丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肝细胞线粒体的保护作用

目的研究丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate,EP）对脓毒症大鼠肝细胞线粒体的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔（cecal ligation-perforation,CLP）法制作大鼠脓毒症模型,60只大鼠分3组：假手术组（n=20）、CLP模型组（n=20）、CLP＋EP治疗组（n=20）,检测肝细胞线粒体超微结构及功能变化。结果电镜扫描结果显示CLP模型组肝细胞线粒体发生明显结构损伤改变,CLP＋EP治疗组肝细胞线粒体病变较轻。比较分析CLP模型组与CLP＋EP治疗组的超微结构参数表明：两组的比表面积及形态因子数值间差异无统计学意义（0．027vs.0．029,1．162vs．1．300）,但CLP＋EP治疗组的中位数较CLP模型组更接近正常;与CLP模型组比较,CLP＋EP治疗组线粒体横截表面积减小,差异有统计学意义[（0．641±0．460）vs.（0．231±0．110）μm^2,P〈0．01]。与假手术组比较。CLP模型组肝细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性下降42％;CLP＋EP治疗组的线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性仅下降12％（P〈0．05）。结论EP对脓毒症大鼠肝细胞线粒体结构及功能有一定保护作用。     

丙酮酸乙酯调节脓毒症小鼠肝细胞HSP70表达的研究

目的研究丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症小鼠肝细胞热休克蛋白70（HSPT0）的调节作用。方法制作小鼠盲肠结扎穿孔模型（CLP），应用丙酮酸乙酯林格氏液（REPS）与乳酸钠林格氏液（RLS）对小鼠进行液体复苏，60只小鼠分3组，各20只：假手术组、CLP模型＋REPS复苏组、CLP模型＋RLS复苏组，检测肝组织丙二醛（MDA）及肝细胞HSP70的表达。结果脓毒症小鼠较假手术组MDA浓度增高，P〈0．01。EP显著提高脓毒症小鼠肝组织的抗氧化能力，REPS组肝组织MDA浓度低于RLS组【（48．18±598）μmol／g．prot vs（78．34±11．16）μmol／gprot，P〈0．01]；REPS组小鼠肝细胞HSPT0表达较RLS组增高[（28．76±5．69）vs（20．04±4．93），P〈0．051。HSP70表达与MDA值呈负相关（r=-0．733，P〈0．01）。结论EP具有的抗氧化作用能提高脓毒症小鼠肝细胞的HSPT0表达。     

丙酮酸乙酯调节脓毒症小鼠炎症反应的研究

脓毒症时活性氧（ROS）可以激活从细胞质到细胞核的炎症反应传导通路，导致失控的炎症反应，最终导致器官功能障碍。丙酮酸乙酯（EP）是有效的抗氧化剂，减轻细胞内氧化应激反应。本研究旨在应用EP进行脓毒症的液体复苏，观察EP的抗氧化作用对体内炎症反应的影响。     

丙酮酸乙酯对脓毒症休克犬肠黏膜屏障功能的保护作用

目的探讨丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症休克犬肠黏膜屏障功能的影响。方法健康雄性杂种犬20只，内毒素（LPS）静脉注射复制犬脓毒症休克模型，随机分为对照组（8只）和EP组（12只）。对照组只接受林格液复苏。EP组另外给予丙酮酸乙酯首剂0．05g／kg．然后按0．05g·kg^-1·h^-1持续泵入。脓毒症休克模型建立前及建立后0、8、12和24h取血测定血浆二胺氧化酶（DAO）活性和血浆D-乳酸含量，试验24h处死动物后取小肠标本，进行肠黏膜炎性损伤病理学评分。结果EP组犬的肠黏膜炎性损伤程度病理学评分为2．33±0．25，明显轻于模型组的3．39±0．38，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。两组实验犬在休克后血浆D-乳酸含量和DAO活性逐渐升高，对照组较EP组升高更为明显（P〈0．05）。结论EP能显著改善肠组织灌流及功能指标，减轻肠黏膜的病理损害，对脓毒症休克时小肠有保护作用。     

丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠组织保护和HMGB1表达的影响

目的:通过观察丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠组织HMGB1表达的影响,进一步揭示丙酮酸乙酯治疗脓毒症的分子作用机制。方法:将96只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、低剂量丙酮酸乙酯治疗组(LET组)、高剂量丙酮酸乙酯治疗组(ET组),以盲肠结扎穿刺法复制大鼠脓毒症模型。LET组(20 mg/kg)及ET组(40 mg/kg)即刻腹腔内注射EP注射液4 mL,每6 h重复注射一次,直至实验结束,假手术组及脓毒症组在相同时间用相同剂量的生理盐水腹腔内注射。各组大鼠分别于术后2 h、8 h、24 h、48 h 4个时间点随机处死6只大鼠,经腹主动脉取血,用ELISA方法检测血浆TNF-α、IL-6、HMGB1水平。术后24 h,取大鼠末端回肠,用RT-PCR法检测回肠组织HMGB1mRNA表达水平,用免疫组织化学两步方法观察肠组织HMGB1蛋白表达,在光镜下观察大鼠肠组织的病理变化。结果:与假手术组相比,脓毒症组血浆HMGB1在术后8 h、24 h、48 h显著增高,脓毒症组回肠组织HMGB1mRNA及蛋白表达在术后24 h显著增高(P0.05)。与脓毒症组相比,ET组、LET组血浆HMGB1在术后8 h、24 h、48 h显著降低,ET组、LET组回肠组织HMGB1mRNA及蛋白表达在术后24h显著降低(P0.05)。结论:脓毒症大鼠血浆HMGB1出现时间晚,作用时间长,提示HMGB1是脓毒症的重要晚期炎症介质。丙酮酸乙酯可抑制脓毒症大鼠血浆及肠组织HMGB1的表达,提示丙酮酸乙酯对脓毒症的治疗机制可能与其直接或间接抑制HMGB1的表达有关。     

丙酮酸乙酯对脓毒症肺损伤大鼠细胞间粘附分子-1的影响

目的研究丙酮酸乙酯对脓毒症肺损伤大鼠细胞间粘附分子1(ICAM1)的影响,探讨丙酮酸乙酯保护大鼠脓毒症肺损伤的作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔术复制脓毒症肺损伤动物模型,30只Wistar大鼠随机分为假手术组、脓毒症肺损伤组和丙酮酸乙酯(40mg/kg,腹腔内注射)治疗组,每组10只。所有大鼠12h后活杀,用免疫组织化学方法检测肺组织中ICAM1的分布和表达,用免疫印迹法检测肺组织ICAM1蛋白水平的表达,检测支气管肺泡灌洗液白细胞计数、肺湿/干重比和肺组织髓过氧化物酶(MPOase)活性。结果与脓毒症肺损伤组比较,丙酮酸乙酯治疗组免疫印迹法和免疫组织化学法显示肺组织ICAM1的表达显著降低,肺泡灌洗液白细胞计数、肺湿/干重比和MPOase活性降低(P<0.01)。结论丙酮酸乙酯通过抑制肺组织ICAM1的表达,对脓毒症肺损伤大鼠具有保护作用。     

丙酮酸乙酯对大鼠重症急性胰腺炎肾损伤的保护作用

目的 探讨丙酮酸乙酯对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾损伤的治疗作用及其机制.方法 72只大鼠随机分为假手术组(S组),SAP组(P组)、丙酮酸乙酯治疗组(T组).大鼠SAP模型由5%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射诱发而成.各组于术后3、6、12 h检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、高迁移率族蛋白B...     

谷胱苷肽对脓毒症氧化性应激的保护作用

脓毒症的病理生理过程尚不明确,氧化性应激可能是关键因素之一。本文对脓毒症时氧自由基在氧化性应激的发生,发展中的作用及抗氧化剂的保护机理作一综述。     

丙酮酸乙酯对脾切除术后老龄大鼠认知功能的影响

目的探讨丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对脾切除术后老龄大鼠认知功能的影响。方法健康雄性SD大鼠84只,18月龄,体重500~600g,采用随机数字表法将其分为四组,每组21只:对照组(C组)、手术组(S组)、EP溶液组(E组)和溶剂组(R组)。S组、E组和R组行脾切除术,E组腹腔注射EP 40mg/kg,R组腹腔注射等量EP溶液的溶剂,S组和C组腹腔注射等量生理盐水。于术前5d、术后1、3、7d进行Morris水迷宫实验,记录大鼠逃避潜伏期和游泳距离,水迷宫实验结束后处死大鼠,采用Western blot和RT-PCR法检测四组大鼠海马高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)及晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)的蛋白含量和mRNA表达量。结果与C组比较,术后1、3dS组、E组和R组逃避潜伏期和游泳距离明显延长,海马HMGB1、RAGE蛋白含量和mRNA表达量明显增加(P0.05)。与S组比较,术后1、3dE组逃避潜伏期和游泳距离明显缩短,海马HMGB1、RAGE蛋白含量和mRNA表达量明显减少(P0.05)。与术前比较,术后1、3dS组、E组和R组逃避潜伏期和游泳距离明显延长(P0.05)。结论丙酮酸乙酯可能通过下调海马HMGB1及RAGE的表达改善认知功能。     

丙酮酸乙酯对重症急性胰腺炎大鼠血清高迁移率蛋白-1水平的影响及意义

目的　探讨重症急性胰腺炎 (SAP)大鼠血清高迁移率蛋白 1(HMGB1)水平的变化规律 ,以及丙酮酸乙酯 (EP)对其水平的影响和意义。方法　采用胰管逆行灌注人工胆汁的方法复制大鼠SAP模型。随机分为正常对照组 (N组 ,n =8)、重症急性胰腺炎组 (SAP组 ,n =80 )、EP治疗组 (Treat组 ,n =3 2 )。Treat组建模 12h开始使用EP治疗。酶联免疫吸附试验检测各组动物血清肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 1β(IL 1β)水平。Westernblot法检测血清HMGB1水平。另设实验组研究EP对SAP大鼠生存时间的影响。结果　SAP组大鼠血清TNF α和IL 1β水平在建模 3～ 6h达高峰 ,12h即大幅下降。SAP组大鼠血清HMGB1水平在建模后 12h明显升高 ,至 2 4和 48h仍维持在较高水平 [(161.4± 2 2 .8) μg/L和(98.7± 15 .8) μg/L]。Treat组血清HMGB1水平在建模 2 4、48h [(95 .3± 3 0 .1) μg/L和(4 2 .2± 2 1.5 ) μg/L]明显低于SAP组(P <0 .0 5 )。而血清TNF α和IL 1β水平与SAP组比较差异无显著性。Kaplan Meier分析显示 ,EP治疗组动物生存时间 (71± 6)h明显高于SAP组 (4 6± 4)h (P <0 .0 0 0 1)。结论　HMGB1作为晚期炎症因子参与了SAP的全身炎症反应。延迟的EP治疗仍能降低SAP大鼠血清HMGB1水平 ,延长动物生存时间。     

丙泊酚对脓毒症大鼠肝损伤的保护作用

目的研究丙泊酚对脓毒症大鼠细胞因子的影响和细胞因子对肝线粒体呼吸功能的影响及其机制。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒症模型,将大鼠随机分为假手术组(C组)、盐水组(NS组)和丙泊酚组(P组),模型制作12h后NS组和P组分别给予生理盐水丙泊酚。在给药前和给药4 h后分别取静脉血,并在给药4h后取肝制备肝线粒体和组织匀浆,分别采用Clark氧电极技术测定线粒体呼吸功能,ELISA法检测IL-1β和IL-6,分光光度法测定NO水平。结果NS组的RCR和ADP/O明显低于C组,丙泊酚能改善其呼吸功能;NS组给药前后IL-1β和IL-6水平明显高于C组,而P组给药4 h后的IL-1β和IL-6水平较NS组明显降低,且NS组NO较C组和P组显著升高。结论丙泊酚能通过降低IL-1β和IL-6水平,减少肝组织NO的产生,从而保护线粒体呼吸功能,改善细胞能量代谢。     

高迁移率族蛋白B1 mRNA在脓毒症大鼠脾脏中的表达

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA在脓毒症大鼠外周免疫器官脾脏的表达规律及其与血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的关系。方法：采用盲肠结扎穿孔（CLP）方法制备大鼠脓毒症模型。83只大鼠随机分为正常对照组（10只）、盲肠结扎穿孔组（38只）,盲肠结扎穿孔丙酮酸乙酯治疗组（35只）。分别于CLP术后4、12、24、48、72h或CLP术后丙酮酸乙酯治疗12、24、48、72h活杀动物,留取脾脏组织和血清标本,用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测脾脏组织HMGB1mRNA的表达规律,用放射性免疫方法检测血清TNF-α和IL-6的浓度。结果：HMGB1mRNA在正常大鼠脾脏组织有轻度表达,CLP术后表达显著增强（P〈0.05）。CLP术后24h和72h分别出现两个高峰。丙酮酸乙酯液治疗可显著降低CLP术后大鼠脾脏组织HMGB1mRNA的表达（P〈0.05）。CLP术后大鼠血清TNF-α和IL-6浓度显著增高（P〈0.05）,丙酮酸乙酯治疗可显著降低CLP术后大鼠TNF-α和IL-6的浓度（P〈0.05）。结论：HMGB1在脓毒症大鼠外周免疫器官脾脏的表达显著增高,并与血清TNF-α和IL-6等炎症因子的增高有重要关系;HMGB1参与了失控性炎症反应的发展过程。     

丙酮酸乙酯对缺氧／复氧损伤小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成及白细胞介素-1和6表达的影响

目的：探讨丙酮酸乙酯（EP）对缺氧／复氧损伤小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮（N0）及白细胞介素-1（IL-1）、IL-6表达的影响。方法：采用原代培养小鼠腹腔巨噬细胞和缺氧／复氧诱导损伤模型,墨汁吞噬实验鉴定巨噬细胞纯度,于缺氧3h后复氧1、3、6、9h时收集上清液,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）活性,采用噻唑兰法测定其存活率。在缺氧3h／复氧6h（H3／R6）损伤实验中,细胞分为正常对照组、损伤组和加入不同浓度EP（20、2、0．2mmol／L）后的H3／R6损伤组,取各组细胞上清,硝酸还原酶法测定其NO生成量,放射免疫分析法检测细胞上清中IL-1、IL-6的表达。结果：细胞培养5d后,墨汁吞噬实验鉴定细胞吞噬率达99％以上。与正常对照组相同时间点相比,缺氧3h后复氧1、3、6和9h时,细胞存活率明显下降,上清中MDA含量明显增加（P〈0．05）,但复氧6h组与复氧9h组间差异均无显著性。与正常对照组相比,H3／H6损伤组NO生成量降低,IL-1、IL-6含量明显升高（P〈0．05）;不同浓度EP处理后结果显示,0．2和2mmol／LEP可明显促进N0的生成,降低IL-1和IL-6的含量（P〈0．05）;而20mmol／LEP处理可降低NO生成,提高IL-1和IL-6的表达。结论：低浓度EP对小鼠腹腔巨噬细胞缺氧／复氧损伤有保护作用,其途径可能是通过上调NO含量,下调IL-1和IL-6表达水平实现的。     

帕瑞昔布钠对脓毒症小鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的研究帕瑞昔布钠对脓毒症小鼠肠黏膜屏障功能的影响及可能机制。方法 21只C57BL/6小鼠随机分为三组:假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)、脓毒症模型+帕瑞昔布钠2mg/kg治疗组(P组),每组7只。术后24h用襻环结扎法检测各组小鼠小肠通透性。另21只C57BL/6小鼠随机分为三组,分组及治疗同前,术后24h处死小鼠,收集小鼠回肠。小肠组织行HE染色观察肠病理损伤。采用Western bolt法检测小肠ZO-1、Occludin、Claudin-1等紧密连接蛋白的表达。采用ELISA法检测小肠黏膜IL-6、PGE2的浓度。结果与Sham组比较,CLP组小鼠小肠明显损伤,门静脉血内FD4浓度明显升高,小肠黏膜内ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达明显减少、IL-6与PGE2浓度明显升高(P0.05)。与CLP组比较,P组小鼠小肠损伤明显减轻(P0.05),门静脉血内FD4浓度明显降低(P0.05),小肠黏膜内各蛋白表达水平明显增加、IL-6与PGE2浓度明显降低(P0.05)。结论帕瑞昔布钠治疗可以明显降低脓毒症导致的肠黏膜屏障功能损伤,其机制可能与降低肠组织炎症水平,增加肠紧密连接蛋白表达相关。