1型阈值前期和阈值期早产儿视网膜病变血小板参数分析

目的　观察不同时间段１型阈值前期和阈值期早产儿视网膜病变（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ,ＲＯＰ）患儿血小板相关参数的变化,分析其与ＲＯＰ发生发展的内在联系。方法收集我院新生儿病房２０１３年１月至２０１４年１２月诊治的早产儿临床资料,纳入早产儿分为１型阈值前期与阈值期ＲＯＰ组和对照组,对照组出生孕周与ＲＯＰ组匹配,眼底筛查未见明显ＲＯＰ病变,并对两组矫正胎龄为３２～３３周、３６～３７周、４０～４１周、４４～４５周者的血小板平均体积（ｍｅａｎｐｌａｔｅｌｅｔｖｏｌｕｍｅ,ＭＰＶ）和血小板计数（ｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｕｎｔｓ,ＰＣ）进行比较。结果　与对照组相比,ＲＯＰ组患儿３６～３７周和４０～４１周的ＭＰＶ［（１０．８６±１．８７）ｆＬ、（１０．１２±１．４５）ｆＬ,（１０．７４±１．６６）ｆＬ、（１０．１７±１．５２）ｆＬ］显著增加（均为Ｐ＜０．０５）;３２～３３周和４４～４５周ＭＰＶ［（１０．１８±１．５４）ｆＬ、（１０．３７±１．９１）ｆＬ,（１０．５６±１．２１）ｆＬ、（１０．４２±０．９７）ｆＬ］差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。与对照组相比,ＲＯＰ组患儿３２～３３周、３６～３７周、４０～４１周、４４～４５周的ＰＣ［（２８８．００±１４３．２５）×１０９Ｌ－１、（２９１．００±１１３．２７）×１０９Ｌ－１,（２７７．２３±９２．８８）×１０９Ｌ－１、（２６５．４９±１０２．１３）×１０９ Ｌ－１,（３０６．００±１７１．８３）×１０９Ｌ－１、（２８４．００±１４３．５６）×１０９Ｌ－１,（３１１．４３±１３１．２４）×１０９ Ｌ－１、（３０３．６２±９４．５５）×１０９Ｌ－１］差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。进一步进行多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析,结果显示ＭＰＶ与１型阈值前期和阈值期ＲＯＰ发生相关。结论　ＭＰＶ的变化可能与ＲＯＰ的病情严重程度和检查时间的差异相关;ＭＰＶ增高是１型阈值前期和阈值期ＲＯＰ发生的高危因素,活化的血小板在１型阈值前期和阈值期ＲＯＰ的发生发展中发挥重要作用。     

二氢睾酮对小鼠角膜上皮细胞Mucins表达的影响

目的　探讨不同浓度二氢睾酮（ＤＨＴ）对角膜上皮黏蛋白Ｍｕｃｉｎｓ表达的影响。方法　体外原代培养ＢＡＬＢ／ｃ小鼠角膜上皮细胞,分为空白对照组以及ＤＨＴ干预组,ＤＨＴ干预组给予不同浓度（０．０５ｇ?Ｌ－１、０．１０ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１、１．００ｇ?Ｌ－１）ＤＨＴ干预２４ｈ;采用ＲＴ-ＰＣＲ方法与免疫荧光组织化学方法分别检测Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ以及蛋白水平的表达。结果　Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ检测结果显示:空白对照组,０．０５ｇ?Ｌ－１、０．１０ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ１ｍＲＮＡ相对表达量分别为１．００±０．００、０．１５±０．０１、１．４０±０．０９、０．０７±０．１１、０．０６±０．０２;Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ相对表达量分别为１．００±０．００、０．３０±０．２８、１．３６±０．０５、０．４３±０．０１、０．４５±０．０１,０．１０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ表达水平较空白对照组明显增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;０．０５ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组表达均下降,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。免疫荧光化学检测结果示,以上各组Ｍｕｃ１ＯＤ值分别为１．８６±０．０１、１．８２±０．０１、２．０３±０．０４、１．８８±０．０１、１．８１±０．０２,０．１０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ１表达较空白对照组明显增加,０．０５ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组表达均下调,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;Ｍｕｃ４ＯＤ值分别为１．８６±０．００、１．７７±０．０１、１．８４±０．０２、１．９２±０．００、１．６９±０．０５,０．１０ｇ?Ｌ－１与０．２０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ４表达较空白对照组明显增加,０．０５ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组表达均下调,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。０．５０ｇ?Ｌ－１与１．００ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ可影响细胞体外生长。结论　一定浓度ＤＨＴ（如０．１０ｇ?Ｌ－１）可上调小鼠角膜上皮细胞Ｍｕｃ１与Ｍｕｃ４的表达水平;而高浓度（０．５０ｇ?Ｌ－１与１．００ｇ?Ｌ－１）ＤＨＴ对角膜上皮细胞存在毒性作用。     

缺氧、氧化应激对视网膜色素上皮细胞增殖及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的　观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞增殖的影响及ＧＲＰ７８表达的变化。方法　体外培养人ＲＰＥ细胞,采用ＣｏＣｌ２诱发细胞缺氧模型、Ｈ２Ｏ２诱发氧化应激模型。实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为１００μｍｏｌ?Ｌ－１、２００μｍｏｌ?Ｌ－１、４００μｍｏｌ?Ｌ－１、８００μｍｏｌ?Ｌ－１的ＣｏＣｌ２、Ｈ２Ｏ２作用１２ｈ,用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在ＣｏＣｌ２浓度为２００μｍｏｌ?Ｌ－１、Ｈ２Ｏ２浓度为４００μｍｏｌ?Ｌ－１的基础上,分别选取药物作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈ３个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测ＧＲＰ７８蛋白的表达情况。结果　量-效关系组:不同浓度ＣｏＣｌ２组ＲＰＥ细胞活性与空白对照组相比均明显下降（均为Ｐ＜０．０５）;４００μｍｏｌ?Ｌ－１及８００μｍｏｌ?Ｌ－１Ｈ２Ｏ２组细胞存活率较空白对照组均明显下降（均为Ｐ＜０．０５）。时-效关系组:空白对照组ＧＲＰ７８表达阳性细胞率为（５．４±３０）％;ＣｏＣｌ２作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈＧＲＰ７８阳性细胞率分别为（３４２±７１）％、（５４．４±９．１）％、（３４．７±６．８）％;Ｈ２Ｏ２作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈＧＲＰ７８阳性细胞率分别为（３７．８±７１）％、（５７．４±５．１）％、（４２．５±３．９）％。经统计学分析,ＣｏＣｌ２、Ｈ２Ｏ２处理８ｈ后,ＲＰＥ细胞中ＧＲＰ７８表达均较空白对照组明显升高（均为Ｐ＜００１）,作用１２ｈ时ＧＲＰ７８的表达量最高,作用１６ｈ时ＧＲＰ７８的表达量又有下降。结论　ＧＲＰ７８可以作为ＲＰＥ细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,ＧＲＰ７８的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系。     

d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响

目的　研究ｄ－δ－三烯生育酚对人晶状体上皮ＳＲＡ细胞增殖和凋亡的影响,探讨后发性白内障治疗的新方法。方法　将人晶状体上皮ＳＲＡ细胞分为对照组和实验组,对照组不加药物干预,实验组设３个药物浓度,分别为３０μｍｏｌ?Ｌ－１、４０μｍｏｌ?Ｌ－１、５０μｍｏｌ?Ｌ－１的ｄ－δ－三烯生育酚,药物干预人晶状体上皮ＳＲＡ细胞２４ｈ和４８ｈ后,采用ＭＴＴ法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色和流式细胞仪分析人晶状体上皮ＳＲＡ细胞的增殖和凋亡情况。结果　ｄ－δ－三烯生育酚呈浓度－时间依赖性抑制人晶状体上皮ＳＲＡ细胞的增殖,诱导其凋亡。３０μｍｏｌ?Ｌ－１、４０μｍｏｌ?Ｌ－１、５０μｍｏｌ?Ｌ－１的ｄ－δ－三烯生育酚干预４８ｈ对ＳＲＡ细胞的增殖抑制率分别为（３２．２３±５．２５）％、（５４．１７±１．６３）％和（８６．８０±０．８５）％,与对照组比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;干预２４ｈ增殖抑制率分别为（１２．７０±１．２０）％、（１９．５３±０．９５）％和（５１．８３±６．１１）％,与对照组相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。干预２４ｈ后,各实验组细胞晚期凋亡率Ｑ２分别为（５．８７±０．１５）％、（１１．３７±０．８５）％、（２２．７７±２．４１）％,与对照组的（１．１０ ±０．１７）％相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;各实验组细胞早期凋亡率Ｑ４分别为（３．５７±０．３２）％、（４．２０±０．４０）％、（８．００±０．５０）％,与对照组的（２．５３±０．１５）％相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ｄ－δ－三烯生育酚抑制人晶状体上皮ＳＲＡ细胞增殖,诱导其凋亡,具有抗晶状体上皮细胞增殖的生物学作用,为治疗后发性白内障提供一种新思路。     

平均血小板容积与糖尿病视网膜病变严重程度的横断面研究

目的　评估平均血小板容积（ｍｅａｎｐｌａｔｅｌｅｔｖｏｌｕｍｅ,ＭＰＶ）与糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）严重程度的关系。方法　横断面研究。选取所有于２０１２年１月至２０１３年１２月在我院眼科中心住院的ＤＲ患者１３７例（非增殖期６７例,增殖期７０例）,同时选取７２例无ＤＲ糖尿病患者和７０例无糖尿病健康人群进行对照。收集人口学资料及疾病史,抽空腹血行ＭＰＶ和血小板计数等检查。结果　健康对照组人群ＭＰＶ水平［７．２（５．６－９．９）ｆＬ］显著低于糖尿病各组（均为Ｐ＜０．０５）,且随ＤＲ病变分级的增加,ＭＰＶ水平显著增加,分别为７．８（５．７－１０．１）ｆＬ、８．３（５．５－１１．０）ｆＬ和８．９（５．９－１２．５）ｆＬ,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析显示,随着ＭＰＶ水平升高,非增殖期（ＯＲ:１．３８２;９５％ＣＩ:１．２８０－１．４８４）和增殖期ＤＲ（ＯＲ:１４８１;９５％ＣＩ:１．３７０－１．５９２）的患病风险显著增加（均为Ｐ＜０．００１）。结论　ＭＰＶ水平随ＤＲ严重程度增加而升高;随着ＭＰＶ水平升高,非增殖期和增殖期ＤＲ患病风险增加。     

双氯芬酸钠滴眼液控制准分子激光角膜切削术后眼痛

本研究将病人随机分为３组，每组各３０人（６０眼），通过对照组及不同的用药来观察双氯芬酸钠控制准分子激光角膜切削术后的眼部疼痛的有效性和安全性。结果表明：角膜伤口的愈合时间，对照组、药物Ⅰ组和Ⅱ组分别为３．５７±０．９１天、３．９３±１．３０天和３．５７±１．０５天，无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；术后３月的屈光度分别为０．０９±１．０６Ｄ、－０．２９±０．９６Ｄ和－０．２１±１．０９Ｄ，无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；术后３月的角膜混浊分别为０．２５±０．４７级、０．３１±０．５４级和０．２５±０．５１级，无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；用药组病人对疼痛控制满意。双氯芬酸钠控制准分子激光角膜切削术后的眼部疼痛是安全有效的     

视网膜色素变性黄斑区视网膜FD-OCT及mfERG观察

目的　利用频域光学相干断层扫描（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｄｏｍａｉｎｏｐｔｉｃａｌｃｏｈｅｒｅｎｃｅｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ,ＦＤ-ＯＣＴ）及多焦视网膜电图（ｍｕｌｔｉ-ｆｏｃａｌｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｒｇｒａｍ,ｍｆＥＲＧ）观察视网膜色素变性（ｒｅｔｉｎｉｔｉｓｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ,ＲＰ）患者黄斑区视网膜图像特征。方法　选取临床确诊的ＲＰ患者３０例（３０眼）作为ＲＰ组,年龄相匹配的健康人３０人（３０眼）作为对照组。采用ＦＤ-ＯＣＴＲＴＶｕｅ的Ｅ-ＭＭ５扫描模式对５ｍｍ×５ｍｍ范围的黄斑中心视网膜进行检测,获取视网膜厚度及内、外层视网膜容积,同时采用ＲＥＴＩｐｏｒｔ视觉电生理系统测量ｍｆＥＲＧ,对两组测量结果进行比较分析。结果　ＲＰ组视网膜黄斑中心凹厚度为（１４０．８０±１９．２５）μｍ,对照组为（１６５．９１±１４．３９）μｍ,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＲＰ组黄斑区外层视网膜体积为（３．６１±０．１８）ｍｍ３,低于对照组（４．５９±０．１１）ｍｍ３,差异有显著统计学意义（Ｐ＜０．００１）。ＲＰ组黄斑区内层视网膜体积为（２．２８±０．１０）ｍｍ３,对照组为（２．３０±０．１０）ｍｍ３,两组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＲＰ组ｍｆＥＲＧ各环Ｎ１、Ｐ１波反应密度值均低于对照组,且差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＲＰ组Ｎ１、Ｐ１波３～５环的潜伏期较对照组显著延长,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＦＤ-ＯＣＴ和ｍｆＥＲＧ相结合可有效评价ＲＰ患者视网膜功能及形态特点。     

不同放射剂量下大鼠视网膜组织形态与氧化应激因子的变化

目的　通过直线加速器照射大鼠眼部制作放射性视网膜病变大鼠模型,观察大鼠视网膜组织形态与氧化应激因子的变化。方法　选取４５只２个月龄ＳＤ大鼠,随机分为正常对照组、１０Ｇｙ组、３０Ｇｙ组,每组１５只。直线加速器照射眼部,单次剂量１０Ｇｙ。１０Ｇｙ组放射１次。３０Ｇｙ组每周放射１次,连续３周,合计剂量３０Ｇｙ。放射后正常饲养３个月,处死各组大鼠并取眼球。采用ＨＥ染色观察视网膜组织形态,黄嘌呤法测视网膜超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ）活性、丙二醛（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ,ＭＤＡ）含量以及ＥＬＩＳＡ法测定活性氧自由基（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ,ＲＯＳ）含量。结果　造模后３个月,３０Ｇｙ组视网膜各层组织结构松散,神经节细胞层及内核层水肿,１０Ｇｙ组模型大鼠视网膜仅神经节细胞层轻微水肿。与正常对照组相比,１０Ｇｙ组ＳＯＤ活性、ＭＤＡ及ＲＯＳ含量分别为（８８．８０±１６．４４）Ｕ·ｍｇｐｒｏｔ－１（Ｐ＜０．０５）、（１１．０２±４．０２）ｎｍｏｌ·ｍｇｐｒｏｔ－１（Ｐ＜０．０１）、（１６．８９±６．０２）Ｕ·ｍＬ－１（Ｐ＜０．０５）,差异均有统计学意义;３０Ｇｙ组ＳＯＤ活性、ＭＤＡ及ＲＯＳ含量分别为（７８．５０±１８．０９）Ｕ·ｍｇｐｒｏｔ－１、（１５．２６±５．３４）ｎｍｏｌ·ｍｇｐｒｏｔ－１、（２８．６６±８．８２）Ｕ·ｍＬ－１,三者差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。与１０Ｇｙ组比较,３０Ｇｙ组ＭＤＡ含量和ＲＯＳ含量均升高（均为Ｐ＜０．０５）。结论　直线加速器放射造模时,３０Ｇｙ为最佳放射造模剂量,造模后大鼠视网膜ＳＯＤ活性降低,ＭＡＤ及ＲＯＳ含量均升高,可能是放射性视网膜病变的发病基础。     

银杏内酯B对H2O2诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨银杏内酯Ｂ对体外培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）细胞氧化损伤的保护作用及可能机制。方法　ＲＰＥ细胞传代培养２４ｈ后,随机分为阴性对照组、氧化损伤组、银杏内酯Ｂ低浓度组（１ｍｏｌ?Ｌ－１）和银杏内酯Ｂ高浓度组（１０ｍｏｌ?Ｌ－１）,银杏内酯Ｂ预处理２４ｈ后,加入１００μｍｏｌ?Ｌ－１Ｈ２Ｏ２继续孵育１２ｈ,ＭＴＴ比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Ｈｏｃｈｅｓｔ３３２５８染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达。结果　银杏内酯Ｂ能明显抑制Ｈ２Ｏ２诱导的ＲＰＥ细胞活力的下降,ＭＴＴ结果显示银杏内酯Ｂ低浓度组和银杏内酯Ｂ高浓度组细胞活性分别为（５３．３７±２．５３）％和（６９．５７±３．１７）％,与氧化损伤组的（３１．３３±２．４１）％比较,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;流式细胞计数结果显示银杏内酯Ｂ低浓度组和银杏内酯Ｂ高浓度组细胞凋亡率分别下降至（２７．５３±３．３４）％和（１３．３０±２．２５）％,与氧化损伤组的（４８．１３±２．６８）％比较,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。此外,银杏内酯Ｂ还可以减少Ｈ２Ｏ２所致ＲＰＥ细胞内Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达。结论　银杏内酯Ｂ通过抑制Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达有效抑制了Ｈ２Ｏ２对ＲＰＥ细胞的损伤,从而为其用于治疗ＲＰＥ细胞损伤提供可靠的实验依据。     

普拉洛芬滴眼液不同用药时间对干眼症疗效的影响

目的　探讨普拉洛芬滴眼液不同用药时间对干眼症疗效的影响。方法　选取我院眼科门诊诊断为双眼干眼症的患者１１７例,按照随机数字表法将患者分成普拉洛芬１４ｄ组（３９例）、普拉洛芬３０ｄ组（４０例）和对照组（３８例）。普拉洛芬１４ｄ组给予１ｇ·Ｌ－１普拉洛芬滴眼液（１４ｄ）联合１ｇ·Ｌ－１玻璃酸钠滴眼液（３０ｄ）;普拉洛芬３０ｄ组给予１ｇ·Ｌ－１普拉洛芬滴眼液（３０ｄ）联合１ｇ·Ｌ－１玻璃酸钠滴眼液（３０ｄ）,对照组仅给予１ｇ·Ｌ－１玻璃酸钠滴眼液（３０ｄ）。给药方法均为局部滴双眼,每次１滴,每天４次。分别于治疗前后检测３组患者的泪液分泌试验Ｉ（ＳｃｈｉｒｍｅｒＩｔｅｓｔ,ＳＩｔ）、泪膜破裂时间（ｔｅａｒｂｒｅａｋ-ｕｐｔｉｍｅ,ＢＵＴ）和角膜荧光素染色（ｃｏｒｎｅａｌｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｔａｉｎｉｎｇ,ＦＬ）评分。结果　治疗前３组患者人口基线特征比较差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。治疗后普拉洛芬１４ｄ组ＳＩｔ（７．１１±１．３６）ｍｍ和ＢＵＴ（８．４２±０．７９）ｓ均高于对照组ＳＩｔ（５．１９±０．８５）ｍｍ和ＢＵＴ（５．９２±１．２４）ｓ;ＦＬ评分（０．７３±０．７２）显著低于对照组（１．８８±０．７１）,差异均有统计学意义（ｔＳＩｔ＝８．０００,Ｐ＜０．００１;ｔＢＵＴ ＝１０．８７０,Ｐ＜０．００１;ｔＦＬ＝－７．６６７,Ｐ＜０．００１）;治疗后普拉洛芬３０ｄ组ＳＩｔ（７．３８±１．０１）ｍｍ和ＢＵＴ（８．１２±１．００）ｓ均高于对照组,ＦＬ评分（０．８８±０．６８）显著低于对照组,差异均有统计学意义（ｔＳＩｔ＝９．１２５,Ｐ＜０．００１;ｔＢＵＴ＝９．５６５,Ｐ＜０．００１;ｔＦＬ ＝－６．６６７,Ｐ＜０．００１）;但治疗后普拉洛芬１４ｄ组与普拉洛芬３０ｄ组的ＳＩｔ、ＢＵＴ和ＦＬ评分差异均无统计学意义（ｔＳＩｔ＝－１．１２５,０．４＞Ｐ＞０．２;ｔＢＵＴ＝１．３０４,０．２＞Ｐ＞０．１;ｔＦＬ＝－１．０００,０．４＞Ｐ＞０．２）。结论　短期应用１ｇ·Ｌ－１普拉洛芬滴眼液治疗干眼症即可达到较好的疗效,它是辅助治疗干眼症的有效药物。     

视网膜静脉阻塞患者血小板参数及同型半胱氨酸水平的临床分析

目的 检测视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion,RVO)患者的同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平和血小板参数,包括血小板计数(platelet,PLT)、血小板平均体积(mean platelet volume,MPV),探讨两者是否作为致病因素参与RVO发病.方法 对临床诊断为RVO的48例患者(RVO组)进行血PLT、MPV、Hcy测定,包括视网膜分支静脉阻塞(branch retinal vein occlusion,BRVO)患者22例(BRVO组)和视网膜中央静脉阻塞(central retinal vein occlusion,CRVO)患者26例(CRVO组),并与临床诊断为白内障的40例对照组进行比较并作统计学分析.结果 RVO组PLT水平(212.99±50.10)×109 L-1,与对照组PLT水平(198.11±44.69) ×l09 L-1比较,差异无统计学意义(P ＞0.05),RVO组MPV与Hcy水平(9.44±0.97) fL、(8.99±0.81) μmol·L-1较对照组(8.66±0.96) fL和(8.38 ±0.62) μmol·L-1均增高(均为P＜O.05).PLT水平在CRVO组(212.27±49.07) xl09 L-1、BRVO组(213.84±52.43) ×l09 L-1及对照组间比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05),MPV、Hcy水平在CRVO组(9.48±0.91)fL、(8.97±0.76) μmol·L-1与BRVO组(9.40±1.06)fL、(9.01±0.89)tmol·L-1,较对照组均增高(均为P＜0.05),但在CRVO组与BRVO组间比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 高MPV、高Hey可能是引起RVO发病的危险因素,降血小板及降Hcy的治疗从理论上讲是一种积极有效的预防措施.     

眼局部应用骨髓间充质干细胞（BMSC）治疗小鼠干眼的实验研究

目的　探讨局部应用骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＢＭＳＣ）对干眼小鼠的治疗作用及其机制,并比较ＢＭＳＣ滴眼与眼眶注射两种不同应用途径的疗效差异。方法　收集ＢＡＬＢ／ｃ小鼠双侧股骨、胫骨骨髓,采用贴壁培养法纯化ＢＡＬＢ／ｃ小鼠ＢＭＳＣ。利用随机数字表法将３５只健康６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、ＢＭＳＣ滴眼组、ＢＭＳＣ眼眶注射组,每组７只,除正常对照组外的２８只小鼠使用２．５ｇ·Ｌ－１苯扎氯铵溶液滴双眼,连续滴２１ｄ,建立中重度干眼动物模型。造模结束后开始治疗,模型组给予磷酸盐缓冲液滴双眼;阳性对照组给予普拉洛芬眼液滴双眼;ＢＭＳＣ滴眼组给予含１×１０５ＢＭＳＣ的磷酸盐缓冲悬垂液滴双眼;ＢＭＳＣ眼眶注射组给予含１×１０５ＢＭＳＣ的磷酸盐缓冲悬垂液分别于治疗当天、第４天注射。治疗的第８天检测并比较各组小鼠眼表炎症指数、泪液分泌试验（ＳｃｈｉｒｍｅｒⅠｔｅｓｔ,ＳⅠｔ）、泪膜破裂时间（ｔｅａｒｆｉｌｍｂｒｅａｋ-ｕｐｔｉｍｅ,ＢＵＴ）、角膜荧光素染色（ｃｏｒｎｅａｌｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｓｔａｉｎｉｎｇ,ＦＬＳ）评分结果。第９天过量麻醉法处死３５只小鼠,每组随机选取５眼制备ＨＥ染色、ＰＡＳ染色切片,行眼表组织病理学观察,并进行杯状细胞计数;４眼用于制备冰冻切片,观察有无ＰＫ６７标记的异体ＢＭＳＣ在眼表组织迁移,５眼用于ＥＬＩＳＡ测定小鼠眼表组织中ＩＬ-１０、ＩＬ-１β蛋白含量。结果　模型组眼表炎症指数０．３１±０．０５、ＦＬＳ评分８．８０±１．２１分别高于正常对照组０．０１±０．０１、０．１４±０．１４,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;而阳性对照组、ＢＭＳＣ滴眼组、ＢＭＳＣ眼眶注射组炎症指数分别为０．１５±０．０３、０．１８±０．０３、０．０６±０．０２,均明显低于模型组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,且ＢＭＳＣ眼眶注射组低于ＢＭＳＣ滴眼组,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;仅ＢＭ-ＳＣ眼眶注射组ＦＬＳ评分３．９３±０．７４明显低于模型组,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;模型组ＳＩｔ（４．００±０．３９）ｍｍ明显小于正常对照组（６．３６±０．４８）ｍｍ,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;而ＢＭＳＣ眼眶注射组ＳＩｔ（５．８６±０．５４）ｍｍ明显高于模型组、阳性对照组（３．９２±０．３８）ｍｍ、ＢＭＳＣ滴眼组（３．９０±０．３１）ｍｍ,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;模型组ＢＵＴ（３．００±０．２１）ｓ较正常对照组（６．００±０．２１）ｓ明显缩短,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）,而阳性对照组（４．２０±０．２９）ｓ、ＢＭＳＣ滴眼组（４．４０±０．２７）ｓ、ＢＭＳＣ眼眶注射组（４．７９±０．０２）ｓ均较模型组明显延长,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。眼表组织ＨＥ染色:模型组角膜上皮细胞肿胀、大量炎性细胞浸润,基质层胶原纤维排列紊乱、肿胀;ＢＭＳＣ滴眼组、眼眶注射组角膜上皮表面平整,基质层胶原纤维排列紧密,形态接近正常小鼠,两组间差异不明显。ＰＡＳ染色杯状细胞数量ＢＭＳＣ眼眶注射组１３．８０±２．４８与阳性对照组１３．１７±２．０９相当,均多于模型组５．２０±１．０７,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。冰冻切片:在ＢＭＳＣ滴眼组及ＢＭＳＣ眼眶注射组睑板、结膜下及角膜均未见带ＰＫＨ６７标记的ＢＭＳＣ。ＢＭＳＣ眼眶注射组ＩＬ-１０蛋白含量（５０９．８０±１９０．２１）μｇ·ｇ－１明显高于ＢＭＳＣ滴眼组（４３．６４±４３．６４）μｇ·ｇ－１,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;ＩＬ-１β蛋白含量各组间存在差异,但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　眼局部应用ＢＭＳＣ能使眼表炎症减轻、ＢＵＴ延长、角膜上皮修复,从而有效缓解干眼的症状。ＢＭ-ＳＣ眼眶注射更能显著促进泪液分泌、增加杯状细胞数量,疗效优于ＢＭＳＣ滴眼。     

靶向G蛋白偶联受体91的小发夹RNA慢病毒载体的构建及功能初步检测

目的　构建靶向大鼠Ｇ蛋白偶联受体９１（Ｇｐｒｏｔｅｉｎ-ｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ９１,ＧＰＲ９１）基因的小发夹ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ,ｓｈＲＮＡ）慢病毒载体,探讨ＧＰＲ９１受体对高糖诱导下血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）释放的调节作用。方法　设计合成４对针对大鼠ＧＰＲ９１（ＮＭ＿００１００１５１８）的特异性单链寡核苷酸链,两端分别引入ＡｇｅＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点,退火后得到小片段带黏性末端的双链ＤＮＡ,克隆入慢病毒载体ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ,行聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）和ＤＮＡ测序鉴定重组体。将各慢病毒ｓｈＲＮＡ干扰载体和辅助包装载体共转染２９３Ｔ细胞,收集病毒颗粒并行浓缩滴度检测。将各慢病毒载体转染ＲＧＣ-５细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法筛选有效的慢病毒ｓｈＲＮＡ干扰载体。使用４５ｍｍｏｌ?Ｌ－１的高糖刺激ＲＧＣ-５细胞２４ｈ,用ＥＬＩＳＡ法观察干扰ＧＰＲ９１后ＶＥＧＦ的表达情况。结果　ＰＣＲ及ＤＮＡ测序结果均显示慢病毒载体ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧＰＲ９１构建正确;包装病毒颗粒后,ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧＰＲ９１-１、２、３、４组病毒浓缩液的滴度依次为１．５×１０９ ＴＵ?ｍＬ－１、１．５×１０９ＴＵ?ｍＬ－１、３．０×１０９ＴＵ?ｍＬ－１、３．０×１０９ＴＵ?ｍＬ－１。将慢病毒颗粒感染ＲＧＣ-５细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示ＮＣ组ＧＰＲ９１蛋白（０．６０±０．０８）空白组（０．６２±０．０７）的表达无明显差异（Ｆ＝４９．０３,Ｐ＞０．０５）。而与空白组相比,４个慢病毒载体组（０．４８±０．０５、０．３４±０．０６、０．３０±０．０４和０．１１±０．０６）均能不同程度沉默ＧＰＲ９１的表达,差异有统计学意义（Ｆ＝４９．０３,Ｐ＜００１）,其中ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧＰＲ９１-３干扰效率最高。ＥＬＩＳＡ结果显示空白组、高糖组、高糖＋ＮＣ组、高糖＋ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧ-ＰＲ９１-３组ＶＥＧＦ蛋白表达分别为（２５．６３±４．５２）ｐｇ?ｍＬ－１、（７２．７４±８．２４）ｐｇ?ｍＬ－１、（７１．６８±８．３１）ｐｇ?ｍＬ－１和（４６．７７±６２１）ｐｇ?ｍＬ－１,表明ＧＰＲ９１病毒干扰载体可显著降低高糖引起的ＶＥＧＦ分泌,差异有统计学意义（Ｆ＝３０．８５２,Ｐ＜０．０１）。结论　本实验成功构建了靶向大鼠ＧＰＲ９１的ｓｈＲＮＡ慢病毒载体并进行病毒颗粒包装。所构建的慢病毒载体能够降低高糖作用下的ＶＥＧＦ表达,为进一步研究ＧＰＲ９１基因在糖尿病视网膜病变中的作用机制和动物基因治疗奠定基础。     

毛花甙丙抑制氧诱导乳鼠视网膜新生血管的实验研究

目的　探讨毛花甙丙对乳鼠氧诱导视网膜病变模型中视网膜新生血管的抑制作用。方法　将２０只生后第７天的Ｃ５７乳鼠经体积分数７５％ ±１％的氧诱导５ｄ后,分别给予左眼玻璃体内注射０．５０μｇ（１０眼）和０．１０μｇ（１０眼）毛花甙丙注射液,右眼注射相同剂量的磷酸盐缓冲液做对照,在生后第１７天时进行视网膜铺片染色,计算视网膜新生血管面积和视网膜无灌注区面积,双眼间做配对样本ｔ检验。结果　给予０．０５μｇ和０．１０μｇ毛花甙丙玻璃体内注射后视网膜新生血管的面积分别为（１．０９±０．３２）ｍｍ２和（０．９２±０．４０）ｍｍ２,明显低于对照眼的（１．８４±０．５９）ｍｍ２和（２．０３±０．３５）ｍｍ２（均为Ｐ＜０．０５）;０．０５μｇ、０．１０μｇ毛花甙丙注射后视网膜无灌注区面积分别为（１．４０±０．４４）ｍｍ２ 和（１．０７±０．４０）ｍｍ２,明显低于对照眼的（２．００±０．６５）ｍｍ２和（１．８３±０．４６）ｍｍ２（均为Ｐ＜０．０５）。同时０．１０μｇ毛花甙丙治疗效果优于０．０５μｇ。结论　毛花甙丙对氧诱导视网膜病变乳鼠模型中视网膜新生血管的生长具有抑制作用,同时还能促进视网膜无灌注区的修复。     

甲状腺相关眼病患者血清sICAM-1、sVCAM-1及微小RNA-146a的表达

目的：探讨甲状腺相关眼病( thyroid associated ophthalmopathy,TAO)患者血清可溶性细胞间黏附分子-1( serum soluble intercellular adhesion molecules -1, sICAM-1)、可溶性血管细胞黏附分子-1( soluble vascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)及外周血单个核细胞( peripheral blood mononuclear cells, PBMC )中微小 RNA-146 a的表达及其意义。
　　方法：选取2014-06/2015-12在我院诊治的 TAO患者37例( TAO组)、甲状腺功能亢进不伴有眼病患者40例(非眼病组)、健康人群30例(健康组),检测各组血清sICAM-1、sVCAM-1及PBMC中微小RNA-146 a表达。结果：TAO组的血清 sICAM-1(366.14±67.28μg/L)、sVCAM-1(211.07±27.45μg/L)水平显著高于非眼病组(286.62±51.09μg/L、179.83±25.09μg/L)和健康组(234.51±38.969μg/L、164.51±22.57μg/L),差异有统计学意义(P<0.05),TAO组PBMC中微小RNA-146a (0.071±0.016)低于非眼病组(0.381±0.084)和健康组(1.105±0.216),差异有统计学意义(P<0.05);非眼病组的血清sICAM-1、sVCAM-1水平显著高于健康组(P<0.05),非眼病组PBMC中微小RNA-146a表达低于健康组( P<0.05)。轻度组的血清sICAM-1、sVCAM-1水平显著低于中重度组和极重度组( P<0.05),轻度组 PBMC中微小RNA-146 a表达高于中重度组和极重度组( P<0.05);中重度组的血清sICAM-1、sVCAM-1水平显著低于极重度组( P<0.05),中重度组 PBMC中微小 RNA-146 a表达高于极重度组(P<0.05)。
　　结论：血清 sICAM-1、sVCAM-1在 TAO 患者中高表达, PBMC中微小RNA-146 a在TAO患者低表达,并且与患者的病情程度有关。     

玻璃体内注射雷珠单抗联合玻璃体切割术治疗严重增生型糖尿病视网膜病变

目的　观察玻璃体内注射雷珠单抗联合玻璃体切割术治疗严重增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉ-ｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）的临床效果。方法　将临床确诊为严重ＰＤＲ的患者５２例７２眼纳入本研究。依据术前是否行玻璃体内注射雷珠单抗将患者分为治疗组和对照组:治疗组３０例４２眼、对照组２２例３０眼。治疗组术前３ｄ玻璃体内注射１０ｇ·Ｌ－１雷珠单抗０．０５ｍＬ（０．５ｍｇ）,然后行玻璃体切割术,对照组直接行玻璃体切割术。术后随访３～１２（６．５±１．３）个月。对比分析两组患者视力、眼压、黄斑中心凹视网膜厚度和术后并发症的发生情况。结果　治疗组、对照组手术后视力分别为０．０９０±０．０６８、０．０６０±０．０２９,均较术前提高,２组治疗前、治疗后视力比较差异均有统计学意义（ｔ＝－５．００５、－３．２３７,均为Ｐ＜０．０５）。两组术后视力比较,差异有统计学意义（ｔ＝２．０３４,Ｐ＜０．０５）。治疗组、对照组术后黄斑中心凹视网膜厚度分别为（３１３．８±２７．３）μｍ、（３２５．６±１４．５）μｍ,差异有统计学意义（ｔ＝－１．５１,Ｐ＜０．０５）。术后２周、１个月、３个月,治疗组玻璃体积血发生率分别为１２％、２％、２％,对照组发生率分别为２７％、２０％、３％;两组术后各时间点发生率比较,术后２周及１个月之间差异均有统计学意义（χ２＝３．４２、３．２１,均为Ｐ＜０．０５）,术后３个月差异无统计学意义（χ２＝１．０２,Ｐ＞０．０５）。结论　玻璃体切割术联合玻璃体内注射雷珠单抗治疗严重ＰＤＲ能提高患者视力,降低术后玻璃体积血发生率和黄斑中心凹视网膜厚度。