4-苯基丁酸对高糖诱导的人晶状体上皮细胞发生上皮间质转化的影响

目的 探讨4-苯基丁酸(4-PBA)对高糖诱导的人晶状体上皮细胞发生上皮间质转化(EMT)的影响.方法 体外培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞,将培养的HLE-B3细胞分为正常对照组、高糖组和4-PBA预处理+高糖组.利用流式细胞术检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量;利用Western blot检测各组细胞中内质...     

Lumican及其在晶状体上皮细胞的上皮间质转分化中的作用

Lumican是在全身多种组织中广泛表达的一种蛋白质,在细胞增殖迁移分化及组织修复中起着重要作用。Lumican在晶状体上皮细胞（LECs）发生上皮间质转分化（EMT）中大量表达,并具有时间依赖性,有可能对该过程起着关键的调控作用。如果Lumican缺失,则LECs的上皮间质转分化受到明显抑制,从而对抑制后发性白内障的发生具有重要的意义。因此如何调控Lumican的表达已成为研究的热点,例如通过抑制转化生长因子p2的途径下调Lumican表达已被证实是调控的途径之一。但目前有关Lumican调控的研究大多集中于肿瘤和角膜,在LECs上皮间质转分化的调控作用靶点及如何量化还需要进一步研究。     

TGF-β2对晶状体上皮细胞增生和上皮间质转分化的实验研究

目的探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对晶状体上皮细胞(LECs)增生和上皮间质转分化的影响。方法体外培养的人LECs株HLE-B3,加入不同质量浓度的TGF-β2进行处理,分别采用MTT法测定其对细胞增生的影响;采用PI细胞周期染色分析检测细胞周期的改变;应用Western blot及免疫荧光分别检测connexin43、fibronectin及integrinβ1等转分化相关蛋白表达的变化。结果经TGF-β2处理后的细胞增生受到抑制,呈TGF-β2质量浓度和时间依赖性;细胞周期中S期细胞的比例明显降低;connexin43表达随TGF-β2处理时间的增加而逐渐降低,fibronectin及integrinβ1的表达则随TGF-β2处理时间的增加而逐渐上升。结论TGF-β2抑制了LECs的增生,显著下调LECs connexin43的表达,促进了细胞外基质的过度沉积,对后发性白内障的防治具有一定的应用前景。     

转化生长因子-β2诱导的上皮间质转分化对人晶状体上皮细胞基因表型的影响

目的观察转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人晶状体上皮细胞（LECs）发生上皮问质转分化（EMT）时,其形态和基因表型所发生的变化。方法在体外培养的人LECs中,加入100pg／mL浓度的TGF-β2,诱导其发生EMT,处理0、6、24、48h后,观察其在形态上的变化,利用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）于各时间点检测其标志性基因E-钙粘蛋白（CDHl）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（VIM）等在表达水平上所发生的变化,并与未处理的空白对照组进行比较。结果加人TGF-β2后,随着时间的推移,人LECs在形态上拉长,呈梭形;上皮细胞标志性基因如CDHl的表达水平逐渐下调,48h时相对表达量为1．10E-06,和对照组2．68E-06相比差异有统计学意义（P=0．002）;间质细胞标志性基因如VIM的表达水平逐渐上调,48h时相对表达量为1．64E-02,和对照组1．37E-02相比差异有统计学意义（P=0．006）;而α-SMA的表达水平也逐渐上升,48h时相对表达量为9．21E-03,虽和对照组8．67E-03相比差异无统计学意义（P=0．551）,但仍呈上升趋势。结论在TGF-132诱导下,人LECs发生EMT,其形态和基因表型均发生与间质细胞相符的变化。     

miRNA-184在TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的表达

目的　研究ｍｉＲＮＡ-１８４（ｍｉＲ-１８４）在转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦ-β２）诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法　应用不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２ 诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法观察转分化相关分子波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、钙黏附蛋白Ｅ（Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达;应用ｑＲＴ-ＰＣＲ检测ｍｉＲ-１８４在不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２、不同作用时间（０ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）ＴＧＦ-β２（１０μｇ·Ｌ－１）诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化。结果　随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞胞浆中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ荧光强度增强;Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达逐渐减少,各组细胞间Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝８７．６１７,Ｐ＜０．０１）;Ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝６８．９２３,Ｐ＜０．０１）。随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增多,在１０μｇ·Ｌ－１ＴＧＦ-β２诱导组达到峰值;随着ＴＧＦ-β２诱导时间的延长,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增加,在２４ｈ表达达到峰值。结论　ＴＧＦ-β２诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内ｍｉＲ-１８４表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究ｍｉＲ-１８４在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础。     

TGFβ和bFGF对晶状体上皮细胞的转分化作用

晶状体上皮细胞的转分化是后发性白内障和前囊下白内障的主要病理改变.目前研究发现有多种调控因素参与晶状体上皮细胞转分化的发生发展过程,其中转化生长因子β(TGFβ)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等生长因子在此过程中起着至关重要的作用,另外细胞外基质等一些因素也与之密不可分.本文就近年来关于TGFβ和bFGF对晶状体上皮细胞的转分化作用、两者的协同作用的研究作一综述.     

内质网应激在氧化低密度脂蛋白诱导的人RPE细胞凋亡中的作用

目的：观察内质网应激(ERS)在氧化低密度脂蛋白(OxLDL)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡中的作用。

方法：人RPE细胞系ARPE19采用低糖DMEM培养基和10%胎牛血清进行常规培养。实验分为3组：对照组(常规培养的ARPE19)、OxLDL组(加入5、10、25、50、100μg/mL OxLDL)和LDL组(加入5、10、25、50、100μg/mL LDL)培养24h。分别采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测各组细胞活性,流式细胞仪检测凋亡比例,蛋白质印迹(Western blotting)检测ERS相关蛋白及凋亡相关酶的表达。激光共聚焦显微镜观察人RPE细胞吞噬红色荧光探针Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-OxLDL)情况。

结果：CCK8结果显示：对照组细胞存活率为(100±5.637)%,加入5、10、25、50、100μg/mL OxLDL后细胞活力分别为(105.298±9.395)%、(97.106±5.417)%、(77.015±4.055)%、(67.613±3.853)%和(43.872±9.532)%(P<0.05); 加入5、10、25、50、100μg/mL LDL后细胞活力分别为(97.55±6.217)%、(99.640±3.586)%、(90.495±2.786)%、(83.552±9.171)%和(90.910±1.429)%(P>0.05)。流式细胞仪结果显示浓度为25μg/mL的OxLDL会明显诱导细胞凋亡,对照组、OxLDL组(25μg/mL)和LDL(25μg/mL)组凋亡率分别是(5.271±0.519)%、(41.23±1.686)%和(13.07±2.579)%(P<0.01); Western blotting结果显示OxLDL(25μg/mL)组的ERS相关蛋白和凋亡相关酶的表达量明显高于对照组与LDL组(Caspase-12：F=50.53, P<0.05; GRP78：F=55.60, P<0.05; CHOP：F=38.22, P<0.05; XBP-1：F=53.94, P<0.05; ATF6：F=20.01, P<0.05),而LDL组(25μg/mL)和对照组之间无差异(P>0.05)。

结论：ERS参与了OxLDL诱导的人RPE细胞凋亡,调控ERS可能抑制人RPE细胞凋亡,从而治疗RPE细胞凋亡相关疾病。     

糖尿病大鼠视网膜中内质网应激蛋白的表达及意义

目的 检测内质网应激蛋白(bip)在糖尿病大鼠视网膜组织中的表达情况,探讨内质网应激在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用和机制.方法 Wistar大鼠随机分为4组:链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠3、6、9个月模型组及正常对照组,每组10只.采用腹腔注射STZ 60 mg/kg,制备大鼠糖尿病模型;分批处死,每只大鼠左眼免疫组织化学法检测视网膜组织中bip的表达,右眼半定量RT桺CR方法 检测bip mRNA的表达.结果 bip在正常大鼠视网膜组织中少量表达,主要分布于视网膜内核层和神经节细胞层,糖尿病3个月组bip在各层的表达量升高,6个月组表达最高.结论 bip参与了DR的发病机制,在早期糖尿病大鼠视网膜组织中,细胞的应激能力随糖尿病病程延长而增强.     

小RNA干扰TGF-β通路抑制晶状体上皮细胞间质转化预防后发性白内障的研究进展

后发性白内障（posterior capsular opacity,PCO）是白内障最常见的术后并发症,其主要 是由囊膜下残留晶状体上皮细胞（len epithelial cell,LEC）发生上皮-间质转化（epithelial-to-mesenehymal transition,EMT）形成纤维性PCO造成的.而转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）是导致EMT最重要的细胞因子.近年来研究发现小RNA在转录后水平调控EMT发挥重要作用.本文就不同小RNA对TGF-β通路不同信号转导分子,如TGF-βⅡ型受体、Smad2/3、Smad4、Snail、甲基CpG结合蛋白2、基质金属蛋白酶及Skp2基因等的干扰作用,抑制LEC发生EMT,从而预防PCO的研究进展做一综述.     

全反式视黄酸对视网膜色素上皮细胞内质网应激反应的诱导作用及途径

目的：从分子水平探讨全反式视黄酸(ATRA)诱导ARPE-19细胞的内质网应激反应(ERS)。

方法：应用免疫荧光法、实时定量-聚合酶链反应和蛋白印记法等方法,检测ATRA诱导ARPE-19细胞产生ERS过程中相关信号通路蛋白及mRNA表达水平的变化。

结果：检测结果显示,随着ATRA浓度的累积,ERS标记蛋白CHOP及BIP的蛋白及mRNA水平显著上升(P<0.001); 下游信号通路中,PERK、EIF2α、ATF4、IRE1α及XBP1表达上调(P<0.001),ATF6表达无变化(P>0.05)。

结论：过度累积的ATRA诱导ARPE-19细胞产生ERS,并激活其中PERK-EIF2α-ATF4及IRE1α-XBP1信号途径。     

高糖环境下内质网应激及其在眼科疾病的研究进展

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是蛋白质折叠和组装的主要细胞器,在多种生理性及病理性因素作用下,细胞内发生蛋白质错误折叠、腔内未折叠蛋白蓄积或钙离子平衡紊乱的状态称为内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。高糖环境下,蛋白质的氧化还原状态发生改变并产生活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),影响ER上的通道功能和伴侣蛋白的缓冲作用,改变了钙离子的平衡状态,形成ERS。越来越多的研究证实,高糖环境下ERS可以引起多种眼科疾病,本文就近年来关于在高糖环境下ERS及其在眼科疾病中的研究进展进行综述。     

HRD1在糖尿病小鼠视网膜的表达变化

目的　观察羟甲基戊二酰辅酶Ａ还原酶降解蛋白１（ＨｍｇＣｏＡｒｅｄｕｃｔａｓｅｄｅｇｒａｄａ-ｔｉｏｎ１,ＨＲＤ１）在糖尿病小鼠视网膜不同时期的表达变化。方法　ＳＴＺ诱导的糖尿病Ｃ５７ＢＬ／Ｊ小鼠,分别于糖尿病成功造模后１个月、３个月、６个月,选取糖尿病小鼠视网膜组织,利用免疫荧光、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ技术检测ＨＲＤ１在糖尿病不同时期的表达变化。结果　免疫荧光观察到ＨＲＤ１绿色荧光强度在１个月、３个月、６个月糖尿病小鼠视网膜随糖尿病进程逐渐减弱。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测可见在１个月、３个月、６个月糖尿病小鼠视网膜组织ＨＲＤ１基因水平和蛋白水平表达较对照组均明显减少（ｍＲＮＡ:Ｐ１ ＝０．０４０５;Ｐ２＝０．００６２;Ｐ３＝０．００４１;蛋白:Ｐ１＝０．０１０９;Ｐ２＝０．００１３;Ｐ３＝０．０００３）。结论ＨＲＤ１可能在糖尿病视网膜病变发生发展过程中起到一定作用。     

Association between endoplasmic reticulum stress and risk factors of diabetic retinopathy

Diabetic retinopathy (DR) is one of the most common and challenging ocular complications of diabetes mellitus. As a chronic, progressive ocular disease that poses a serious threat to vision, DR has gradually become a leading cause of blindness worldwide. Emerging evidence points to an important role of endoplasmic reticulum (ER) stress in not only maintaining the steady-state equilibrium in the body, but also in intracellular synthesis, protein folding, and other essential functions. Recent studies have demonstrated clear associations between ER stress-related physiological functions and the pathogenesis of DR. When cells are stimulated by external stimuli, UPR pathway is activated firstly to protect it. However, long-term harmful factors can induce ER stress. which interferes with the physiological metabolism of retinal cells and participates in the occurrence of DR via the ATF6 pathway, PERK pathway and IRE1 pathway. At present, ER stress blocker is expected to become a new anti-DR therapy. Thus, understanding the relationship between ER stress and DR will help to develop new effective preventative treatments. In this review, we summarize the risk factors of DR pathogenesis induced by ER stress toward revealing potentially new therapeutic targets.     

活血化瘀汤对急性高眼压大鼠视网膜内质网应激的影响

目的 研究急性高眼压大鼠视网膜的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)以及活血化瘀汤对ERS的影响.方法 88只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、高眼压组(40只)、治疗组(40只).除正常对照组外所有大鼠均随机取一眼制作急性高眼压模型,治疗组在造模后给予活血化瘀汤(4 mL·d-1)灌胃,高眼压组和治疗组分别在造模后12 h、ld、3d、7d、14 d均等处死大鼠.HE染色观察各组视网膜组织结构变化,免疫组织化学染色观察视网膜GRP78、Thy-1表达变化,RT-PCR检测视网膜GRP78、Thy-1 mRNA变化.结果 光镜下见高眼压组视网膜早期水肿,后期萎缩;治疗组与高眼压组在各时间点的变化趋势相同,但程度均轻于高眼压组.免疫组织化学和RT-PCR结果显示高眼压组造模后12h,GRP78蛋白和mRNA的表达量迅速上调(0.291±0.012、1.534±0.143),与正常对照组(0.195±0.003、1.011±0.011)比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);造模后1d,表达量达到高峰(0.498±0.049、2.047±0.177);造模后3d迅速降低,但仍高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).治疗组GRP78蛋白和mRNA表达量在造模后12 h(0.274±0.023、1.398±0.031)较正常对照组显著增多,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),较高眼压组低,但差异均无统计学意义(均为P＞0.05);造模后1d达高峰(0.432 ±0.042、1.641 ±0.164),但增加量均少于同时间点高眼压组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);造模后3d表达量降低(0.212±0.022、1.174±0.126),与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05),但低于同时间点高眼压组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).造模后7d、14 d三组间GRP78蛋白和mRNA的表达量差异均无统计学意义(均为P＞0.05).造模后14 d,高眼压组和治疗组Thy-1蛋白和mRNA的表达量均降低,但治疗组Thy-1 mRNA表达量(0.754±0.053)明显高于高眼压组(0.627±0.069),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERS参与了急性高眼压视网膜损伤过程,中药活血化瘀汤对该损伤有保护作用,可能与其抑制ERS有关.     

热休克蛋白5调控内质网应激在视网膜色素上皮细胞保护中的作用

目的　探讨相对分子质量70 000的热休克蛋白5（heat shock 70 kDa protein 5,HSPA5）调控内质网应激在N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺（N-retinylidene-N-retinylethanolamine,A2E）联合蓝光诱导视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞损伤对RPE细胞的保护作用。方法　建立A2E联合蓝光诱导RPE细胞损伤模型,显微镜下观察RPE细胞对A2E的摄取。在RPE细胞损伤后3 h、6 h、12 h、24 h和48 h,运用CCK-8法检测RPE细胞活力;Western blot检测RPE细胞内质网应激相关蛋白HSPA5和CHOP的表达情况。构建HSPA5 shRNA慢病毒载体抑制RPE细胞中HSPA5的表达,实验分3组,HSPA5干扰组转染了HSPA5干扰序列,阴性干扰组转染了阴性对照序列,野生型组为未转染的RPE细胞。检测在RPE细胞损伤时,干扰HSPA5对内质网应激相关凋亡分子CHOP、Caspase-12表达以及RPE细胞活力的影响。结果　细胞活力检测结果显示,A2E联合蓝光照射后3 h、6 h、12 h、24 h和48 h,RPE细胞活力分别是对照组的（80.9±6.2）%、（73.3±5.8）%、（70.6±5.4）%、（62.3±6.1）%和（51.4±4.5）%,与对照组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,HSPA5和CHOP蛋白表达在RPE细胞损伤后均有不同程度增高（P<0.05）。在A2E联合蓝光处理后12 h,HSPA5干扰组的CHOP和Caspase-12蛋白表达较对照组显著升高,并且RPE细胞活力明显下降（均为P<0.05）。结论　A2E联合蓝光可诱导RPE细胞发生损伤,损伤机制与内质网应激相关。HSPA5具有调控内质网应激,减轻A2E及蓝光损伤,促进RPE细胞存活的作用。     

视网膜内质网应激免疫组织化学抗体浓度选择的实验研究

目的:探索小鼠视网膜色素变性(RP)模型视网膜内质网应激免疫组织化学(IHC)染色抗体的最适浓度,为研究RP发病机制及干预措施提供相应的指标检测方法。方法:给予清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射N-甲基-N-亚硝基脲(MNU,60mg/kg)制备RP小鼠模型,造模后第7d行视网膜电图(ERG)检测和苏木精-伊红(HE)染色验证造模成功,摘取眼球并采用IHC染色法检测视网膜内质网应激相关蛋白(IRE1、ATF6、PERK、GRP78、Caspase-12)表达情况。结果:IRE1、ATF6、PERK、GRP78、Caspase-12蛋白均在RP小鼠视网膜呈阳性表达,IRE1抗体浓度为1∶1000、ATF6抗体浓度为1∶500和1∶1000(此抗体两种浓度阳性表达无差异,P>0.05)、PERK抗体浓度为1∶1500、GRP78抗体浓度为1∶200、Caspase-12抗体浓度为1∶100时,阳性表达强度适宜,且与各自其余抗体浓度相应蛋白阳性表达均有差异(P<0.05)。结论:内质网应激相关蛋白抗体浓度IRE1为1∶1000、ATF6为1∶500和1∶1000、PERK...