MicroRNA-93在宫颈癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的  探讨microRNA-93（miR-93）在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法  收集2014年1月-2014年7月中南大学湘雅医院有完整病历资料的41例宫颈癌患者组织标本及对应癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈癌组织中miR-93表达水平;采用脂质体转染法将miR-93模拟片段（mimic）转染入宫颈癌Hela细胞,恢复细胞内miR-93表达;活细胞计数试剂盒（CCK-8）和流式细胞术检测miR-93对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响;Transwell小室法检测其对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测Hela细胞中上皮生长因子受体（EGFR）及其下游蛋白的表达量变化。结果  41例宫颈癌患者肿瘤组织中miR-93表达量（0.048±0.013）低于癌旁组织（0.113±0.025）,差异有统计学意义（P =0.026）;转染miR-93模拟片段后,宫颈癌Hela细胞中miR-93表达恢复;与对照组和空白组比较,实验组宫颈癌细胞增殖能力下降（P =0.004）,早期凋亡比例增加（P =0.032）,侵袭（P =0.003）和迁移能力下降（P =0.003）;过表达miR-93的Hela细胞EGFR及下游的p-AKT表达下降（P =0.005）,而总AKT蛋白无明显变化（P =0.372）。结论  miR-93在宫颈癌组织中的表达量下降,恢复其在宫颈癌细胞中的表达能够明显抑制其细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制部分与miR-93抑制宫颈癌细胞EGFR/AKT信号通路活性有关。

     

FBXO22表达对HPV阳性宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的探索FBXO22表达对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞生物学行为的影响。 方法qRT-PCR和Western blotting检测FBXO22在正常宫颈细胞H8细胞和宫颈癌细胞系中的差异表达。实验组构建敲除和过表达FBXO22的Hela、CaSki细胞,对照组转入空载体。qRT-PCR和Western blotting检测转染后FBXO22表达；MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验检测FBXO22表达对细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭能力的影响。 结果与H8细胞比较,FBXO22在HPV阳性宫颈癌细胞中呈现过表达(P＜0.05)。与对照组比较,Hela、CaSki细胞FBXO22 mRNA和蛋白、细胞增殖活性、细胞克隆形成率过表达组增加,敲低组减少(P＜0.05)；G2/M期细胞百分率、划痕宽度、穿膜细胞数过表达组减少,敲低组增加(P＜0.05)。 结论FBXO22在HPV阳性宫颈癌细胞中过表达,FBXO22表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移,沉默FBXO22可能为宫颈癌治疗提供潜在靶点。     

JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响

目的分析JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-JMJD2B组和si-HPIP组。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞中JMJD2B、HPIP mRNA表达水平。Western blotting检测宫颈癌细胞和人正常宫颈上皮细胞JMJD2B、HPIP蛋白表达水平。CCK-8检测Hela细胞增殖能力。Transwell检测Hela细胞迁移和侵袭能力。 结果JMJD2B、HPIP蛋白在宫颈癌细胞中表达高于人正常宫颈上皮细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-JMJD2B组和si-HPIP组JMJD2B、HPIP mRNA和蛋白表达、细胞增殖、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均明显减少(P＜0.05)。 结论JMJD2B和HPIP表达可能调节宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。     

膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa形态的影响

膜联蛋白(ANXA)是一个Ca2+依赖的磷脂结合蛋白家族,结构上,它们都有C端保守的核心区域,N端序列中有磷脂酶A2(PLA2)和蛋白激酶C(PKC)的结合位点.功能上,在Ca2+存在的条件下,它们可与细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(PS)可逆性地结合.PKC是胞外细胞信号转导通路的重要成分,若过度激活会造成细胞增殖失调,佛波脂(PMC)是PKC的激动剂,可持续激活PKC而引起肿瘤的发生.     

WIF1在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨Wnt抑制因子(WIF1)在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响.方法 采用Western blot及RT-PCR法检测该院经手术切除的82例宫颈癌组织及癌旁组织中WIF1蛋白及mRNA表达,并应用LipofeetamineTM 2000将pcDNA 3.1 WIF1真核表达载体(过表达组)及空质粒pcDNA3.1(对照组)转染到宫颈癌Hela细胞中,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测CyclinD1、C-myc、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9表达.结果 与癌旁组织比较,宫颈癌组织中WIF1蛋白及mRNA表达量显著降低(P＜0.01);与对照组比较,过表达组中WIF1蛋白及mRNA表达量提高(P＜0.01),细胞活力降低(P＜0.01),细胞凋亡率提高(P＜0.01),细胞周期阻滞于G1期(P＜0.01),CyclinD1、C-myc、MMP-2、MMP-9表达量显著下调(P＜0.01).结论 WIF1在宫颈癌组织中低表达,提高WIF1表达能显著抑制宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭.     

miR-126-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及作用机制

目的 探究miR-126-3p过表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 研究样本为来自北京生物技术有限公司的宫颈癌HeLa细胞,培养后随机分为对照组(n=9)及miR-126-3p过表达组(n=9),对照组细胞正常培养,miR-126-3p过表达组采用miR-126-3p模拟物转染。使用细胞增殖实验检测两组样本细胞活力,使用流式细胞术检测两组细胞周期,使用划痕实验、Wright染色法检测两组细胞迁移量和细胞迁移率,使用蛋白印迹检测两组Bax、Casepase-3、Bcl-2、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白表达,使用DAPI染色观察两组细胞凋亡小体表达。结果 miR-126-3p过表达组miR-126-3p相对表达量比对照组高(3.14±0.28 vs 1.04±0.11,P=0.000),模型构建成功。miR-126-3p过表达组HeLa细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。DAPI染色结果显示,miR-126-3p过表达组细胞显示出凋亡小体,对照组未显示出明显的细胞凋亡。miR-126-3p过表达组G0/G1期细胞占比显著高于对照组,S期细胞占比显著低于...     

HPVL1和EGFR在宫颈癌及癌前病变中的表达及意义研究

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)L1、表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈癌及癌前病变中的表达情况及价值.方法 选取2009年1月至2015年5月本院收治的40例宫颈癌、300例癌前病变、10例子宫颈HPV感染与20例尖锐湿疣患者为研究对象,采取免疫组化检查HPVL1、EG-FR在不同患者中的表达情况,并对40例宫颈癌患...     

宫颈癌EGFR和VEGF的表达及相关性研究

目的探讨宫颈癌中EGFR及VEGF的表达与宫颈癌的关系及其相关性。方法采用免疫组化EnVision法检测80例宫颈癌组织芯片中EGFR和VEGF的表达,分析其与宫颈癌临床病理特征的关系及其间相关性。结果宫颈癌中的EGFR和VEGF阳性表达率分别为94.8%、79.1%,癌旁组织中的表达率分别为15%、20%。两者在两种组织中的表达有显著差异(P<0.01)。EGFR表达与肿瘤大小、组织类型、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05);VEGF与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05);EGFR和VEGF表达两者之间有显著性相关性(r=0.2548,P<0.05)。结论 EGFR和VEGF高表达与宫颈癌的生长、浸润转移及预后有相关性,两者在宫颈癌的发展中可能存在协同作用。     

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响

目的：探讨自噬基因Beclin 1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响。方法：运用Beclin 1过表达质粒pIRES2-Zs－Green1-h Beclin 1转染食管癌 Eca109细胞株,RT-PCR和Western blot检测Beclin 1的mRNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化。结果：pIRES2-ZsGreen-hBeclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株。目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制（P=0.000,P=0.000）;目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组（P值均<0.05）;Beclin 1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制。结论：Beclin 1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因。     

微环境对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响

肿瘤的发生和发展是一个多因素、多步骤、多基因共同作用的综合病变过程。特殊的宿主微环境通过种种调节机制影响着肿瘤细胞的生成发展、侵袭转移。对肿瘤细胞之间、肿瘤与微环境相互作用的深入研究,有助于更加深入地了解恶性肿瘤的生物学本质,从而应用分子技术手段逆转或阻断肿瘤的恶性表型。1肿瘤细胞恶性生物学行为及所处微环境的组成肿瘤从始发突变到演进发展,是一个遗传改变的积累和选择克隆化的过程。肿瘤细胞的生物学特性是多样化的,有自主性、可移植性、侵袭性、转移性等。来自同一器官的肿瘤可以表现为不同的组织学类型,即使在同一…     

表皮生长因子对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对人肝癌细胞EGFR／DNA表达的影响。方法 采用双参数流式细胞免疫荧光技术检测。结果 EGF短时间内上调肝癌细胞EGFR及DNA表达，随时间延长表现出下调作用。两种相对立的作用呈时间依赖性；结论 EGFR表达的变化可能是EGF对肝癌细胞表现出两种相对立作用的机理之一。     

慢病毒载体miR-184过表达对前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响

目的 探讨负载microRNA-184(miR-184)的慢病毒过表达miR-184对前列腺癌细胞PC-3生物活动的影响.方法 实验分为3组:过表达慢病毒组、阴性对照组以及空白组,将过表达的miR-184慢病毒转染前列腺癌细胞PC-3,转染72 h后,通过荧光显微镜评估细胞转染情况以及实时荧光定量PCR检测各组细胞mi...     

沉默β-catenin表达对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响与作用机制研究

目的探讨β-链蛋白（β-catenin）表达下调对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响,并分析其作用机制。方法将RNA干扰慢病毒（β-catenin-RNAi慢病毒）及空载体慢病毒（β-catenin-Neg）分别感染MGC-803细胞,分为实验组（MGC-803-RNAi细胞）、阴性对照组（MGC-803-Neg细胞）、空白对照组（未处理的MGC-803细胞）。Westernblot检测验证转染效率;双染流式细胞术检测细胞凋亡率,单染流失细胞术分析细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力;Westernblot检测细胞Bax、Bcl-2、cyclinD1及基质金属蛋白酶（MMP）-7蛋白表达水平。结果MGC-803-RNAi、MGC-803-Neg细胞中显示绿色荧光的细胞约占80%,MGC-803细胞不显示荧光;与MGC-803-Neg、MGC-803细胞相比,MGC-803-RNAi细胞β-catenin表达水平明显下调(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),出现G1/S期阻滞现象(P＜0.05),侵袭能力明显减弱(P＜0.05),Bcl-2、cyclinD1及MMP-7蛋白表达水平下调(均P＜0.05）,而Bax蛋白表达水平上调(P＜0.05)。结论沉默β-catenin表达可促进胃癌MGC-803细胞凋亡,阻滞其细胞周期进程,减弱其侵袭转移力,其作用机制可能与影响Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白表达有关。     

COX-2在VEGF-C介导的人宫颈癌细胞生物学行为中的作用研究

目的检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和环氧合酶-2(COX-2)在人宫颈癌细胞系中表达,探讨二者之间的关系及COX-2在VEGF-C介导的人宫颈癌细胞生物学行为中的作用。方法用Western blot方法检测VEGF-C和COX-2在HeLa、Siha、C33a和Caski等4株宫颈癌细胞中的表达;用特定浓度的COX-2特异性抑制剂NS398处理HeLa细胞,评估其对HeLa细胞的增殖、转移产生的影响。结果 VEGF-C和COX-2蛋白在4株宫颈癌细胞中均有表达,且在不同细胞株中二者表达强弱一致。用NS398处理HeLa细胞后,其VEGF-C蛋白表达明显降低,且细胞凋亡率增加。NS398可诱导HeLa细胞增殖活性降低(P<0.05),且呈剂量依赖模式。Transwell实验结果显示NS398处理组细胞侵袭力为(25.45±3.67)%,较对照组(40.38±0.72)%明显减弱(P<0.05)。结论 VEGF-C和COX-2均在人宫颈癌细胞中表达,且COX-2与VEGF-C表达之间有一定的相关性。COX-2可能是宫颈癌细胞中VEGF-C表达的一个调节者,其抑制剂NS398对于VEGF-C介导的肿瘤生长和转移有一定抑制作用。     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

慢病毒介导的过表达载脂蛋白A1宫颈癌稳定细胞系建立的实验研究

目的采用慢病毒载体构建稳定过表达载脂蛋白A1(apolipoprotein A1, ApoA1)基因的SIHA、HELA细胞系,为研究ApoA1在宫颈癌中的作用机制奠定基础。方法构建过表达ApoA1基因的慢病毒载体,感染SIHA、HELA细胞并进行嘌呤霉素抗性筛选,构建稳定过表达ApoA1基因的SIHA、HELA细胞系,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot方法检测ApoA1 mRNA和蛋白的表达水平。结果 RT-qPCR显示SIHA及HELA细胞转染组中ApoA1mRNA表达量较阴性对照组明显提高(P <0.01),Western blot提示ApoA1蛋白在SIHA及HELA细胞中低表达,转染组ApoA1蛋白水平的表达明显高于对照组。结论成功构建稳定过表达ApoA1基因的宫颈癌SIHA、HELA细胞系。     

胃泌素、生长抑素的表达与胃癌生物学行为相关性研究

目的 研究胃癌组织中胃泌素(gastrin)、生长抑素(somatostasis，SS)的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法 应用免疫组化SP法，对42例胃癌组织中胃泌素、生长抑素蛋白表达进行检测。结果 胃泌素表达水平在胃癌Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较，有显著性差异，随着胃癌的进展，胃泌素的蛋白表达呈递增趋势。胃癌分化程度降低，生长抑素蛋白表达减弱，即高分化胃癌生长抑素蛋白表达水平显著高于低分化胃癌。结论 胃泌素促进胃癌的生长、浸润和转移，而生长抑素则抑制胃癌细胞增殖，胃泌素、生长抑素表达与胃癌的生物学行为有一定关系。     

宫颈癌Ki-67及PCNA表达的比较研究

目的研究Ki-67及PCNA两种增殖抗原在宫颈癌组织中的表达特点，了解其表达的相关性。方法采用免疫组化方法（S—P法）对57例宫颈癌（包括原位癌，早期浸润癌及浸润癌）组织切片进行Ki-67及PCNA染色，并对两者进行相关性分析，同时检测9例慢性宫颈炎作为对照研究。结果9例慢性宫颈炎中Ki-67均表达阴性，而PCNA有8例基底细胞阳性；在宫颈癌中PCNA抗原表达强度明显高于Ki-67（P〈0．005）。结论在宫颈癌组织中PCNA抗原表达较强，几乎涵盖了所有Ki-67的增殖信息。