Survivin反义寡核苷酸对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法30只裸鼠建立人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机分3组，每组10只。分别于瘤周及瘤体注射阳离子脂质体（1ipofectin，Lip），ASODN／Lip及NODN／Lip，每5天1次，共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和裸鼠体重的变化。用TUNEL法，透射电镜观察体内瘤体的细胞调亡情况；用Western—blot检测各组肿瘤的survivin蛋白表达情况。结果成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型。ASODN／Lip治疗组的肿瘤体积在治疗期内减少，抑瘤率达70．10％；而NODN／Lip治疗组和Lip对照组肿瘤体积增加。各组裸鼠体重无明显变化。ASODN／Lip组细胞凋亡率为38．6％明显高于其他两组，差异有显著性（P〈0．05）。ASODN／Lip组肿瘤的survivin蛋白表达明显降低。结论survivin反义寡核苷酸可有效地抑制人乳腺癌裸鼠皮下肿瘤的生长速度，并促进诱导肿瘤细胞的凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞的抑制作用

我们以骨肉瘤OS 73 2细胞为对象 ,在明确其高表达Survivin基础上 ,尝试通过合成靶向Survivin的反义寡核苷酸(ASODN)转染OS 73 2细胞 ,以封闭Sur vivin表达 ,探讨ASODN对骨肉瘤细胞凋亡 /增殖的影响及其对化疗药物的促进作用。一、材料与方法1.材料 :人骨肉瘤细胞株OS 73 2购自北京积水潭医院骨科研究所。针对Survivin基因翻译起始密码区 ,设计合成ASODN (上海生工公司 ) ,序列为 5′CCCAGCCTTCCAGCTCCTTG 3′ ,并设正义 (senseoligonucleotide ,SODN )对照 ,序列为 5′GTTCCTCGACCTTCCGACCC3′ ,两组寡核苷酸均…     

Survivin反义寡核苷酸转染对肝门部胆管癌细胞FRH-0201侵袭性的影响

目的：观察Survivin反义寡核苷酸转染对肝门部胆管癌细胞FRH-0201侵袭能力的影响。方法：针对Survivin基因序列设计合成反义寡核苷酸,阳离子脂质体包裹转染胆管癌细胞株FRH-0201。观察转染后癌细胞生长增殖情况,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）含量,侵袭小室检测细胞侵袭能力的改变。结果：反义转染组细胞生长及增殖减缓并趋向凋亡,细胞上清液中MMP-2因子较正义转染组及阴性对照组少,且差异有统计学意义（P〈0.05）,TIMP-2因子较另2组有所增加,且差异有统计学意义（P〈0.05）,Transwell实验中反义转染组穿过小室细胞数目较另2组减少（P〈0.05）。结论：Survivin反义寡核苷酸转染可有效抑制肝门部胆管癌细胞增殖,并降低癌细胞的侵袭能力。     

Survivin反义寡核苷酸对肝门部胆管癌细胞株FRH-0201作用的研究

目的 探讨survivin反义寡核苷酸抑制survivin基因表达对肝门部胆管癌细胞FRH-0201的作用.方法 脂质体介导survivin ASODN转染肝门部胆管癌细胞FRH-0201;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR、Western印迹法检测survivin mRNA及蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 survivin反义寡核昔酸作用后肝门部胆管癌细胞FRH-0201 survivinmRNA及蛋白表达水平较未转染组显著下降(mRNA:0.51±0.03 vs 0.82±0.02,P<0.05;蛋白:1.82±0.16 vs 3.08±0.27,P<0.05),细胞出现凋亡形态学变化.细胞凋亡率增高(11.50±1.49%vs 0.39±0.08%,P<0.05).结论 survivin反义寡核苷酸能有效下调survivin基因表达,诱导肝门部胆管癌细胞凋亡.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制作用

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPSE)反义寡脱氧核苷酸 (AS ODN )对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制活性。方法　设计合成分别互补于HPSEmRNA 5 '未翻译区和起始密码区的AS ODN1、AS ODN2及相应对照NS ODN1、NS ODN 2 ,在脂质体介导下以 2 5 0nmol/L终浓度转染人乳腺癌MDA43 5细胞 ,以RT PCR和Westernblot分别检测HPSEmRNA和蛋白表达 ,以基质凝胶侵袭实验检测细胞侵袭力。结果　AS ODN 2组的HPSEmRNA相对表达量、蛋白表达量和侵袭细胞数(0 .62± 0 .0 4、12 .70± 1.70、61.0 0± 9.0 0 )与脂质体对照组 (1.60± 0 .0 4、3 6.2 0± 2 .10、178.0 0±17.0 0 )和NS ODN2组 (1.48± 0 .0 3、3 5 .5 0± 2 .3 0、174.0 0± 2 0 .0 0 )相比较均显著降低 (P <0 .0 1) ;而AS ODN 1组与脂质体对照组和NS ODN1组相比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　互补于起始密码区的HPSEAS ODN可通过下调HPSE表达显著抑制人乳腺癌细胞株MDA43 5的侵袭力。     

反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒转染胆管癌细胞的抑制作用

目的　探讨反义寡核苷酸 (ODNs)对丙型肝炎病毒 (HCV)转染胆管癌细胞中HCV的抑制作用。方法　通过半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测HCVmRNA表达的变化 ,观察不同浓度 (0～ 6 .0 μmol/L)的HCV核心区ODNs对体外丙肝病毒感染胆管癌细胞 (QBC939)的抑制作用 ;同时以裸鼠为研究对象进一步观察ODNs对HCV的体内抑制作用。结果　ODNs可有效地进入靶细胞在体外与HCV核心基因杂交结合 ,使HCVmRNA的表达明显降低 ,终浓度为 6μmol/L的ODNs作用下无HCVmRNA表达。动物实验观察ODNs组在裸鼠中的瘤体平均直径小于对照组、PBK HCVC转染组 (P <0 .0 1 ) ,成瘤率 2 5 % (5/ 2 0 )低于PBK HCVC转染组 65 % (1 3/2 0 ) (P <0 .0 5) ,成瘤时间 1 5 .3d较对照组 1 2 .0d、PBK HCVC转染组 1 0 .1d延迟 (P <0 .0 1 )。结论　反义寡核苷酸不失为治疗丙肝病毒感染胆管癌新的途径     

生存素反义核酸对裸鼠皮下种植结肠癌细胞的作用

生存素（survivin）是一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白家族新成员，其在多种肿瘤中表达，使应用靶向生存素的阻断性基因治疗肿瘤成为可能。本文以生存素为靶基因治疗裸鼠皮下种植瘤，观察其疗效及不良反应，以求进一步探索肿瘤治疗的新途径。     

生存素反义寡核苷酸联合 P53基因抑制胃癌细胞的生长作用

目的 研究生存素（survivin）反义寡核苷酸联合抑癌基因P53对人胃癌细胞系HS-746T的抑制作用及机制。方法 用P53基因和设计合成的survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞系HS-746T进行处理，分空白对照组、反义survivin转染组，P53基因组，反义survivin加P53共转染组。采用细胞计数和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力及细胞生长速度，用RT-PCR技术和Western印迹法分析survivin mRNA及蛋白质的表达情况，末端原位标记染色法（TUNEL）分析细胞凋亡指数。结果 不同时间反义survivin转染组、P53基因组和共转染组均对胃癌细胞的生长有抑制作用，且能够下凋胃癌细胞survivin mRNA和蛋白质的表达，共转染组较单独用药组效应明显增强，共转染组胃癌细胞凋亡指数高于另外两组。结论 Survivin反义寡核苷酸联合P53基因抑制人胃癌细胞的生长及诱导凋亡的作用大于单独应用一种药物。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究

本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸 (ＡＳＯＤＮ ｔ)抑制端粒酶活性[1] ,诱导肝癌细胞凋亡 ,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2 ] ,为肝癌基因治疗提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.ＡＳＯＤＮ ｔ对细胞抑制作用的观察 :取 2× 10 7个 /Ｌ对数生长期肝癌细胞 (肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库 )接种于 96孔的细胞培养板中 ,每孔 10 0 μｌ,设3个复孔。分别加入ＡＳＯＤＮ ｔ(上海生工生物工程公司合成 ,序列为 5’ ＣＴＣＡＧＴ ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡ 3’ ,调节其终浓度分别为 1、2、3…     

VEGF-ASODN转染对胃癌细胞VEGF和survivin表达的影响

目的:观察血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸（VEGF-ASODN）转染胃癌细胞SGC-7901对血管内皮生长因子（VEGF）和生存素（survivin）表达的影响。方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN。实验分为5组：对照组，错义组，实验1组(转染浓度为100 ng∕mL),实验2组（转染浓度为400 ng∕mL）及实验3组（转染浓度为700 ng∕mL）。转染后实时荧光定量RT-PCR检测细胞RNA起始拷贝数; ELESA法检测细胞及培养上清液VEGF 蛋白含量; Western-blot法检测细胞生存素蛋白表达量; 流式细胞仪检测细胞凋亡; 细胞生长曲线检测转染对细胞生长的影响。结果:3个实验组VEGF mRNA水平和VEGF蛋白表达量及培养上清液VEGF 蛋白含量均明显降低，survivin蛋白的表达水平随转染浓度的升高而降低，转染VEGF-ASODN能使胃癌细胞凋亡增加、细胞生长减缓。结论:VEGF-ASODN转染胃癌细胞SGC-7901能显著抑制细胞VEGF的表达，促进细胞凋亡，抑制细胞增殖。     

Bcl-2反义寡核苷酸对VP-16抑制人胆管癌细胞株增殖和诱导凋亡的影响

目的:探讨bcl-2 反义寡核苷酸（ASODN）对VP-16抑制人胆管癌QBC939细胞生长和诱导细胞凋亡的影响。方法:合成特异性靶向Bcl-2 ASODN，并将其转染QBC939细胞;四甲基噻唑蓝（MTT）试验检测Bcl-2 ASODN对VP-16抑制QBC939细胞增殖的影响;流式细胞术观察Bcl-2 ASODN对VP-16诱导QBC939细胞凋亡的影响。结果:ASODN组细胞的存活率显著低于无义寡核苷酸（NSODN）组(P＜0.05);ASODN+VP-16组细胞存活率显著低于ASODN组及VP-16组(P＜0.05);ASODN组、ASODN+VP-16组和VP-16组细胞凋亡率显著高于对照组和NSODN组（P＜0.05);ASODN+VP-16组细胞凋亡率显著高于ASODN组及VP-16组(P＜0.05)。结论:Bcl-2 ASODN对VP-16抑制人胆管癌QBC939细胞生长和诱导细胞凋亡有促进作用。     

奥曲肽抑制转化生长因子α诱导肝癌细胞增殖的实验研究

目的探讨奥曲肽对转化生长因子α（TGF-α）诱导肝癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法用免疫组化法观察奥曲肽对TGF-α诱导肝癌细胞增殖的影响，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测奥曲肽对肝癌细胞TGF-α分泌和表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响，用Western-blot法、免疫组化法检测奥曲肽对细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）的影响。结果奥曲肽明显抑制细胞核内TGF-α诱导的增殖细胞核抗原（PCNA）表达，使肝癌细胞TGF-αmRNA指数较对照组降低（P〈0．05），对TGF-α诱导的EGFR mRNA指数的增加具有明显抑制作用。Western-blot显示，奥曲肽明显抑制TGF-α诱导的ERK蛋白表达；免疫组化显示，TGF-α作用后，胞核染色明显加深，奥曲肽与TGF-α同时作用后胞核染色明显减弱。结论奥曲肽可能通过抑制肝癌细胞分泌TGF-α，抑制EGFR表达和阻断EGFR信号传导，从而抑制TGF-α诱导的肝癌细胞增殖。     

环氧合酶-2表达上调与人肝细胞癌新生血管生成的关系

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)表达上调与人肝细胞癌(HCC)新生血管生成的关系。方法采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应法检测8 0例肝癌组织中COX-2,VEGF,bFGF,Ang-2和CD 3 4的表达情况;用W eidner分析法计算CD 3 4标记的平均微血管密度(MVD)。结果COX-2,VEGF,bFGF和Ang-2在HCC中表达率分别为7 5.0%,6 2.5 0%,6 0.0%和6 1.2 5%。VEGF,bFGF和Ang-2在COX-2强阳性组的免疫染色积分分别是5.9 8±1.1 6,4.5 7±0.2 6和5.8 7±0.1 2;而在COX-2中弱阳性组的积分分别是3.3 0±0.2 2,2.6 1±0.1 6和2.6 3±0.1 3;VEGF,bFGF和Ang-2在COX-2强阳性组的表达率分别是1 0 0.0%(9 5/9 5),9 4.2 9%(3 3/3 5)和9 7.1 4%(3 4/3 5),而在中弱阳性组分别是6 0.0%(1 5/2 5),6 0.0%(1 5/2 5)和6 0.0%(1 5/2 5)。两组的新生血管生成差异有显著性(P<0.0 1);COX-2与VEGF,bFGF和Ang-2表达呈明显正相关性(r分别为0.8 5 7,0.706,0.9 0 1;P分别<0.0 1)。MVD在COX-2强阳性组和中弱阳性组分别为7 3.1 8±1 2.4 3和33.42±7.52(P<0.0 1),COX-2与MVD呈正相关(r=0.8 1 2,P<0.0 1)。结论COX-2高表达与HCC血管生成密切相关。     

神经生长因子对人胆管癌细胞增殖作用的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对人胆管癌细胞株QBC939增殖能力的影响。方法构建β-NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF，经酶切鉴定后，采用脂质体lipofectamine转染人胆管埔细胞株QBC939。Western Blot检测蛋白的表达情况。MTT法检测转染前后细胞的增殖情况。结果成功构建β—NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF：转染QBC939细胞后，能稳定表达β-NGF蛋白，且表达强度随转染质粒浓度的增加而增强，与对照组相比，差异有显著性（P〈0.0001）。MTT检测转染后的细胞增殖能力增强，与空白对照组和转染空质粒组相比，差异有显著性（P〈0．01）．且表现出量效依赖关系。结论NGF具有促进胆管癌细胞株QBC939增殖的作用。     

肝动脉化疗栓塞对原发性肝癌患者树突状细胞的影响

目的探讨原发性肝癌患者肝动脉化疗栓塞（TACE）前后肝癌组织和外周血液中树突状细胞（DCs）的变化及其意义。方法选取经TACE治疗后二期手术切除的原发性肝癌患者标本17例（TACE＋手术组）和未经TACE单纯手术切除的原发性肝癌患者标本30例（单纯手术组），用免疫组织化学方法检测肝癌组织中的DCs含量。另选经TACE治疗的原发性肝癌患者37例，分别于治疗前、治疗后第1，7，15天采集周围静脉血，用流式细胞仪检测治疗前后外周血DCs的含量。结果TACE＋手术组肝癌组织中DCs数量明显少于单纯手术组（P〈0．05）；经TACE治疗后第7，15天，患者外周血DCs数量明显少于治疗前（均为P〈0．05）。结论TACE治疗后，患者肝癌组织和血液中DCs数量的减少可能是TACE后肝癌易复发、转移的重要原因之一。     

BC047440基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的:探讨肝癌相关的新基因BC047440在肝细胞癌(HCC)中的表达及其病理学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测36例HCC及其相应的癌旁肝组织中BC047440 mRNA的表达，并将该基因在HCC中的表达分为过高表达组及较高表达组，分析其与肿瘤病理变化的关系。〖KG(*8〗结果：36例HCC中BC047440基因mRNA的表达较癌旁肝组织高,其平均光密度比值分别为0.2594±0.0928和0.0942±0.0443,差异有极显著性意义（P<0.01）;过高表达组与较高表达组相比较，前者肝癌直径较大，门静脉受侵较严重，差异有显著性（P<0.05）。结论：BC047440基因与HCC的发生、发展和侵袭转移有关。     

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的：探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法：用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA3.1-X，脂质体转染HEPG2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG2-X细胞RhoC蛋白表达。结果：构建的真核表达载体pcDNA3.1-X在HEPG2细胞中有稳定表达，HEPG2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论：体外条件下，X基因可促进肝癌HEPG2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。     

联用c myb ASON与VEGF防治血管成形术后再狭窄的研究

目的：评估联合应用c myb反义寡核苷酸（ASON）和血管内皮生长因子（VEGF）对血管成形术后再狭窄的效果。方法：28只中国长耳白兔随机分成狭窄对照（Ⅰ）组, 狭窄c myb ASON处理（Ⅱ）组, 狭窄VEGF处理（Ⅲ）组和狭窄c myb ASON +VEGF处理（Ⅳ）组。测定治疗后各组血管狭窄程度, 并进行比较分析。结果：处理后各组均呈不同程度的血管内膜及血管平滑肌增生, 以Ⅰ组最重, Ⅱ, Ⅲ组增生情况较Ⅰ组明显减轻, 差异有统计学意义(P＜0.01)。Ⅳ组增生情况较Ⅱ, Ⅲ组更轻, 差异均有统计学意义(P＜0.01), 但Ⅱ, Ⅲ组间差异无统计学意义（P＞0.05）。Western blotting结果显示, 各组间灰度均有明显差别。结论：c myb ASON与VEGF联合应用能显著减轻血管成形术后的再狭窄, 但两者之间无协同作用。