毒死蜱单克隆抗体的制备及ELISA检测方法研究

为了探讨建立毒死蜱残留检测方法,研究人员以毒死蜱原药与3-巯基丙酸为起始原料,合成半抗原并对其进行结构鉴定。利用该半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联制备毒死蜱人工免疫抗原和包被抗原,再取已免疫的经过筛选的Balb／c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合,用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对2株细胞进行鉴定,并测定其与其它农药的交叉反应率。     

甲型肝炎病毒H2株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 为甲型肝炎病毒(HAV)的诊断和相关研究提供高效价的抗体来源. 方法 用细胞培养获得的H_2株HAV免疫BALB/C小鼠,经细胞融合技术,ELISA筛选和有限稀释克隆化培养. 结果 获得3株能稳定分泌抗HAV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,命名为6-A8、6-F2和1-H3.经鉴定,其上清和腹水的抗体效价分别为1∶(2048～16 824)和1∶(65 536～524 288).6-A8和6-F2属IgG2a亚型,1-H3属IgG1亚型.染色体数分布在92～98之间.3株细胞株McAb分别能与HAV不同抗原位点结合. 结论 3株能稳定分泌抗HAV McAb的杂交瘤细胞株成功建立,并获得高效价的抗HAV McAb.     

抗腐败西瓦菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

目的 制备和鉴定抗腐败西瓦菌单克隆抗体(mAbs),为建立重要海洋细菌快速ELISA检测试剂盒奠定基础.方法 用灭活腐败西瓦菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗腐败西瓦菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用间接ELISA方法筛选、鉴定其与腐败西瓦菌及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价.结果 共获得4株抗腐败西瓦菌的杂交瘤细胞株(02D6、02H12、03G4、03A7),均符合杂交瘤细胞染色体特点,其培养上清效价为10-1～10-2,具有良好的特异性和免疫反应性.结论 研究制备、筛选出抗腐败西瓦菌的特异性抗体,有助于进一步建立重要海洋细菌快速检测试剂盒.     

Neutralizing antibody response and SARS severity

Using the Taiwan nationwide laboratory-confirmed severe acute respiratory syndrome (SARS) database, we analyzed neutralizing antibody in relation to clinical outcomes. With a linear mixed model, neutralizing antibody titer was shown to peak between week 5 and week 8 after onset and to decline thereafter, with a half-life of 6.4 weeks. Patients with a longer illness showed a lower neutralizing antibody response than patients with a shorter illness duration (p = 0.008). When early responders were compared with most patients, who seroconverted on and after week 3 of illness, the small proportion (17.4%) of early responders (antibody detectable within 2 weeks) had a higher death rate (29.6% vs. 7.8%) (Fisher exact test, p = 0.004), had a shorter survival time of <2 weeks (Fisher exact test, p = 0.013), and were more likely to be > 60 years of age (Fisher exact test, p = 0.01). Our findings have implications for understanding the pathogenesis of SARS and for SARS vaccine research and development.     

抗T-2毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定抗T-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,以期为T-2毒素的快速检测提供有力的抗体工具。方法:采用琥珀酸酐法将T-2毒素活化为T-2HS,T-2HS在DCC与NHS作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联合成完全抗原。以T-2HS-BSA为抗原,免疫BALB/c小鼠,用ELISA筛选、建立分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株。测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接竞争法检测单克隆抗体细胞株的特异性。结果:建立了1株稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株T-1B3,该细胞株所分泌的单隆抗体Ig亚类为IgG1,ELISA检测结果表明抗T-2毒素抗体可以与T-2毒素发生特异性反应,工作浓度为1:6.5×104,IC50为3.6 ng/ml。该抗体与HT-2毒素的交叉反应为65.9%,与黄曲霉毒素无交叉。结论:制备出能分泌具有较高特异性和亲和力的抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

胸腺肽α1单克隆抗体的制备及其鉴定

目的:研制胸腺肽α1(Tα1)单克隆抗体，为Tα1作用机制的阐明奠定基础。方法:用戊二醛将Tα1和牛血清白蛋白进行交联，以其交联物为抗原，按常规淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，并采用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和Western免疫印迹来鉴定单克隆抗体的特异性。结果:建立了分泌抗Tα1抗体的杂交瘤细胞株，能特异性地与Tα1结合，但与单纯牛血清白蛋白、酵母抽提物和转染Tα1酵母未诱导表达产物无反应。其抗体效价为1：10240，Ig亚类为IgG2b。结论：本研究建立了针对Tα1高效价、高特异性单克隆抗体细胞株。     

汉坦病毒单克隆抗体的制备和鉴定

本文用汉坦病毒A16和R22株活毒免疫BALB／c小鼠，取牌细胞与sp2／0骨髓瘤细胞融合，制备了6株分泌抗汉坦病毒单克隆抗体的杂交癌细胞系。单克隆抗体IgG亚类鉴定表明，其中2株为IgG1，1株为IgG2b，3株为IgG2a。用间接免疫荧光检测单抗腹水滴度，分别在1：10240～1：81920之间；用反向被动血凝抑制试验测定单抗腹水，滴度均低于1：20。免疫印迹试验表明，6株单克隆抗体均为抗核蛋白单抗。对已知型别病毒的反应话表明，其中3株为组特异性单抗，1株为汉滩型特异性单抗，2株为汉城型特异性单抗。还用6株单抗对宁夏新分离毒株进行抗原性分析。     

禽流感病毒研究进展及抗H7N9型病毒疫苗与抗体研究

禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是一种可引起急性呼吸道传染病的人畜共患病毒。自2013年我国出现了全球首例人感染H7N9型AIV病例以来,人们对该病毒产生了担忧与恐慌。AIV在全球广泛传播,人感染不同型别AIV事件也持续发生,造成了巨大的经济损失。目前尚无针对该病的特异性治疗措施与药物,...     

SARS患者7年随访血清抗体变化规律及胃肠道免疫组化研究

目的 连续7年随访严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度变化,应用胃肠镜观察胃肠道的病理改变并进行免疫组织化学研究.方法 应用免疫荧光(IFA)和双抗原夹心ELISA方法,对SARS患者发病1年后采用每隔1年检测一次血清SARS病毒(SARS-CoV)特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度;用抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体对SARS恢复期患者胃肠道组织进行免疫组化研究.结果 14例SARS患者特异性IgG抗体1年后平均滴度为1/71(95%CI:1/58～1/85),连续追踪7年呈下降趋势,7年后大部分患者IgG抗体滴度消失,特异性IgM抗体1年后消失,N蛋白抗体1年后平均滴度为1/146(95%CI:1/122～1/171),与IgG抗体变化同时呈下降趋势.7年后其中9例患者检测N蛋白抗体全部为阴性,另5例临床症状较重的患者,N蛋白抗体仍检测阳性,其中3例N蛋白抗体滴度维持在1/156～1/210之间,2例N蛋白抗体滴度接近正常.该5例患者行胃肠镜检测和细胞免疫组化试验,血中N蛋白抗体检测阳性的3例患者胃组织黏液腺上皮细胞免疫组化呈阳性表达,大部呈胞浆着色.其中1例患者在肠组织浆液柱状上皮及间质细胞亦有表达,另2例血清N蛋白抗体检测接近正常的患者,细胞免疫组化为阴性.5例患者病理活检:1例明确诊断为"胃印戒细胞癌并直肠多发转移"、1例"胃息肉"、1例"浅表性胃窦炎",其余2例正常.结论 SARS患者血清特异性IgM、IgG、N蛋白抗体在恢复期呈下降趋势,7年后大部分消失;N蛋白抗体变化规律与病情轻重程度有关.     

N255 is a key residue for recognition by a monoclonal antibody which protects against Yersinia pestis infection

Mab7.3 to Yersinia pestis LcrV antigen (LcrV_Ype) protected J774A.1 macrophages in vitro from killing by a Yersinia pseudotuberculosis strain expressing LcrV_Ype. Of 4 site-directed mutations in the coiled-coil region (148–169) and 7 mutations in the 225–255 sequence of LcrV_Ype, only the mutation of N255 to D255, abrogated the binding of Mab7.3 and reduced its protective capacity against plague. Since the Mab7.3 epitope in LcrV_Ype (135–275) encompasses a region (136–180) thought to be exposed on the injectisome, we suggest that Mab7.3 protects by binding to LcrV_Ype and interfering with protein–protein interactions necessary for type three secretion.     

乙肝病毒突变体HBx-d382特异性抗体的制备及鉴定

目的制备乙肝病毒X基因突变体HBx-d382特异性抗体。方法运用生物信息学和多肽合成法制备HBx-d382特异性多肽(HBx-d382P),采用高效液相色谱法(HPLC)和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)测定合成多肽的纯度和分子量。用化学方法将多肽与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联成多肽抗原HBx-d382P-KLH,并经完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)乳化,免疫新西兰雄性大白兔。用ELISA鉴定抗血清效价、亲和层析法纯化抗体、Dot blot评价抗体特异性。结果经HPLC和ESI-MS分析,合成多肽符合HBx-d382特异性抗体制备的要求。ELISA和Dot blot试验结果显示,兔抗血清的效价为6.4×104,纯化后的HBx-d382抗体特异性高。结论获得了高效价高特异性的HBx-d382多克隆抗体,为进一步研制HBx-d382免疫检测试剂盒打好了基础。