人工培育北虫草培养基的筛选及优化

目的:为工厂化培育北虫草提供优质液体发酵菌种,保证并提高人工培育北虫草的质量.方法:以生物转化率、虫草素和腺苷含量为指标,从碳源、氮源、C/N比、微量元素硒的影响等因素,通过正交实验确定优化培养基的组成成分.结果:优化培养基的组成成分为:土豆汁20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、蚕蛹粉0.5%、KH2P04 0.1%、MgSO4·7H20 0.05%、F3SO4·7H2O 0.002%、VB18mg·L-1,发酵初始pH7.0.结论:采用优化后的培养基,提高了北虫草子实体培育的生物转化率和子实体中的有效成分含量.     

正交实验优化蛹虫草培养成分提高虫草菌素含量

目的 通过正交实验优化蛹虫草培养成分,提高虫草菌素含量.方法 以蛹虫草的无性型Peacilomyces militaris 08-03为材料,进行正交实验.结果 通过正交实验优选出的最佳培养基成分为:蛋白胨2%、酵母膏3%、麦牙糖3%、蔗糖4%、KH2PO4 0.1%、NaNO3 0.1%、NH4Cl 0.2%,140 r/min,27℃,摇瓶发酵8 d;虫草菌素含量为(0.98±0.08) mg/g.结论 优化的培养基比用查氏液体培养基培养的虫草菌素产量[(6.51±0.22) mg/g]提高了近6.6倍.     

用蛹虫草固体发酵法高效生产虫草素的研究

目的：研究并建立用蛹虫草固体发酵方式高效生产虫草素的最佳方法。方法：通过对不同菌株在固体发酵过程中各生长期的虫草素含量变化进行跟踪测定以及正交旋转组合设计、正交试验设计等方法，对影响虫草素产量和含量的各影响因子(包括菌种、生长期、培养基配方和环境条件等)进行系统优化。结果：JF-1是虫草素生产的最佳菌株，现蕾期是收获提取虫草素的最佳时期；最佳的培养基配方为水料比1.1∶1(mL·g^-1)，营养水中酵母膏、蛋白胨、葡萄糖的用量分别为22.6，6.0，25.4 g·L^-1，营养水pH 6.6；最佳的环境条件为：光照强度4 400 lx，每日光照时间18 h，温度18～22 ℃。结论：用以上方法固体发酵生产虫草素，经过约13 d的培养，培养基中虫草素达到0.60%，比传统液体发酵方法的最高产量高近2倍，并且培养时间缩短2 d。     

活体柞蚕蛹复壮北虫草菌种初探

针对野生菌种在人工培养基上容易丢失产生子实体的能力,稳定性差,且野生型菌种虫草菌素等生理活性物质含量较低等影响北虫草规模化人工栽培的问题,本文探索利用紫外线对出发菌株P进行诱变处理,以生物转化率、虫草素、腺苷含量为指标,筛选出高产菌株89,其有性子实体中虫草素含量和腺苷含量分别是出发菌株的2.5倍和3.6倍.进一步对其进行传代稳定性试验测试后,可用于大规模工厂化北虫草培育用菌种.     

人工虫草与冬虫夏草成分的比较研究

目的比较人工北虫草、发酵虫草菌粉和冬虫夏草中,核苷及碱基类成分、甘露醇及麦角甾醇的含量,为开发利用虫草的药用价值提供理论依据。方法采用RP-HPLC法测定虫草中核苷及碱基类成分,采用HPLC-ELSD法分析虫草中甘露醇的含量,采用RP-HPLC法分析虫草中麦角甾醇的含量。结果 11批冬虫夏草中核苷及碱基类成分(尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷和虫草素)的平均含量分别为0.008 0、0.738 8、0.251 1、0.200 6、0.003 7、0.229 4、0.005 0 mg/g。10批人工北虫草中核苷及碱基类成分的平均含量分别为0.012 3、0.110 0、0.081 2、0.648 0、0.001 6、0.071 5、0.699 9 mg/g,12批发酵虫草菌粉中核苷及碱基类成分的平均含量分别为0.017 0、1.057 1、0.127 9、0.944 8、0.009 7、1.232 8、0.029 0 mg/g;冬虫夏草、人工北虫草、发酵虫草菌粉中甘露醇的平均含量分别为88.66、44.23、17.40 mg/g;冬虫夏草、人工北虫草、发酵虫草菌粉中麦角甾醇的平均含量分别为1.723 8、5.123 3、5.321 9 mg/g。结论人工北虫草、发酵虫草菌粉含有与冬虫夏草相似的主要活性成分,但人工虫草与冬虫夏草中各种活性成分的含量存在差异。     

灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化

用正交法研究了不同条件对灵芝菌生长影响,从中选出了灵芝 菌液体深层发酵的优化 培养基：葡萄糖 3.6%,蛋白胨 0.4%,pH 6.0,酵母膏 0.2%,KH2PO40.1%,MgSO 4· 7H2O 0.05%,Vit B1 0.005%,每升发酵液产干菌丝体 15.6 g,粗多糖 0.72 g。 经葡 聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化,共有 5 个组分,并用红外光谱、紫外光谱 ,气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成,结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖、 果糖、葡萄糖通过糖 β-D 糖苷键构成。     

紫外诱变选育北虫草新菌种的研究

针对野生菌种在人工培养基上容易丢失产生子实体的能力,稳定性差,且野生型菌种虫草菌素等生理活性物质含量较低等影响北虫草规模化人工栽培的问题,本文探索利用紫外线对出发菌株P进行诱变处理,以生物转化率、虫草素、腺苷含量为指标,筛选出高产菌株89,其有性子实体中虫草素含量和腺苷含量分别是出发菌株的2.5倍和3.6倍.进一步对其...     

稀土元素对冬凌草再生植株生长的影响

目的：探讨稀土元素镧、铈对冬凌草再生植株生长的影响。方法：在冬凌草再生植株时期,添加不同浓度的稀土元素镧、铈,重量法测定均单株鲜重及干重。结果：CeCl3·7H2O对冬凌草再生植株生长的促进作用优于LaCl3·6H2O,空白对照组农艺性状评分为51.70分,5 μmol·L-1 CeCl3·7H2O条件下,评分最高为67.40分。结论：稀土元素铈能显著改善冬凌草再生植株农艺性状,而镧对冬凌草生长促进作用不显著。     

蛹虫草液体发酵过程主要活性成分的代谢变化

目的:研究蛹虫草在液体发酵过程中主要活性成分的累积与代谢变化。方法:选取蛹虫草菌种GIM5.270,在基本发酵条件下延长发酵时间至20 d,通过含量分析方法检测每24 h时间间隔后生物量、虫草多糖、虫草酸、腺苷、虫草素在发酵体系中的累积与动态变化。结果:复合氮源组成的基础培养基比单一氮源组成所产生的生物量更高,随着时间发展,菌丝体生物量越来越高,虫草多糖与虫草酸(D-甘露醇)先增高后降低,腺苷逐渐降低,虫草素(3-脱氧腺苷)逐渐增高。结论:随着时间的发展,整个体系会吸收自身产生的营养物质出现自溶现象,本研究探索了主要活性成分在发酵体系中的代谢变化,确定了主要活性成分的最佳收集时间,为提高活性成分的产率提供依据。     

人工培育北冬虫夏草主要有效成分分布特点的研究

目的:研究人工培育北冬虫夏草主要有效成分的分布特点。方法:以虫草素、腺苷和虫草多糖的含量为主要评价指标,采用HPLC和苯酚-硫酸法,分别研究了这三种活性物质在人工北冬虫夏草子实体上部、中部、下部和培养基中的分布情况。结果:人工北冬虫夏草整个生长过程中,腺苷、虫草素和虫草多糖在培养基中的含量都远远低于其他三个部分。结论:人工北冬虫夏草子实体的活性物质主要分布在子实体中,在培养基中的含量极少。     

活体柞蚕蛹复壮北虫草菌种初探

目的：对北虫草菌株进行复壮处理以提高菌种活力。方法：用一株人工培育的北虫草菌株P感染刚化蛹的活体柞蚕蛹,蛹体近头部长出子实体后,待子实体近成熟期时采集孢子进行有性繁殖对原菌株进行复壮。结果：复壮后菌株10-2的子实体产量和生物转化率分别是原来菌株P的1.2倍和1.5倍。结论：在表面消毒过的活体柞蚕蛹上接种液体菌株活化复壮菌种的方法是可行的。     

人工蛹虫草中核苷类化学成分的研究

目的：研究人工蛹虫草Cordyceps militaris中核苷类化学成分。方法：建立人工蛹虫草中核苷类化合物的提取方法并用色谱水法分离各个核苷类化合物。结果：分离鉴定了4个化合物，分别是尿嘧啶核苷（1）、腺嘌呤核苷（2）、鸟嘌呤核苷（3）和酪氨酸（4）。结论：从核苷类物质分析来看，该人工蛹虫草菌丝体中核苷类物质含量丰富，主要为化合物1、2、3，三者总和约占菌丝体干重的1．3％。     

三种虫草抗氧化活性的化学发光法研究

为研究冬虫夏草、蛹虫草、蒙山虫草3种虫草的抗氧化活性，考察实验条件对结果的影响，采用化学发光法测定3种虫草清除超氧阴离子自由基的活性。结果显示，3种虫草的水提液中蛹虫草样品的抗氧化活性较高，蒙山虫草和冬虫夏草的抗氧化活性比较接近。提示：蛹虫草和蒙山虫草有着良好的应用前景，有望替代冬虫夏草应用于临床。     

蝉花真菌的分离及液体发酵培养

目的:探讨蝉花真菌分离及液体发酵培养。方法:从蝉花僵虫体、子座芽、孢子分离真菌,并采用三种液体培养基考察菌丝收率。结果:分离得到的蝉花真菌经鉴定为拟青霉属的蝉拟青霉。在含蚕蛹粉、鸡蛋等动物性成分的液体培养基中培养4天,菌丝收率135 g/L。结论:从蝉花分离得到的蝉拟青霉,可用液体发酵培养。     

工业化培育北虫草生物活性成分含量变化的研究

目的:明确工业化培育北虫草的主要生物活性成分在不同生长时期含量变化的规律.方法:采用HPLC和苯酚硫酸法,分别对不同生长时期的工业化培育的北虫草的虫草素、腺苷和虫草多糖含量的变化进行了跟踪.结果:培养周期内虫草素含量随生长期增长而不断增高,而腺苷和虫草多糖含量均在第40d达到最高值.结论:本研究结果对工业化生产,合理有...     

Effects of Cordyceps sinensis, Cordyceps militaris and their isolated compounds on ion transport in Calu-3 human airway epithelial cells

AIM OF THE STUDY: The traditional Chinese medicine Cordyceps sinensis (CS) (Clavicipitaceae) improves pulmonary function and is used to treat respiratory disease. Here, we compare the efficacy and mechanisms of action of Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris (CM) (Clavicipitaceae) in Calu-3 human airway epithelial monolayer model. MATERIAL AND METHODS: The extracts of Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris, as well as their isolated compounds, cordycepin and adenosine, stimulated ion transport in a dose-dependent manner in Calu-3 monolayers. In subsequent experiments, transport inhibitor bumetanide and carbonic anhydrase inhibitor acetazolamide were added after Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris extracts to determine their effects on Cl- and HCO3- movement. RESULTS: The results suggested that Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris extracts may affect the anion movement from the basolateral to apical compartments in the airway epithelia. CONCLUSIONS: Basolateral Na+-K+-2Cl- cotransporter and apical cAMP-dependent cystic fibrosis transmembrane conductance regulator Cl- channel are involved in the process. The results provide the first evidence for the pharmacological mechanism of Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris on respiratory tract.     

北虫草废弃培养料多糖提取条件优化研究

虫草人工栽培产生的大量废弃培养料,采用正交设计,确定从提取多糖的条件为提取温度80℃,提取2次,浸提时间120 min,料液比(w/v)1 20.本项实验结果可为北虫草的清洁生产及综合利用资源提供参考.     

Anti-inflammatory and related pharmacological activities of cultured mycelia and fruiting bodies of Cordyceps militaris

This study aimed to elucidate pharmacological activities of Cordyceps militaris. The 70% ethanolic extracts of cultured mycelia (CME) and fruiting bodies (FBE) of Cordyceps militaris were prepared. CME was able to directly scavenge the stable free radical diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), indicating its antioxidant activity. Both CME and FBE showed topical anti-inflammatory activity in the croton oil-induced ear edema in mice. CME was found to contain acute anti-inflammatory activity, which was evaluated using the carrageenin-induced edema, and also strong antinociceptive activity in writhing test. CME and FBE contain potent inhibitory activity on the chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) angiogenesis in a dose-dependent manner. Cordycepin, a metabolite of Cordyceps militaris, appeared to be at least partly responsible for its anti-inflammatory and anti-angiogenic activities. CME concentration-dependently inhibited the NO production and iNOS expression upon stimulation by lipoposaccharide in RAW 264.7, a murine macrophage cell line. In brief, we demontrate that Cordyceps militaris possesses anti-inflammatory and antinociceptive activites, and related antioxidant, anti-angiogenic, and NO production-inhibitory activities.