基于流式细胞分析技术的茯苓基因组大小测定

目的:茯苓是担子菌多孔菌科的著名传统中药.本研究的目的在于测定茯苓的基因组大小并考察了其倍性与基因组的关系.方法:真菌材料的前处理参考文献报道[1],并用DNA特异性染料碘化丙啶进行染色,通过调节离心转速、染色时间等条件对样品进行核分离的优化.DNA含量用流式细胞仪进行分析,通过比较茯苓与内参黑曲霉G0/G1期峰比值计算得出.结果:茯苓的基因组大小测定为55.79±3.03Mb,或相对DNA含量为0.12±0.01pg(1pgDNA=0.965×109bp).在结果中可以检测出黑曲霉和茯苓的G2/M期峰.结论:本研究探索了用流式细胞仪分析茯苓基因组大小的方法,所得数据可为基因组学研究提供了参考.     

基于流式细胞术和K-mer分析的黄芪基因组大小估测

目的使用流式细胞术与K-mer分析估测黄芪基因组的大小及复杂程度,为黄芪基因组测序奠定基础。方法以番茄为内标,用流式细胞仪测定经碘化丙啶(PI)染色的番茄细胞核和黄芪细胞核混合样品的PI荧光强度,通过比较黄芪与番茄细胞DNA含量峰值的倍数关系,计算黄芪的基因组大小。采用高通量测序技术进行黄芪基因组调查测序,利用生物信息学方法估计黄芪杂合率、重复序列和GC含量等信息。结果采用流式细胞术测得黄芪基因组大小约为1 426 Mb。通过基因组调查测序,获得了95 Gb黄芪基因组DNA测序数据,K-mer分析表明黄芪基因组约为1 456 Mb,测序深度为39×。K-mer分布曲线有明显的杂合峰,基因组杂合率为2.1%。结论黄芪基因组大小为1.45 Gb左右,杂合率较高。这一结果可为黄芪基因组学研究提供参考。     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株细胞凋亡的研究

目的：研究狗舌草提取物对U266细胞的细胞凋亡作用及其机制。方法：U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,电镜观察细胞凋亡形态,DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带。用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率。结果：狗舌草提取物作用U266细胞,电镜观察到细胞凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡条带,狗舌草提取物影响U266细胞周期,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,凋亡细胞增加,用Annexin V/PI染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系。结论：体外实验证实,狗舌草提取物对266细胞有细胞凋亡作用,存在剂量依赖关系。     

附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 凋亡及细胞周期的影响

目的：观察附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 的增殖以及凋亡的影响。方法：运用MTT 法,测定经附子生物碱处理后体外培养SGC-7901 细胞的增殖活性。分别采用Annexin-V/PI 双染法、流式细胞仪检测附子生物碱对细胞凋亡周期的影响。结果：淤附子生物碱分别作用人胃癌细胞株SGC-7901 24 h、48 h、72 h 后的IC50 为0.231 8±0.002 2、0.160 1±0.022 7、0.103 1±0.023 1 mg·mL-1,与空白对照组比较有显著性差异（P<0.01）。于当附子生物碱浓度达到0.8 mg·mL-1 时出现明显的凋亡,凋亡率为（59.38±5.05）%。盂流式细胞仪检测发现,与空白对照组相比,给药组处于S 期细胞的比例显著增多,并且G0/G1 期前出现凋亡亚二倍体峰。结论：附子生物碱体外对人胃癌细胞SGC-7901 具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,还可使SGC-7901 细胞阻滞于S 期。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的作用机制。方法:用MTT法观察青蒿琥酯对HSC增殖的影响,用流式细胞仪检测HSC在细胞周期中DNA含量的改变,测定不同浓度青蒿琥酯作用于HSC后上清液中Hpy、LDH的含量。结果:1.5~100μg/m l青蒿琥酯在0~72h范围内对HSC增殖有抑制作用,并有药物浓度时间依赖关系。各青蒿琥酯处理组中G0/G1期细胞比例逐渐增高,与正常组相比由56.2±1.3%升至72.6±2.3%左右;S期比例逐渐降低,由27.1±2.6%降至13.8±4.1%左右,而对G2/M期无影响。青蒿琥酯(12.5μg/m l~100μg/m l)组上清液Hyp值逐渐减小,呈剂量依赖关系,与相应的空白对照组比较有显著性差异;青蒿琥酯组上清液LDH与空白对照组比较无显著性差异。结论:青蒿琥酯能阻止HSC从G0/G1期进入S期,体外能明显抑制HSC的增殖,减少胶原的分泌,且在实验观察剂量范围内对HSC没有细胞毒性。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的作用机制.方法用MTT法观察青蒿琥酯对HSC增殖的影响,用流式细胞仪检测HSC在细胞周期中DNA含量的改变,测定不同浓度青蒿琥酯作用于HSC后上清液中Hpy、LDH的含量.结果1.5～100 μg/ml青蒿琥酯在0～72h范围内对HSC增殖有抑制作用,并有药物浓度时间依赖关系.各青蒿琥酯处理组中G0/G1期细胞比例逐渐增高,与正常组相比由56.2±1.3%升至72.6±2.3%左右;S期比例逐渐降低,由27.1±2.6%降至13.8±4.1%左右,而对G2/M期无影响.青蒿琥酯(12.5 μg/ml～100 μg/ml)组上清液Hyp值逐渐减小,呈剂量依赖关系,与相应的空白对照组比较有显著性差异;青蒿琥酯组上清液LDH与空白对照组比较无显著性差异.结论青蒿琥酯能阻止HSC从G0/G1期进入S期,体外能明显抑制HSC的增殖,减少胶原的分泌,且在实验观察剂量范围内对HSC没有细胞毒性.     

吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的探讨吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞H22的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响.方法体外试验MTT法测存活率,甲基绿-派诺宁联合染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察DNA损伤及细胞周期.结果吴茱萸碱0.5、1、2、4mg/L浓度组对小鼠肝癌细胞H22作用72h细胞存活率分别为60.3±6.6%、54.0±4.3%、40.7±4.8%、26.9±0.9%,作用24h、48h和72h的IC50依次为4.2、3.3和1.4mg/L.甲基绿-派诺宁染色后0.5、1mg/L吴茱萸碱组癌细胞均表现出凋亡特征;2mg/L吴茱萸碱组部分癌细胞开始出现坏死特征;4mg/L有较多癌细胞坏死.48h流式细胞仪检测表明1、2mg/L吴茱萸碱组出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2期,4mg/L吴茱萸碱组亚二倍体凋亡峰不典型,出现坏死单峰.凋亡率对照组为1.2、1、2和4mg/L吴茱萸碱分别为6.4、9.1和11.2%.48h琼脂糖凝胶电泳表明,4mg/L吴茱萸碱组细胞DNA裂成大片段,DNA损伤呈凋亡特征.结论吴茱萸碱能诱导小鼠肝癌细胞H22的凋亡.     

去氢骆驼蓬碱诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡

目的：探讨去氢骆驼蓬碱（Harmine，HM）诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：MTT法检测HM对该细胞系的生存抑制率，光镜下观察凋亡细胞，流式细胞仪（FCM）检测凋亡率，基因组DNA琼脂糖凝胶电泳（DNALadder）检测凋亡梯状条带。结果：HM处理SGC-7901细胞后，细胞的存活率明显降低；细胞形态观察到有核固缩与核断裂的凋亡现象；流式细胞仪测定细胞周期的G1期前有亚二倍体的凋亡峰；基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论：HM能诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡。     

雄黄诱导维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR2细胞)凋亡的体外研究

目的 :深入了解雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)的机理。方法 :以对全反式维甲酸 (ATRA)耐药的APL细胞株MR₂ 细胞为体外模型 ,用不同剂量的雄黄处理细胞一定时间后 ,利用MTT实验观察细胞的存活、增殖状态 ,应用细胞形态学、基因组DNA电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡 ,利用流式细胞仪分析细胞周期及细胞膜AnnexinⅤ的表达。结果 :一定浓度范围内雄黄对MR₂ 细胞的生长、增殖有剂量、时间依赖性抑制作用 ;Wright’s及HE染色均可见凋亡细胞 ,透射电镜下可见核染色质边集、核碎裂及凋亡小体 ;基因组DNA电泳出现“梯形”条带 ;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体细胞峰 ;经雄黄处理后AnnexinⅤ FITC⁺/PI^-的凋亡细胞逐渐增多。结论 :雄黄可诱导ATRA耐药的APL细胞发生凋亡 ,提示雄黄治疗APL的效应途径可能不同于ATRA。     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用

目的 研究狗舌草提取物对U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用.方法 U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI.结果 狗舌草总提取物影响266细胞周期,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,凋亡细胞增加,用AnnexinV/PI染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系.结论 狗舌草提取物对U266细胞有诱导细胞凋亡作用.     

不同产地茯苓中茯苓酸含量的比较研究

目的建立茯苓中茯苓酸含量的测定方法,比较9个不同产地茯苓中茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的品质提供参考依据。方法采用反相高效液相色谱法（RP—HPLC）,Kromasil 100—5C18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,柱温30℃,流动相为乙腈-0．4％乙酸（80：20）,流速1．0mL／min,检测波长242nm。结果茯苓酸在0．48—2．40μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0．9997,平均回收率99．96％,RSD=1．85％。9个产地茯芩中茯苓酸的含量有所差异。结论该方法简便、专属、稳定,可用于茯苓药材中茯苓酸的含量测定。     

灵芝菌对茯苓药材的生物转化研究

目的：利用灵芝菌对中药材茯苓药材进行固态生物转化,研究转化产物中总多糖和总三萜量的变化情况。方法：采用微波法提取茯苓及转化产物中的总多糖并采用苯酚-硫酸法进行含量测定;采用超声法提取茯苓及转化产物中总三萜并用香草醛-高氯酸法进行含量测定。结果：经生物转化后产物中的总多糖含量明显高于未经转化的茯苓药材（P<0.01）,而总三萜含量明显升高（P<0.01）,说明灵芝菌的生物转化过程改变了茯苓药材的原始特性;茯苓对灵芝生长具有促进作用,表现为灵芝菌丝生长旺盛未受抑制、转化产物中总多糖及总三萜含量显著高于茯苓原药材。结论：利用灵芝菌对中药茯苓进行生物转化来提高总多糖和总三萜含量,具有方法简单、成本低等优点,在中药现代化中有较高的应用价值。     

全国20个主要产地茯苓质量分析比较研究

目的建立茯苓多糖和茯苓酸的含量测定方法,分析比较全国20个主要产地茯苓中茯苓多糖和茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的质量品质提供依据。方法采用分光光度法测定茯苓多糖的含量,碱提,苯酚-浓硫酸显色,葡萄糖为对照品,检测波长490nm。采用RP-HPLC法测定茯苓酸的含量,Kromasil100-5C18色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸(80:20),流速1.0mL/min,检测波长242nm。结果葡萄糖在40～200μg/mL范围内线性良好,r=0.9999,平均回收率为99.72%,RSD=0.99%;茯苓酸在0.48～2.40μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.9997,平均回收率100.26%,RSD=1.26%。不同产地茯苓药材中茯苓多糖和茯苓酸的含量有较大差异,说明药材质量并不一致。结论该方法简便快速、准确可靠,为评价不同产地茯苓药材的质量提供了一种可靠的分析方法。     

茯苓化学成分、药理作用及质量控制研究进展

中药材茯苓是真菌茯苓[Poria cocos(Schw)Wolf]的干燥菌核,来源于多孔菌科,是药食两用类中药,其有效成分和药理作用较多,现已在临床应用广泛。现对茯苓的化学成分、药理作用以及质量控制研究进行综述。发现茯苓主要化学成分为三萜类、二萜类、甾醇类、多糖类以及其他类化合物,其中研究最多的是三萜和多糖类化合物。茯苓的药理作用体现在机体多个方面,主要集中于泌尿系统、消化系统、中枢神经、免疫系统等,具有利尿、抗炎、镇静催眠、抗衰老等多种药理作用。质量控制方面,大部分文献报道主要集中于茯苓的指纹图谱和含量测定研究。     

参木肠溶胶囊的质量标准研究

目的：建立参木肠溶胶囊的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法（TLC）对制剂中木香、白芍、茯苓进行定性鉴别;采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中盐酸小檗碱的含量。结果：TLC法可专属性地鉴别木香、白芍、茯苓,且特征斑点清晰,阴性对照无干扰。含量测定结果显示,盐酸小檗碱在0.028-0.28μg范围内线性关系良好,r=0.9995;平均加样回收率为100.81%,RSD为1.65%。结论：所建立的方法简便可行、重复性好,可有效控制参木肠溶胶囊的质量。     

RP-HPLC测定茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量△

目的:建立茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量测定方法,为该提取物的质量控制提供依据.方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对茯苓乙醇提取物中茯苓酸进行定性定量分析,利用保留时间定性和外标两点法定量.结果:此方法线性关系良好,茯苓酸线性回归方程为Y=565.41X+ 14.477(r=0.999 5),平均回收率为99.76％,RSD=l.13％(n=6).结论:该方法简便、可靠,可作为茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量测定方法.     

RP-HPLC测定茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量

目的：建立茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量测定方法,为该提取物的质量控制提供依据。方法：采用反相高效液相色谱法（RP—HPLC）对茯苓乙醇提取物中茯苓酸进行定性定量分析,利用保留时间定性和外标两点法定量。结果：此方法线性关系良好,茯苓酸线性回归方程为Y：565．41X＋14．477（r=0．9995）,平均回收率为99．76％,RSD=1．13％（n=6）。结论：该方法简便、可靠,可作为茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量测定方法。     

茯苓化学成分、生物活性及其提取方法的研究进展

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf 的干燥菌核,作为传统药食同源物品在中医药中应用广泛。本文对茯苓中化学成分的分离鉴定、茯苓生物活性研究,以及茯苓多糖和三萜类化合物的提取方法进行了综述,为茯苓的深入开发利用提供参考。     

茯苓抗衰、养生与美容作用诠析

茯苓是一味常用的抗衰老、养生与美容中药之一,就茯苓的相关作用机制进行了诠析。认为,茯苓通过健脾与渗湿作用达到抗衰老、养生与美容的目的。深入研究茯苓的抗衰老机制及其养生与美容作用,在当前关注养生与美容的今天,具有十分重要的意义。     

HPLC法测定茯苓中茯苓酸的含量

目的:建立测定茯苓药材中茯苓酸含量的反相高效液相色谱法。方法:采用HPLC法。色谱柱为Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水溶液梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为250nm。结果:茯苓酸进样浓度在50～3 000μg/mL之间有良好的线性关系。平均加样回收率为98.53%,RSD(n=6)为2.24%。结论:HPLC法可作为茯苓质量控制的一个有效方法。