miR-199a-3p通过调控CBX7对肺癌细胞A549侵袭与转移的影响

目的: 探讨miR-199a-3p负调控色素框同源蛋白7（pigment box homologous protein 7, CBX7）促进肺癌细胞A549的侵袭与迁移能力。方法： :qRT-PCR法检测肺癌患者的肺癌组织、癌旁组织、发生转移的患者的肺癌组织及肺癌细胞系中miR-199a-3p、CBX7的表达量,分析miR-199a-3p与临床特征的关系。荧光素酶报告分析实验检测miR-199a-3p可与CBX7 mRNA的结合区域,qRT-PCR法检测过表达miR-199a-3p对肺癌细胞A549中的CBX7 mRNA表达的影响;Western blot法检测过表达miR-199a-3p对肺癌细胞A549中的CBX7蛋白表达的影响。Western blot检测在肺癌组织和癌旁组织中CBX7蛋白的表达。MTT实验、流式细胞法、Transwell实验检测miR-199a-3p与CBX7对肺癌细胞A549增殖、侵袭、迁移能力及周期S期聚集的调控。结果 : 肺癌组织中miR-199a-3p的相对表达量显著高于癌旁组织,发生转移患者的肺癌组织中miR-199a-3p的相对表达量显著升高;各肺癌细胞株中miR-199a-3p的表达量均显著高于正常肺细胞;miR-199a-3p的表达量与患者肿瘤 TNM分期、肺癌转移有关。CBX7是miR-199a-3p可能作用的靶基因;miR-199a-3p可特异性与CBX7 mRNA的3’UTR区域内的位点互补结合, 进而抑制CBX7的表达;miR-199a-3p mimics转染组CBX7的mRNA及蛋白表达水平均显著降低。肺癌组织中CBX7 mRNA、蛋白的相对表达量显著低于癌旁组织;各肺癌细胞株中CBX7 mRNA的表达水平均显著低于正常肺细胞。miR-199a-3p抑制CBX7,促进肺癌细胞A549增殖、侵袭、迁移能力及周期S期的聚集;miR-199a-3p可下调CBX7促进肺癌细胞增殖。结论: miR-199a-3p能通过负调控CBX7抑制肺癌的发展,其可能成为肺癌诊断及治疗的新靶向。     

BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p影响NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡

目的:探讨BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:qRT-PCR检测BSN-AS2和miR-219a-5p在NSCLC组织和细胞系中的表达;原位杂交FISH检测BSN-AS2和miR-219a-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-219a-5p 靶向调控BSN-AS2;Transwell、CCK8和Tunel细胞凋亡分别检测BSN-AS2-miR-219a-5p轴对侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响;构建NSCLC裸鼠皮下移植瘤模型进行验证BSN-AS2-miR-219a-5p轴的调控作用。结果:BSN-AS2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-219a-5p为低表达,BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p;siBSN-AS2组抑制NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,且促进细胞凋亡,而In-miR-219a-5p组促进NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡,siBSN-AS2+In-miR-219a-5p组相比siBSN-AS2组促进了NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡;BSN-AS2增加体内肿瘤细胞增殖和肿瘤生长,miR-219a-5p则能抑制。结论:BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p促进NSCLC细胞侵袭、迁移和增殖,且抑制凋亡,而干扰BSN-AS2-miR-219a-5p轴可能作为抗NSCLC的新靶点。     

lncRNA BLACAT1靶向结合miR-29a-3p调控甲状腺癌细胞TPC-1的生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA BLACAT1(lncRNA BLACAT1)调控microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能机制。方法:收集2018年06月至2019年03月在我院行甲状腺癌切除术的31例患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p在甲状腺癌组织、癌旁组织、5种甲状腺癌细胞系（SW579、 PDTC-1、 HMGA1、 TPC-1、 KAT-5）及正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平;调控TPC-1甲状腺癌细胞系中lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用生物信息分析和双荧光素酶报告基因法预测和验证lncRNA BLACAT1与miR-29a-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌组织和细胞系中lncRNA BLACAT1的表达水平显著上调,miR-29a-3p的表达水平显著下调（P＜0.05）;过表达lncRNA BLACAT1促进TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭;在甲状腺癌组织中lncRNA BLACAT1的表达水平与miR-29a-3p的表达水平呈负相关（r2 =0.492,P＜0.001）;双荧光素酶分析证实lncRNA BLACAT1能特异性结合miR-29a-3p,并能降低其表达;过表达miR-29a-3p抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,且miR-29a-3p可以抑制由lncRNA BLACAT1过表达引起的TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强。结论:lncRNA BLACAT1通过靶向调控miR-29a-3p表达影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而促进甲状腺癌的发展。     

miR-26a靶向MMP16参与调控胃癌细胞侵袭作用研究

背景与目的：胃癌发生侵袭转移是导致患者预后不良的重要因素。本研究旨在明确miR-26a在调控胃癌细胞运动侵袭中的作用及其可能机制。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测胃癌组织细胞中miR-26a表达情况,体外通过CCK-8法、平板克隆形成实验和Matrigel-Transwell实验评价miR-26a对人胃癌细胞增殖、运动和侵袭能力的影响。荧光素酶报告基因系统评估miR-26a对下游靶基因的调控作用。结果：胃癌组织中miR-26a表达较癌旁组织明显下降。miR-26a体外对胃癌细胞增殖无明显影响,但可显著抑制胃癌细胞的运动和侵袭。相反,抑制miR-26a表达可促进胃癌细胞的侵袭能力。生物信息学分析提示,基质金属蛋白酶16(matrix metalloproteinase 16,MMP16)为miR-26直接调控靶基因,miR-26a可抑制胃癌细胞MMP16 miRNA和蛋白的表达。荧光素酶报告基因检测提示,miR-26a可与MMP16 mRNA 3’UTR结合诱导其转录后抑制。进一步研究提示,MMP16 siRNA对胃癌细胞侵袭具有模拟miR-26a作用,而过表达MMP16可拮抗miR-26a对胃癌细胞侵袭的影响。结论：miR-26a可通过靶向MMP16来抑制胃癌细胞运动侵袭,miR-26a可作为抑制胃癌细胞侵袭的重要干预靶点。     

miRNA-30a-5p和异黏蛋白对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的探讨miRNA-30a-5p(miR-30a-5p)与异黏蛋白(MTDH)体外对人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库数据, 分析数据库中112例乳腺癌患者癌及癌旁组织MTDH和103例乳腺癌患者癌及癌旁组织miR-30a-5p的表达情况;采用Pearson相关性分析法分析数据库中1 222例乳腺癌患者MTDH与miR-30a-5p的相关性;数据更新时间为2022年8月。将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(转染阴性对照序列)、miR-30a-5p过表达组(转染miR-30a-5p模拟物)、siMTDH组[转染针对MTDH基因的小干扰RNA(siMTDH)]、siMTDH+miR-30a-5p过表达组(同时转染siMTDH、miR-30a-5p模拟物);采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力, 采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力, Transwell法检测细胞侵袭能力, 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞miR-30a-5p、MTDH、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、波形蛋白(vimentin)...     

miR-125a-3p下调胃癌细胞NRG1表达并抑制细胞增殖

目的:探讨microRNA-125a-3p(miR-125a-3p)在胃癌细胞恶性增殖中的作用及调控机制。方法:qRT-PCR法检测各肿瘤细胞系及正常对照细胞系中miR-125a-3p的表达,应用microRNA类似物(Mimic及Inhibitor)转染技术改变细胞内miR-125a-3p表达。Western-blot检测NRG1蛋白表达水平的改变。XTT、平板克隆及裸鼠成瘤试验检测处理后胃癌细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果:miR-125a-3p在多个胃癌细胞系中表达均低于永生化胃黏膜上皮细胞系(P<0.01)。利用类似物转染可以有效改变肿瘤细胞miR-125a-3p的表达(P<0.01)。miR-125a-3p过表达可以降低NRG1蛋白的表达、抑制细胞周期进展,并降低胃癌细胞系的体外和在体增殖能力,抑制miR-125a-3p表达可以见到相反结果。结论:miR-125a-3p可通过调控NRG1表达在胃癌中起到抑癌作用。miR-125a-3p可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,因此具有成为胃癌治疗新策略候选靶点的可能。     

LncRNA UCA1对肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究长链非编码RNA (LncRNA) UCA1对肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响及其机制。方法 运用qRT-PCR法检测肺癌细胞A549、H1299和人正常肺细胞HBE中UCA1、miR-513a-5p表达。将si-con组(转染si-con)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、IR+si-con组(转染si-con+照射)、IR+si-UCA1组(转染miR-NC+照射)、IR+miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics+照射)、IR+miR-NC组(转染miR-NC+照射)、IR+si-UCA1+anti-miR-513a-5p组(共转染si-UCA1和anti-miR-513a-5p+照射)均用脂质体法转染至A549、H1299细胞,然后部分组进行4Gy照射。MTT法检测各组细胞增殖,克隆形成实验检测细胞增敏比,流式细胞术检测各组细胞凋亡,双荧光素没报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果 与HBE细胞相比,A549、H1299细胞中UCA1表达显著升高(P<0.05),miR-513a-5p表达显著降低(P<0.05)。抑制UCA1、过表达miR-513a-5p均可明显抑制A549、H1299细胞增殖、促进凋亡、提高放射敏感性(放射增敏比为1.897、2.146和1.615、1.872)。miR-513a-5p可抑制野生型UCA1细胞的荧光活性,且UCA1可负向调控miR-513a-5p的表达。抑制miR-513a-5p可逆转抑制UCA1对细胞的放射敏感性的增强作用。结论 抑制LncRNA UCA1可增强放射对肺癌细胞敏感性,其机制可能与靶向抑制miR-513a-5p有关。     

miR-146b-5p对胶质瘤TJ905细胞生长的抑制作用及其机制探讨

  目的  在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中观察miR-146b-5p对MMP16的调控作用及其对细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响。  方法  分别用无义序列表达质粒(对照组)和miR-146b-5p表达质粒(P-miR-146b-5p组)转染TJ905细胞, 用qRT-PCR和Western blot检测两组细胞miR-146b-5p的表达水平及MMP16 mRNA和蛋白的表达水平, 用体外迁移侵袭实验及流式细胞术检测转染细胞迁移、侵袭、细胞周期分布和凋亡水平, 并分析这些变化的相互关系。  结果  与对照组相比, p-miR-146b-5p组MMP16 mRNA和蛋白表达量明显降低, 二者间呈正相关且均与miR-146b-5p表达量呈负相关。p-miR-146b-5p组侵袭和迁移细胞数均明显低于对照组, 并均与同组MMP16蛋白表达量呈正相关; 而凋亡水平明显高于对照组, 并与同组miR-146b-5p表达量呈正相关, 但两组细胞周期时相分布无显著性差异。  结论  miR-146b-5p是胶质瘤的抑瘤miRNA; 补充外源性miR-146b-5p可促进胶质瘤细胞凋亡, 并通过抑制靶基因MMP16表达阻止其侵袭迁移; 提示miR-146b-5p在恶性胶质瘤基因治疗方面具有重要的潜在应用价值。      

miR-218-5p靶向下调LPAR3抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-218-5p通过调控LPAR3表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常宫颈细胞H8和4种宫颈癌细胞（SiHa、HeLa、MS751和HT-3）中miR-218-5p和LPAR3的表达。以HeLa细胞为后续研究对象,分别构建过表达miR-218-5p和敲减LPAR3的HeLa细胞株,CCK-8法检测细胞存活情况,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白CyclinD1、迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218-5p和LPAR3的靶向调控关系。结果:与人正常宫颈细胞H8相比,4种宫颈癌细胞miR-218-5p的表达显著下调,LPAR3的表达显著上调。过表达miR-218-5p或敲减LPAR3均可抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达。LPAR3是miR-218-5p的靶基因,miR-218-5p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可逆转miR-218-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:miR-218-5p通过靶向下调LPAR3表达抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-218-5p/LPAR3分子轴有望成为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。     

miR-125a-5p通过下调BAG4表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-125a-5p通过调控Bcl-2相关永生基因4(Bcl-2-associated athanogene 4,BAG4)的表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭的分子机制.方法:选用2014年1月至2015年12月兰州大学第一医院手术切除的82例胃癌组织标本及配对的癌旁组织以及人胃癌细胞系MGC803、BGC823...     

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7 侵袭

目的：探究miR-130a-3p 通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法：收集承德医学院附属医院2018 年1 月至10 月收治的22 例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-453）和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用qPCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p 的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics 组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752（MET小分子抑制剂）转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor 组,然后采用CCK-8 法和Transwell 实验分别检测MCF-7 细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7 细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p 与MET之间的靶向关系。结果：miR-130a-3p 在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p 可抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p 出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p 靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p 负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论：miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞EMT过程,进而抑制MCF-7 细胞侵袭转移。     

lncRNA GAS6-AS2靶向miR-125a-3p调控肺癌A549细胞紫杉醇敏感性

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GAS6-AS2对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭及紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响及其分子机制.方法:用qPCR法检测肺癌A549和A549/PTX细胞中GAS6-AS2和miR-125a-3p 的表达水平.用脂质体转...     

miR-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性北大核心

目的:探索miR-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中miR-30a-5p表达情况;应用miR-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测miR-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选miR-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-PCR、Western Blotting检测靶基因表达与miR-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:miR-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(P<0.001);miR-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为P<0.05)。靶基因预测及验证结果显示,miR-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是miR-30a-5p的一个靶基因,过表达miR-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为P<0.05)。结论:miR-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。     

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p（microRNA-125a-5p,miR-125a-5p）对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）的方法检测人肺上皮正常细胞（BEAS-2B）与非小细胞肺癌细胞系（A549、A549/DDP、SK-MES-1）中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞的存活率与半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高（P＜0.05）;过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著增加（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2（P＜0.05）;过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.05）。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

miR-513a-5p慢病毒载体的构建及其对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响

目的:构建miR-513a-5p慢病毒过表达载体,转染人骨肉瘤细胞株,观察miR-513a-5p对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响。方法:PCR法扩增人miR-513a-5p基因,克隆入pLentis-CMV-GFP-MCS-PGK-PURO载体获得重组质粒pLentis-miR513a,双酶切鉴定并测序后将正确的重组质粒和对照质粒转染293FT细胞制备慢病毒,分别转染骨肉瘤HOS和U2OS细胞,qRT-PCR法及荧光显微镜鉴定转染结果。克隆形成实验、MTT法检测miR-513a-5p高表达HOS和U2OS细胞在X射线照射下细胞存活情况。结果:双酶切及测序结果确定成功构建miR-513a-5p慢病毒载体pLentis-miR513a。qRT-PCR结果提示,转染骨肉瘤细胞株后miR-513a-5p表达显著升高。克隆形成实验结果显示miR-513a-5p高表达后骨肉瘤细胞在X射线照射下细胞增殖减慢。MTT结果提示miR-513a-5p高表达骨肉瘤细胞经X射线照射后细胞存活减少。结论:成功构建了miR-513a-5p慢病毒载体,建立了高效稳定表达miR-513a-5p的骨肉瘤细胞株,高表达miR-513a-5p能显著增加X射线照射后骨肉瘤细胞的放疗敏感性。