不同抗真菌药物对艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病临床疗效及体外药敏试验结果分析

目的观察艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病患者体外真菌药敏结果和不同抗真菌治疗方案的疗效。方法将酵母相马尔尼菲篮状菌调成菌悬液并转移至药敏培养基中混匀,然后将混匀的酵母菌悬浮液接种到ATBTMFUNGUS 3酵母样真菌敏感性检测试纸条上孵育,可以通过肉眼判读杯状凹中酵母菌的生长情况,获得两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑、氟康唑、氟胞嘧啶的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);同时临床观察不同抗真菌药物治疗的疗效。结果84株马尔尼菲篮状菌均显示两性霉素B MIC<0.5 mg/L,伊曲康唑MIC<0.125 mg/L,伏立康唑MIC<0.06 mg/L。73株(86.90%)马尔尼菲篮状菌显示氟康唑MIC≥1 mg/L。69株(82.14%)马尔尼菲篮状菌显示氟胞嘧啶MIC≥4 mg/L。药敏结果显示马尔尼菲篮状菌对两性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑的MIC均处于低水平,而对氟康唑和氟胞嘧啶MIC均处于高水平。84例患者中有7例未接受抗真菌治疗者均死亡,77例患者接受了抗真菌治疗,其中74例治疗好转,治疗好转率96.10%。两性霉素B治疗组好转率96.88%,伏立康唑治疗组好转率92.31%,两组比较差异无统计学意义(P=0.43)。结论艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病可以选择两性霉素B、伏立康唑和伊曲康唑治疗,不推荐选择氟康唑和氟胞嘧啶治疗。     

氟康唑诱导菌丝相马尔尼菲青霉菌产67.5kDa蛋白

目的探讨在体外加入氟康唑培养菌丝相马尔尼菲青霉菌的外分泌蛋白质变化情况。方法11株马尔尼菲青霉菌分别接种于含8μg/mL和不含氟康唑的30mL沙氏液基(SDB)中,25℃培养1周。E-test法测定不同培养液中菌丝对氟康唑的药敏。同时提取培养液中的蛋白质,聚丙烯酰胺凝胶电泳比较外分泌蛋白质差异。结果含氟康唑SDB中的马尔尼菲青霉菌菌丝悬液均变为玫瑰红色,不含氟康唑SDB中菌丝悬液颜色不变红。含氟康唑SDB中菌丝氟康唑MIC值显著增高(P<0.01),而且分泌67.5kDa蛋白质。结论在25℃沙氏液基中,8μg/mL氟康唑可以诱导马尔尼菲青霉菌产红色色素并分泌67.5kDa蛋白质。     

用E—test法对菌丝相马尔尼莫青霉进行体外药敏检测

用Ｅ－ｔｅｓｔ抗真菌药敏试条研究酮康唑,伊曲康唑、５－氟胞嘧啶两性霉素Ｂ、氟康唑对马尔尼菲青霉菌丝相的敏感性,判定ＭＩＣ值。结果５种抗真菌药对ＰＭ菌丝相均具良好敏感性,尤以伊曲康唑为优。马尔尼菲青霉的药敏度为临床上选择有效物具有一定的意义。     

蛇床子素体外对酵母相马尔尼菲篮状菌的抗菌活性检测

目的 体外检测蛇床子素对酵母相马尔尼菲篮状菌（Talaromyces marneffei,TM）的抗菌活性,为临床用中药治疗马尔尼菲篮状菌感染提供实验依据。方法 TM菌株20株,包括1株标准株, 2株氟康唑天然耐药株,11株临床分离株,6株野生竹鼠分离株。使用96孔细胞培养板,采用微量稀释法制备蛇床子素、氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑药敏板。将TM受试菌以（1～5） × 103 CFU/ml菌悬液接种于药敏板,在 37 ℃下培养48 h后观察结果,同时设阳性对照（仅加入TM和培养基,不加药物）和阴性对照（仅加入培养基,不加TM和药物）。参照美国临床实验室标准研究所颁布的酵母菌抗真菌药物敏感性试验方案 M27-A2判定最低抑菌浓度（MIC值）。与生长对照孔相比, ≥ 80%生长抑制所对应的最低药物浓度为氟康唑MIC,其余药物MIC为100%生长抑制所对应的最低药物浓度。结果 质控株MIC值均在参考范围内,阳性对照孔TM生长良好。氟康唑MIC值范围2.0～8.0 mg/L（对氟康唑天然耐药株为128 mg/L）,两性霉素B 1.0～4.0 mg/L,伊曲康唑0.03～0.25 mg/L,伏立康唑0.06～0.25 mg/L。蛇床子素对标准株FRR2161的MIC为16 mg/L,对氟康唑天然耐药株的MIC均为32 mg/L,对1株野生竹鼠分离株MIC为128 mg/L,对其他16株TM菌株的MIC值范围为16～64 mg/L,MIC90及MIC50分别为64和32 mg/L。结论 蛇床子素具有抑制酵母相马尔尼菲篮状菌的活性。     

4种抗真菌药物对马尔尼菲青霉感染体外药敏试验与临床疗效

目的：探讨4种抗真菌药物对马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei,PM）感染体外药敏试验与临床疗效的相关性。方法：①体外药敏试验：采用美国临床实验室标准委员会（NCCLS）方案中的E—test法测定9株临床分离PM的酵母相对酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B的最小抑菌浓度（MIC）值。②治疗方法：根据病情予两性霉素B、氟康唑、酮康唑或伊曲康唑治疗,联合用药或单独给药。结果：①体外药敏试验：伊曲康唑、酮康唑的MIC值范围分别是0．002-0．064μg/mL、0．012-0．250μg/mL,无耐药株。氟康唑耐药株1株,敏感株8株．MIC值范围是1．500～32．000μg/mL。两性霉素B的耐药株4株（44．4％）,MIC值范围是0．047～2.000μg/mL。②临床疗效：6例患者（其中2例合并艾滋病）接受两性霉素B、氟康唑及伊曲康唑联合用药,共4～12周,好转率达66．67％。好转后口服氟康唑及伊曲康唑0．5～1年。3例患者予口服酮康唑或伊曲康唑治疗,好转率达33．33％。结论：受试菌株对唑类抗真菌药物有较高的敏感性,两性霉素B的敏感性较差。但对病情严重的播散性PM病患者如尽早给予两性霉素B、氟康唑及伊曲康唑联合治疗,仍能获得满意的疗效。病情较轻的患者,可给予口服伊曲康唑或酮康唑0．5～1年治疗。疗效满意。     

两性霉素B联合曲酸作用于马尔尼菲青霉的体外药敏实验

目的研究曲酸和两性霉素B在体外联合抵抗马尔尼菲青霉中的相互作用。方法参照美国国家临床实验标准化委员会(NCCLS)提出的标准(M27-A2方案),采用棋盘微量稀释法对马尔尼菲青霉10株临床分离株和8株野生竹鼠分离株的酵母相进行曲酸和两性霉素B的体外联合药敏试验。结果曲酸和两性霉素B联合应用,两种药物对抗17株马尔尼菲青霉的联合药敏0.50FICI≤4.00,1株的联合药敏FICI≤0.50。单用时AMB抵抗马尔尼菲青霉的MIC几何均值为1.75μg/m L,两性霉素B联合曲酸后抵抗马尔尼菲青霉的MIC几何均值为0.82μg/m L,与单用比较有显著降低(P0.01)。结论曲酸可以作为增敏剂提高两性霉素B对马尔尼菲青霉菌酵母相的敏感性。     

几种抗真菌药物对马尔尼菲青霉的体外药敏试验

目的 观察马尔尼菲青霉（PM）广西野生银星竹鼠寄生株与临床人分离株对伏立康唑和几种常用抗真菌药物的敏感性。方法 采用美国临床实验室标准委员会（CLSI）M27-A2和M38-A方案中的微量稀释法,测定伏立康唑、伊曲康唑、特比萘芬、两性霉素B 及氟康唑对14株广西野生银星竹鼠PM寄生株与25株临床人PM分离株25 ℃菌丝相及37 ℃酵母相的最小抑菌浓度（MIC）。用两样本均数比较t检验比较PM寄生株与临床人PM分离株MIC的差异性,用配对t检验比较同一株菌在两种不同温度相下的MIC差异性。结果 伏立康唑、伊曲康唑、特比萘芬、两性霉素B、氟康唑对PM寄生株菌丝相的MIC分别为：0.0313 ～ 0.1250、0.1250 ～ 1.0000、0.0313 ～ 0.5000、0.2500 ～ 4.0000、2.0000 ～ 8.0000 mg/L;对PM寄生株酵母相的MIC分别为：0.0078 ～ 0.2500、0.0313 ～ 0.5000、0.0313 ～ 1.0000、0.2500 ～ 2.0000、1.0000 ～ 8.0000 mg/L;对PM临床人分离株菌丝相的MIC分别为：0.0313 ～ 0.2500、0.0625 ～ 1.0000、0.0313 ～ 1.0000、0.2500 ～ 4.0000、2.0000 ～ 32.0000 mg/L;对PM临床人分离株酵母相的MIC分别为：0.0039 ～ 0.2500、0.0313 ～ 0.5000、0.0313 ～ 2.0000、0.1250 ～ 2.0000、2.0000 ～ 16.0000 mg/L。5种抗真菌药物对广西野生银星竹鼠PM寄生株与临床人PM分离株菌丝相和酵母相均敏感。同一温度下伏立康唑对两种不同来源PM的MIC最低,其他药物的MIC依次为伊曲康唑、特比萘芬 < 两性霉素B < 氟康唑。同一药物在同一温度下对广西野生银星竹鼠PM寄生株与PM临床分离株的MIC无明显差异;伊曲康唑、两性霉素B、特比萘芬对同一菌株在菌丝相和酵母相下的MIC存在差异。结论 PM对伏立康唑的敏感性最高;来自于广西野生银星竹鼠的PM寄生株与临床人PM分离株对伏立康唑、伊曲康唑、特比萘芬、两性霉素B及氟康唑的MIC类似;菌相的改变可影响PM对伊曲康唑、两性霉素B、特比萘芬的敏感性。     

马尔尼菲青霉菌酵母相生化及药敏分析

目的:研究马尔尼菲青霉菌野生株和人感染株酵母相生化及药敏特性。方法:14株野生菌株和16株人感染株马尔尼菲青霉菌酵母相分别进行生化和抗真菌药药敏检测,分析其生化反应特点。结果:全部菌株均能同化葡萄糖、海藻糖、赤藓醇、麦芽糖和纤维二糖,均不能利用硝酸盐且尿素酶试验均阴性,野生株和人感染株生化反应总体无差异(P>0.05)。抗真菌药的敏感率由高到低依次为伊曲康唑、5-氟胞嘧啶、氟康唑、酮康唑和两性霉素B。人感染株对两性霉素B敏感性低于野生株(t=191.5,P<0.05)。结论:马尔尼菲青霉菌野生株和人感染株生化表型基本相同;在临床治疗马尔尼菲青霉菌感染时,应根据抗真菌药敏测试调整用药。     

小檗碱体外对酵母相马尔尼菲篮状菌的抗菌活性检测

目的:体外检测小檗碱对酵母相马尔尼菲篮状菌（TM）的抗菌活性。方法:TM标准株（ATCC22019）1株,临床分离株10株,野生竹鼠分离株10株。TM以（1~5）× 10 3菌落形成单位/ml菌悬液接种于用微量稀释法制备的小檗碱、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、卡泊芬净药敏板,在37 ℃下培养48 ...     

不典型马尔尼菲青霉的形态学对比观察

目的确定不典型马尔尼菲青霉的形态学变异。方法将待研究的马尔尼菲青霉菌株Y株、M株和P株接种到沙堡氏葡萄糖琼脂培养基(SDA),分别置25℃和37℃培养,连续观察株间菌落、镜下的形态学差异,并照相。结果Y株在25℃时形成酵母样或膜样菌落,可快速高产葡萄酒样红色素,镜下呈较细的菌丝结构,未见帚状枝结构;37℃培养为酵母样菌落,镜下菌体形成典型酵母样细胞;M株与P株形态学特征相同,与文献中对马尔尼菲青霉形态学特征的描述一致。结论马尔尼菲青霉种内存在具不典型双相型,且高产色素的表型变异株。     

白念珠菌的药物敏感性与基因型的研究

目的 探讨甲紫等5种抗真菌药物对白念珠菌的药物敏感性,分析白念珠菌药物敏感性与其基因型的关系。 方法 根据M27－A2方案检测甲紫、两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑对67株白念珠菌的药物敏感性。提取白念珠菌基因组DNA,应用PCR扩增白念珠菌25S核糖体 rDNA基因内含子区,根据PCR扩增片段将白念珠菌分为A（36株）、B（23株）、C（8株）基因型,分析白念珠菌不同基因型与药物敏感性的关系。结果 药敏实验结果显示,67株白念珠菌中,8.96%对氟康唑、2.98%对伊曲康唑、1.49%对酮康唑耐药,两性霉素B无耐药菌株。甲紫的最低抑菌浓度在0.125 ~ 4 mg/L。统计学分析显示,白念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性与其基因型无明显相关关系,P值均 > 0.05。结论 氟康唑和伊曲康唑耐药菌株的增多在临床用药选择上应引起注意,甲紫的抗真菌作用值得重视。白念珠菌基因型与抗真菌药物耐药的发生可能无明显相关关系。     

浅部与深部感染来源白念珠菌氟康唑耐药株药物敏感性及耐药基因突变比较

【摘要】 目的 比较浅部、深部感染来源的氟康唑耐药白念珠菌体外对8种抗真菌药物的敏感性及耐药基因突变。方法 26株深部感染来源白念珠菌耐药株、33株浅部感染来源白念珠菌耐药株,参照CLSI酵母菌检测方案M27-A4测定上述菌株对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶、特比萘芬、米卡芬净8种药物单独或联合的体外敏感性。提取所有耐药菌株DNA,通过PCR检测ERG3、ERG11、FUR1 3种耐药基因的突变情况。满足正态分布和方差齐性检验的定量资料两组间比较采用独立样本t检验,不满足者组间比较采用Mann-Whitney U检验,定性资料组间比较采用卡方检验。结果 氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、氟胞嘧啶的最小抑菌浓度（MIC）在浅部感染组和深部感染组间差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而两性霉素B、米卡芬净的MIC两组间差异无统计学意义（均P > 0.05）。96.6%的菌株特比萘芬MIC值＞64 μg/ml,无法进行组间对比。15株白念珠菌（7株深部感染来源、8株浅部感染来源）特比萘芬 + 唑类（氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑）联合药敏试验均显示为协同效应,部分抑菌浓度（FIC）指数0.033～0.187;氟胞嘧啶 + 唑类、氟胞嘧啶 + 两性霉素B、两性霉素B + 氟康唑组合均无明显协同作用,FIC指数0.56～1.125。浅部感染来源白念珠菌ERG3基因突变包括错义突变V351A（33株,100%）,深部感染来源白念珠菌包括错义突变V351A（13株,50%）、A353T（4株,15%）;浅部感染来源白念珠菌ERG11基因突变包括错义突变I437V（32株,97%）、Y132H（23株,70%）、T123I（16株,48%）、K128T（6株,18%）、D116E（5株,15%）、A114S（4株,12%）、E266D（2株,6%）、G448E（2株,6%）、G465S（2株,6%）,深部感染来源白念珠菌包括I437V（23株,88%）、E266D（13株,50%）、E260G（5株,19%）、V488I（4株,15%）;浅部感染来源白念珠菌 FUR1基因突变包括错义突变R101C（11株,33%）,深部感染来源白念珠菌未检出错义突变。结论 浅部与深部感染来源白念珠菌氟康唑耐药株对药物的敏感性及基因突变位点均有所差别。     

我国不同地域烟曲霉临床分离株CSP基因型及对抗真菌药物的敏感性分析

【摘要】 目的 探讨我国不同地域致病烟曲霉临床分离株CSP基因型分布情况,以及不同地域、不同CSP基因型烟曲霉药物敏感性有无差异。 方法 对福建、上海、河北及北京四地临床分离到的112株烟曲霉分别通过形态学、温度试验及β微管蛋白分子生物学测序鉴定,再对烟曲霉进行CSP基因分型,同时用M38-A方法测定伏立康唑、伊曲康唑及两性霉素B对不同型别烟曲霉的最低抑菌浓度（MIC）。 结果 112株曲霉均鉴定为经典烟曲霉,共确定11个CSP基因型,其中t04A、t03、t01最多见,分别为32株、17株、24株。福建分离株以t10、t04A、t01最常见,上海分离株以t04A、t01最常见,河北分离株以t01、t03、t04A最常见,北京分离株以t02、t04A、t01和t03最常见,t25为1个新CSP基因分型,新基因型菌株的菌落形态、生长速度、最适生长温度与其他菌株并无显著差别。不同CSP基因型烟曲霉对抗真菌药物敏感性差异无统计学意义,但福建地区分离株对伊曲康唑的MIC值低于其他三地的分离株。 结论 烟曲霉临床株CSP基因型存在一定的地域特点,不同基因型的烟曲霉对抗真菌药物的敏感性差异无统计学意义,而不同地域来源烟曲霉对伊曲康唑敏感性存在差异。     

烟曲霉白化株致免疫正常宿主肺曲霉球

患者女,76岁,因右侧胸痛3个月就诊。肺部CT示右侧下叶背段4.8 cm × 3.0 cm团块状密度增高影。取患者肺穿刺组织进行真菌培养及组织病理检查。组织病理显示慢性肉芽肿性炎,有隔的透明菌丝。SDA培养见白色绒毛状致密菌落,中央略高起,表面可见皱褶或放射状纹,背面呈淡黄色,小培养见较丰富的分枝分隔菌丝,可见极少量无色透明类圆形孢子。对分离菌种行rDNA ITS、β微管蛋白测序鉴定及抗真菌药物体外药敏试验,利用MEGA7.0软件构建烟曲霉复合体及其近源菌种系发生树。分子生物学测序鉴定为烟曲霉。诊断：肺曲霉球。先后予以伊曲康唑口服液及伏立康唑片治疗后明显好转。     

两种培养基在ROSCO真菌药敏试验中的应用

目的比较两种真菌药敏培养基,即改良Shadomy琼脂与亚甲蓝M-H琼脂对4种抗真菌药物的纸片扩散法药敏试验的影响。方法将分离的141株念球菌用改良Shadomy琼脂和亚甲蓝M-H琼脂和4种丹麦Rosco抗真菌药敏片,分别进行培养及药物敏感试验。结果这两种真菌药敏培养基对两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑敏感试验的符合率分别为100%,46.81%,83.69%和92.20%,敏感性分别为为100%,53.19%,80.85%和94.33%。这两种培养基对两性霉素B和伊曲康唑的药敏试验结果的差异无统计学意义(P>0.05),对氟康唑和氟胞嘧啶差异有统计学意义(P<0.01)。结论改良Shadomy琼脂与亚甲蓝M-H琼脂在两性霉素B和伊曲康唑的敏感性试验中可以相互替代,但在氟康唑和氟胞嘧啶的试验中符合率较低,结果相差甚远。     

耐伊曲康唑烟曲霉临床分离株对四种抗真菌药物的敏感性测定

目的 测定耐伊曲康唑烟曲霉临床株对4种抗真菌药物的敏感性。方法 自一例对伊曲康唑无效的肺曲霉球患者体内系列分离6株烟曲霉。利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）的微量液基稀释法M38-A方案和E-test法测定6株烟曲霉临床分离株对两性霉素B、卡泊芬净、米卡芬净、伏立康唑和伊曲康唑的敏感性。结果 6株烟曲霉中，2株对伊曲康唑的最低抑菌浓度（MIC）为 0.5 μg/mL，其他4株的MIC均 ＞ 16 μg/mL；两性霉素B和伏立康唑对6株烟曲霉的MIC分别为1 μg/mL和0.25 ~ 1 μg/mL，卡泊芬净和米卡芬净对6株烟曲霉的最低有效浓度均 ≤0.03 μg/mL。E-test法测定结果也显示，卡泊芬净和伏立康唑对6株烟曲霉有良好的抑制活性。结论 耐伊曲康唑烟曲霉临床株对两性霉素B、卡泊芬净、米卡芬净和伏立康唑敏感。     

抗真菌药单用及联合体外抗皮炎外瓶霉生物膜效应

目的 检测抗真菌药单用及联合对皮炎外瓶霉生物膜的体外抗真菌活性。方法 96孔板构建皮炎外瓶霉生物膜,通过棋盘式微量液基稀释法,检测两性霉素B、伏立康唑、伊曲康唑及卡泊芬净单用或联合抗皮炎外瓶霉生物膜的活性。结果 伊曲康唑、伏立康唑及卡泊芬净对皮炎外瓶霉生物膜50%和80%最低抑菌浓度（SMIC50、SMIC80）均 > 32 mg/L,两性霉素B的SMIC50为1 ~ 2 mg/L,SMIC 80为4 ~ 8 mg/L。两性霉素B与伏立康唑联合抗皮炎外瓶霉生物膜有协同效应;两性霉素B与伊曲康唑或卡泊芬净联合,以及伏立康唑与卡泊芬净联合对皮炎外瓶霉生物膜均无协同作用;所有组合均未见拮抗效应。结论 两性霉素B具有较好的抗皮炎外瓶霉生物膜活性,与伏立康唑联合能够增强对皮炎外瓶霉生物膜的杀伤作用。