沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中生存素表达的影响

目的:观察沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中生存素(Survivin)表达的影响.方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2随机分成4组:空白对照组;多柔比星组(1.0 mg/L);沙立度胺组(50、100、200、400 ms/mL,4个对半稀释质量浓度);联合用药组:沙立度胺(200 mg/mL)+多柔比星(1.0 mg/L).分别对HepG2细胞作用12、24、48、72 h后,应用免疫组织化学法观察对Survivin表达的影响.结果:沙立度胺单独及联合多柔比星作用于HepG2细胞可下调Survivin表达,单药沙立度胺以200 mg/L作用48 h效果最为明显,联合用药组下调Survivin表达优于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:沙立度胺可下调人肝癌细胞株HepG2 Survivin的表达,且与多柔比星有协同作用,可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一.     

沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中VEGFmRNA表达的影响

目的:观察沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2血管内皮生长因子信使核糖核酸(VEGFmRNA)表达的影响.方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2并随机分成5组;空白对照组,多柔比星组(1.0 mg/L),沙立度胺100 mg/L组,沙立度胺200 mg/L组,联合用药组:沙立度胺(200 mg/L)+多柔比星(1.0 mg/L),分别作用于HepG2细胞48 h后,应用半定量RT-PCR法观察对VEGFmRNA表达的影响.结果:沙立度胺单独及联合多柔比星作用于HepG2细胞均可下调VEGFmRNA表达.沙立度胺以100 mg/L作用效果较为明显.联合用药组下调VEGFmRNA表达,与沙立度胺100 mg/L组比较差异无显著性(P=0.225),与其余各组比较差异具有显著性(P<0.05).结论:沙立度胺可下调人肝癌细胞株VEGFmRNA的表达,但与多柔比星无明显协同作用,可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一.     

沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中VEGFmRNA表达的影响

目的:观察沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2血管内皮生长因子信使核糖核酸(VEGFmRNA)表达的影响.方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2并随机分成5组;空白对照组,多柔比星组(1.0 mg/L),沙立度胺100 mg/L组,沙立度胺200 mg/L组,联合用药组:沙立度胺(200 mg/L)+多柔比星(1.0 mg/L),分别作用于HepG2细胞48 h后,应用半定量RT-PCR法观察对VEGFmRNA表达的影响.结果:沙立度胺单独及联合多柔比星作用于HepG2细胞均可下调VEGFmRNA表达.沙立度胺以100 mg/L作用效果较为明显.联合用药组下调VEGFmRNA表达,与沙立度胺100 mg/L组比较差异无显著性(P=0.225),与其余各组比较差异具有显著性(P<0.05).结论:沙立度胺可下调人肝癌细胞株VEGFmRNA的表达,但与多柔比星无明显协同作用,可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一.     

沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2过氧化物酶体增殖物激活受体γ、环氧合酶-2表达的影响

目的:观察沙立度胺(Thalidomide,Tha)单独及联合多柔比星(Doxorubicin)对人肝癌细胞株HepG2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响.方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2并随机分成4组:空白对照组,沙立度胺组(200 mg/L),多柔比星组(1.0 mg/L),联合用药组(沙立度胺200 mg/L+多柔比星1.0 mg/L),分别作用于HepG2细胞12、24、48、72 h后,应用免疫细胞化学法观察PPARγCOX-2表达的影响.结果:沙立度胺单独及联合多柔比星可上调PPARγ,并降低COX-2表达,与对照组及多柔比星组差异有统计学意义(P<0.05).结论:沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株PPARγ、COX-2表达有明显作用,可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一.     

沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2过氧化物酶体增殖物激活受体γ、环氧合酶-2表达的影响

目的:观察沙立度胺(Thalidomide,Tha)单独及联合多柔比星(Doxorubicin)对人肝癌细胞株HepG2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响.方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2并随机分成4组:空白对照组,沙立度胺组(200 mg/L),多柔比星组(1.0 mg/L),联合用药组(沙立度胺200 mg/L+多柔比星1.0 mg/L),分别作用于HepG2细胞12、24、48、72 h后,应用免疫细胞化学法观察PPARγCOX-2表达的影响.结果:沙立度胺单独及联合多柔比星可上调PPARγ,并降低COX-2表达,与对照组及多柔比星组差异有统计学意义(P<0.05).结论:沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株PPARγ、COX-2表达有明显作用,可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一.     

多柔比星联合羟基喜树碱杀伤肝癌细胞HepG2机制研究

目的 探讨羟基喜树碱（HCPT）联合多柔比星抑制肝细胞癌转移机制. 方法 以人肝癌细胞系HepG2及正常肝细胞LO2为实验对象, 使用噻唑蓝（MTT）法比较多柔比星处理组、HCPT组及多柔比星联合HCPT组对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO2的作用差异.荧光定量PCR检测E-selectin、VEGF、MMP-9、Bcl-2及Bax mRNA的变化.Westernblot检测E-selectin和MMP-9蛋白表达的变化. 结果 MTT实验表明作用48 h后, 1.5 mg&#8226;L-1多柔比星对肝癌细胞HepG2的细胞抑制率为16.58%, 2 mg&#8226;L-1HCPT为39.92%, 而HCPT（2 mg&#8226;L-1）联合多柔比星（1, 1.5 mg&#8226;L-1）组分别为66.61%和74.47%.Real-time PCR检测表明E-selectin mRNA相对表达量多柔比星组为（52.13±0.58）, 联合组为（93.41±8.43）、MMP-9 mRNA相对表达量多柔比星组为（26.49±0.11）, 联合组为（6.48±0.05）.联合组Bcl-2及Bax表达与其他实验组比较均差异有显著性（P< 0.05）. 结论 HCPT杀伤肝癌细胞HepG2的作用优于多柔比星, HCPT联合多柔比星抑制肝癌细胞生长的效应更加明显.HCPT联合多柔比星可以明显降低HCPT及多柔比星的药物浓度, 减少这些药物对肝脏的细胞毒作用.     

多柔比星对肝癌细胞GATA4的表达及细胞凋亡的影响

目的：通过观察多柔比星（别名阿霉素）对肝癌细胞GATA4表达和细胞凋亡的影响，探讨多柔比星抑制肝癌细胞增殖的可能机制。方法：检测不同p53状态肝癌细胞中GATA4的表达。以300nmol／L多柔比星加入高表达GATA4的小鼠Hepal-6肝癌细胞培养液中。碘化丙啶染色，以流式细胞术观察用药后不同时间点（0、6、12、18、24、30h）凋亡细胞比例，MTT法观察细胞生长，半定量RT—PCR比较不同时间点GATA4、bax、bel—XL bel-2 mRNA的表达，Western blot检测GATA4和细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果：不同p53状态肝癌细胞中均有GATA4的高表达。分别与0h或6h相比，多柔比星处理后12、18、24、30h的肝癌细胞凋亡率显著增加（流式细胞术检测），且肝癌细胞增殖显著减少（MTT法）。0、6、12、18、24和30h GATA4 mRNA和GATA4蛋白质的表达呈递减趋势，Bcl—XL mRNA、PCNA蛋白质和bcl-2 mRNA／bax mRNA比值在6h后也相继递减。结论：GATA4和p53在肝癌细胞中的表达可能不相关。多柔比星可抑制GATA4的表达，而Bel—XL mRNA、bcl-2 mRNA、bcl-2／bax和PCNA表达的减少，以及凋亡细胞的增多则相对滞后。多柔比星可能通过抑制GATA4的表达来抑制肝癌细胞增殖或诱导肝癌细胞凋亡。     

多柔比星／沙利度胺联用增加重度静脉血栓形成的危险

美国的研究者报道 ,用多柔比星 /沙利度胺作为抗肿瘤治疗剂与重度静脉血栓形成 (ＤＶＴ)的发生率增加有关 ,为了考察用多柔比星 /沙利度胺治疗与ＤＶＴ之间的关系 ,研究者分析 2个研究组中的 1组登记的有症状的多样骨髓瘤患者中ＤＶＴ的发生率 ,并接受不同的协议治疗 ,第一研究组中的患者接受地塞米松 ,沙利度胺、顺铂、环磷酰胺和依托泊苷 (ＤＥＣＰ -Ｔ ;ｎ =4 0 ) ,第二研究组中的患者接受类似的剂量 ,将上述药物与多柔比星联用 (ＤＴ -ＰＡＣＥ ;ｎ =192 ) ,随访患者≥9个月。在ＳＥＣＰ -Ｔ组 (ｐ =0 .0 2 ) ,31名 (16 % )接受多柔比星…     

下调survivin表达对HL-60耐多柔比星细胞株耐药性的逆转作用

AIM: To investigate the ability of an antisense RNA eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1/survivin in downregulating the expression level of survivin mRNA and survivin protein and reversed multidrug resistance (MDR) in adriamycin-resistant HL-60/ADR cell line. METHODS: The expression of survivin mRNA was measured by RTPCR and the expression of survivin protein was measured by Western blot. Caspase-3 activity was determined by Phar Mingen colorimetric assay kit. Apoptosis was assessed by flow cytometry. The chemosensitivity of HL-60/ADR cells to adriamycin (ADR) was measured by MTT assay. RESULTS: pcDNA3.1/survivin down-regulated the expression level of survivin mRNA and survivin protein obviously, and induced apoptosis of HL-60/ADR cells in a time-dependent manner during 12-48 h. After transient transfection with pcDNA3.1/survivin for 48 h, survivin mRNA decreased by 67 %, survivin protein decreased by 57 %, caspase-3 activity increased 4.37 times, and the apoptosis rate increased by 4.41% compared with control. Compared with ADR alone, pcDNA3.1/survivin significantly reversed MDR in HL-60/ADR cells, the chemosensitivity of HL-60/ADR cells to ADR was increased to 5.36 folds. CONCLUSION: pcDNA3.1/survivin down-regulated the expression level of survivin mRNA and survivinp rotein obviously, the threshold of apoptosis was decreased and MDR was reversed.     

川楝素对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响

目的 观察川楝素对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响,并研究其诱导凋亡的机制.方法 取人肝癌HepG2细胞株培养后,随机分为对照组(不添加任何药物)、观察组(加川楝素80 mmol/ml),培养细胞24、48、72 h后,酶标仪测定人肝癌HepG2细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测人肝癌HepG2细胞周期和凋亡率.结果 两组对肝癌HepG2细胞增殖抑制率差异有统计学意义(x2=5.33,P＜0.05);两组S期、G0/G1期、M/G2期的细胞比率(t=6.31、6.26、6.56,均P＜0.05)、细胞凋亡率差异有统计学意义(x2=6.15,P＜0.05).结论 川楝素可明显抑制人肝癌细胞HepG2的恶性增殖,并诱导肿瘤细胞凋亡.     

古抑菌素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及对脆性组氨酸三联体蛋白和凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A(TSA)对人肝癌HepG2细胞的抑制作用以及对脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的机制。方法:以不同浓度TSA(125、250、500、1000、2000nmol·L-1)处理体外培养的人肝癌HepG2细胞,孵育24、48h后采用MTT法、以吸光度值和抑制率为指标检测细胞的生长抑制情况;分别用原位末端脱氧核苷转换酶标记(TUNEL)法和免疫细胞化学法检测TSA(250、1000nmol·L-1)作用后细胞凋亡率和细胞中FHIT、caspase-3、bax、bcl-2的蛋白表达;同时设立溶剂为对照组。结果:与对照组比较,不同浓度TSA作用后吸光度值降低,抑制率升高,并呈明显的剂量依赖和时间依赖关系;TUNEL阳性细胞百分率升高(P<0.01)、细胞中FHIT、cas-pase-3、bax蛋白表达增强(P<0.05),bcl-2的变化不明显(P>0.05)。结论:TSA可能通过上调FHIT、caspase-3、bax蛋白的表达而诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG 2 的影响

目的观察曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度的曲马多（0．1,1,10,100,1000,10000,100000,um01．L^-1）,对照组RPMI-1640培养液中不加曲马多,分别孵育48小时后,采用MTT比色法检测曲马多对HepG2细胞增殖活性的影响,采用流式细胞技术检测曲马多对HepG2细胞周期的影响,用Hoechst3328染色方法分析鉴定曲马多对HepG2细胞凋亡的影响。结果曲马多浓度≥1000μmol．L^-1时。细胞增殖活性较对照组显著下降（P〈0．05）;随着曲马多浓度的增加,G0／G1期比例逐渐增高,（S＋G2）／M期逐渐降低;用Hoechst33258染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分HepG2细胞发生凋亡,曲马多浓度≥10000μmol．L^-1时,荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞数占细胞总数的比例较对照组显著增加（P〈0．05）。结论曲马多在临床常用剂量范围内对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡无明显影响,浓度≥1000μmol．L^-1时可以抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,浓度≥10000μmol．L^-1时可引起人肝癌细胞株HepG2凋亡。     

氯唑沙腙对抗HepG2肿瘤细胞的作用研究

目的研究氯唑沙腙(chlorzoxazone)对HepG2细胞存活和凋亡的影响。方法采用MTT法检测氯唑沙腙对体外培养的HepG2细胞存活率的影响,通过检测LDH释放观察氯唑沙腙对HepG2细胞的致坏死作用,通过TUNEL法评价细胞凋亡率,透射镜评价细胞的超微结构。结果氯唑沙腙在50～500μmol.L-1浓度范围内对HepG2细胞的存活率均有抑制作用,呈明显的剂量依赖效应关系。荧光显微镜和透射电镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。氯唑沙腙在100、200、300及500μmol.L-1浓度下作用48h均可诱导HepG2细胞凋亡,具有明显的剂量效应关系。氯唑沙腙100、200、300及500μmol.L-14种浓度分别作用于HepG2细胞24、48及72h,发现以上各种浓度在48h即可诱导细胞凋亡,作用时间越长,凋亡率越高,有明显的时间效应关系。结论氯唑沙腙能够抑制HepG2细胞存活和诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素上调人肝癌HepG2细胞 PTEN基因表达与诱导凋亡作用

［摘要］目的研究冬凌草甲素诱导人肝细胞癌HepG2细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定冬凌草甲素诱导HepG2细胞的增长抑制；流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡；琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片；逆转录 聚合酶链式反应（RT PCR）半定量分析冬凌草甲素诱导人肝细胞癌HepG2细胞后PTEN mRNA的表达情况。结果MTT比色法测得冬凌草甲素对HepG2细胞增殖具有明显抑制作用，并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强；流式细胞术分析HepG2细胞经冬凌草甲素诱导后，细胞凋亡率随作用时间延长而增加；DNA电泳呈梯状条带。RT PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡增加而逐渐增高。 结论冬凌草甲素能够明显抑制HepG2细胞增殖，并诱导肝癌细胞凋亡， 其作用途径可能与上调PTEN mRNA表达有关。     

淫羊藿苷联合丝裂霉素对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

目的通过将淫羊藿苷(ICA)联合丝裂霉素(MMC)联合作用肝癌HepG2细胞的实验研究,探讨联合药物对HepG2细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度ICA、MMC或两药联合处理48 h后及未处理组HepG2细胞的增殖活性,通过两药相互作用系数CDI评价两种药物的相互作用性质;RT-PCR检测药物处理后HepG2细胞内凋亡抑制蛋白质FLIP mRNA水平的变化。结果单独ICA或MMC处理后,均可抑制HepG2细胞的增殖,其抑制率随着药物剂量增加而增强(P<0.05),呈剂量依赖性;两药联合应用对HepG2细胞增殖的抑制作用明显,其抑制率呈剂量依赖性(P<0.01),且两药作用具有协同效应(CDI<1);与未处理组相比,ICA或MMC处理后HepG2细胞内FLIP mRNA水平降低,尤其以联合药物处理组降低更加显著(P<0.001)。结论 ICA与MMC联用可在体外抑制肝癌细胞的增殖,两药具有协同效应,其抑制机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白FLIP的表达,从而增加癌细胞的凋亡而实现的。     

新型格列酮类化合物ANY2对HepG2细胞糖代谢的影响

目的：体外实验研究新型格列酮类化合物ANY2对糖代谢的影响。方法：采用高浓度胰岛素持续作用肝癌细胞株（HepG2）24h建立胰岛素抵抗模型（IR-HepG2）,并观察ANY2对细胞葡萄糖消耗（GC）、对细胞内糖原含量、糖异生及糖酵解作用的影响。结果：ANY2能显著增加IR-HepG2在高、中、低糖条件下的葡萄糖消耗,并呈明显的剂量依赖性;增加IR-HepG2细胞内糖原含量,但与模型组相比,仅在高浓度差异有统计学意义;减少IR-HepG2细胞以乳酸为底物的糖异生量;提高糖酵解作用中IR-HepG2细胞乳酸的生成和细胞内丙酮酸激酶（PK）活力。结论：ANY2可显著改善IR-HepG2细胞的糖代谢作用。