c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的影响

目的 观察c—myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的抑制作用。方法 用四甲基偶氮唑盐法评价脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c—myc蛋白表达;荧光显微镜观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,可以显著抑制细胞增殖,其抑制作用具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,Go／G1期细胞增多;免疫细胞化学显示c—myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为64．9％±5.68％。结论 c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

脂质体介导的c-myc反义硫代寡核苷酸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的　探讨c myc反义硫代寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide ,APSODN)对胃癌SGC 790 1细胞凋亡的影响。方法　人工合成c mycAPSODN ,通过脂质体转染法处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,于不同时间收集细胞 ,采用Northernblot、Westernblot检测c myc基因mRNA及蛋白表达 ,采用TUNEL方法检测凋亡指数 ,以流式细胞仪检测细胞周期。结果　TUNEL显示c mycAPSODN可诱导胃癌SGC 790 1细胞凋亡 ,并与APSODN的浓度和处理时间有关。流式细胞仪检测显示细胞阻滞于G0 /G1期。结论　c mycAP SODN可诱导胃癌细胞凋亡。     

survivin反义寡核苷酸激活caspase-3诱导SGC7901胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究转染生存素（survivin）反义寡核苷酸诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组（Control组）、脂质体组（Lip组）、正义寡核苷酸组（Sodn组）及反义寡核苷酸组（Asodn组）。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染人胃癌细胞48h后,MTT检测细胞增殖抑制率,Western blot检测caspase-3蛋白表达改变,Hoechst染色观察细胞凋亡形态改变及流式细胞仪检测凋亡率。结果Hoechst染色荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈正常的蓝色,而Asodn组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;Asodn组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均增高,与Control组、Lip组及Sodn组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论survivin反义寡核苷酸可诱导胃癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活caspase-3表达,启动凋亡信号传导。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响

目的：探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响．．方法：采用脂质体介导乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染人胃癌细胞株SGC7901细胞,以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后乙酰肝素酶mRNA、Fas mRNA和Bcl-2 mRNA表达的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果：脂质体介导转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸后,SGC7901胃癌细胞内乙酰肝素酶mRNA和Bcl-2 mRNA表达下降,FasmRNA表达上升,凋亡细胞比率由转染前的4．04％增加至转染后的16．00％。结论：转染后的乙酰肝素酶反义寡核苷酸可有效地诱导胃癌细胞发生凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞株凋亡的实验研究

目的 观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞株（SGC7901）增殖、凋亡的作用。方法 人工合成Survivin硫代ASODN，通过脂质体转染胃癌细胞株（SGC7901）后，用MTT法检测细胞毒作用；用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡；用RT-PCR、免疫组化技术检测SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 （1）Survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞增殖呈时间和剂量依赖性；（2）Survivin ASODN处理组SGC7901细胞24h后凋亡率为33．6％，正义寡核苷酸（SODN）组为10．7％，2组相比，有显著性差异（P〈0．05）；（3）SurvivinASODN处理组SGC7901细胞Survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降。结论 Survivin ASODN能够抑制增殖、诱导凋亡，推测可能通过下调Survivin mRNA及蛋白表达而起作用。     

miR-92a反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测处理前以及处理48 h后胃癌细胞中miR-92a的表达变化;MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 Anti-miR-92a作用48 h后,miR-92a在两种胃癌细胞中的表达均显著下降(P<0.05);细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05),荧光染色显示其细胞核呈凋亡细胞的特征样改变。结论以miR-92a为靶标的ASO可以有效抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的体外研究C-MYC反义寡核苷酸(ASODN)对人宫颈癌HELA细胞凋亡的影响,寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法免疫组化、流式细胞术、半定量RT-PCR法鉴定ASODN的有效性;GIEMSA染色、流式细胞术检测凋亡指数(AI)、DNA LADDER检测细胞凋亡。结果转染后,免疫组化结果显示C-MYC蛋白表达降低;半定量RT-PCR结果显示C-MYC MRNA表达较空白对照组及阴性对照组明显减弱(P<0.05)。GIEMSA染色可见凋亡小体;流式细胞术结果显示转染后凋亡指数为(10.29±0.66)%,转染ASODN(C-MYC)联合放射的凋亡指数为(16.83±0.57)%,均明显高于空白对照组(1.79±0.19)%(P<0.05);DNA LADDER呈现具有凋亡特征的梯带。结论本实验所设计的ASODN能有效地抑制C-MYC基因的表达;转染ASODN(C-MYC)能够显著增加HELA细胞凋亡,从而提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

c-myc的反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法　贴壁法培养血 管平滑肌细胞,将不同浓度的反义及正义寡核苷酸加入培养液,观察对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果５μｇ／ｍｌ ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸加入培养液后第 ５、７天抑制血管平滑肌细胞增殖,１５μｇ／ｍｌ ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸加入培养液 后第３、５、７天抑制血管平滑肌细胞增殖。各浓度ｃ－ｍｙｃ的正义寡核苷酸未发现其抑制血管平滑肌细胞增殖。结论 ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

Ki—Ras反义寡核苷酸对人胃癌细胞及血管内皮细胞的作用

目的 用Ki-Ras的反义寡核苷酸（ASODN）作用于人胃癌细胞和血管内皮细胞，为其抑制胃癌生长及其内血管生成进行前期基础研究。方法 MTT法观察Ki-Ras ASODN对两种细胞增殖的影响，电镜下观察细胞的超微结构变化及有无凋亡发生。结果 Ki-Ras ASODN可明显抑制人胃癌细胞和血管内皮细胞的增殖。在一定剂量下还可诱发细胞凋亡。结论 Ki-Ras P21在人胃癌细胞和血管内皮细胞的增殖与凋亡调控中具有重要作用。     

大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响

目的探讨大蒜素（diallyl trisulfide,allicin）对人胃癌细胞株SGC7901体外生长的影响。方法大蒜素处理胃癌细胞株SGC7901,MTT法检测SGC7901的生长,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测Ki67的表达。结果大蒜素作用于SGC7901细胞后,对其增殖表现出了明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;大蒜素作用于SGC7901细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为2.41%、7.30%和15.44%,明显高于对照组（P〈0.05）;大蒜素作用48h后,Ki67的阳性表达率下降（P〈0.05）。结论大蒜素可以抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

VEGF反义寡核苷酸抑制胆囊癌生长增殖和凋亡的体外实验研究

目的:探讨VEGF反义寡核苷酸转染对人胆囊癌GBC-SD细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法:运用Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide,SODN)转染人胆囊癌(GBC-SD)细胞。采用MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率,流式细胞术检测转染后不同时间各组细胞凋亡情况。结果:SODN组、SODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长无显著影响(P>0.05),ASODN组及ASODN十Oligofectamine组则能显著抑制GBC-SD细胞生长(P<0.05),且ASODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长增殖抑制作用较ASODN组更为强(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现ASODN十Oligofectamine组能促进GBC-SD细胞凋亡(P<0.05)。结论:VEGFASODN转染能抑制胆囊癌GBC-SD细胞生长和增殖,Oligofectamine介导能明显增强VEGF ASODN的抑制作用;Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸转染能促进胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡。     

hsa-miR-518b反义寡核苷酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨hsa-miR-518b反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对胃癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在胃癌中的作用机制.方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的hsa-miR-518b ASODN,将其转染于胃癌细胞株SGC7901.用Real time RT-PCR分析hsa-miR-518b在胃癌细胞转染前后的表达情况,MTT检测胃癌细胞转染后的生长情况,流式细胞仪分析细胞周期.结果:转染hsa-miR-518b ASODN后,胃癌细胞hsa-miR-518b表达显著降低(P=0.000),生长受到抑制(P=0.000),大量胃癌细胞阻滞于G1期(P=0.000).结论:hsa-miR-518b ASODN能使胃癌细胞阻滞于G1期,抑制胃癌细胞的生长.提示hsa-miR-518b可能通过促进细胞周期G1/S期转换而促进胃癌细胞生长.     

半乳糖受体介导的c-myc反义核酸联合三氧化二砷对人肝癌细胞的增殖抑制作用

目的　探讨Gal-PEI-c -mycASODN与三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对人肝癌Bel- 74 0 2细胞增殖的影响。方法　As2 O3 分别或联合Gal-PEI-c -mycASODN与人肝癌Bel- 74 0 2细胞共孵育 4 8h ,台盼蓝染色法检测细胞增殖的变化 ,流式细胞仪分析细胞亚二倍体百分率。结果　 0 5 μmol/LAs2 O3 和Gal-PEI-ASODN(含A SODN 0 12 5 μmol/L)均不能抑制Bel- 74 0 2细胞增殖 ,0 5 μmol/L的As2 O3 联合Gal-PEI-ASODN(含ASODN 0 12 5μmol/L)对Bel- 74 0 2细胞增殖有明显抑制作用 (P <0 0 5 ) ,与 4 μmol/LAs2 O3 产生的抑制作用相当 ;1 0 μmol/LAs2 O3 不引起Bel- 74 0 2细胞凋亡 ,但联合Gal-PEI-ASODN(含ASODN 0 2 5 μmol/L)即导致Bel - 74 0 2细胞凋亡。结论　Gal-PEI-ASODN联合As2 O3 能明显提高肝Bel- 74 0 2细胞对As2 O3 的敏感性 ,抑制Bel- 74 0 2细胞增殖 ,促进细胞凋亡。     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

目的探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义寡核苷酸转染对照组（Lip-SODN组）、ASODN转染组（Lip-ASODN组）。转染48 h后,Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0.05）,对多西他赛的IC50值明显低于各对照组（P〈0.05）,细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0.05）。结论survivin ASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。     

MMP-9反义寡核苷酸抑制胃癌细胞生长的实验研究

目的探讨MMP-9反义寡核苷酸作为靶基因对胃癌细胞的生长抑制效应,以进一步揭示MMP-9反义寡核苷酸治疗胃癌的可能性和可行性。方法以人胃癌细胞株MGC803为研究对象,应用ASODN技术,将MMP-9ASODN转染到MGC803细胞中,利用MTT法检测不同浓度不同时间MMP-9反义寡核苷酸对MGC803细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析MMP-9反义寡核苷酸对MGC803细胞周期及凋亡的影响。结果MMP-9反义寡核苷酸在体外能够抑制MGC803肿瘤细胞增殖,且这种增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性;MMP-9反义寡核苷酸在体外能够诱导MGC803肿瘤细胞凋亡,作用与浓度和时间有关。结论MMP-9反义寡核苷酸可望成为一种人胃癌临床有效的治疗方法。     

反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞生长的抑制作用

目的探讨反义c-myc寡核苷酸(ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞(LEC)生长的影响.方法人工合成与c-myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞,应用细胞计数法和MTT法观察反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响.结果 2.5～10.0 μmol/L反义c-myc寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖,10.0 μmol/L时作用较显著.结论反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用.     

bcl—2 mRNA反义寡核苷酸对胃癌SGC—7901细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨bcl-2反义寡核苷酸（antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC－7901细胞端粒酶活性的影响。方法 应用脂质体瞬时转染法介导bcl-2反义寡核苷酸,处理人胃癌细胞系SGC－7901后,分别采用Northern blot、Western blot检测bcl-2 mRNA、蛋白表达,用端粒微孔板杂交法检测端粒酶活性。结果 bcl-2 ASODN处理的胃癌SGC－7901细胞端粒酶活性明显受到抑制,并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论 bcl-2反义寡核苷酸可抑制胃癌细胞端粒酶活性。     

二氯化钴对胃癌细胞SGC7901凋亡和增殖的影响

目的了解胃癌细胞系SGC7901在缺氧状态下凋亡和增殖情况,探讨低氧诱导因子(hypoxia induced factor,HIF-1α)与胃癌细胞SGC7901凋亡和增殖的关系。方法以二氯化钴(CoCl2)作为缺氧模拟剂,利用RT-PCR、免疫荧光及Western blotting法检测SGC7901细胞HIF-1α在转录水平和翻译水平上的表达,利用流式细胞仪检测SGC7901细胞在不同缺氧程度下的细胞凋亡率,利用MTT法观察SGC7901细胞的增殖情况。结果 (1)50μM CoCl2处理SGC7901细胞24小时后,HIF-1a mRNA及蛋白表达明显增加;(2)50μM CoCl2处理SGC7901细胞24小时后,细胞凋亡减少;(3)50μM CoCl2处理24小时后,细胞生长和增殖均加快。结论 50μM CoCl2处理SGC7901细胞24小时后,细胞增殖能力增加,细胞凋亡减少,HIF-1α表达增加,提示其在此过程中发挥重要作用。