大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织的氧化损伤

目的：通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的变化，进一步探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后氧化损伤的病理生理改变。方法：实验于2004-09／2005-01在泸州医学院神经生物学教研室进行。将雄性成年Wistar大鼠60只随机分为2组：假手术组30只和缺血再灌注组30只。每组分3个观察时间点，分别为手术后6，12，24h，每个时间点10只。采用线栓法制成大脑中动脉闭塞模型，假手术组手术过程同缺血再灌注组，但未插栓线，不造成脑缺血。测定手术后不同时点脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛水平。结果：在实验过程中有6只大鼠死亡，缺血再灌注组有8只大鼠手术后模型评价为0级，被排除实验，随机补充14只大鼠，最终进入结果分析仍为60只大鼠。①缺血再灌注组术后6，12，24h超氧化物歧化酶活性均低于假手术组[（289．72&;#177;10．67），（534．77&;#177;22．67）μkat／L；（330．57&;#177;18．17），（539．11&;#177;11．50）μkat／L；（377．58&;#177;14．67），（550．78&;#177;11．50）μkat／L，P〈0．05]。②缺血再灌注组术后6，12，24h丙二醛水平显著高于假手术组[（15．06&;#177;0．59），（6.78&;#177;0．25）μmoL／L；（13．53&;#177;1．11），（6．78&;#177;0．26）μmol／L；（11．31&;#177;0．97），（6．80&;#177;0．26）μmoL／L，P〈0．05]。结论：脑缺血再灌注后，缺血大鼠脑组织内丙二醛水平升高，超氧化物歧化酶活性降低，说明自由基参与了脑缺血再灌注损伤的病理生理过程。     

氯氮平对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察氯氮平对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并与尼莫地平进行阳性对照。方法:实验于1999年在郑州大学医学院药理教研室实验室进行,取Wistar大鼠240只,单纯随机分成缺血再灌注组,氯氮平24,12,6mg/kg组,尼莫地平组和假手术组6组,每组40只。氯氮平24,12,6mg/kg组腹腔注射相应剂量的氯氮平,尼莫地平组腹腔注射0.2mg/kg尼莫地平,缺血再灌注组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水,均为1次/d,连续7d。给药7d后除假手术组外其他5组大鼠栓塞法建立大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型。测定再灌注2h缺血侧脑组织含水量、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性;流式细胞仪定量分析细胞凋亡率;Fura-2负载,以荧光分光光度计测定细胞内游离钙的变化。结果:经补充后240只大鼠进入结果分析。①脑组织含水量:缺血再灌注组高于假手术组([81.62±0.15)%,(75.81±0.23)%,P<0.01],其他4组均低于缺血再灌注组(P<0.01)。②丙二醛含量:缺血再灌注组高于假手术组([10.85±0.38),(4.07±0.63)μmol/g,P<0.01],其他4组均低于缺血再灌注组(P<0.01)。③超氧化物歧化酶活性:缺血再灌注组低于假手术组([82.47±10.73),(280.15±10.32)Nu/mg,P<0.01],其他4组均高于缺血再灌注组(P<0.01)。④细胞内游离钙浓度:缺血再灌注组高于假手术组([574.87±14.56),(215.76±10.84)nmol/L,P<0.01],其他4组均低于缺血再灌注组(P<0.01)。⑤细胞凋亡率:假手术组为0,缺血再灌注组为28%,氯氮平6,12,24mg/kg组及尼莫地平组分别为19%,12%,5%,13%。结论:①6～24mg/kg氯氮平可显著降低细胞内游离钙含量,抑制缺血再灌注诱导的神经细胞凋亡,提示氯氮平对缺血再灌注所致神经细胞损伤的保护作用可能与其钙拮抗以及抗脂质过氧化有关。②氯氮平的神经保护作用与尼莫地平相似。     

米帕明对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性的影响

目的:观察米帕明对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中含一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性的影响。方法:实验于2005-03/12在解放军总医院老年心血管病研究所生化药理实验室进行。①选用健康Wistar大鼠96只,随机分成假手术组、模型组、尼莫地平组和米帕明组4组,每组24只。②米帕明组腹腔注射米帕明10mg/kg,尼莫地平组腹腔注射尼莫地平2mg/kg,假手术组和模型组腹腔注射等容积生理盐水;60min后用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,假手术组尼龙线的头端不插入颈内动脉。③于缺血2h再灌注2,12和24h每组随机取6只大鼠断头,测定脑组织中一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性。每组剩余6只再灌注2h处死取脑,光镜下观察脑组织病理变化。结果:96只大鼠进入结果分析。①一氧化氮浓度:模型组、尼莫地平组和米帕明组再灌注2,12和24h均高于假手术组(P<0.05);尼莫地平组再灌注2,12和24h均低于模型组[(45.99±8.13),(40.63±3.13),(36.72±4.38)μmol/L;(65.54±6.01),(57.08±4.79),(48.13±5.12)μmol/L;P均<0.05];米帕明组再灌注2h和24h也低于同期模型组[(55.98±6.89),(39.42±4.28)μmol/L;P均<0.05]。②一氧化氮合酶活性:模型组、尼莫地平组和米帕明组再灌注2,12和24h均高于假手术组(P<0.05);尼莫地平组和米帕明组各个时间点均低于模型组(P<0.05)。③脑组织病理变化:尼莫地平组和米帕明组神经元损伤较模型组轻。结论:米帕明可降低局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中一氧化氮浓度和一氧化氮合酶活性,从而对大鼠脑缺血再灌注有保护作用,其效果与尼莫地平相似。     

骨骼肌缺血再灌注损伤中血管功能障碍与丹参的干预效应

目的:观察骨骼肌缺血再灌注损伤血清一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶、内皮素1含量的变化及中药丹参的干预作用。方法:实验于2005-01/12在福建中医学院骨伤系实验室完成。实验分组:选用雄性SD大鼠84只,按随机数字表法分为丹参组、生理盐水组,每组42只,每组又分缺血再灌注10,20,30,40,50,60,90min7个时间点,每个时间点6只。实验方法:①制备大鼠左侧提睾肌缺血再灌注损伤模型。②丹参组于缺血2h时腹腔注射丹参注射液,生理盐水组给予相应剂量生理盐水;分别于缺血再灌注10,20,30,40,50,60,90min抽取腹主动脉血。实验评估:①采用硝酸还原酶法测定血清一氧化氮浓度。②采用比色法测定诱导型一氧化氮合酶活性。③采用放射免疫法测定内皮素1含量。结果:纳入大鼠84只,均进入结果分析。①一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶的表达量:缺血再灌注10,20min两组一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶的表达量无明显差异(P>0.05);缺血再灌注30,40,50,60,90min丹参组一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶的表达量均高于生理盐水组[一氧化氮分别为(70.95±2.10),(68.21±2.23)μmol/L;(77.05±2.28),(72.20±1.56)μmol/L;(81.12±2.74),(74.60±1.90)μmol/L;(68.81±2.32),(62.03±2.80)μmol/L;(57.08±3.02),(46.77±3.01)μmol/L;诱导型一氧化氮合酶分别为(515.17±47.54),(459.78±37.27)μkat/L;(629.46±44.19),(499.37±29.46)μkat/L;(673.73±29.96),(584.77±58.48)μkat/L;(590.62±31.96),(507.78±31.82)μkat/L;(485.33±38.27),(378.64±38.04)μkat/L],差异有非常显著性意义(t=2.238,4.332,4.783,4.569,5.922;2.246,6.000,3.317,4.499,4.843,P<0.05,0.01)。缺血再灌注50min两组一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶的表达量均达到最高峰,此后表达量开始下降。②内皮素1的表达量:缺血再灌注40min两组内皮素1的表达量均达到最高峰,此后表达量开始下降;缺血再灌注10min两组间内皮素1的表达量无明显差异(P>0.05),缺血再灌注20,30,40,50,60,90min丹参组内皮素1的表达量低于生理盐水组[分别为(145.77±26.54),(237.76±14.41)ng/L;(197.32±21.80),(258.50±40.20)ng/L;(124.44±6.00),(189.58±7.24)ng/L;(115.88±10.84),(165.93±10.43)ng/L;(103.96±3.84),(158.05±10.62)ng/L;(84.42±6.16),(113.69±10.41)ng/L],差异有非常显著性意义(t=7.462,3.278,16.959,8.149,11.731,5.926,P<0.01)。结论:骨骼肌缺血再灌注损伤导致血清中一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶、内皮素1的表达量发生改变,丹参可能通过调整一氧化氮和内皮素1的平衡,改善缺血再灌注损伤造成的血管内皮功能障碍。     

白藜芦醇苷对全脑缺血再灌注大鼠脑保护的剂量依赖性作用

目的:观察白藜芦醇苷注射液对大鼠全脑缺血再灌注损伤脑保护作用的剂量依赖性关系,并以己酮可可碱作阳性对照。方法:实验于2004-06在南方医科大学基础部药理教研室完成。选择SD大鼠132只,随机分6组:假手术组、模型组、白藜芦醇苷注射液7.5,15,30mg/kg组,己酮可可碱16.5mg/kg组,每组22只。各药物组均舌下静脉给药,1次/d,连续2d,假手术组和模型组给予生理盐水注射液5mL/kg。给药第3天,将各组大鼠腹腔注射麻醉,动脉夹结扎双侧颈总动脉,缺血1h后经舌下静脉再注射各剂量药物或生理盐水,继续缺血1h后解除动脉夹实施再灌注,缝合切口。假手术组除不结扎外,其余步骤同上。于再灌注24h时各组取12只测定脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量评估脂质过氧化和氧自由基水平,各组取10只大鼠测量脑组织含水量评估脑水肿情况。结果:132只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量:模型组脑组织超氧化物歧化酶活性明显低于假手术组犤(1390.3±76.2),(1853.7±64.0)μkat/g犦,丙二醛含量高于假手术组犤(92.33±13.05),(65.76±8.56)μmol/g,(P<0.01)犦,白藜芦醇苷注射液各剂量组均能明显升高脑组织中超氧化物歧化酶活性犤(1620.3±68.2),(1793.7±99.4),(2023.8±89.2)μkat/g犦,降低丙二醛含量犤(87.4±4.33),(70.1±2.35),(66.3±2.81)μmol/g,(P<0.01)犦,且呈剂量依赖趋势。②各组大鼠脑组织含水量:模型组大鼠大脑右半球含水量明显高于假手术组及己酮可可碱16.5mg/kg组、白藜芦醇苷注射液7.5,15,30mg/kg组犤(79.32±0.65)%,(77.36±1.33)%,(78.69±0.64)%,(78.54±1.32)%,(78.12±1.29)%,(77.63±0.99)%,(P<0.01)犦。各给药组大鼠大脑右半球含水量亦较假手术组低,同时有呈剂量依赖性的趋势(P<0.05～0.01)。结论:白藜芦醇苷注射液能显著减轻脑缺血再灌注损伤引起的氧自由基损害,减少过氧化脂质的形成,并且可以减轻脑水肿,从而改善脑组织微循环及缺血、缺氧,作用强度有剂量依赖关系,以白藜芦醇苷注射液30mg/kg组治疗效果最好。     

益肾降浊汤对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织抗氧化酶活力的干预效应

目的:观察脑缺血再灌注后大鼠脑组织丙二醛、钙离子含量和超氧化物歧化酶活性的变化,探讨益肾降浊汤对其损伤脑组织抗氧化酶活力的影响。方法:实验于2003-04/2004-09在承德医学院基础医学研究所进行。采用Wister大鼠120只,雌雄各半,随机分为5组,每组24只,即正常对照,假手术组,模型组,益肾降浊汤组,都可喜组。益肾降浊汤由泽泻、何首乌、黄连、肉苁蓉、石菖蒲、三七组成,由承德市药材公司提供,水煎、过滤、浓缩至每毫升药液含生药2.53g;都可喜(阿米三嗪与萝巴新按一定比例的混合制剂),法国施维雅药厂生产,上海福达制药有限公司分装(批号:90841)。对模型组,益肾降浊汤组,都可喜组在造成大鼠高脂血症的基础上,进行脑缺血再灌注。都可喜组按20mg/kg都可喜,益肾降浊汤组按2.53g/kg生药,灌胃给药,均为1次/d,从术前3d开始至杀检为止。假手术组,高脂血症大鼠仅做双侧颈总动脉分离术,然后缝合,不进行缺血再灌注,正常对照组:不加任何处理。各组分别于造模后第1,7,15天断头取脑,每时间点8只。用羟胺法测超氧化物歧化酶活性,TBA法测丙二醛含量,用原子分光光度法测钙离子含量。结果:实验大鼠120只全部进入结果分析。①第1,7,15天模型大鼠超氧化物歧化酶活性与正常大鼠相比明显降低眼穴16.05±3.17雪,(16.33±1.97),(17.01±4.03),(22.11±2.29)NU/mg;P<0.05～0.01演;而益肾降浊汤组酶活性与同期模型组相比,显著升高眼(18.89±2.36),(20.36±2.46),(22.98±2.14)NU/mg;P<0.05～0.01演。②模型组大鼠3个时间点脑组织内丙二醛含量显著高于正常对照组眼(11.78±1.32),(10.15±1.44),(8.15±2.16),(8.56±1.46)μmol/g,P<0.05～0.01演,而益肾降浊汤组3个时间点的丙二醛含量较同日期模型组明显降低眼(11.78±1.32),(10.15±1.44),(8.15±2.16)μmol/g,P<0.05～0.01演。③各组钙离子含量与丙二醛含量呈现相同的变化趋势。结论:益肾降浊汤可提高脑组织内超氧化物歧化酶活性,降低缺血再灌后脑组织丙二醛含量及钙离子含量,能增加脑缺血再灌注模型大鼠脑组织抗氧化酶的活性,保护脑神经元。     

缺血后处理对肺再灌注损伤中脂质过氧化反应的调整

目的:缺血后处理即在全面恢复再灌注前反复短暂多次预再灌、停灌,探讨缺血后处理对在体大鼠肺缺血再灌注损伤的脂质过氧化反应的影响。方法:实验于2004-05/06在汕头大学医学院附属肿瘤医院中心实验室完成。通过阻断左肺门建立大鼠在体左肺缺血再灌注模型,将24只健康雌性SD大鼠随机分为①假手术组8只:持续灌注105min。②缺血再灌注组8只:缺血45min,再灌注60min。③缺血后处理组8只:缺血45min后,短暂再灌注1min,缺血1min,反复5次,然后再全面恢复灌注60min。试验结束后处死动物,切取新鲜肺左叶组织制成100g/L组织匀浆,测定丙二醛含量用硫代巴比妥酸比色法,测定超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)。结果:3组24只动物均进入结果分析。①肺组织丙二醛含量测定结果:假手术组为(0.934±0.086)μmol/g,对照组为(1.230±0.169)μmol/g,缺血后处理组为(1.064±0.090)μmol/g,缺血后处理组与对照组相比明显降低(P<0.05)。②超氧化物歧化酶活性测定结果:假手术组为(2.838±0.509)μkat/g,对照组为(1.183±0.222)μkat/g,缺血后处理组为(2.008±0.298)μkat/g,缺血后处理组与对照组相比显著升高(P<0.01)。结论:对照组与假手术组相比,肺组织经历45min缺血60min再灌注后丙二醛含量明显升高,抗自由基酶类超氧化物歧化酶活性显著下降,说明再灌注期肺组织脂质过氧化反应增强,抗氧化能力降低。缺血后处理组较对照组肺组织中脂质代谢产物丙二醛含量下降,抗自由基酶超氧化物歧化酶活性增加,表明缺血后处理可减轻在体大鼠肺缺血再灌注损伤的脂质过氧化反应而产生肺保护作用。     

促红细胞生成素预处理对肢体缺血再灌注损伤的影响

目的:观察促红细胞生成素预处理对骨骼肌缺血再灌注损伤的影响。方法:实验于2004-08/2005-01在解放军第二五二医院中心实验室完成。①采用大鼠右后肢缺血再灌注模型,将30只实验大鼠随机分为3组,每组10只。假手术组:仅显露股血管鞘,不做缺血再灌注,经腹腔注射同体积生理盐水;对照组:经腹腔注射同体积生理盐水,持续缺血4h,再灌注1h。促红细胞生成素预处理组(预处理组):经腹腔注射5000u/kg人重组促红细胞生成素,24h后持续缺血4h,再灌注1h。②测定各组血清磷酸激酶,乳酸脱氢酶丙二醛和腓肠肌99Tcm亚甲基二磷酸钠吸收量变化。③电镜观察腓肠肌超微结构变化。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①对照组和预处理组血清磷酸激酶[(121.627±18.112),(84.417±14.594)μkat/L]、乳酸脱氢酶[(20.065±4.676),(13.354±5.229)μkat/L]明显高于假手术组[(50.247±16.066),(7.732±1.256)μkat/L](P<0.05);对照组和预处理组丙二醛[(10.36±2.65),(6.55.±2.19)nmol/L]及99Tcm亚甲基二磷酸钠吸收量[(16.69±3.14),(11.66±3.87)%/(g·min)]均明显高于假手术组[(3.54±1.89)nmol/L,(9.12±1.96)%/(g·min)(P<0.05)]。②预处理组各指标与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:促红细胞生成素对肢体骨骼肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注脑组织超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

目的:探讨黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注自由基损伤的保护作用,为脑缺血再灌注损伤防治提供新的药物。方法:将大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组及黄芩苷治疗组。动物模型采用大脑中动脉缺血再灌注模型,用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法分别测定脑组织缺血再灌注3,6h时超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛的含量及黄芩苷对其的影响。结果:脑缺血2h再灌注后3,6h时,脑组织SOD分别为(24.5±0.28),(16.27±0.20)NU/mg,丙二醛分别为(0.66±0.32),(1.62±0.52)μmol/g,与假手术组比较,脑组织SOD明显降低(P<0.01),丙二醛则明显增高(P<0.01);黄芩苷治疗后脑组织SOD分别为(30.19±0.36),(25.74±0.28)NU/mg,丙二醛分别为(0.42±0.26),(0.78±0.37)μmol/g,与模型组相比,脑组织SOD有所增高(P<0.01),而丙二醛则有所降低(P<0.01)。并且,治疗组大鼠神经功能缺损评分较模型组增高(P<0.05)。结论:黄芩苷对脑缺血再灌注自由基损伤有一定保护作用。     

白藜芦醇甙对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

背景脑缺血时大量的自由基生成,使脑内脂质过氧化作用加强,导致细胞及细胞屏障损害,神经元坏死或凋亡,引起和加重缺血脑组织水肿.目的通过观察白藜芦醇甙对大鼠局灶性脑缺血后脑组织自由基、脂质过氧化物含量、脑含水量及病理形态学的影响,探讨其对脑缺血的保护作用.设计随机对照实验.单位重庆医科大学附属第二医院ICU和重庆医科大学附属儿童医院儿科医学研究所.材料实验于2001-10/2002-07在重庆医科大学儿科医学研究所完成.将48只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组16只.缺血前白藜芦醇甙处理组缺血前30 min,经颈外静脉注射6 g/L白藜芦醇甙(12 mg/kg)溶液.假手术组大鼠仅在麻醉状态下分离右侧颈总动脉,不予阻断血流.缺血模型组建立大鼠右侧大脑中动脉梗死模型.假手术组、缺血模型组与缺血前白藜芦醇甙处理组以同样方式、剂量静脉给予生理盐水.大鼠大脑中动脉阻塞后2 h在麻醉状态下快速断头取脑.每组随机选取8只大鼠测定脑组织含水量,其余8只大鼠测定脑组织自由基及脂质过氧化物含量.方法应用干-湿重法测脑组织含水量,以硫代巴比妥酸法检测丙二醛水平、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活性、化学比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶活性、化学比色法检测一氧化氮合酶活性,以比色法测定过氧化氢酶活性,并按Folin-酚试剂法标定蛋白含量,所有操作均严格按说明书进行.主要观察指标①各组大鼠脑组织含水量.②各组大鼠脑组织中丙二醛含量,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶及一氧化氮合酶活性.③各组大鼠脑组织病理学观察.结果48只大鼠均进入结果分析.①缺血前白藜芦醇甙处理组脑组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性明显高于缺血模型组[(226.43±8.69),(193.37 ±11.14)NU/mg;(244.38±12.34),(211.71±16.50)μkat/g;(59.85±9.67),(35.51±7.67)μkat/g,(q=4.38～10.45,P＜0.01)].②缺血前白藜芦醇甙处理组脑组织中丙二醛含量、脑含水量明显低于缺血模型组[(6.38±0.54),(8.63±0.78)μmol/g;(78.72±0.43),(80.41±0.64),%,P＜0.01].③白藜芦醇甙有降低缺血脑组织中一氧化氮合酶活性的趋势,但与缺血模型组非常接近[(12.00±1.00),(12.84±1.17)μkat/g,P＞0.05].④病理学组织检查显示,白藜芦醇甙能减轻缺血所导致的脑水肿.结论白藜芦醇甙能减轻脂质过氧化反应,降低缺血脑组织中丙二醛含量,提高体内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性,抑制或减轻脑水肿形成,保护细胞膜功能,减轻缺血神经元功能损害,对局灶脑缺血性脑损伤具有明显的保护作用.