今后LC-MS/MS在临检应用的主要发展方向。     

液相色谱质谱联用技术在临床检测和代谢研究中的应用进展

色谱-质谱联用技术[液相色谱-质谱联用(LC-MS)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)等]因其灵敏度高、具有保留时间和质荷比双重分离的选择性和特异度、检测动态范围宽等优势,已成为临床代谢物指标检测和代谢组学研究中不可或缺的分析工具。其中液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)可对目标代谢物进行准确定性定量分析,能够在单次分析中获得数千种代谢物的信息。该文结合文献报道,综述了液质联用技术在临床样品的代谢物检测和代谢组学研究的应用进展,介绍了多种代谢标志物与疾病相关性和相应的检测方法,讨论了现阶段液质联用技术在临床转化应用中面临的问题,并展望未来发展趋势。     

液相色谱-串联质谱检测血浆3-甲氧酪胺方法的建立

目的建立一种稳定的检测血浆3-甲氧酪胺(3-MT)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。方法对LC-MS/MS的分离条件(色谱柱、柱温、p H值)进行优化,建立检测血浆3-MT的方法,并对该方法的线性范围、回收率、精密度、最低检测下限和稳定性进行评价。结果以同位素氘代作为内标,采用BEH HILIC色谱柱进行分离。流动相为100 mmol/L甲酸铵缓冲液(p H值为3)和纯乙腈,梯度洗脱;柱温为35℃。LC-MS/MS检测3-MT的线性范围为5~1 000 pg/mL,定量检出限为5 pg/mL,天间和批间变异系数(CV)分别为6%和7%,回收率为97.1%~109.3%。由于3-MT在室温中稳定性较差,因此需冰浴送检。结论建立了检测3-MT的LC-MS/MS方法,能够灵敏、准确地检测血浆3-MT水平。     

液相色谱串联质谱法分析激素代谢谱在肾上腺疾病诊断中的应用进展

<正>大气压离子化技术在20世纪80年代被科学家首次发明,它的出现进一步推动了液相色谱和质谱联用技术的迅速发展^[1]。近年来随着液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的不断进步,其被应用于食品、医药、化工、环境等各行各业,特别是在临床检验诊断方面,其发展的速度尤为迅猛^[2],已逐渐由科研应用转变为用于临床检测和辅助诊断,为精准医疗提供服务。自2010年以来,在内分泌领域涉及LC-MS/MS技术的临床研究文献每年增加超过100篇,     

液相色谱串联质谱技术在载脂蛋白E室间质量评价中的应用

目的探讨液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)在载脂蛋白E(apo E)室间质量评价中的应用。方法分别将5份混合人血清样品冷链运送到76家实验室,用免疫比浊法(ITA)进行单次检测。以同位素标记精氨酸的肽段为内标,对标本进行变性、烷基化和胰蛋白酶酶解处理,液相色谱部分采用SB-C18色谱柱分离,质谱部分采用正离子模式和多反应监测定量。JMP13.0软件分析不同方法分组所对应的相对偏倚。结果对于所有样品,ITA检测apo E的方法组内不精密度在1.7%至20.4%之间。总不精密度在8%左右(s B~s E样品)。5个样品相对偏倚的均值分别是(按照样品浓度由低到高排列):-34.2%、-9.4%、-9.8%、-2.7%和-2.1%。高浓度样品比低浓度样品更接近LC-MS/MS检测结果。结论 LC-MS/MS检测apo E可评价免疫法的准确性,为临床应用提供帮助。     

一种免疫分析系统与液相色谱-串联质谱检测25-羟维生素D的一致性评价

目的:比较临床常用的罗氏全自动免疫分析系统（评估方法）与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS,参比方法）检测25-羟基维生素D［25（OH）D］的一致性。方法:收集2019年5—6月解放军总医院第二医学中心及第五医学中心健康查体剩余血清标本909份,分别由评估方法及LC-MS/MS检测25（OH）D。用Passing-...     

液相色谱串联质谱技术在罕见病诊断中的临床应用

罕见病具有种类多、发病率低、诊治困难等特点,近年来备受国家重视.常规实验室检测项目往往不能满足罕见病的诊断需求,液相色谱串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术以其特异度高、可同时区分/定量多种代谢物等特点而广泛受到临床关注,正逐渐从...     

液相色谱-质谱联用技术及其在医院药学中的应用

液相色谱-质谱联用 （liquid chromatography -mass spec- trometry, LC-MS）技术是当代最强有力的分离和鉴定分析系统之一。近年来,LC-MS技术在医院药学领域得到了广泛应用,本文就LC—MS技术的特点及其在医院药学工作中的应用作一简要综述。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清17α-羟孕酮候选参考测量程序的研究

目的:研究1种基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术的血清17α-羟孕酮（17α-OHP）候选参考测量程序并对其进行评价。方法:2019年12月,取上海市临床检验中心员工体检留存的血清标本,采用正己烷乙酸乙酯混合液（体积比3∶2）提取加入同位素内标的血清样本,C18反向色谱柱分离,正离子电喷雾质谱仪检测,参照美国...     

液相色谱-串联质谱法监测血清茶碱浓度及室间质量评价

目的对液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测茶碱进行方法学评价,探讨其在茶碱治疗药物监测(TDM)中的应用。方法在血清添加放射性核素内标茶碱-D6,经蛋白沉淀稀释后采用LC-MS/MS测定。以Capcell C18 MGⅢ(100 mm×2.0 mm,5μm)为分析柱进行反相色谱分离;以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水[20∶80(v/v)]为流动相,流速为0.3 m L/min;以电喷雾离子化串联四级杆质谱、正离子多反应监测进行定量检测。用建立的方法从2008年起连续参加卫生部临检中心茶碱TDM室间质量评价。结果 LC-MS/MS检测茶碱的线性范围为1~50μg/m L,批内和批间精密度分别为2.26%~6.65%和4.70%~6.84%,准确度分别为94.14%~104.00%。单个样品的监测分析时间为3.5 min。冻融(-30℃室温反复解冻3次)、室温放置24 h、自动进样器放置24 h、长期保存(-30℃放置28 d)的稳定性均良好。LC-MS/MS测定结果与室间质量评价靶值偏差为2.75%,斜率为1.04,相关系数(r2)为0.983。结论该LC-MS/MS采用放射性内标稀释,具有简单、快速、特异性和灵敏度较好的特点,连续6年测定结果符合全国室间质量评价要求,可用于茶碱的临床TDM。     

僵蚕水溶性物质指纹图谱及共有峰识别研究

目的 采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术对僵蚕水溶性物质中化学成分进行定性分析,建立僵蚕的指纹图谱和共有峰识别的分析方法.方法 采用Acclaim PA 25 μm C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm),流动相A和B分别为0.2％磷酸溶液和乙腈,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长为265 nm.采用电喷雾离子源正负离子模式,检测LC-MS/MS获得的特征峰的分子量和分子碎片,并进行特征峰结构指认.结果 僵蚕水溶性成分的指纹图谱发现19个共有峰,通过LC-MS/MS识别出其中10个共有峰.10批不同产地的僵蚕药材指纹图谱的相似度评价结果显示,相似度值为0.985～1.000.结论 本研究建立的基于LC-MS/MS的僵蚕指纹图谱分析方法具有选择性好、专属性强和灵敏度高等优点,可以为僵蚕药材的质量评价提供技术参考.     

液相色谱-串联质谱法检测类固醇激素在CAH筛查中的应用进展

准确测定先天性肾上腺皮质增生症(CAH)患者体内的各激素水平一直是困扰检验工作人员的难题。液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)是目前公认的具有较大应用潜力的检测方法。本文从CAH患者的类固醇激素代谢情况,LC-MS/MS检测类固醇激素的方法学建立要点及LC-MS/MS用于CAH诊治的研究现状进行综述,明确了LC-MS/MS有避免非特异性物质干扰,解决免疫分析法的高假阳性,检测标本多样化及能够快速进行类固醇代谢谱分析的优点,是一种能够为临床内分泌疾病的诊断与疗效监测提供精准、高效的检测手段。同时本文也对此检测技术的不足进行了阐述。     

血清胆汁酸LC-MS/MS测定及在老年人血清检测中的应用

目的：建立稳定、有效的血清中所有胆汁酸的液相色谱-串联质谱（LC-MS／MS）测定方法，分析老年人血清胆汁酸谱的特征。方法：建立血清胆汁酸LC-MS／MS定量检测方法，并对方法的灵敏度、精密度、回收率、线性范围等性能指标进行评价；利用该检测方法对10例老年人和15例儿童的空腹血清中所有胆汁酸进行定量检测，分析老年组血清胆汁酸组成特征。结果：该检测体系中，血清中15种胆汁酸和内标在10分钟内完成定量检测，最低检测极限为2～4ng／ml，浓度在3．9～3000ng／ml范围内线性良好，相对回收率为91．95～108．25％，偏移系数为1．71％～10．83％，日内变异度为0．68％～7．05％，日间变异度为2．04％～11．05％；与儿童组相比，老年组血清中胆汁酸总量、疏水性胆汁酸的含量百分较高。结论：所建立的胆汁酸LC-MS／MS检测方法稳定可靠，能满足临床定量检测要求；老年人体内血清胆汁酸谱可能促进胆石症的发生。     

液相色谱-串联质谱法检测25-羟维生素D标准化专家共识

液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）是临床生化小分子检测的首选方法,常用于血清25-羟维生素D［25（OH）D］的检测。其虽有高灵敏度、高特异性、线性范围宽等优势,但因仪器、色谱柱、试剂、校准物、方法学及性能验证等因素的影响,也会造成同一个实验室内部及不同实验室之间的LC-MS/MS检测结果存在较大偏差。标准化是确...     

液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

基于串联质谱标签技术筛选免疫介导性脱髓鞘疾病诊断与鉴别诊断的生物标志物

目的:采用串联质谱标签（TMT）联合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）筛选免疫介导性脱髓鞘疾病诊断与鉴别诊断的潜在生物标志物。方法:选择首都医科大学附属北京天坛医院2020年1月至2021年1月收治的20例脱髓鞘疾病患者（脱髓鞘组）,包括10例吉兰-巴雷综合征（GBS）患者（GBS亚组）与10例多发性硬化（MS）患者...     

液相色谱串联质谱法和循环酶法测定血清中同型半胱氨酸的相关性

目的分析液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法与循环酶法测定人血清中同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)浓度的相关性。方法收集63例患者的血清样本,用LC-MS/MS法和循环酶法分别测定相同样本的HCY浓度,并评价2种方法的相关性。结果 LC-MS/MS法与循环酶法对HCY浓度测定的结果分别为(19.11±15.69)μmol/L和(16.95±14.41)μmol/L,差异有统计学意义(t=6.25,P0.05)。2种方法的线性回归方程为YLC-MS/MS法=1.074X循环酶法+0.892,相关系数(R)=0.987,相关性较好。结论 LC-MS/MS法与循环酶法测定血清中HCY浓度的相关性较好,LC-MS/MS法适用于临床对HCY的检测。     

液相色谱-串联质谱法检测唾液皮质醇和可的松进展及临床应用

摘要：午夜唾液皮质醇检测作为库欣综合征的一线筛查指标，也可用于库欣综合征术后复发监控和药物替代治疗监测。可的松是皮质醇在唾液中的代谢物，同时亦是其干扰物，与皮质醇同时检测不仅能排除干扰，而且能鉴别外源性皮质醇污染导致的假阳性结果。液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)检测唾液皮质醇和可的松具有无创、简便、敏感性高、特异性强等特点。检测方法的核心在于通过样本浓缩和液相色谱分离技术实现皮质醇和可的松的分离及准确测定。因此，测定唾液皮质醇和可的松比传统的血清或者尿样更具优势,是血清或者尿样皮质醇/可的松检测的合适替代指标。鉴于目前国内相关的应用和研究报道较少，有必要开发和验证唾液皮质醇的LC-MS/MS检测方法，建立中国人群的健康参考值和疾病诊断值，为扩大这一技术的临床应用提供依据。     

肺炎支原体双向电泳条件的探索

目的建立适用于肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的双向电泳技术。方法对双向电泳实验中的三个关键因素:全蛋白提取量、固相PH梯度胶条范围、蛋白上样量进行摸索,比较和分析标准株FH电泳图谱,利用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)鉴定部分蛋白斑点。结果采用菌液离心结合超声破碎的方法提取全蛋白,上样量为2mg,固相PH梯度胶条选取PH4-7,可以得到蛋白点分布均匀的双向电泳图谱,蛋白点数为60±2。利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术成功获得了分子伴侣蛋白(Chaperone protein DnaK),鉴定成功率为100%。结论成功建立了适用于肺炎支原体蛋白质组分析的双向电泳技术条件,为肺炎支原体蛋白质组学的研究提供一个可靠的技术平台。