HBV感染时病毒清除与肝细胞免疫病理损伤并非同步--重视非靶细胞损伤性清除肝细胞内病毒的机制

ＨＢＶ感染后病毒清除和肝细胞免疫性损伤是两个密切相关的过程。但近年发现机体可在不损伤靶肝细胞的情况下清除其内的ＨＢＶ ,本文对这方面的研究进展作一介绍。一、对ＨＢＶ清除与肝细胞免疫病理损伤之间关系的经典认识及其不足一般认为 ,ＨＢＶ侵入血液循环后 ,首先感染以肝细胞为主的多种靶细胞 ,在细胞内复制、转录、表达并分泌ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｇ等病毒抗原及完整的病毒颗粒 ;在血液和肝细胞膜上的病毒抗原达到一定的量后 ,即可诱导特异性细胞免疫应答 (如ＣＴＬ的活化及ＩＦＮ γ、ＴＮＦα等多种细胞因子的产生 )…     

细胞凋亡与重型肝炎

细胞凋亡本质是基因调控的程序性细胞死亡过程,凋亡异常可参与多种疾病发生。无论是乙型肝炎或丙型肝炎,其肝细胞损伤均是病毒诱发的特异性ＣＴＬ所致,后者可使病毒感染细胞凋亡。在急性乙型肝炎,ＣＴＬ的诱导具有自限性;而在重型肝炎,ＣＴＬ则始终有很高的活性。在ＨＢＶ转基因小鼠腹腔内注射ＨＢＶ特异性ＣＴＬ可成功地建立肝功能衰竭模型。有人筛选出细胞毒性最强的ＨＢＶ特异ＣＴＬ克隆,静脉内注射后也成功地诱导出致死性肝功能衰竭模型。本文就重型肝炎与细胞凋亡之间关系的最新研究进展作一概述。一、Ｆａｓ／Ｆａｓ配体系统的…     

肝细胞凋亡与肝病

乙型肝炎与肝细胞凋亡骆抗先教授（广州,第一军医大学南方医院）乙型肝炎时有肝细胞凋亡,且在病变的发生和发展中有重要作用。病毒性肝炎时有众多激发凋亡的因素,包括感染过程中参与的免疫效应细胞和细胞因子、感染后发生的细胞ＤＮＡ损伤和细胞周期混乱。而ＨＢ病毒本身与细胞凋亡的关系尚未阐明。作为嗜肝ＤＮＡ病毒的ＨＢＶ,如同其它ＤＮＡ病毒,较可能抑制细胞凋亡。在慢性无症状携带者可有高水平ＨＢＶ复制,转染的肝癌细胞系中ＨＢＶ大量复制而生长旺盛,也可能表明ＨＢＶ复制不会直接诱导肝细胞凋亡。我们用ＨｅｐＧ２细胞和及其…     

乙型肝炎病毒变异对其特异性CTL反应的影响

特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）反应是人体清除ＨＢＶ的主要机制，与临床结局密切相关，了解病毒变异对ＣＴＬ反应的影响尤为重要。 １．ＣＴＬ表位区内的变异：ＣＴＬ通过识别ＨＢＶ抗原特异性表位而清除病毒，ＨＢＶ编码的蛋白产物上都有这种表位。表位区内的变异可能引起（１）与ＨＬＡ分子结合的病毒抗原肽“错位变异”，抗原提呈失败；（２）ＣＴＬ不能识别变异的表位；（３）变异性肽配体与ＣＴＬ受体结合，使ＣＴＬ分化信号发生改变而失去对靶抗原的杀伤作用。但ＨＢＶ可表达多种抗原性、且变异绝大多数不在表位区内，个别ＣＴＬ…     

乙型肝炎病毒变异的临床意义

全世界人口大约三分之一有过急性乙肝病毒(ＨＢＶ)感染 ,1%以下的急性感染病人会发生暴发性肝炎[1] ;大约有 3 5亿人成为ＨＢＶ慢性携带者 ,每年仅1%～ 2 %会自发清除ＨＢｓＡｇ ;半数以上的ＨＢｓＡｇ阳性病人将死于肝细胞癌或肝衰竭。病毒和宿主因素如年龄、免疫抑制和性别与病人的预后有关。过去十年间 ,变异ＨＢＶ株与急性或慢性感染临床过程的关系越来越引人注目。变异的ＨＢＶ可能扩大了病毒毒力和增强ＨＢＶ复制的水平、增大了抗病毒治疗的抵抗力 (例如干扰素α或核苷类似物 )、促进病毒附着 /穿透细胞、或引起宿主免疫反应方面重要…     

乙型肝炎病毒基因注入大鼠肝脏后的短暂抗原表达

目的建立ＨＢＶ感染的急性乙型肝炎大鼠模型。方法将经磷酸钙沉淀的含３．２ｋｂ全序列ＨＢＶＤＮＡ的ＨＢＶ－ＰＣＮＣＸ质粒直接导入大鼠肝脏。结果１０只实验动物中，８只大鼠血清ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性，肝细胞中ＨＢＶｍＲＮＡ及ＨＢｓＡｇ得到表达，肝脏出现局灶性炎性细胞浸润，肝细胞坏死、浊肿等典型的病毒性肝炎病理变化。结论将磷酸钙沉淀后的ＨＢＶＤＮＡ导入大鼠肝脏细胞，可产生病毒抗原血症和典型的急性病毒性肝炎病理变化     

乙型肝炎病毒嗜肝性机制研究进展

乙型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ,ＨＢＶ)属嗜肝脱氧核糖核酸病毒 (ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ)。其吸附、入侵肝细胞 ,是感染肝细胞并引起病变的第一步 ,也是ＨＢＶ嗜肝性的原因之一 ,人们对ＨＢＶ吸附肝细胞的机制进行了长期大量的研究 ,现将有关内容综述如下 :1　ＨＢＶ与肝细胞受体直接结合研究初期 ,许多学者[1,2 ] 成功地以ＨＢＶ颗粒感染肝癌细胞系ＨｅｐＧ2 细胞 ,推测 ｐｒｅＳ1和 ｐｒｅＳ2 蛋白可以直接与肝细胞结合。Ｎｅｕｒａｔｈ等利用人工合成多肽方法 ,对 ｐｒｅＳ1及 ｐｒｅＳ2 的决定簇进行分析 ,通过…     

HBV感染时肿瘤坏死因子对肝细胞毒性效应与受体的关系

为了观察ＨＢＶ感染时肿瘤环死因子对肝细胞毒性效应与受体的关系，以进一步阐明慢性乙型肝炎时ＰＣ损伤机制。分别取血清ＨＢＶ感染标志阳性肝癌患者癌周组织及血清ＨＢＶ感染标志阴性肝内胆管结石患者肝组织，作观察组及对照组并行细胞分离培养得ＰＣ及枯否细胞。     

合成多肽体外诱导乙肝病毒抗原特异性T杀伤细胞实验研究

目的及方法 为探讨ＨＢＶ抗原特异性细胞毒Ｔ细胞（ＨＢＶ－ＣＴＬ），根据ＨＢｃＡｇ的ＨＬＡ分子结合关键序列合成抗原多肽２段，分别与转铁蛋白（Ｔｆ），抗ＣＤ单克隆抗体（ＣＤ３ｍＡｂ）和ＩＬ－２联合体外诱导ＨＢＶ－ＣＴＬ，应用＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法分别测定ＨＢＶ－ＣＴＬ对ＨＢＶＤＮＡ转染的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞特异性活性及无ＨＢＶＤＮＡ转染的ＨｅＰＧ２细胞的非特异性杀伤率。结果 ＨＢＶ－ＣＴＬ对ＨＢＶＤ     

白细胞介素-18在慢性乙型病毒性肝炎中的免疫作用研究进展

白细胞介素 - 18(ＩＬ - 18)是一种新发现的细胞因子 ,具有较强的免疫调节能力 ,主要功能是调节Ｔｈ1型细胞反应。在慢性乙型病毒性肝炎 (慢乙肝 )感染中 ,能增强机体免疫而引起肝细胞损伤 ,也可介导抗乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)作用 ,抑制肝细胞膜上ＨＢＶ基因表达 ,从而引起或不引起感染肝细胞的破坏 ,而达到清除细胞内病毒的目的 ,使肝细胞恢复。本文就近年来有关ＩＬ - 18在慢乙肝中的免疫作用研究进展作一概述。1　ＩＬ - 18的生物学功能和效应机制1 1　诱导产生ＩＦＮ -γ和激活ＮＫ细胞 :ＩＬ - 18诱导Ｔｈ1型细胞产生ＩＦＮ -γ ,与ＩＬ…     

HBV基因定量分析技术的应用价值存在问题及展望

近年来ＨＢＶ基因定量分析的价值受到越来越多研究者的重视。以前由于过分强调了ＨＢＶ感染后过强的细胞免疫应答介导肝细胞损伤，因而忽视了对病毒复制水平与致病性之间因果关系的研究。目前普遍认为，尽管ＨＢＶ不直接破坏寄生细胞，但病毒的活跃复制是启动或激发肝脏组织炎症反应的因素。这表明确定感染者体内ＨＢＶ复制状态，即从ＨＢＶ基因定量的角度作病情分析是十分有意义的。事实上，真正引起人们关注ＨＢＶ基因定量分析价值的重要原因是最近发现了干扰素疗效与ＨＢＶ基因水平两者之间有非常密切的关系。ＨＢＶ基因定量分析还在转基…     

从机体清除乙型肝炎病毒的规律探讨抗病毒治疗的新策略

乙型肝炎患者自体每日可清除外周血中大量乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）根据最近对ＨＢＶ在人体内动力学研究，ＨＢＶ的半衰期为 ２６．４ ｈ，病毒存活期为 ３６．６ ｈ，日更新率为４８％，所以控制人体病毒感染的关键在于清除ＨＢＶ ＣＣＣ ＤＮＡ，抑制病毒复制［１，２］。根据目前研究，可能通过两种途径清除 ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡ，即非溶细胞性及溶细胞性，而且以前者为主［３］。至于其具体途径目前尚不完全了解。但是肝脏及肝细胞在清除 ＨＢＶ ｃｃｃ ＤＮＡ过程中具有重要作用是无庸置疑的。 一、非溶细胞性清除ＨＢＶ和细胞因子 自从…     

慢性乙型肝炎肝细胞Fas表达和凋亡

探讨ＨＢＶ感染时的肝细胞凋亡及其参与的病理机制。方法研究ＨＢＶ相关ＣＨ３８例、ＬＣ２７例和ＨＣＣ４３例的肝组织，以抗Ｆａｓ单抗检测Ｆａｓ表达及以标记的核苷酸借３未端转移酶检测ＤＮＡ损伤。结论：ＣＴＬ－Ｆａｓ－凋亡也是参与肝细胞损伤的重要机制。     

应用双重原位杂交技术定位检测肝细胞癌中乙型丙型肝炎病毒

目的检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是否可同时感染同一宿主细胞．方法联合应用地高辛标记探针和生物素标记探针的双标记方法，成功建立起非放射性双重原位杂交技术，并应用这一技术检测了１０例肝细胞性肝癌及癌周组织细胞内乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染情况．结果发现ＨＢＶ、ＨＣＶ可同时感染同一宿主细胞这一独特的生物学现象．结论从而认为ＨＢＶ、ＨＣＶ双病毒感染可能并不遵循“病毒干扰”原则，并为了解这两种病毒在肝细胞癌发生中可能存在着的协同作用提供了新的线索．     

慢性乙型肝炎肝组织表达FasL蛋白,mRNA及Fas的实验研究

目的研究ＦａｓＬ、Ｆａｓ在慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）肝组织中的表达及意义。方法采用ＦａｓＬ多克隆抗体、人工合成ＦａｓＬ寡核苷酸探针对ＣＨＢ及ＨＢＶ慢性携带者肝组织进行免疫组化和原位杂交检测。部分组织同时检测Ｆａｓ抗原。结果肝组织浸润单个核细胞及肝细胞都不同程度检测出ＦａｓＬ蛋白及其ｍＲＮＡ，表达程度随肝脏炎症坏死程度加重而增加。ＦａｓＬ、Ｆａｓ阳性肝细胞分布及表达程度有一致性。结论经ＦａｓＬ、Ｆａｓ介导的细胞凋亡机制在ＣＨ致病中起重要作用，不仅存在ＣＴＬｓ介导的细胞免疫作用，肝细胞也可能通过表达ＦａｓＬ发生细胞自杀和同胞相杀     

丙型肝炎患者外周B淋巴细胞系及HCV的形态学研究

研究ＨＣＶ对人Ｂ淋巴细胞的感染 ,建立ＨＣＶ感染的丙型肝炎患者Ｂ淋巴细胞模型 (ＣＢＣＬ) ,并进行ＨＣＶ的形态学研究 ,观察ＨＣＶ在其中的复制及ＨＣＶ形态学及超微结构。用ＥＢ病毒转化Ｂ细胞建立Ｂ细胞系 ,以逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)、免疫组织化学、原位杂交方法检测Ｂ细胞系上清液及细胞内的ＨＣＶ抗原及ＨＣＶＲＮＡ ,并通过电镜对ＨＣＶ进行形态学研究。用ＥＢ病毒转化丙型肝炎患者Ｂ淋巴细胞传代培养 ,使其成为永生细胞系。用抗ＨＣＶ ＮＳ3、ＮＳ5、ＣＯＲＥ单克隆抗体检测ＣＢＣＬ中ＨＣＶ抗原 ,发现阳性颗粒主要见于…     

HDV/HBV感染树鼩肝组织中Bcl2/Bax表达及其在肝细胞凋亡中的作用

目前已有许多实验研究表明Ｂａｘ可促进细胞凋亡 ,Ｂｃｌ2可抑制细胞凋亡[1] 。本研究以ＨＤＶ/ＨＢＶ感染树为研究对象 ,采用免疫组化技术检测树肝组织中ＨＤＡｇ、Ｂｃｌ2 和Ｂａｘ表达 ;采用ＴＵＮＥＬ法原位检测肝细胞凋亡 ,并应用连续切片和双重染色分析丁型肝炎病毒抗原和Ｂｃｌ2 /Ｂａｘ表达以及其与肝细胞凋亡的关系。一、材料与方法1 标本来源 :所有标本取自我科采用ＨＤＶ/ＨＢＶ同时和重叠感染的 8只经血清和肝组织检测ＨＤＶ标志物阳性、伴ＡＬＴ升高的树 ,选取感染后 4～ 10周肝组织标本 (每周取肝组织 1次 )共 45份 ,每…     

乙型肝炎特异性细胞毒性T细胞治疗慢性乙型肝炎

乙型肝炎特异性细胞毒性Ｔ细胞治疗慢性乙型肝炎李旭红，王崇国，在岳鹏，张启华，缪松毅将慢性乙型肝炎患者（ＣＨＢ）的周围血淋巴细胞在体外用新的免疫学方法诱导成为ＨＢＶ特异性细胞毒性Ｔ细胞（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．ＣＴＬ）回输治疗３０例...     

乙型肝炎病毒-S基因重组逆转录病毒载体诱导小鼠体液和细胞免疫反应

探索逆转录病毒载体在基因治疗乙型肝炎中的应用。方法用ＤＮＡ重组技术构建ＨＢＶ－Ｓ基因重组逆转录病毒载体,电穿孔转染ＰＡ３１７后,用假病毒颗粒感染ＨｅｐＧ２、Ｐ８１５和ＥＬ－４细胞,并进行基因免疫。结果ＨＢＶ－Ｓ基因在上述细胞获得高效表达,在免疫动物体内产生高滴度抗一ＨＢＳ及有效的ＣＴＬ反应。结论该载体肌肉注射后有效激发对ＨＢｓＡｄｅ异性的体液免疫及细胞免疫反应,在细胞内稳定表达,是一种高效的基因转移系统,适用于基因治疗试验。     

感染乙型肝炎病毒MT2淋巴细胞表达Fas

目的：观测Ｔ淋巴细胞－ＭＴ２细胞对乙型肝炎病毒感染的敏感性，了解病毒感染对淋巴细胞表达Ｆａｓ的影响。方法：体外培养ＭＴ２细胞，用ＨＢＶ ＤＮＡ阳性血清直接感染，用酶联免疫和斑点杂交，ＰＣＲ法检测感染后的细胞病毒复制与表达状况，用酶联免疫法检测了Ｆａｓ抗原表达。结果：ＭＴ２细胞于阳性血清感染后第八天可测到ＨＢｅＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ同时出现Ｆａｓ表达信号，结论：ＭＴ２细胞对ＨＢＶ易感，ＨＢＶ