HRD1在糖尿病小鼠视网膜的表达变化

目的　观察羟甲基戊二酰辅酶Ａ还原酶降解蛋白１（ＨｍｇＣｏＡｒｅｄｕｃｔａｓｅｄｅｇｒａｄａ-ｔｉｏｎ１,ＨＲＤ１）在糖尿病小鼠视网膜不同时期的表达变化。方法　ＳＴＺ诱导的糖尿病Ｃ５７ＢＬ／Ｊ小鼠,分别于糖尿病成功造模后１个月、３个月、６个月,选取糖尿病小鼠视网膜组织,利用免疫荧光、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ技术检测ＨＲＤ１在糖尿病不同时期的表达变化。结果　免疫荧光观察到ＨＲＤ１绿色荧光强度在１个月、３个月、６个月糖尿病小鼠视网膜随糖尿病进程逐渐减弱。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测可见在１个月、３个月、６个月糖尿病小鼠视网膜组织ＨＲＤ１基因水平和蛋白水平表达较对照组均明显减少（ｍＲＮＡ:Ｐ１ ＝０．０４０５;Ｐ２＝０．００６２;Ｐ３＝０．００４１;蛋白:Ｐ１＝０．０１０９;Ｐ２＝０．００１３;Ｐ３＝０．０００３）。结论ＨＲＤ１可能在糖尿病视网膜病变发生发展过程中起到一定作用。     

莱菔硫烷对链脲佐霉素诱导的大鼠糖尿病白内障的治疗作用

目的　探讨莱菔硫烷（Ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ,ＳＦＮ）对链脲佐霉素诱导的大鼠糖尿病白内障的治疗作用。方法　将７２只雄性ＳＤ大鼠随机分为正常对照组、模型组、ＳＦＮ低剂量干预组、ＳＦＮ中剂量干预组、ＳＦＮ高剂量干预组和苄达赖氨酸（ｂｅｎｄａｚａｃｌｙ-ｓｉｎｅ,ＢＤＬ）组,每组１２只,后５组腹腔一次性注射链脲佐菌素（６５ｍｇ·ｋｇ－１）建立糖尿病白内障模型,从造模成功当日开始,ＳＦＮ低、中、高剂量干预组分别给予５０ｍｇ·ｋｇ－１、１００ｍｇ·ｋｇ－１、２００ｍｇ·ｋｇ－１ＳＦＮ灌胃,ＢＤＬ组以２００ｍｇ·ｋｇ－１ＢＤＬ灌胃,其余２组用同体积的生理盐水,每天１次,治疗１２周后,测定空腹血糖水平,裂隙灯观察大鼠晶状体变化并对其混浊度进行分级,分离晶状体并制备成匀浆液,测定丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ,ＭＤＡ）含量及超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ-ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ,ＧＳＨ-Ｐｘ）、过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ,ＣＡＴ）活性,ＥＬＩＳＡ检测糖基化终末产物（ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ,ＡＧＥｓ）含量,行Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ,ＡＲ）表达。结果　用药后１２周,ＳＦＮ中、高剂量干预组大鼠空腹血糖明显低于模型组（均为Ｐ＜０．０５）,而ＳＦＮ低剂量干预组、ＢＤＬ组仍处于高血糖水平,与模型组比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。正常对照组大鼠晶状体透明,无混浊发生;而模型组大鼠晶状体出现雾状混浊、核混浊,分级为Ⅲ ～Ⅴ级,其混浊度显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。与模型组比较,ＳＦＮ中、高剂量干预组晶状体混浊度等级差异明显减轻（均为Ｐ＜０．０５）,而ＳＦＮ低剂量干预组、ＢＤＬ组晶状体混浊度等级与模型组相比,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。与正常对照组比较,模型组大鼠晶状体组织中ＭＤＡ含量升高,而ＳＯＤ、ＧＳＨ-Ｐｘ、ＣＡＴ活性降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。经中、高剂量ＳＦＮ或ＢＤＬ处理后,ＭＤＡ含量较模型组减少（均为Ｐ＜０．０５）,ＳＯＤ、ＧＳＨ-Ｐｘ、ＣＡＴ活性较模型组增加（均为Ｐ＜０．０５）。而ＳＦＮ低剂量干预组上述指标与模型组相比,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。模型组大鼠晶状体组织中ＡＧＥｓ含量较正常对照组升高（Ｐ＜０．０１）;相对于模型组,经中、高剂量ＳＦＮ处理１２周后,ＡＧＥｓ含量明显减少（均为Ｐ＜０．０５）;而ＳＦＮ低剂量干预组、ＢＤＬ组ＡＧＥｓ含量与模型组比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。运用Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测各组大鼠晶状体组织ＡＲ蛋白表达,结果显示:正常对照组ＡＲ蛋白呈低水平表达,模型组ＡＲ蛋白表达明显上调,与正常对照组比较,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）;相对于模型组,经中、高剂量ＳＦＮ或ＢＤＬ处理后,ＡＲ蛋白表达水平降低（均为Ｐ＜０．０５）,而ＳＦＮ低剂量干预组ＡＲ蛋白表达水平与模型组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＳＦＮ对链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病白内障有治疗作用,其机制可能与增强抗氧化能力、抑制ＡＧＥｓ产生及下调ＡＲ表达有关。     

JNK细胞通路在高压氧和过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞凋亡中的作用

目的　研究ＪＮＫ细胞信号通路在高压氧（ｈｙｐｅｒｂａｒｉｃｏｘｙｇｅｎ,ＨＢＯ）和过氧化氢（ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅ,Ｈ２Ｏ２）影响晶状体上皮细胞活力和凋亡中的作用。方法　培养人晶状体上皮细胞系ＳＲＡ０１／０４,实验分为对照组、ＳＰ６００１２５组（２０μｍｏｌ?Ｌ－１）、ＨＢＯ组（体积分数９５％ Ｏ２＋体积分数５％ＣＯ２,６００Ｐａ）、ＨＢＯ＋ＳＰ６００１２５组、Ｈ２Ｏ２组（２００μｍｏｌ?Ｌ－１）和Ｈ２Ｏ２＋ＳＰ６００１２５组,处理６ｈ后收集细胞,应用ＭＴＴ法检测各组细胞活力,ＡｎｎｅｘｉｎＶ-ＦＩＴＣ凋亡试剂盒处理细胞后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,通过Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔ法检测各组细胞ＪＮＫ、ｐ-ＪＮＫ、ｃ-Ｊｕｎ、ｐ-ｃ-Ｊｕｎ、ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ９的表达情况。结果　作用６ｈ后,ＨＢＯ和Ｈ２Ｏ２处理的晶状体上皮细胞Ａ５７０分别为０．４２３±０．０４７和０．４０６±０．０６９,较对照组的０．８２４±０．０６５明显下降（Ｐ＜０．０５）,细胞凋亡率为（１９．７７３±１．１４７）％和（２９．２０６±１．６７８）％,较对照组的（２．１８４±１．０１５）％明显上升（Ｐ＜０．０５）,ＳＰ６００１２５可部分抑制ＨＢＯ和Ｈ２Ｏ２对晶状体上皮细胞活力和凋亡的影响,ＨＢＯ和Ｈ２Ｏ２处理的晶状体上皮细胞ｐ-ＪＮＫ、ｐ-ｃ-Ｊｕｎ蛋白表达量及ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ９蛋白表达量升高,Ｓｐ６００１２５可部分抑制高压氧和Ｈ２Ｏ２ 诱导的晶状体上皮细胞ｐ-ＪＮＫ、ｐ-ｃ-Ｊｕｎ、ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ９蛋白高表达。结论　ＨＢＯ和Ｈ２Ｏ２可激活晶状体上皮细胞中ＪＮＫ细胞信号通路,促使细胞凋亡,提示ＪＮＫ细胞信号通路在ＨＢＯ和Ｈ２Ｏ２诱导晶状体上皮细胞凋亡的发生发展中起重要作用。     

BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨过表达激活素膜结合抑制剂（ｂｍｐａｎｄａｃｔｉｖｉｎｍｅｍｂｒａｎｅ-ｂｏｕｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＢＡＭＢＩ）对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）增殖和迁移的影响。方法　将ＲＦ／６Ａ细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧＋ｐＦＬＡＧ组和缺氧＋ＢＡＭＢＩ组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＢＡＭＢＩ的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,ＣＣＫ-８法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的迁移,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达。结果　与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养１２０ｈ后,对照组细胞增殖倍数为５．００±０．２８,缺氧组为７．６４±０．３２（Ｐ＜０．００１）;缺氧组Ｓ期进程显著加快,占（１０．４４±２．６１）％,对照组Ｓ期占（２０．７９±２．２３）％（Ｐ＜０．０５）;细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为３３．８０±４．２０,对照组为８．３５±２．５０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）。缺氧＋ＢＡＭＢＩ组:缺氧处理的细胞转染ｐＦＬＡＧ-ＢＡＭ-ＢＩ后,与缺氧组相比,ＢＡＭＢＩ蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养１２０ｈ后,增殖倍数为５．５３±０．２７（Ｐ＜０．００１）,细胞Ｓ期受到阻滞,占（１８．７５±２．９２）％,迁移显著下降,数目为１３．００±２．８０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显下调（Ｐ＜０．０５）。结论　过表达ＢＡＭＢＩ可抑制缺氧诱导的ＲＦ／６Ａ细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生。     

内质网应激对糖尿病小鼠晶状体上皮细胞发生上皮间质转分化的作用

目的　探讨内质网应激对糖尿病小鼠晶状体上皮细胞发生上皮间质转分化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ-ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）的作用。方法　４２只雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和糖尿病＋４-苯基丁酸（４-ＰＢＡ）干预模型组。糖尿病模型小鼠由腹腔注射ＳＴＺ建立,糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组给予４-ＰＢＡ溶液灌胃。干预过程中监测各组小鼠体质量及随机血糖水平变化。干预开始后每４周散瞳后于裂隙灯显微镜下观察晶状体混浊情况并照相记录,第１２周摘取眼球于体式显微镜下观察晶状体混浊情况。在干预的第１、４、８和１２周,采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测晶状体上皮中葡萄糖调节蛋白７８（ｇｌｕｃｏｓｅｒｅｇ-ｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＲＰ７８）、α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）及Ｅ-钙黏蛋白（Ｅ-ｃａｄｈｅｒｉｎ）表达水平。结果　正常对照组小鼠体质量增加明显,观察期结束时体质量为（３０．２１±１．４７）ｇ,糖尿病模型组及糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组小鼠体质量增长较正常对照组小鼠缓慢,１２周末时分别为（２５．３２±０．７３）ｇ及（２５．０７±０．６７）ｇ。随机血糖监测结果显示糖尿病模型组小鼠各时间点血糖均高于正常对照组（ｔ＝１３．５２、１９．４５、１８．８６、２１．１８、２１．５６,均为Ｐ＜０．０５）,糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组血糖各时间点均高于正常对照组（ｔ＝１５．２３、１８．７８、１３．０４、１５．０６、１３．９０,均为Ｐ＜０．０５）,第４周起低于糖尿病模型组（ｔ＝５．８１９、６．１２０、７.６６４,均为Ｐ＜０．０５）。裂隙灯显微镜下检查结果显示,正常对照组小鼠晶状体维持透明,糖尿病模型组小鼠第８周起晶状体出现浅层皮质点状混浊,糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组小鼠８周时晶状体出现轻度混浊,但程度较糖尿病模型组轻。离体观察正常对照组晶状体保持透明,糖尿病模型组及糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组晶状体均出现点状混浊,糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组混浊程度较轻。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示,与正常对照组相比,糖尿病模型组ＧＲＰ７８蛋白表达量在第１２周时明显增高（ｔ＝７．１５３,Ｐ＜０.０５）;８周及１２周时α-ＳＭＡ表达量明显升高（ｔ＝３．５５９、４．０８４,均为Ｐ＜０．０５）,各时间点Ｅ-ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量均明显降低（ｔ＝４.３５０、６．１３９、７．７７０、３．４８６,均为Ｐ＜０．０５）;糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组ＧＲＰ７８蛋白表达量低于糖尿病模型组,且在第８周和１２周差异均有统计学意义（ｔ＝８．６００,１１．５３,均为Ｐ＜０．０５）;α-ＳＭＡ相对表达量在第１２周时明显下降（ｔ＝４．３５７,Ｐ＜０．０５）,Ｅ-ｃａｄｈｅｒｉｎ相对表达量在增高且达到正常水平,各时间点差异均有统计学意义（ｔ＝４．３６０、７．６３３、８．４５０、５．８５３,均为Ｐ＜０．０５）。糖尿病＋４-ＰＢＡ干预模型组不同时间点比较,ＧＲＰ７８表达量在８周时达到最低。结论　利用分子伴侣４-ＰＢＡ抑制糖尿病小鼠内质网应激水平能够抑制糖尿病引起的晶状体上皮细胞发生ＥＭＴ。     

αB-晶状体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用机制的研究

目的　研究αＢ-晶状体蛋白对钾离子通道ｋｖ１．１、ｋｖ１．３及凋亡抑制因子Ｂｃｌ-ｘｌ和凋亡因子Ｃａｓｐａｓｅ-３的影响,探讨αＢ-晶状体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓ,ＲＧＣ）保护作用的机制。方法　６０只ＳＤ大鼠随机分为Ａ组（急性高眼压组）、Ｂ组（急性高眼压＋玻璃体内注射生理盐水５μＬ组）、Ｃ组（急性高眼压＋玻璃体内注射１０×１０－６ｇ?Ｌ－１αＢ-晶状体蛋白５μＬ组）,每组２０只,右眼为实验眼。注射后７ｄ和１４ｄ时,应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和实时定量逆转录聚合酶链反应（ＱＲＴ-ＰＣＲ）法检测ｋｖ１．１、ｋｖ１．３、Ｂｃｌ-ｘｌ和Ｃａｓｐａｓｅ-３在视网膜上的表达水平。结果　注射后７ｄ和１４ｄ时,Ｃ组ｋｖ１．１、ｋｖ１．３通道蛋白和凋亡因子Ｃａｓｐａｓｅ-３蛋白表达水平和ｍＲＮＡ相对表达量均较Ａ组、Ｂ组低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０.０５）;Ｃ组Ｂｃｌ-ｘｌ蛋白表达水平和ｍＲＮＡ相对表达量较Ａ组、Ｂ组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;相同时间点不同因子Ａ组、Ｂ组间两两比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。结论　αＢ-晶状体蛋白通过抑制急性高眼压后ＲＧＣ上钾离子通道ｋｖ１．１、ｋｖ１．３的表达,从而提高凋亡抑制因子Ｂｃｌ-ｘｌ的表达、降低凋亡因子Ｃａｓｐａｓｅ-３的表达,减少细胞凋亡,保护ＲＧＣ。     

miR-210靶向沉默Bcl-2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的　观察ｍｉＲ-２１０在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达,并探讨其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响与调控机制。方法　收集年龄相关性白内障患者与新鲜人眼透明晶状体前囊膜（正常对照组）标本;培养人晶状体上皮细胞ＳＲＡ０１／０４,予或不予（正常对照组）紫外线照射,利用实时荧光定量ＰＣＲ检测上述组织或细胞中ｍｉＲ-２１０表达。此外,将遭受紫外线照射的ＳＲＡ０１／０４细胞分为空白对照组、阴性对照组、ｍｉＲ-２１０模拟物组和ｍｉＲ-２１０抑制物组,分别予培养液及ｍｉＲ-２１０阴性对照物、模拟物、抑制物处理４８ｈ,行实时荧光定量ＰＣＲ检测ｍｉＲ-２１０表达,以验证转染效率;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｍｉＲ-２１０的靶基因Ｂｃｌ-２表达,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果　与正常对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织和紫外线诱导的ＳＲＡ０１／０４细胞凋亡模型中ｍｉＲ-２１０表达均显著上调（均为Ｐ＜０．０１）。相对于空白对照组,ｍｉＲ-２１０模拟物组ｍｉＲ-２１０水平和细胞凋亡率均增加（均为Ｐ＜０．０１）,Ｂｃｌ-２蛋白表达水平降低（Ｐ＜０．０１）;而ｍｉＲ-２１０抑制物组ｍｉＲ-２１０水平和细胞凋亡率均减少（均为Ｐ＜０．０５）,Ｂｃｌ-２蛋白表达水平升高（Ｐ＜０．０１）;阴性对照组上述指标与空白对照组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ｍｉＲ-２１０在年龄相关性白内障患者晶状体组织中呈高表达,ｍｉＲ-２１０可能通过靶向沉默Ｂｃｌ-２促进人晶状体上皮细胞凋亡。     

核转录因子-κB在氧诱导血管增殖性视网膜病变小鼠中的表达

目的　探讨氧诱导血管增殖性视网膜病变小鼠视网膜中核转录因子（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ,ＮＦ）-κＢ蛋白的表达变化及意义。方法　７２只出生后７ｄ的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠随机分为实验组（３６只）和对照组（３６只）,实验组与母鼠一起放入氧气含量为体积分数７５％的饲养箱中饲养,出生后１２ｄ回到正常大气环境中;对照组小鼠始终在正常大气环境中饲养。分别于出生后１２ｄ、１４ｄ、１７ｄ时处死小鼠,荧光素灌注后行视网膜铺片观察血管分布及形态,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测视网膜中血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的蛋白表达变化,免疫组织化学染色检测眼球中ＮＦ-κＢ的表达变化。结果　视网膜铺片检查结果可见,实验组小鼠出生后１４ｄ开始出现视网膜新生血管,面积为每眼（０. ０６±０．１２）ｍｍ２;生后１７ｄ达到高峰,面积为每眼（１．７９±０．０２）ｍｍ２（χ２＝２０．１１２,Ｐ＜０．０１）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果显示,实验组ＶＥＧＦ表达不断增强,在生后１７ｄ时表达达到高峰,为０．８３±０．０５。免疫组织化学染色结果显示,实验组生后１２ｄＮＦ-κＢ阳性细胞计数为（１２．３２±１. ０４）个?ｍｍ－２,１４ｄ时为（１９．１６±１．０２）个?ｍｍ－２,生后１７ｄ阳性表达较１２ｄ和１４ｄ时均高,为（２８. ６０±０．５２）个?ｍｍ－２（χ２ ＝１３. １０２,Ｐ＜０．０５;χ２＝２０．１３２,Ｐ＜０．０１）。结论　ＮＦ-κＢ在氧诱导血管增殖性视网膜病变小鼠视网膜中表达明显升高,其趋势与ＶＥＧＦ的变化相同,ＮＦ-κＢ参与了缺氧状态下视网膜新生血管形成的调控过程。     

通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的作用

目的　观察通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜ＩＫＫβ／ＩＫＢα／ＮＦ-κＢ通路的影响。方法　４０只ＫＫ／Ｕｐｊ-Ａｙ小鼠随机分为模型组、通心络低（１ｇ?ｋｇ－１）、中（２ｇ?ｋｇ－１）、高（４ｇ?ｋｇ－１）剂量组,每组各１０只,１０只Ｃ５７ＢＬ／６小鼠为对照组。通心络组按相应剂量灌胃给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天１次,连续１２周。测定体质量、空腹血糖值（ｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕ-ｃｏｓｅ,ＦＢＧ）,伊文思蓝法（ｅｖａｎｓｂｌｕｅｍｅｔｈｏｄ,ＥＢ）测定血-视网膜屏障的通透性,ＨＥ染色法观察视网膜形态学变化,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ（ｑＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定ＩＫＫβ、ＩＫＢα、ＮＦ-κＢｍＲＮＡ和蛋白的表达及Ｐ-ＩＫＢα和核ＮＦ-κＢ蛋白的表达。结果　通心络高剂量组较中、低剂量组细胞结构更致密,排列更有序。通心络低、中、高剂量组ＥＢ含量分别（２０．８２±３．８８）ｎｇ?ｍＬ－１、（１６．４３±２６０）ｎｇ?ｍＬ－１、（１６．１４±２．４２）ｎｇ?ｍＬ－１,较模型组（２５．５３±３．５７）ｎｇ?ｍＬ－１明显下降（均为Ｐ＜０．０５）。通心络中、高剂量组ＩＫＫβｍＲＮＡ和蛋白表达量较模型组显著下降（均为Ｐ＜０．０１）;通心络组ＩＫＢαｍＲＮＡ,通心络中、高剂量组ＩＫＢα蛋白以及Ｐ-ＩＫＢα蛋白的表达均较模型组显著下降（均为Ｐ＜０．０１）,通心络低、中、高剂量组核ＮＦ-κＢ蛋白表达量为０．５２±０．０５、０４３±００５、０３４±０．０４,显著低于模型组（０．６１±０．０７）（均为Ｐ＜０．０５）。结论　通心络胶囊可明显改善ＫＫ／Ｕｐｊ-Ａｙ小鼠视网膜病变,其机制与抑制ＩＫＫβ／ＩＫＢα／ＮＦ-κＢ通路相关。     

泪腺肿瘤组织中GPX3基因mRNA和蛋白的表达及其相关性

目的　探讨ＧＰＸ３基因ｍＲＮＡ和蛋白在泪腺上皮性肿瘤中的表达及其临床意义。方法　采用逆转录-多聚酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔ技术,检测３２例泪腺多形性腺瘤、２８例泪腺腺样囊性癌及９例正常泪腺组织中的ＧＰＸ３基因ｍＲＮＡ及蛋白的表达。结果　ＲＴ-ＰＣＲ结果显示,ＧＰＸ３ｍＲＮＡ在正常泪腺组织、泪腺多形性腺瘤及泪腺腺样囊性癌中的表达量分别为:０．９０±０．０１、０．４８±０．０３、０．２１±０．０１,三组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔ结果显示,ＧＰＸ３蛋白在正常泪腺组织、泪腺多形性腺瘤及泪腺腺样囊性癌中的表达分别为１９８５．００±１２１．６３、７６８．０１±１２１．３２、０,逐渐降低,三组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　ＧＰＸ３可能参与了泪腺肿瘤的发生、发展,可作为鉴别泪腺良、恶性疾病的一种辅助分子标记物。     

羊毛甾醇合酶及羊毛甾醇在大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的分布

背景 已有研究证实与羊毛甾醇结构相似的三萜类化合物对于全身多种疾病具有治疗作用,近年来发现羊毛甾醇合酶(LSS)及羊毛甾醇对白内障具有治疗作用,但羊毛甾醇及其抑制剂与其他眼病的关系尚不清楚.了解羊毛甾醇在眼组织中的分布有助于阐明其与眼病的关系. 目的 研究正常大鼠角膜、晶状体和视网膜中LSS及羊毛甾醇的表达及分布,为相关眼科疾病的靶向治疗提供依据.方法 取SPF级雄性SD大鼠15只,采用戊巴比妥钠过量麻醉法处死实验大鼠,立即摘取眼球,分别采用Western blot和逆转录(RT)-PCR法检测大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中LSS蛋白及其mRNA的表达情况;采用免疫荧光化学法对LSS在角膜、晶状体和视网膜组织中的表达进行定位;采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)检测羊毛甾醇在正常大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的含量. 结果 Western blot法检测显示,大鼠视网膜中无LSS蛋白表达,LSS蛋白在晶状体组织的相对表达量为0.43±0.05,明显高于角膜组织中的0.25±0.03,差异有统计学意义(t =-5.35,P＜0.01).RT-PCR结果显示,正常大鼠视网膜中无LSS mRNA表达,大鼠角膜和晶状体组织中LSS mRNA的相对表达量为0.51±0.04,明显高于角膜组织中的0.29±0.02,差异有统计学意义(t=-8.34,P＜0.01).免疫荧光化学法结果表明,LSS主要表达于角膜上皮、基质和内皮层角膜细胞的细胞质以及晶状体上皮细胞和浅皮质层细胞,而视网膜组织中未检测到LSS表达,且视网膜中LSS与NeuN标记的神经元及谷氨酰胺合成酶(GS)标记的Müller细胞无共表达.LC-MS检测显示,正常大鼠视网膜中未检测到羊毛甾醇,大鼠晶状体中含羊毛甾醇为(24.37±2.91) ng/mg,明显高于角膜组织中的(5.31±0.58) ng/mg,差异有统计学意义(t=-11.13,P＜0.01).结论 LSS及羊毛甾醇分布于大鼠角膜各层组织以及晶状体组织中,在视网膜各层组织中均无LSS表达.     

过氧化物酶体增生物激活受体γ在鼠眼球中的分布

背景过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）是一类由配体激活的核转录因子,是潜在的抗炎、抗纤维增生、抗新生血管形成及神经保护因子,其在动物和人体组织中的生理病理功能是目前的研究热点之一,PPARγ与眼科疾病的研究受到关注。目的研究PPARγ在眼部不同组织细胞中的表达,为PPARγ激动剂在眼科疾病治疗中的应用提供参考依据。方法取SPF级C57BL／6J小鼠6只及SD大鼠1只,用质量分数3％水合氯醛麻醉处死后立即摘除眼球,采用Western blot法检测小鼠角膜、晶状体和视网膜组织中PPARγ蛋白的表达;采用免疫组织化学和免疫荧光化学法检测PPARγ在小鼠角膜、晶状体、视网膜、睫状体及视神经组织中的表达及定位。结果Western blot法检测表明,PPARγ在小鼠角膜、晶状体、视网膜中均呈阳性表达。免疫组织化学和免疫荧光化学法检测显示,PPARγ在角膜组织中主要表达于上皮层,以基底细胞染色最强,而角膜内皮及基质细胞上仅有弱表达。PPARγ在晶状体中主要表达于上皮细胞和浅皮质层;在视网膜组织中,PPARγ主要表达于视网膜节细胞层、内丛状层、外丛状层和内核层,此外PPARγ在SD大鼠睫状体组织中主要表达于无色素上皮。免疫荧光化学法检测显示,其在视网膜中与Muller细胞标志物谷氨酰胺合成酶（GS）共定位表达明显;PPARγ在视神经组织中的表达与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）共定位表达明显。结论PPARγ广泛分布于眼不同组织中并呈特异性表达,该结果为相关眼科疾病的靶向治疗提供了依据。     

缺氧诱导因子-1α在大鼠角膜发育过程中的表达

目的　观察大鼠角膜在胚胎期及生后发育期缺氧诱导因子-１α（ｈｙｐｏｘｉａ-ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ-１ａｌｐｈａ,ＨＩＦ-１α）的表达,探讨ＨＩＦ-１α与角膜发育之间的关系。方法　取实验用Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为８组:胚胎１２ｄ（Ｅ１２）、胚胎１６ｄ（Ｅ１６）、胚胎２０ｄ（Ｅ２０）、生后１ｄ（Ｐ１）、生后７ｄ（Ｐ７）、生后１５ｄ（Ｐ１５）、生后２１ｄ（Ｐ２１）、成年组,每组３只鼠６眼,共４８眼。每只鼠取一眼,采用免疫组织化学方法检测ＨＩＦ-１α的表达,另一眼采用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测角膜组织中ＨＩＦ-１αｍＲＮＡ的表达（Ｅ１２、Ｅ１６时鼠胚眼球较小,无法分离角膜组织,未行ＰＣＲ检测）。结果　免疫组织化学染色结果显示,大鼠在角膜发育过程中,ＨＩＦ-１α的表达存在时空变化。Ｅ１２时,由表面外胚层分化的两层细胞内可见明显棕黄色颗粒。Ｅ１６时,分化形成的上皮层、基质层、内皮层中ＨＩＦ-１α阳性表达显著。Ｅ２０时,棕黄色颗粒集中表达在上皮层、内皮层,基质层染色较弱。Ｐ１、Ｐ７时,大鼠眼睑粘连,角膜各层中ＨＩＦ-１α维持少量表达,上皮、内皮细胞较基质细胞染色明显。Ｐ１５时,ＨＩＦ-１α在上皮层阳性着色尤其强烈,细胞核、细胞浆棕黄色颗粒明显,基质层未见阳性着色,内皮层见少量细胞核着染。Ｐ２１时,ＨＩＦ-１α的阳性表达更加集中在上皮层基底细胞,基质层、内皮层表达阴性。成年组,角膜中仅在上皮基底细胞见ＨＩＦ-１α阳性表达,余未见阳性。实时荧光定量ＰＣＲ显示ＨＩＦ-１αｍＲＮＡ在角膜发育期各组表达量不同,差异有统计学意义（Ｆ＝９７．００、Ｐ＜０．０５）。Ｐ１组与Ｅ２０组之间,成年组与Ｐ２１组之间比较,差异均无统计学意义（Ｐ＝０．２０、０．０５）,其余各组间差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＨＩＦ-１α在大鼠角膜发育过程中存在阳性表达,且随发育时期不同表达部位、表达量发生变化。ＨＩＦ-１α可能在角膜各层分化、细胞分裂过程中发挥重要作用。     

Dystrobrevin localization in photoreceptor axon terminals and at blood-ocular barrier sites

PURPOSE: Dystrobrevin is a newly discovered dystrophin-associated protein with multiple sites for phosphorylation on tyrosine residues. In the present study, the cellular distribution and subcellular localization of dystrobrevin were examined in the adult rat retina, cornea, lens, iris, ciliary body, and cultured Müller cells. METHODS: Immunoblot analysis, confocal laser scanning microscopy, and immunoelectron microscopy were used to examine dystrobrevin expression. RESULTS: Immunoblot analysis showed that an approximately 87-kDa band was expressed predominantly in the lens, retina, iris and ciliary body, whereas an approximately 60-kDa band was expressed in cultured Müller cells, cornea, retina, iris, and ciliary body. Confocal microscopy demonstrated dystrobrevin in the inner limiting membrane, outer plexiform layer, and retinal pigment epithelium and around blood vessels in the retina. At the ultrastructural level, dystrobrevin was localized under cell membranes of rod spherules and cone pedicles of photoreceptor cell terminals but often was found in the cytoplasm of endothelial cells and Müller cells. Furthermore, dystrobrevin was colocalized with beta-dystroglycan in corneal endothelium; lens, iris, and ciliary epithelia; and cultured Müller cells. CONCLUSIONS: The present study demonstrates that dystrobrevin is expressed in neurons, glia, and endothelial cells in the rat retina. In addition, dystrobrevin is localized at the blood-ocular barrier sites in extraocular tissue. These data suggest that dystrobrevin plays an important role in visual function.     

Functions of aquaporins in the eye

The aquaporins (AQPs) are integral membrane proteins whose main function is to transport water across cell membranes in response to osmotic gradients. At the ocular surface, AQP1 is expressed in corneal endothelium, AQP3 and AQP5 in corneal epithelium, and AQP3 in conjunctival epithelium. AQPs are also expressed in lens fiber cells (AQP0), lens epithelium (AQP1), ciliary epithelium (AQP1, AQP4) and retinal Müller cells (AQP4). Mutations in AQP0 produce congenital cataracts in humans. Analysis of knockout mice lacking individual AQPs suggests their involvement in maintenance of corneal and lens transparency, corneal epithelial repair, intraocular pressure (IOP) regulation, retinal signal transduction and retinal swelling following injury. The mouse phenotype findings implicate AQPs as potential drug targets for therapy of elevated IOP and ocular disorders involving the cornea, lens and retina. However, much research remains in defining cell-level mechanisms for the ocular AQP functions, in establishing the relevance to human eye disease of conclusions from knockout mice, and in developing AQP-modulating drugs.     

葡萄糖转运蛋白-1在糖尿病早期大鼠视网膜的表达

目的　通过检测糖尿病早期大鼠视网膜葡萄糖转运蛋白-１（ｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ-１,ＧＬＵＴ１）表达的变化,揭示ＧＬＵＴ１对早期糖尿病视网膜的影响。方法　选取鼠龄为１２周的健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠８０只,随机选取４０只采用链脲佐菌素左下腹腔一次性注射建立１型糖尿病模型（实验中４只因严重感染而死）,另取４０只作为对照组注射同等量柠檬酸缓冲液。模型组大鼠建模成功后分别在４周、８周、１２周、１６周（每周９只大鼠）测定血糖和糖化血红蛋白,取同时期对照组（每周１０只）大鼠做相同检测。免疫组织化学方法检测视网膜ＧＬＵＴ１蛋白表达,利用ＡＤＰ酶组织化学染色方法进行视网膜铺片,了解视网膜血管改变情况。结果　糖尿病组血糖及糖化血红蛋白显著高于对照组。免疫组织化学染色、光镜形态学观察显示糖尿病组１６周视网膜节细胞层细胞排列极其紊乱,但未见出血,视网膜内核层水肿,内外核层细胞排列紊乱。糖尿病组ＧＬＵＴ１表达较对照组大鼠视网膜中阳性染色颗粒均明显增加。糖尿病组视网膜ＧＬＵＴ１表达的平均积分光密度在４周（６３．９０３３±４２．２４５３）、８周（９６．３６９１±１８．６９７２）、１２周（１０２．００２８±２３．９９８９）、１６周（１３０．４０８７±７２．７４５１）依次有所增强,其中８周和１２周差异无统计学意义,其他各时间点均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;两组各个时间点相比较,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＡＤＰ酶组织化学染色显示:对照组视网膜血管自视盘发出的大血管向四周呈放射状分布,毛细血管分布均匀;糖尿病组大鼠１６周视网膜出现视盘周围血管灌注降低,周边部部分毛细血管迂曲及血管闭塞。结论　糖尿病大鼠视网膜中ＧＬＵＴ１表达增强,并随病程进展逐渐增高。出现明显视网膜微血管改变时,显著增高。     

Patterned expression of BDNF and NT-3 in the retina and anterior segment of the developing mammalian eye.

PURPOSE: The neurotrophins brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and neurotrophin-3 (NT-3) are hypothesized to play an important role in vertebrate eye development because of their patterned expression in the developing and adult neuroretina, their regulated response to retinal and optic nerve injury, and the effects of altered neurotrophin signaling on retinal development. To further characterize the role of these neurotrophins in mammalian eye development and maintenance, the pattern of expression of BDNF and NT-3 was analyzed in the developing and mature mouse eye. METHODS: Using mouse strains in which the reporter gene lacZ, encoding the enzyme beta-galactosidase, was targeted to either the BDNF or NT-3 locus, the expression of BDNF and NT-3 in the eyes of mice heterozygous for these mutations was analyzed by enzyme histochemistry during embryogenesis, postnatal development, and adulthood. RESULTS: BDNF and NT-3 expression were first observed in the inner and outer segments of the developing optic cup at embryonic days 10.5 to 11.5. As the retina matured, BDNF expression was restricted to retinal ganglion cells and a subset of cells in the inner nuclear layer (INL), whereas NT-3 expression was confined to a small subset of cells in the INL and ganglion cell layer. Both neurotrophins were expressed within the developing retinal pigment epithelium. In the anterior segment, BDNF and NT-3 were expressed at high levels in the developing and mature ciliary epithelium. In the lens and cornea, however, these neurotrophins displayed distinct patterns of expression during development and adulthood. BDNF expression was found in the lens epithelium, immature trabecular meshwork, corneal endothelium, and corneal epithelium, whereas NT-3 expression was confined to the corneal epithelium. CONCLUSIONS: BDNF and NT-3 exhibit different, yet overlapping, patterns of expression during the development and differentiation of the mouse eye. In addition to the neuroretina, the spatiotemporal expression of BDNF and NT-3 may play an important role in the development and maintenance of the lens, ciliary body, trabecular meshwork, and cornea.     

Transcorneal Extrusion of an Intraocular Lens

An 82-year-old woman was treated for pseukophakic bullous keratopathy with a penetrating keratoplasty complicated by a postoperative retinal detachment. The retina was reattached successfully but impaired visual acuity remained. She was lost to follow-up for 14 months. Upon re-examination the pseudophakic lens optic had eroded completely through the donor cornea. Histologic study of the enucleated eye suggests that the intraocular lens optic came in contact with the posterior cornea after a transient wound dehiscence. The lens haptics, still attached to the optic, extended through anterior corneal scar tissue into the globe. The globe remained sterile and intact during the extrusion process. This case emphasizes the importance of selecting patients who will comply with postoperative care and the need to minimize contact between intraocular lenses and ocular tissue.