RNAi技术沉默survivin基因诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的:探讨RNA干扰技术沉默survivin基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:设计并合成靶向survivin的小分子干扰RNA(siRNA),在脂质体(lipidosome)的介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率; MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法分析检测各组癌细胞的存活率;流式细胞计数检测各组癌细胞周期和凋亡指数;Western Blot方法观察对MCF-7细胞survivin mRNA和蛋白质表达的抑制效率.结果:Survivin-siRNA能有效封闭survivin基因的表达,使survivin的mRNA相对水平明显降低(P＜0.05);Survivin-siRNA能明显抑制细胞增殖(P＜0.05);Survivin-siRNA使细胞G2/M期细胞百分比明显增加,S期的细胞百分比显著减少(P＜0.05).结论:利用RNA干扰技术沉默survivin基因的表达可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值.     

雌激素受体亚型对乳腺癌MCF-7细胞生长及微环境中Th平衡的影响

目的:研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型对人乳腺癌细胞MCF-7的生长及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中ERα或ERβ的表达,获得ERα/ERβ不同表达状态的MCF-7细胞。应用MTT法、流式细胞术、RT-PCR法分别检测MCF-7细胞的增殖、细胞周期和凋亡抑制基因的表达,ELISA法检测细胞上清中IFN-γ和IL-4的分泌水平。结果:经RNA干扰后MCF-7细胞的ERα或ERβ蛋白表达水平分别下降了(77.7±3.3)%和(68.3±2.1)%。与对照组相比,ERα基因沉默后,MCF-7细胞生长减慢(P<0.05),受阻于G0～G1期,凋亡抑制基因XIAP的表达水平降低为对照组的(43.0±2.0)%,IFN-γ分泌水平增加至对照组的(1.89±0.34)倍;ERβ基因沉默促进MCF-7细胞的生长(P<0.05),S期细胞比例增加,凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl、XIAP的表达水平分别升高至对照组的(1.28±0.21)、(1.61±0.32)和(1.65±0.29)倍,IFN-γ分泌水平降低为对照组的(28.0±4.0)%。结论:ER亚型的表达状态可影响MCF-7细胞的生长,并通过调节IFN-γ的自分泌水平诱导微环境发生Th偏移。     

miR-129-5p通过HMGB1 调控乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇的敏感性

目的：探讨miR-129-5p 通过调控高迁移率族蛋白B1 基因（high mobility group box 1,HMGB1）影响乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics、HMGB1 小干扰RNA（si-HMGB1）分别转染入MCF-7 细胞,用PTX刺激培养细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后MCF-7 细胞miR-129-5p 和HMGB1 mRNA的表达,Western blotting 检测转染后MCF-7 细胞HMGB1 蛋白的表达,CCK-8 增殖实验检测转染后PTX对MCF-7 细胞增殖的影响,流式细胞术检测转染后对PTX诱导MCF-7 细胞凋亡的影响。结果：转染miR-129-5p mimics 后,MCF-7 细胞中miR-129-5p 的表达水平明显高于阴性对照组细胞（P<0.01）;过表达miR-129-5p 后可明显增强PTX抑制MCF-7 细胞的增殖和诱导细胞凋亡的能力（均P<0.05）,并显著抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。转染si-HMGB1 后,显著降低MCF-7 细胞HMGB1 mRNA 和蛋白的表达（均P<0.05）;干扰HMGB1 表达进一步促进PTX抑制MCF-7 细胞的增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.05）。结论：miR-129-5p 通过下调HMGB1 的表达增强乳腺癌MCF-7 细胞对PTX的敏感性。     

siRNA沉默c-FLIP基因表达与表柔比星联合应用对MCF-7细胞凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术沉默c-FLIP基因表达联合应用表柔比星对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法 体外化学合成c-FLIP序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),转染MCF-7细胞,应用Western blot方法检测c-FLIP蛋白的抑制水平、检测Caspase-8的表达差异;应用流式细胞术检测细胞凋亡的变化及表柔比星与c-FLIP-siRNA联合应用对细胞凋亡的影响。结果 c-FLIP-siRNA能有效地抑制c-FLIP蛋白的表达(P＜0.05),促进细胞的凋亡(P＜0.05)。c-FLIP-siRNA和表柔比星联合应用较单用表柔比星能明显促进MCF-7细胞的凋亡(P＜0.05)。结论 c-FLIP-siRNA能够促进MCF-7细胞的凋亡,并且能够增强表柔比星的抗肿瘤作用。     

小干扰RNA沉默survivin基因对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin在人结肠癌细胞Caco-2中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默survivin基因对survivin蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响.方法:以脂质体LipofectAMINE 2000为载体,将针对特异靶点survivin基因的siRNA转染入人结肠癌细胞Caco-2.应用免疫细胞化学SP法和Western印迹法检测survivin蛋白表达的变化,MTT法检测细胞增殖,FCM法检测细胞凋亡.结果:免疫细胞化学检测结果显示,survivin蛋白在Caco-2细胞空白对照组、脂质体对照组及阴性错配对照组的细胞质中均呈强阳性表达,而在survivin-siRNA转染组细胞质中呈弱阳性表达;Western印迹法检测结果显示,survivin-siRNA转染组细胞的蛋白条带亮度明显低于空白对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组;MTT检测结果显示,与阴性错配对照组相比, survivin-siRNA转染组细胞生长出现明显的抑制(P＜0.05),且不同时段(24、48和72 h)的肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有统计学意义(P＜0.05);FCM检测结果显示,survivin-siRNA转染组细胞出现明显的亚二倍体峰,细胞凋亡率(9.72%)明显高于空白对照组(P＜0.01).结论:siRNA沉默survivin基因可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡.推测survivin基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点.     

RNA干扰survivin对口腔表皮样癌细胞株 KB生长的抑制作用

 摘要：目的探讨RNA干扰技术沉默survivin基因对口腔表皮样癌细胞株KB增殖和凋亡的影响。方法化学合 成靶向survivin基因的小干扰RNA片段（siRNA）,脂质体法转染KB细胞。通过RT-PCR、蛋白印迹法分别检 测survivin mRNA和蛋白表达变化,流式细胞仪检测细胞生长周期和凋亡,MTT法检测转染后KB细胞增殖情 况。结果siRNA可以有效地降低KB细胞survivin mRNA和蛋白的表达;转染后KB细胞阻滞于G2/M期,凋亡增 加,增殖受抑制。结论应用RNA干扰技术沉默survivin 在KB细胞中的表达可以有效抑制该细胞增殖、促进 癌细胞凋亡,将survivin作为口腔癌基因治疗的靶点,通过RNA干扰技术对口腔癌进行基因治疗具有一定 的可行性。     

短发夹RNA沉默S100A4基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响

目的:观察靶向S100A4基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭的抑制作用.方法:构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,经过脂质体介导将S100A4-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞.应用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,运用MTT法和FCM法检测转染后MCF-7细胞的增殖水平和凋亡率变化.转染细胞经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株, 运用Transwell小室法和划痕实验检测其侵袭力和迁移力的变化,裸鼠体内成瘤实验检测体内细胞增殖情况.结果: 经测序鉴定证实成功构建了S100A4-shRNA表达载体.所构建的S100A4-shRNA表达载体转染MCF-7细胞48 h后,能有效抑制S100A4的表达,并且显著降低MCF-7细胞增殖水平,以及诱导细胞进入晚期凋亡.稳定转染S100A4-shRNA表达载体的MCF-7细胞形态无显著变化,但其侵袭力和迁移力明显下降;裸鼠体内成瘤实验也显示实验组裸鼠移植瘤的体积和质量明显小于空白对照组和阴性对照组. 结论:S100A4-shRNA表达载体能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞中S100A4的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力.     

RNA干扰抑制人结肠癌SW480细胞EGFR的表达及其对体外生长情况影响的研究

目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。     

Ezrin siRNA对人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的影响

目的:探讨siRNA沉默Ezrin基因表达对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的影响。方法:设计siRNAEzrin,脂质体转染法将Ezrin siRNA转染入T24细胞。RT-PCR法检测Ezrin siRNA对T24细胞Ezrin基因的抑制作用,筛选有效的siRNA片段。采用绘制细胞生长曲线、MTT实验、流式细胞检测,观察siRNA干扰后细胞增殖的变化。结果:设计的siRNA能够很好地对目的基因产生沉默效应。转染siRNA后的实验组T24细胞生长速度较对照组明显减慢,差异有统计学意义。实验组T24细胞凋亡率为(30.37±8.37)%,同空白组、阴性对照组比较,凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:Ezrin siRNA可以明显下调T24细胞中Ezrin mRNA表达水平,且导致细胞生长减慢、凋亡增加。     

靶向survivin的siRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡

目的 观察靶向survivin的siRNA对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染乳腺癌细胞MCF-7,采用半定量RTPCR、免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对MCF-7细胞增殖的抑制作用;采用TUNEL法检测诱导MCF-7细胞凋亡的作用。结果靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效抑制MCF-7细胞survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为64．9％;在蛋白质水平其表达抑制率为79．7％;转染靶向survivin的siRNA真核表达载体可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为31．6％和33．0％;转染后24h可以诱导12．9％的细胞凋亡。结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。