新生隐球菌丝氨酸蛋白酶对脑微血管内皮细胞MMP-9、Tau—LRP、LDL—LRP的调控作用

目的:观察新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶对血脑屏障基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、微管相关蛋白(Tau-LRP)和低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDL-LRP)表达的影响以及抑肽酶的干预作用。方法:在含有成熟的脑微血管内皮细胞的培养皿中,分别加入丝氨酸蛋白酶相关成分及其特异性抑制剂后,应用免疫组织细胞化学技术检测MMP-9、Tau-LRP和LDL-LRP表达的变化。结果:应用新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶后内皮细胞的MMP-9、Tau-LRP、LDL-LRP的表达均升高,与对照组比较有显著统计学差异(P<0.01);抑制剂组的MMP-9、Tau-LRP和LDL-LRP与对照组比较无明显统计学差异(P>0.05)。结论:新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶通过上调MMP-9和(或)Tau-LRP、LDL-LRP表达,诱导内皮细胞基质降解和细胞自身微管结构及紧密连接发生变化,可能最终导致血脑屏障通透性增加。     

新生隐球菌毒力因子研究进展

新生隐球菌是条件致病性深部真菌,细胞免疫功能受损的人群易感,是隐球菌属的主要致病菌。近年来,由新生隐球菌感染引起的隐球菌病日益增多,因其症状重、治疗困难、病死率高而引起重视。有关新生隐球菌的毒力因子致病性方面的研究十分活跃,本文就这方面的研究进展作一综述。     

肺隐球菌病二例误诊原因分析

目的提高肺隐球菌病(pulmonary cryptococcosis,PC)临床诊治水平,减少误诊。方法 回顾分析2例肺隐球菌病诊治经过。结果例1无诱因发热20 d入院;例2体检时发现肺部阴影,有鸟类接触史,近1月有活动后气促、体重减轻。2例病初经X线胸片或胸部CT检查诊断为肺炎,经多种抗生素治疗效果不佳,后行经皮肺穿刺活检病理检查确诊为PC,给予抗真菌治疗后症状及肺部病灶均有好转。结论 PC临床表现缺乏特异性,影像学表现多样,易误诊。对肺部感染经多种抗生素治疗无效者,应警惕PC,积极行经皮肺穿刺活检术确诊。     

肺隐球菌病的CT诊断

目的：探讨肺隐球菌病（PC）的CT表现,以期提高CT诊断水平。方法：搜集2008年3月～2009年7月间收治经病理学或实验室检查证实的10例PC患者的CT及相关临床实验室资料,结合相关文献回顾性分析其胸部CT表现。结果：本组患者以中年男性为主,多数合并免疫抑制疾病,临床症状不明显或无特异性,其胸部CT表现可归纳为以下4种：结节或肿块型6例,病灶孤立或多发,合并“晕征”及空洞等;浸润实变型2例;小结节或网织结节型1例;混合型病变1例。多数病灶位于外周肺野或胸膜下区,且以右肺下叶多见。结论：PC的CT表现多种多样,无明显特异性征象,影像工作者应提高对该病的重视,结合临床、病理及实验室检查,以便早期诊断。     

慢病毒介导的小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞的条件

目的 研究慢病毒介导下小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞( bEND.3)的最佳条件.方法 实验分3组,完全培养基组(NP组)、培养基±5 mg/L凝聚胺组(P1组)和培养基+8 mg/L凝聚胺组(P2组),每组均有5个不同梯度的转染复数(MOI),即1、5、10、15、20,每个MOI值设3个孔,共45组.转染48、72、96 h分别在荧光显微镜下计数绿色荧光蛋白,并求其转染率,从而得到其最佳MOI值;1周后采用MTT法检测最佳MOI值对bEND.3活性和存活率的影响.结果 转染48 h时,在各组观察到少量绿色荧光蛋白,其转染率介于1％ ～9％;72 h和96 h时,MOI相同的各组间差异无统计学意义(P＞0.01),其中,MOI为1、5、15的各组转染率均低于20％;MOI为10和20组,转染率介于71％～97％与60％～ 84％,且MOI为10组转染率高于MOI为20组,差异有统计学意义(P＜0.01).MTT检测P1组和P2组存活率,1周时分别为(81.38 ±6.69)％、(62.03±5.13)％,P1组显著高于P2组(t=15.795,P＜0.001).结论 慢病毒介导的小RNA干扰组织蛋白酶B转染bEND.3最佳优化条件为MOI=10,凝聚胺为5 mg/L,最佳转染时间为转染后72 h.     

实时荧光定量PCR检测VAD1 mRNA评估新型隐球菌性脑膜炎的疗效

目的 建立RT-FQ-PCR检测新型隐球菌VAD1 mRNA的方法 ,探讨定量测定VAD1 mRNA用于CNM疗效评估的可行性.方法 依据GenBank收录的新型隐球菌VAD1 mRNA全序列,设计引物和TaqMan探针,建立RT-FQ-PCR检测VAD1 mRNA的方法 .检测25例CNM患者和30例其他神经系统疾病对照组患者脑脊液,评价方法 的敏感度及特异度;检测25例CNM患者急性期与恢复期脑脊液中VAD1 mRNA的表达量,分析VAD1 mRNA与CNM治疗效果的关系.结果 建立的标准曲线相关系数为-0.997 9,检测下限为101 拷贝数/μl,高、中、低浓度质粒标准品批内CV值分别为0.65%、0.89%和1.23%;RT-FQ-PCR法检测新型隐球菌的敏感度为96%(24/25),特异度为100%(30/30);急性期VAD1 mRNA表达量为3.042±0.906,明显高于恢复期的2.187±0.665,差异有统计学意义(t=4.583,P＜0.01).结论 本研究建立的RT-FQ-PCR方法 具有较高的敏感度、特异度和重复性,适合于新型隐球菌的VAD1 mRNA检测;VAD1 mRNA表达水平与CNM的治疗效果有关.     

LPS对心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响及rHDL的调控作用

目的：观察 ＰＬＳ作用下心脏微血管内皮（ＣＭＥＣｓ）细胞间粘附分子 （ＩＣＡＭ）－１的表达情况及ｒＨＤＬ的调控作用,为ＣＨＤ的防治提供实验依据。方 法：利用培养的血管内皮细胞,采用流式细胞仪检测正常细胞、ＬＰＳ作用和ＬＰＳ与 ｒＨＤＬ协同作用下０、１、２、６、１２小时不同时相点 ＩＣＡＭ－１表达阳性细胞数及荧光 强度。结果：ＬＰＳ和ＣＭＥＣｓ共同孵育下,随时间延长ＩＣＡＭ－１表达的阳性细胞数 和荧光强度上升,ｒＨＤＬ有抑制ＩＣＡＭ－１表达作用。结论：ＰＬＳ可以刺激ＣＭＥＣｓ 表达ＩＣＡＭ－１,ｒＨＤＬ对血管内波细胞的损伤有保护作用。     

实时荧光定量PCR检测VAD1 mRNA评估新型隐球菌性脑膜炎的疗效

Objective To establish a new approach for quantitative detection of VAD1 mRNA in cryptococcus neoformans by RT-FQ-PCR, and evaluate the treatment efficacy of CNM. MethodsThe primers and TaqMan probe were designed according to the published sequence of VAD1 mRNA (GenBank),and RT-FQ-PCR method to detect VAD1 mRNA was established. Cerebrospinal fluid from 25 CNM patients and 30 controls were detected and sensitivity and specificity of the method were evaluated. VAD1 mRNA concentration in cerebrospinal fluid from both acute phase and recovery phase of 25 CNM patients were also detected and significance of CNM treatment efficacy with VAD1 mRNA analysis was evaluated. Results Correlation coefficient of standard curve was - 0. 997 9 in detection of VAD1 mRNA by RT-FQ-PCR, and the detection limit was 101 copies/μl. The intra CV of plasmid standard for high, medium and low concentrations were 0. 65% ,0. 89% and 1.23% respectively, the sensitivity of cryptococcus neoformans detection by RT-FQPCR was 96% (24/25) ,while specificity was 100% (30/30). VAD1 mRNA concentration in acute phase were significant higher than that in recovery phase (3. 042 ±0. 906 vs 2. 187 ±0. 665 ,t =4. 583 ,P ＜0. 01).Conclusions The established RT-FQ-PCR method for the detection of VAD1 mRNA is provided with sound sensitivity, specificity and reproducibility, which might be fit for the detection of VAD1 mRNA. The expression level of VAD1 mRNA is relevant with the treatment efficacy of CNM.     

血清内皮细胞特异分子-1、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂水平对2型糖尿病大血管病变诊断的临床价值

目的 探讨血清内皮细胞特异分子-1(Endocan-1)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平对2型糖尿病(T2DM)大血管病变(MVC)的临床诊断意义.方法 选取72例患者,根据是否合并大血管疾病,分为T2DM组36例和MVC组36例;此外,选同期36例健康者作为对照组.利用酶联免疫吸附检测技术(ELIS...     

血必净对小鼠脑微血管内皮细胞株增殖的作用

目的 观察中成药血必净注射液对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞株（bEnd．3）增殖活力的影响,探讨其促进内皮损伤修复的药物效应。方法采用小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd．3,分别给予质量浓度为0、5、25和50mg／ml血必净刺激12、24和48h后,应用四甲基偶氮唑蓝法（MTr）检测各组细胞的增殖情况,并应用流式细胞仪检测血必净对细胞周期（增殖指数％=（G2-M）％＋S％）的影响。采用单因素方差分析或非参数秩和检验进行统计学分析。结果与对照组（0mg/／ml）相比,血必净5mg组和25哗组在12h和24h的MTT和增殖指数均明显升高（P〈0．05）,两组在48h的增殖指数明显降低（P〈0．05）,而MTT则差异无统计学意义;50mg组的MTT在12h与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,而在24h和48h则显著降低（P〈0．05）;其增殖指数在12h和24h均明显升高（P〈0．01）,在48h显著下降（P〈0．01）。结论 血必净对于体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞在特定药物浓度和时间内具有刺激增殖的作用,提示对内皮细胞的损伤具有一定的修复作用。     

系统性红斑狼疮患者合并隐球菌性脑膜炎及下肢深静脉血栓的护理

总结了1例系统性红斑狼疮患者合并隐球菌性脑膜炎、下肢深静脉血栓的护理.护理要点包括:严密观察病情变化,给予下肢深静脉血栓及预防感染等护理.经积极治疗和护理,患者病情得到有效控制,脑脊液培养隐球菌阴性,下肢深静脉血栓症状缓解.     

乳胶凝集试验对小儿新型隐球菌脑膜炎诊断及治疗的应用探讨

目的 探讨乳胶凝集试验对小儿新型隐球菌性脑膜炎的临床诊疗价值.方法 对我院儿科近3年确诊的15例新型隐球菌脑膜炎患儿相关临床资料进行回顾性分析,包括颅脑CT、脑脊液墨汁染色及乳胶凝集试验等检查结果在治疗前后的变化.结果 治疗前,乳胶凝集试验对小儿新型隐球菌脑膜炎诊断阳性率86.7％（13/15）高于颅脑CT 20.0％ （3/15）和常规脑脊液墨汁染色40.0％（6/15）,差异均有统计学意义（x^2=13.393,P=0.001;x^2=7.033,P=0.021）;治疗后,乳胶凝集试验抗体滴度逐渐降低,并与颅脑CT以及脑脊液墨汁染色的转阴率变化在一定程度上具有一致性,但有3例患儿（20.0％）持续阳性.结论 乳胶凝集试验诊断小儿新型隐球菌脑膜炎的价值较高,但作为治愈指标的参考意义有限.     

饮食干预对艾滋病合并新型隐球菌脑膜炎病人营养状况的影响

[目的]探讨饮食干预对艾滋病合并新型隐球菌脑膜炎病人营养状况的影响。[方法]选择能自主进食的艾滋病合并新型隐球菌脑膜炎病人60例,分为观察组和对照组各30例,对照组进行常规护理,按病人意愿进食;观察组进行饮食干预,由营养师根据病人情况进行配餐,在责任护士指导下进食。[结果]1个月后两组病人体重、血清清蛋白及血红蛋白比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]饮食干预能改善艾滋病合并新型隐球菌脑膜炎病人的营养状况。     

系统性红斑狼疮脑病并发隐球菌脑膜炎1例的护理

我科2008—05收治系统性红斑狼疮脑病并发隐球菌性脑膜炎患者1例,经治疗,取得良好的效果,现报告如下。 1病历摘要 女,47岁。入院查体：T37．5℃,R20次／min,P80次／min,BP140／95mmHg,意识清,精神萎靡,左前臂散在少许红色皮疹,双胫前轻度压陷性肿胀,双膝骨擦感阳性。腰穿结果：颅内压〉330mmH20,蛋白定性2．0g／L,ESR71mm／h。     

脑微血管内皮细胞对体外缺氧神经干细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察脑微血管内皮细胞对体外培养缺氧神经干细胞增殖、凋亡的影响。方法:实验于1996-01/1996-12在佳木斯大学神经科学所完成。实验材料:同一基因背景新生的Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物学部提供(黑动字第99102001)。实验方法:①取新生24hWistar大鼠大脑培养神经干细胞,采用免疫组织化学方法鉴定神经干细胞。②取出生1～7dWistar大鼠大脑培养脑微血管内皮细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定。③将培养传代纯化的脑微血管内皮细胞,用0.25%胰酶消化成单细胞液后接种于涂有多聚赖氨酸包被的盖玻片上,接种传3代后用胰酶消化的神经干细胞,以1∶10接种比例加入神经细胞完全培养液共培养。④用无菌石蜡油覆盖于低糖细胞培养液表面,制备低氧低糖溶液。对照组:正常神经干细胞置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养。缺氧共培养组:取共培养3d细胞,吸出培养液,用无菌Hank’s缓冲液清洗2次,加入低氧低糖溶液共同作用2,4,8,16h后换液,用PBS缓冲液冲洗3次后,换神经细胞完全培养液,置于细胞培养箱中复氧培养。缺氧单纯神经干细胞组:取传3代神经干细胞,用无菌Hank’s缓冲液清洗2次后,方法同上。实验评估:免疫组织荧光鉴定缺氧条件下神经干细胞的增殖与凋亡。结果:①免疫组织化学方法检测Nestin及Ⅷ因子相关抗原分别鉴定为神经干细胞及脑微血管内皮细胞。②对照组细胞胞体饱满,折光性强,周围有光晕。缺氧单纯神经干细胞组细胞胞体肿胀,折光性差,有大量细胞碎屑,仅有少量活细胞,并出现悬浮死细胞。缺氧共培养组细胞形态有所改善,细胞折光性仍较好,大部分细胞突起仍未见回缩,仅少数细胞肿胀,坏死。③随着缺氧时间的延长,细胞死亡明显增多,存活数明显下降。缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组与对照组(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P<0.01)。④缺氧条件下脑微血管内皮细胞对神经干细胞增殖及凋亡的影响:缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组,细胞凋亡细胞数低于缺氧单纯神经干细胞组(P<0.05)。结论:脑微血管内皮细胞可以促进缺氧神经干细胞的增殖、减少其凋亡。     

常压高浓度氧对新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤与Nrf2/HO-1信号通路的影响分析

目的 探究常压高浓度氧(NBO)对新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤及核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路的影响。方法 取新生SD大鼠45只,采用随机数字表法分为常氧组、NBO组和NBO+Nrf2激活剂组,每组各15只。常氧组大鼠置于普通空气(21%氧气)中饲养,NBO组和NBO+Nrf2激活剂组大鼠置于90%常压氧气饲养,NBO+Nrf2激活剂组每日灌胃5 mg/kg Nrf2激动剂莱菔硫烷。测定脑组织伊文思蓝(EB)含量,采用酶联免疫法检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量,干湿重法检测脑组织含水量,HE染色和TUNEL染色观察脑组织病理变化,蛋白质印迹法检测海马组织Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达,水迷宫检测大鼠认知功能。结果 与常氧组比较,NBO组脑组织EB、VEGF、MMP-9含量及脑组织含水量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组脑组织EB、VEGF、MMP-9含量及脑组织含水量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。病理染色结果显示,常氧组大鼠神经细胞形态及...     

HIV-1 Tat对人脑内皮细胞MMP-9蛋白的影响及作用机制

目的 探讨HIV-1 Tat对人脑内皮细胞基质金属蛋白-9(MMP-9)的影响及作用机制。方法 按照Weksler's方法分离和处理人脑血管内皮细胞。小分子干扰RNA(siRNA)沉寂MMP-9,根据报告的序列设计MMP-9的特异性siRNA和Scramble II对照,MMP-9的活性采用明胶酶谱法检测,进行内皮细胞渗透性检测。结果 实验结果显示,Tat增强MMP-9的表达和活性,siRNA靶向作用于MMP-9以减少可溶性闭锁蛋白的浓度,Tat可以使HBMECs渗透性显著增强。MMP-9干扰可以恢复Tat处理后细胞的完整性。结论 Tat可以抑制闭锁蛋白的表达,并通过增强MMP的表达和激活而间接破坏闭锁蛋白,使血脑屏障(BBB)渗透性增强。     

缺血性卒中后小胶质细胞的异质性活化 对脑内皮细胞的作用

缺血性卒中是目前导致人类死亡的主要疾病之一.在卒中引起脑损伤的多种机制中,活化小胶质细胞 介导的神经炎症反应至关重要。新兴的单细胞测序技术促进了对小胶质细胞异质性活化的认识。血脑屏障 具有维持脑内环境稳态的关键作用,脑血管内皮细胞是血脑屏障的重要组成部分。研究发现血管相关的小 胶质细胞可以直接接触脑血管内皮细胞,进而影响血脑屏障的通透性,参与调控生理和病理状态下的脑血流 动力学,并促进血管内皮细胞的增殖和血管新生。进一步探索小胶质细胞的异质性活化对脑血管内皮细胞 作用,有望为缺血性卒中研发新的治疗思路。     

MRS2179对大鼠缺血性脑卒中后MMP-9表达及血脑屏障通透性的影响

目的:观察P2Y1受体抑制剂MRS2179对大鼠缺血性脑卒中后MMP-9表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:45只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、MRS2179组各15只。假手术组及模型组经侧脑室注射5μL人工脑脊液(aCSF),MRS2179组侧脑室注射5μL MRS2179(2 nmol)。制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,假手术组不予缺血。缺血再灌注24 h后,应用干湿重法检测脑组织含水量;伊文思蓝染料(EB)溢出量定量检测BBB通透性改变;Western blot法检测MMP-9蛋白表达。结果:模型组、假手术组、MRS2179组的脑含水量分别为(81.72±0.23)%、(77.65±0.27)%、(79.92±0.24)%(n=6),模型组高于假手术组(P<0.01);MRS2179组较模型组有所下降(P<0.01),但仍高于假手术组(P<0.01)。模型组梗死侧脑组织血管外EB溢出量为(1737.60±67.46)ng/g,显著高于假手术组(324.18±63.35)ng/g(P<0.01);MRS2179组梗死侧脑组织血管外EB溢出量为(1165.15±93.26)ng/g,较模型组明显下降(P<0.01)(n=6)。假手术组、模型组、MRS2179再灌注24 h梗死边缘区脑组织中相对MMP-9蛋白含量分别为(0.52±0.05)、(1.69±0.08)、(0.99±0.10)(n=3),模型组与假手术组相比明显升高(P<0.01),MRS2179组与模型组比较显著下降(P<0.01)。结论:P2Y1R抑制剂MRS2179可能通过降低MMP-9表达,降低BBB通透性,减轻缺血性脑卒中后脑水肿程度。     

基质金属蛋白酶-9抑制剂SB-3CT对心肺复苏大鼠血脑屏障作用的研究

目的 观察心肺复苏(CPR)早期大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血脑屏障的变化及MMP-9抑制剂SB-3CT对其的作用.方法 将动物随机分为假手术组、复苏对照组和复苏治疗组,夹闭气管插管致大鼠心搏骤停,1 min后进行CPR,复苏治疗组于自主循环恢复(ROSC)后立即腹腔注射MMP-9抑制剂SB-3CT 25 mg/kg.各组于ROSC 0、3、9、24和48 h分别处死8只大鼠后,观察血脑屏障变化;测定脑组织MMP-9的蛋白和mRNA表达;电镜下观察超微结构改变.结果 假手术组各时间点脑含水量、伊文思蓝含量、脑组织MMP-9蛋白及mRNA表达和电镜观察均无明显变化.复苏对照组各指标于3 h起明显升高,24 h达高峰,与假手术组比较差异均有统计学意义;血脑屏障明显改变.复苏治疗组ROSC后上述指标变化趋势与复苏对照组相似,但损伤程度较复苏对照组轻(P<0.05或P<0.01).结论 MMP-9抑制剂SB-3CT可明显减少MMP-9表达,减轻血脑屏障损伤,减轻脑水肿,对CPR后脑缺血/再灌注损伤有明显保护作用.