蛭龙活血通瘀胶囊对H2O2诱导细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨蛭龙活血通瘀胶囊(以下简称“ZL”)对H2O2诱导细胞氧化损伤的保护作用.方法:以正常H9C2心肌细胞、PC12细胞作为对照,分别以不同浓度的H2O2处理细胞4h,建立氧化损伤模型;在H2O2处理细胞前用ZL预处理24 h,作为ZL药物组,采用CCK-8法检测以上各组细胞存活率.结果:与未经H2O2处理的细胞比较,400 μmol/L H2O2处理的H9C2心肌细胞存活率下降至(47.25±4.14)％(P＜0.01);600 μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率下降至(52.53±4.31)％(P＜0.01);经10～320 mg/ml的ZL预处理后,H9C2心肌细胞、PC12细胞的存活率均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:ZL对H2O2诱导的H9C2心肌细胞、PC12细胞氧化损伤有保护效果.     

龙眼肉不同提取物的神经保护作用及其机制

目的:探讨龙眼肉的神经保护作用及其机制。方法:采用Aβ诱导PC12细胞损伤,用龙眼肉不同提取物作用于损伤的PC12细胞,Elisa试剂盒检测SOD、MDA水平,MTT检测细胞增殖;采用H2O2诱导PC12细胞损伤,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡。结果:龙眼肉水提取物和正丁醇提取物能提高Aβ诱导损伤的细胞存活和SOD活力,抑制H2O2诱导损伤的早期细胞凋亡,对MDA含量无明显影响;乙酸乙酯提取物可减少H2O2诱导损伤的各期细胞凋亡及坏死,但对Aβ诱导损伤的细胞存活以及SOD活力和MDA含量无明显影响。结论:龙眼肉具有神经细胞保护作用,但不同提取物作用机制可能不同。     

菥蓂子乙醇提取物对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究菥蓂子乙醇提取物对H2O2诱导损伤的PC12细胞保护作用及其作用机制。方法:用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,活性氧检测试剂盒(DCFH-DA)检测细胞内活性氧,线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:菥蓂子乙醇提取物能够保护H2O2诱导的PC12细胞活力损伤,抑制H2O2所致胞内ROS水平升高,抑制H2O2导致的线粒体膜电位下降,减少细胞凋亡的发生。结论:菥蓂子乙醇提取物能够抑制H2O2诱导PC12细胞氧化损伤,在神经细胞氧化损伤保护方面具有较好的应用价值。     

通络化痰胶囊对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的:探讨通络化痰胶囊对过氧化氢(H2O2)所致的大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞凋亡的保护作用及机制.方法:PC12细胞常规培养后,首先通过MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和通络化痰胶囊药物浓度的筛选;确定造成PC12细胞损伤的H2O2浓度和通络化痰胶囊的安全作用浓度后,将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组和通络化痰胶囊6.25,12.5,25,50,100mg·L-15个治疗组.用200 μmol· L-1H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞存活率、Hoechst33342荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率、Western blot 方法检测与细胞凋亡线粒体途径密切相关的蛋白细胞色素C(CytC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的变化.结果:200 μmol· L-1H2O2诱导PC12细胞损伤明显,浓度小于等于100 mg·L-1的通络化痰胶囊浓度对正常PC12细胞的存活率没有抑制作用.与模型组比较,各通络化痰治疗组PC12细胞存活率提高(P＜0.01),凋亡率下降(P＜0.01),Cytc和Caspase-3的表达减少(P＜0.01),其作用与剂量有关.结论:通络化痰胶囊可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关CytC和caspase-3的表达有关.     

何首乌不同炮制品对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的初步研究何首乌不同炮制品对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法实验用何首乌分生品、清蒸品、黑豆汁蒸品,各分成高、中、低剂量(即10、5、2.5 mg生药/mL),采用MTT法测定其对正常PC12细胞和H2O2致PC12细胞损伤的保护作用,并用比色法测定SOD活性、LDH和MDA水平。结果何首乌生品、清蒸品、黑豆汁蒸品对正常PC12细胞增殖均无明显影响(P>0.05),但均可显著刺激H2O2致PC12损伤细胞增殖(P<0.05),黑豆汁蒸品和清蒸品均显著升高SOD活性(P<0.05)、减少LDH释放(P<0.05)、降低MDA(P<0.05)水平来改善H2O2致PC12细胞氧化应激而对损伤细胞有保护作用,生品虽能升高SOD活性(P<0.05),但同时也显著升高MDA和LDH水平(P<0.05)。结论清蒸和黑豆汁蒸均可加强何首乌保护PC12细胞免受H2O2损伤的作用。     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。     

苗药黑骨藤种子幼芽与黑骨藤不同部位对PC12细胞氧化损伤的影响

目的:研究黑骨藤种子幼芽与黑骨藤不同部位提取物对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)氧化损伤的保护作用。方法:使用H_2O_2氧化压力诱导PC12出现氧化损伤,检测黑骨藤种子幼芽、颈、叶乙醇提取物对PC12细胞的保护作用。结果:黑骨藤不同部位对PC12细胞的保护作用存在差异;与模型对照组比,黑骨藤幼芽、叶乙醇提取物能保护PC12细胞免受H_2O_2诱导的氧化损伤;幼芽的半数有效浓度(EC50)大约为34μg/m L,叶的EC50大约为16μg/m L;黑骨藤颈乙醇提取物缺乏保护PC12细胞的作用。结论:黑骨藤叶、幼芽乙醇提取物具有抗氧化损伤作用。黑骨藤叶具有开发的潜质。     

大黄酸对过氧化氢诱导损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的:观察大黄酸对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡、NO、NOS及SOD表达的影响,探讨大黄酸保护血管内皮细胞氧化损伤的可能机理。方法:100μmol/L H2O2造成血管内皮细胞氧化应激损伤模型,采用倒置显微镜观察细胞形态,Hochest染色观察细胞凋亡情况;MTT法和试剂盒测定各组细胞增殖、NO、NOS的及SOD的表达情况。结果:100μmol/LH2O2可损伤血管内皮细胞、抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、降低NO、NOS含量和SOD的活力;而大黄酸则能改善H2O2诱导损伤的血管内皮细胞形态,促进其增殖,抑制其凋亡,提升NO、NOS的含量和SOD的活力,显示大黄酸对血管内皮细胞有一定的保护作用。     

茶多酚对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的研究茶多酚(tea polyphenols,TP)对H2O2所致大鼠嗜铬细胞PC12细胞损伤的保护作用。方法 PC12细胞用TP及H2O2处理,MTT法观察细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,流式细胞术测定细胞周期分布,BrdU免疫荧光法检测细胞周期相S期DNA合成。结果 500μmol/L H2O2作用PC12细胞2 h,细胞出现明显损伤,细胞活力下降,培养上清液中LDH量增加,DNA合成减少;5、10、20μmol/LTP预处理可有效提高细胞存活率,减少LDH渗漏,提高S期DNA合成。结论 TP对H2O2所致的PC12细胞损伤有保护作用。     

生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:探讨生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2处理PC12细胞制作成氧化应激损伤模型,采用MTT法检测生地黄水煎剂对PC12细胞活性的影响,并采用Westen blot法检测PC12体外凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、caspase3的表达情况。结果:经150μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率明显降低,而经生地黄水煎剂(2.5、5、10mg/m L)预处理后,细胞存活率大致呈浓度依赖增长,并明显抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的高表达,提高Bcl-2/Bax比值。结论:生地黄水煎剂对氧化应激损伤的PC12细胞凋亡具有保护作用,其保护机制是通过抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的表达,并提高Bcl-2表达而实现的。     

仙人掌提取物抗溃疡作用

仙人掌提取物给大鼠口服,对应激型、消炎痛型、醋酸型、结扎胃幽门型胃溃疡皆有明显的抗溃疡作用,且可明显提高胃液中的前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）含量。     

维药罗勒不同提取组分在体外对Ecv304细胞COX-1活性的影响

目的:探讨维药罗勒不同提取组分在体外对环氧化酶-1(COX-1)的合成物6-keto-PGF1α浓度的影响,间接证明其对COX-1活性的影响,进而找出该药抗血栓的作用机制及其有效部位。方法:将维药罗勒不同提取组分对Ecv304细胞进行不同时间的药物干预,采用MTT法检测活细胞数目,ELISA法测定细胞上清液中6-keto-PGF1α的浓度。结果:不同组分在不同时间内对6-keto-PGF1α的浓度有不同的影响,在短时间内,OBL-正丁醇和OBL-乙醇均能显著增加6-keto-PGF1α的浓度(P<0.01);长时间内,OBL-乙酸乙酯可显著性地降低6-ket-PGF1α的浓度(P<0.05),而OBL-氯仿和OBL-正丁醇中高剂量可显著增加6-keto-PGF1α的浓度(P<0.01)。结论:维药罗勒可能通过抑制TXA2合成酶的活性,激活COX-1的酶活性,最终维持TXA2-PGI2的平衡而产生抗血栓作用,正丁醇提取部位是其发挥激活COX-1酶活性作用的有效部位。     

银杏内酯对体外PC12细胞拟缺血缺氧损伤及缺血继发性凋亡的作用

目的：研究银杏内酯对缺血缺氧损伤情况下体外培养PC12细胞的保护作用及其对该细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法：在离体培养的PC12细胞，用NaCN无糖培养造成拟缺血损伤模型，用H2O2模拟氧自由基损伤，分别通过形态学观察、MTT微量比色等方法研究药物对上述模型的保护作用。另将PC12细胞在无血清条件下培养96h，通过琼脂糖凝胶电泳检测其凋亡情况，并用流式细胞术检测细胞的凋亡程度及凋亡相关基因bcl-2在其中的作用。结果：银杏内酯终浓度10^-5、10^-6、10^-7mol/L能抑制NaCN无糖和H2O2培养造成的细胞损伤，明显增强细胞活力。凝胶电泳可见到明显的梯型条带，流式细胞术检测凋亡情况发现模型组凋亡率为10．40％，银杏内酯10^-5mol/L组的凋亡率为3．96％。同时发现药物组和模型组细胞中的bcl-2基因表达没有显著差异。结论：银杏内酯具有神经保护作用，且该作用与药物的抗凋亡能力有关，但这种抗凋亡作用似乎并不是通过bcl-2基因的调控实现的。     

仙人掌多糖主要组分对大鼠红细胞脂质过氧化损伤的影响

目的分离纯化仙人掌多糖主要组分,观察仙人掌多糖主要组分(ODP-Ⅰa)对红细胞脂质过氧化损伤的影响,探讨其抗氧化机制。方法从野生仙人掌Opuntia dilleniiHaw.中采用超声提取法并用DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析纯化得到仙人掌多糖组分ODP-Ⅰa、ODP-Ⅰb和ODP-Ⅱ′。以活性氧(H2O2)作用于离体正常大鼠红细胞,观察ODP-Ⅰa对红细胞溶血率、高铁血红蛋白含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、红细胞膜蛋白巯基含量和膜蛋白质高分子聚合物的影响。结果 ODP-Ⅰa能够抑制H2O2诱导的红细胞溶血和高铁血红蛋白的产生;提高H2O2氧化损伤红细胞中超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性和降低丙二醛含量;同时,能够抑制H2O2引起的膜蛋白巯基含量的降低和红细胞膜蛋白高分子聚合物的形成。结论 ODP-Ⅰa对活性氧引起的红细胞脂质过氧化损伤具有保护作用。     

Antiviral activities of extracts isolated from Terminalis chebula Retz., Sanguisorba officinalis L., Rubus coreanus Miq. and Rheum palmatum L. against hepatitis B virus.

The antiviral effects of aqueous extracts of Terminalis chebula Retz., Sanguisorba officinalis L., Rubus coreanus Miq. and Rheum palmatum L. were examined by a cell culture system using a hepatitis B virus (HBV) producing cell line, HepG2 2.2.15. The extracts were assayed for the inhibition of HBV multiplication by measurement of HBV DNA and surface antigen (HBsAg) levels in the extracellular medium of HepG2 2.2.15 cells after an 8-day treatment. All extracts decreased the levels of extracellular HBV virion DNA at concentrations ranging from 64 to 128 microg/mL and inhibited the secretion of HBsAg dose dependently. Of the four tested plants, Terminalis chebula exhibited the most prominent anti-HBV activities.     

远志皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察远志皂苷（Tenuigenin TEN）对过氧化氢（H202）所致PCI2细胞损伤的保护作用。方法：以H2O2损伤PCI2细胞为氧化应激损伤模型，MTT法检测细胞存活率；采用紫外分光光度法测定LDH漏出量，观察细胞的损伤程度；硫代巴比妥酸法测定MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。结果：TEN能明显改善H：0：导致的细胞损伤，与H2O2处理组相比，20、10mg／L组可使细胞存活率升高，LDH漏出量明显降低，降低MDA含量，提高SOD活性。结论：TEN对H2O2诱导的PCI2细胞损伤具有明显的保护作用。     

五种维吾尔药的清除羟自由基及抗DNA损伤作用研究

目的　研究 5种维吾尔药的清除羟自由基 (· OH)及保护 DNA氧化损伤的作用。方法　采用现代生物化学发光分析技术 ,以 Cu SO4- Vit C- H2 O2 -酵母菌发光体系测定药材对· OH的清除作用。结果　研究表明 ,5种维吾尔药材对· OH具有不同程度的清除作用 ,并能保护 DNA的氧化损伤 ,而且它们清除· OH及抗 DNA氧化损伤的作用与它们的浓度之间存在正比性依赖关系。结论　 5种维吾尔药清· OH及抗 DNA损伤的作用可能是它们抗衰老、防治某些疾病的主要作用机制之一。     

开心散抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的机制

目的:研究开心散(Kaixin San,KXS)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色观察及流式细胞技术,考察KXS对凋亡的保护作用;采用比色法测定caspase活性、Western blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,RT-PCR技术分析Bcl-2和Bax mRNA的表达,考察KXS抗凋亡的机制。结果:KXS可以有效地改善H2O2诱导的PC12细胞的凋亡,抑制caspase-3、caspase-9的活性,降低胞浆中细胞色素C的水平,增加Bcl-2mRNA的表达,减少BaxmRNA的表达,从而导致Bcl-2/Bax比值的增加。结论:KXS可能通过线粒体途径抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。     

Neuroprotective effects of Hypericum perforatum on trauma induced by hydrogen peroxide in PC12 cells

The standard extracts of Hypericum perforatum L. (SEHP), a well-known medicinal plant, are used for the treatment of depression, exhibited upgrading and significant protective effects on the trauma of PC12 cells induced by 200 microM H2O2 in a dose-dependent manner within 24-hour treatment. Cell viability was assessed by the MTT method, and in situ cellular hydrogen peroxide (H2O2)-induced oxidative stress was examined by measurement of reactive oxygen species (ROS) formation using CDCFH procedures. Intra- and extra-cellular ROS levels decreased significantly to 71.9% and 50.0% of the control at a moderate concentration of 20 microg/ml, respectively, suggesting that SEHP could easily enter the cells and play important roles in reducing ROS levels. Our results were proved by detection of DNA fragmentation and inspection of cell morphology of PC12 cells. SEHP can obviously block DNA fragmentation and prevent the cells from shrinking and turning round of H2O2-induced apoptosis in PC12 cells at concentrations of 10 approximately 100 microg/ml. This data suggests SEHP may be a candidate for application in neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease or Parkinson's disease.     

菟丝子黄酮类组分对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的：探讨菟丝子中黄酮类组分（CF）对氧化损伤的肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞（Pheochromocytoma，PC12）的保护作用及其可能的作用机制。方法：从菟丝子中提取纯化黄酮类活性成分（CF），采用MTT法检测细胞活力，DPPH测定CF在无细胞体系中对自由基的清除能力，利用Hoechst 33258染色和流式细胞仪技术对凋亡细胞进行形态观测和比例测定。结果：0．3～0．5mmol／L H2O2能够剂量与时间依赖性降低PC12细胞的存活率，诱导细胞凋亡。不同剂量CF预处理可提高PC12细胞存活率，明显抑制细胞的凋亡，降低细胞的凋亡比率；CF对DPPH自由基的清除率呈剂量依赖性增强。结论：CF对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用，其机制可能是通过清除自由基、提高抗氧化酶活性从而抑制细胞的凋亡。