梭曼、沙林对鸭血清丁酰胆碱酯酶的动力学研究

目的从酶反应动力学方面揭示梭曼、沙林对丁酰胆碱酯酶的毒性强弱,比较两者对丁酰胆碱酯酶的抑制强度.方法通过改进的Ellman法验测定了鸭血清丁酰胆碱酯酶的km值,以及梭曼、沙林对该酶抑制反应的解离常数kd、膦酰化常数k2和抑制速率常数ki值.结果虽然梭曼和沙林在可逆的酶-抑制剂反应过程中反应速度相差不大,但梭曼对该酶的亲和力与抑制能力均比沙林强.结论这可能是梭曼毒性大于沙林的一个重要因素.     

烟碱型乙酰胆碱受体亚型的表达调控及其生理意义

位于哺乳动物神经肌肉接头突触后膜上的烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)直接参与神经肌肉之间兴奋传递,对肌肉完成正常收缩功能具有十分重要的意义.nAChR是一种杂合五聚体蛋白,按亚单位组成的不同分为成熟型受体ε-AChR(α2βεδ)和胚胎型受体γ-AChR (α2βγδ).本文主要对两者在表达时期、分布范围、调控机制和生理意义方面的差异进行综述.     

Effect of soman on the neuro-muscle junctional and extrajunctional nicotinic acetylcholine receptors

Autoradiography of nicotinic acetytcholine receptors(N-ACHR)with the application ofhistochemical staining location of cholinesterase was used to observe the effect of soman onjunctional and extrajunctional N-AChR.Testing with the diaphragms and extensor digitorum longusmuscles of mice and rats,we found that soman mainly increased the number of extrajunctionalN-AChR.It did not alter the number of junctional N-AChR significantly,nor did it have any pro-nouneed effects on the gtycoprotein property and isoelectfic point(pI)of junctional andextrajunctional N-AChR.The change of extrajunctional N-AChR number caused by somanis similar to the phenomenon of increased extrajunctional N-AChR number and sensitivity resultingfrom denervation,but the mechanism of action is different from the latter.The increase ofN-AChR number is one of the important characteristics of soman poisoning which make it differ-ent from other nerve agents.To maintain the metabofic balance of N-AChR may be an importantnew approach to the treatment of soman poisoning.     

治疗炎性疾病的新靶点——α7烟碱型乙酰胆碱受体

胆碱能抗炎通路是新近发现的一种神经-免疫调节通路,其潜在的药物作用靶点是α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR).近年来大量的研究证明特异性激动α7nAChR能够有效减少促炎细胞因子的释放.本文综述了α7nAChR在炎性疾病发生发展中的作用,拟为炎性疾病的治疗提供新的理论和思路.     

大鼠纹状体边缘区内烟碱型乙酰胆碱受体mRNA的表达

目的研究纹状体边缘区内有无乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）的分布。方法用地高辛标记的 ｎＡＣｈＲ ｃＤＮＡ作为探针， 与大鼠脑切片进行原位杂交。结果大鼠脑纹状体内可见较多的ｎＡＣｈＲ阳性神经元，其中尾壳核中可见较多中等大小 的多极阳性神经元，在尾壳核和苍白球之间的边缘区部位，可见较多阳性梭形细胞，呈密集的带状分布。结论纹状体边 缘区内存在 ｎＡＣｈＲ ｍＲＮＡ的表达，推测边缘区内的 ｎＡＣｈＲ阳性神经元对调节边缘区的学习记忆功能有重要作用。     

Association of nicotinic acetylcholine receptor subunit alpha-4 polymorphisms with smoking behaviors in Chinese male smokers

Background  It has been reported that the nicotinic acetylcholine receptor subunit α4 gene (CHRNA4) might be associated with smoking behaviors in the previous studies. Up to now, there are few reports on the relationship between CHRNA4 and smoking initiation. In this study, we tried to explore the role of two polymorphisms in CHRNA4 (rs1044396 and rs1044397) in smoking initiation and nicotine dependence in Chinese male smokers.

Methods  Nine hundred and sixty-six Chinese male lifetime nonsmokers and smokers were assessed by the Fagerström test for nicotine dependence (FTND), smoking quantity (SQ) and the heaviness of smoking index (HSI). All subjects were divided into four groups based on their tobacco use history and the FTND scores. The polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was performed to find two polymorphisms of CHRNA4 in these subjects.

Results  The χ² test showed that rs1044396 was significantly associated with smoking initiation (χ²=4.65, P=0.031), while both rs1044396 and rs1044397 were significantly associated with nicotine dependence (χ²=5.42, P=0.020; χ²=7.58, P=0.005). Furthermore, the T-G (3.9%) haplotype of rs1044396-rs1044397 showed significant association with smoking initiation (χ²=6.30, P=0.012) and the C-G haplotype (58.9%) remained positive association with nicotine dependence (χ²=8.64, P=0.003) after Bonferroni correction. The C-G haplotype also significantly increased the HSI (P=0.002) and FTND scores (P=0.001) after Bonferroni correction.

Conclusion  These findings suggest that CHRNA4 may be associated with smoking initiation and the C-G haplotype of rs1044396-rs1044397 might increase the vulnerability to nicotine dependence in Chinese male smokers.

     

M乙酰胆碱受体在缺氧复合梭曼中毒大鼠脑损伤中的作用研究

目的探讨毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M受体)在缺氧复合梭曼中毒脑损伤中的作用。方法实验大鼠随机分为正常对照组、梭曼中毒组、缺氧组和缺氧复合梭曼中毒组。利用受体放射性配基结合法、Western blot、放射免疫和酶放射化学分析分别检测皮层、海马和纹状体M受体密度和亲和力、Gia蛋白含量、cAMP浓度及PKA活性。结果与平原中毒组相比,缺氧复合梭曼中毒组皮层和纹状体Bmax增加,海马和纹状体Kd值降低;复合致伤组皮层、海马和纹状体Gia蛋白含量分别比单纯梭曼中毒组降低了15．48％、8．56％和28．20％;各脑区cAMP浓度及PKA活性显著升高,分别较梭曼中毒组升高了79．51％、84．75％、52．92％和78．93％、44．32％、39．05％;M受体阻断剂阿托品可部分阻断梭曼中毒和／或缺氧所致的PKA活性的升高。结论复合致伤引起的M受体上调,cAMP-PKA信号系统的异常增强,在缺氧复合梭曼中毒脑损伤中可能是缺氧复合梭曼中毒毒性效应增强的重要原因之一。     

缺氧条件下梭曼中毒对大鼠心肌M2受体mRNA表达的影响

目的 探讨缺氧条件下梭曼中毒大鼠心肌M2胆碱能受体表达的变化。方法 采用半定量RT－PCR法分别检测缺氧、梭曼中毒以及缺氧条件下梭曼中毒大鼠心肌M2受体mRNA的表达。结果 与正常对照组比较，缺氧组大鼠心肌M2受体mRNA表达增强，但相差并不显著；单纯梭曼中毒组和缺氧中毒组大鼠M2受体在致伤后各时间点表达明显减弱，但与单纯梭曼中毒组比较，缺氧中毒组大鼠心肌M2受体mRNA的表达在致伤后12h和24h明显增强（P＜0.05)。结论 M2受体对有机磷毒剂非常敏感，缺氧条件下大鼠心肌M2受体的表达相对于平原中毒组有所增强，可能是高原战区神经性毒剂加重心脏功能损害的一个重要原因。     

糖皮质激素对重症肌无力患者白细胞介素-6和乙酰胆碱受体抗体的影响

目的探讨糖皮质激素(GC)对重症肌无力(MG)患者白细胞介素-6(IL-6)和乙酰胆碱受体抗体(AchRab)的影响.方法采用ELISA法检测32例MG患者在用GC治疗前、治疗3个月后和20例正常对照者的血清IL-6和AchRab水平.结果MG患者血清IL-6和AchRab水平均显著高于对照组(P＜0.01)GC治疗能明显降低其水平(P＜0.05或P＜0.01),且对不同性别、年龄、病程、临床类型和不同预后的MG患者均有作用(P＜0.05或P＜0.01),但在GC治疗前后,预后差的MG患者血清IL-6和AchRab水平始终高于预后好者(P＜0.05).血清IL-6水平在AchRab阳性MG患者高于AchRab阴性患者(P＜0.05),且与AchRab滴度呈正相关(f=0.710,P＜0.01).结论GC可通过抑制MG患者体内IL-6和AchRab的产生,有效调节机体细胞免疫和体液免疫功能.     

缺氧条件下梭曼中毒对大鼠脑M受体的影响

目的 探讨高原缺氧条件下梭曼中毒大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）活性和毒蕈碱性乙酰胆碱（Ｍ）受体变化规律。方法 以ＤＴＮＢ法和受体放射性配基结合法检测大鼠皮层、海马及纹状体ＡＣｈＥ活性和Ｍ受体密度及亲和力。结果 缺氧使大鼠脑组织ＡＣｈＥ活性不同程度升高,缺氧２４ｈ海马和纹状体Ｍ受体 分别增加１０．４％和２５．３％,Ｍ受体的亲和力分别增加５５．６％和３０．３％。单纯梭曼中毒和缺氧复合梭曼中毒均显著     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

Effects of Phenamiphos on Muscarinic Acetylcholine Receptor in the Brain Synaptosome in Rats and Its Mechanism

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰｈｅｎａｍｉｐｈｏｓｏｎＭｕｓｃａｒｉｎｉｃＡｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅＲｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｈｅＢｒａｉｎＳｙｎａｐｔｏｓｏｍｅｉｎＲａｔｓａｎｄ　Ｉｔｓ　ＭｅｃｈａｎｉｓｍＳＵＮＬｉ（孙黎），ＭＡＴａｎ－ｇｅｎｇ（马谭庚），ＬＩ...     

M2受体抗体在支气管哮喘发病中的实验性研究

目的测定Wistar大鼠外周血中M2受体的自身抗体,观察地塞米松对M2受体的自身抗体影响以及M2受体的自身抗体在哮喘发病中的可能机制。方法以卵白蛋白致敏制备Wistax大鼠哮喘模型,分为健康对照组、哮喘模型组和地塞米松组。以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,分别通过SA—ELISA检测各组大鼠外周血中的M2受体的自身抗体,计算抗体阳性率和抗体滴度的几何均数;观察各组动物哮喘发作症状、末次卵白蛋白致敏攻击24h内支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量及支气管肺组织病理学改变。结果哮喘模型组的M2受体自身抗体阳性率为66．7％,明显高于对照组的8．3％和地塞米松组的16．7％（P〈0．05）;哮喘模型组自身抗体阳性患者的抗体滴度为1-105,明显高于对照组的1—20和地塞米松组的1-30（P〈0．05）。在哮喘模型组中,M2受体的自身抗体阳性率和抗体滴度明显高于健康对照组与地塞米松组,地塞米松组的BALF中的嗜酸性粒细胞与哮喘组相比有明显减少,地塞米松组的气道炎症程度轻于哮喘组。结论应用地塞米松可以降低M2受体的自身抗体阳性率和抗体滴度,提示M2受体的自身抗体可能参与哮喘的病理生理过程。     

有机磷类杀虫剂对毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响

目的：研究有机磷类杀虫剂（OPs）对G蛋白结合受体激酶-2（GRK2）介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响,进一步揭示有机磷类杀虫剂可能存在的其他作用途径.方法：利用亲和层析方法从猪脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体,G蛋白结合受体激酶-2,[γ-p^32]标记的ATP与不同浓度的对氧磷（PO）、氧毒死蜱（CPO）共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测M2受体磷酸化结果.之后将干燥凝胶片中放射性标记的磷酸化M2受体蛋白带剪下,同位素液体闪烁计数器计数.结果：氧毒死蜱（CPO）完全抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,其IC50为70 μM;毒死蜱（CPF）也抑制M2受体的磷酸化,而对氧磷（PO）与对硫磷（parathion）不抑制M2受体的磷酸化.结论：不同的OPs对GRK2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化有完全不同的作用;毒死蜱阻断M2受体的磷酸化,提示OPs的毒性作用存在其他的可能作用途径.     

烟碱对膝骨关节炎模型大鼠的保护作用及机制研究

目的:研究烟碱对碘乙酸(monoiodoacetic acid,MIA)诱导的大鼠膝骨关节炎模型的保护作用,并对其作用机制作初步探讨?方法:通过MIA膝关节腔注射法构建大鼠膝骨关节炎模型,将造模成功的30只SD大鼠随机分为模型组(MIA组)10只,烟碱干预组20只(MIA+Nic 0.25 mg/kg与MIA+Nic 0.5 mg/kg组各10只)?另外,将10只大鼠作为假手术组(对照组)?造模30 d后提取大鼠右膝关节软骨组织标本,进行大体光镜和组织学病理切片观察关节软骨破坏情况;并用RT-PCR法对各组大鼠右膝关节软骨内的Ⅱ型胶原?蛋白聚糖的表达进行检测;采用Western blot法检测磷酸化Akt蛋白表达?结果:与MIA组相比,烟碱可明显改善模型大鼠膝关节大体光镜评分和Mankin’s评分(P < 0.01),提高关节软骨Ⅱ型胶原和蛋白聚糖表达水平(P < 0.01),并显著增加磷酸化Akt蛋白水平(P < 0.01)?结论:烟碱可有效缓解MIA诱导的大鼠膝关节软骨退变,这种保护作用可能与PI3K/Akt信号途径有关?     

梭曼中毒对大鼠脑组织ATP酶及腺苷酸代谢的影响

目的　研究梭曼中毒后大鼠脑组织能量代谢的变化特点。方法　Wistar大鼠以 72 μg kg的剂量梭曼皮下中毒 ,分离海马及小脑并以生化法检测Na+ ,K+ ATPase、Ca2 + ATPase、Mg2 + ATPase的活性 ,HPLC法检测全脑ATP、ADP及AMP含量。结果　梭曼中毒 10～ 2 0min 3种ATP酶活性均显著升高 (P <0 .0 5 ) ,1～ 6h酶活性逐渐下降并低于对照组 ,于中毒后 48h恢复至正常对照水平。ATP含量于中毒 12h显著低于对照组 ,随着时间延长呈逐渐升高的趋势。AMP含量中毒 12h升高显著 (P <0 .0 1) ,其后于 48h恢复正常。结论　梭曼对脑组织ATP酶和能量代谢均产生广泛的影响     

肌肉型胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞的表达及化学动力学特征

给非洲爪蟾卵母细胞分别微量注射从去神经大鼠骨骼肌提取的和以电鳐电器宜烟碱胆碱受体四种亚基ｃＤＮＡｓ为模板，通过体外转录获得的烟碱胆碱受体的ｍＲＮＡｓ，表达出相应的烟碱胆碱受体。以全细胞电压钳位和快速细胞灌流法测定不同浓度的氨甲酰胆碱激动烟碱胆碱受体产生的内向膜电流，以最小反应模型拟合所得的两种受体的量反应曲线非常接近。所祖的两直线回归方程无显著差别，大鼠和电鳐的Ｋ值分别为０．５６７ｍｍｏｌ／Ｌ和０．５７５ｍｍｏｌ／Ｌ，φ值为０．２８２和０．２１７。结果表明：两种受体化学动力学特征相似。     

鞘内注射蛙皮素在大鼠引起镇痛效应的性别差异

【目的】 探讨烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)激动剂蛙皮素引起镇痛效应的性别差异及其可能的受体机制。【方法】采用痛行为学测试观察鞘内注射蛙皮素在雌雄大鼠引起的镇痛效应以及其拮抗剂美加明对抗其镇痛作用的差异性;利用免疫荧光组织化学方法,观察雌雄大鼠脊髓背角nAChR亚单位α4的表达是否存在性别差异,以探讨蛙皮素镇痛效应性别差异的可能机制。【结果】①鞘内给予蛙皮素剂量依赖性地发挥镇痛作用,且在雌性大鼠的镇痛作用大于雄性大鼠;②nAChR特异的非竞争性拮抗剂-美加明能够阻断蛙皮素的镇痛作用,且阻断效应于雄鼠大于雌鼠;③介导蛙皮素镇痛作用的nAChRα4表达于脊髓背角神经元,但雌雄大鼠间的表达未发现性别差异。【结论】 鞘内注射蛙皮素产生的镇痛效应在大鼠具有性别差异,但蛙皮素受体nAChRα4的表达可能与镇痛效应的差异性没有关系。     

重症肌无力患者血清抗乙酰胆碱受体抗体和抗突触前膜抗体检测

目的:探讨重症肌无力(MG)患者血清抗乙酰胆碱受体抗体(AchRab)和抗突触前膜抗体(Psmab)水平与其临床特征之间的关系.方法:采用ABC-ELISA法检测186例MG患者及35例正常人血清AchRab和Psmab.结果:MG患者血清AchRab和Psmab水平及阳性率均高于对照组(P＜0.01),且2抗体水平高度相关(r=0.72,P＜0.001).2抗体水平与MG患者的性别无关;1～14岁患者2抗体水平较低;胸腺瘤患者2抗体水平高于胸腺增生者;危象型患者高于轻型和混合型患者;手术摘除胸腺后,2抗体水平较术前下降(P均＜0.05).结论:AchRab和Psmab与MG患者病情程度及病理类型有关,可用于MG的病情监测.