TGF-β诱导及病毒感染获得iTreg细胞的方法学研究

目的:建立MSC V-Foxp3感染法和TGF-β诱导法获取诱导性调节性T淋巴细胞(iTreg)的方法,并初步探讨两种iTreg的作用机制异同.方法:分别用MSCV-Foxp3感染和TGF-β诱导获取iTreg,流式细胞术和PCR检测两种iTreg的产率和Foxp3mRNA表达,CFSE染色观察iTreg的免疫抑制作用.ELISA检测iTreg的IL-10和TGF-β分泌,PCR检测iTreg颗粒酶A和B的mRNA水平.结果:感染法和诱导法iTreg产率分别可达49.12％和41.08％,但前者Foxp3 mRNA表达高于后者(P＜0.05).两种iTreg均具有一定的免疫抑制活性,IL-10分泌水平较原始CD4+T细胞上升(P＜0.05),但颗粒酶B在诱导组iTreg的表达显著高于感染组(P＜0.05).结论:病毒感染法与TGF-β诱导法均可成功获得具有免疫抑制功能的iTreg,但前者Foxp3mRNA表达高于后者.两种iTreg发挥免疫抑制功能可能都有IL-10参与,而颗粒酶B可能只与诱导组iTreg有关.     

IL-10表达对小鼠脾脏CD4+T细胞亚群相关细胞因子的影响

目的 研究应用T细胞特异性慢病毒过表达白细胞介素10(IL-10)或siRNA片段抑制IL-10后对小鼠脾脏CD4⁺T细胞亚群的影响。方法 磁珠分选试剂分离小鼠初始CD4⁺T细胞,通过IL-10过表达特异性慢病毒侵染CD4⁺T细胞,应用qRT-PCR检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3的mRNA表达量,应用流式细胞术分别检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3在CD4⁺T细胞中的分泌比率。应用siRNA干扰片段抑制IL-10,应用qRT-PCR检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3的mRNA表达量,应用流式细胞术分别检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3在CD4⁺T细胞中的分泌比率。结果 过表达IL-10后,IFN-γ、IL-4、IL-17A mRNA水平明显下降(P<0.05),Foxp3 mRNA表达明显上升(P<0.05);IFN-γ、IL-4、IL-17A分泌量均明显降低(P<0.05),Foxp3分泌量...     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

目的 探讨小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4⁺T细胞体外增殖的影响.方法 以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4⁺T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10～20μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果 经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4⁺T细胞纯度达到90.%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4⁺T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20～20μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4⁺T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论 免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4⁺T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4⁺T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4⁺T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.     

髓源性抑制细胞在骨髓增生异常综合征中的表达

目的 探讨不同危险度分层骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓血髓源性抑制细胞(MDSCs)、外周血T淋巴细胞各亚群及相关免疫抑制因子的表达变化,阐明其在MDS疾病进展中的作用。方法 应用流式细胞术检测60例初治MDS患者(MDS组)和20例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓血MDSCs,外周血CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、颗粒酶B及调节性T细胞(Tregs)的表达水平,ELISA法检测免疫抑制因子白介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的表达水平,同时根据修订的国际预后积分系统(IPSS-R)将MDS患者分为较低危组(L-MDS组)和较高危组(H-MDS组),分析不同分组患者中MDSCs、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、颗粒酶B及Tregs,免疫抑制因子IL-10及TGF-β的表达差异。结果 与对照组相比,MDS患者MDSCs及Tregs的表达量增高,CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、颗粒酶B表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。...     

不同CD4+基线值艾滋病患者高效抗逆转录病毒治疗后免疫重建效果观察

目的 了解高效抗逆转录病毒疗法（highly active antiretroviral therapy,HAART）治疗艾滋病（acquired immune deficiency syndrome,AIDS）患者时,不同CD4⁺基线值艾滋病患者经过治疗后免疫重建效果的差异,为艾滋病患者临床治疗措施的改进提供理论依据。方法 2016 年1月—2017年3月期间,随机选取符合研究要求的艾滋病患者174例,根据CD4⁺T淋巴细胞基线值的不同分为两组,低值组（CD4⁺T淋巴细胞<200/mm³）和高值组（CD4⁺T淋巴细胞≥200/mm³）,每组均为87例患者,比较两组患者治疗前后（1个月、3个月、6个月、12个月）外周血T淋巴细胞各项指标（包括Treg、Th2、Th17、CD4⁺T、CD8⁺T）检测结果的统计学差异。结果 两组患者基本情况和治疗方式构成的差异均无统计学意义（P>0.05）;两组患者治疗3个月（Th17、CD4⁺T、Th17/Treg、CD4⁺T/CD8⁺T） 、治疗6个月（Treg、Th17、CD4⁺T、CD8⁺T、Th2/Treg、Th17/Treg、CD4⁺T/CD8⁺T）、治疗12个月（Treg、Th2、Th17、CD4⁺T、CD8⁺T、Th2/Treg、Th17/Treg、CD4⁺T/CD8⁺T）指标的差异具有统计学意义（P<0.05）;三组患者不同时点指标（Treg、Th2、Th17、CD4⁺T、CD8⁺T、Th2/Treg、Th17/Treg、CD4⁺T/CD8⁺T）的差异具有统计学意义（P<0.05）;两组患者T淋巴细胞具体检测结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论 CD4⁺T淋巴细胞基线值低患者,经高效抗病毒治疗后免疫重建效果较差,因此艾滋病患者进行高效抗病毒治疗应尽早进行。     

IL-36γ促进人CD8+T淋巴细胞细胞因子的分泌

目的: 探讨白细胞介素36γ（IL-36γ）是否能够增强体外培养的人CD8⁺T淋巴细胞分泌γ干扰素。方法: 经密度梯度离心法从健康人外周血分离获得外周血单个核细胞（PBMC）,经磁珠阳性选择富集纯化CD8⁺T淋巴细胞,分别用CD3单克隆抗体（mAb）+CD28 mAb,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-36γ以及CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12+IL-36γ 4种因子组合刺激培养24 h和72 h。收集细胞,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析分选富集的CD8⁺T淋巴细胞纯度以及γ干扰素的表达;采用实时PCR检测各组细胞IL-36受体（IL-36R）、γ干扰素和颗粒酶B mRNA的表达。结果： 人CD8⁺T淋巴细胞表达IL-36R;各组因子刺激的人CD8⁺T淋巴细胞形态没有明显差异;人CD8+T淋巴细胞经IL-36γ刺激后,γ干扰素、颗粒酶B mRNA表达上调;同时, IL-36γ和IL-12 具有协同刺激CD8⁺T淋巴细胞的作用。结论： IL-36γ能促进体外培养的人CD8⁺T淋巴细胞分泌细胞因子,并且与IL-12具有协同作用。     

玉溪市2006—2016年新报告HIV/AIDS基线免疫状况分析

目的 了解2006—2016年玉溪市新报告艾滋病病毒感染者/艾滋病病人（HIV/AIDS）基线CD4⁺ T 淋巴细胞计数及其及时检测情况,了解不同人群基线CD4⁺T淋巴细胞计数差异。方法 使用艾滋病综合防治数据信息系统中的病例报告卡数据库,以及历年CD4⁺T淋巴细胞检测原始记录,截止日期为2016年12月底,收集其相关人口学信息,对相关数据进行统计分析。结果 3 504例HIV/AIDS中,2 718例（77.57%）患者在报告半年内获得CD4⁺T淋巴细胞检测,由2006年的20.38%上升到2011年的94.36%后保持稳定（P<0.001）,25.16% (611/2 428)的新报告感染者基线CD4⁺T淋巴细胞计数<200 cells/μL表现为晚发现,且历年表现为上升趋势（P<0.001）。历年通过异性性传播感染HIV者,>50岁者,样本来源于医疗机构者和男性基线CD4⁺T淋巴细胞中位数均较同性性传播感染HIV者和注射吸毒者;<50岁者,样本来源于VCT、哨点、婚检孕检者,女性为高。结论 玉溪市获得及时的CD4⁺T淋巴细胞检测的比例逐年上升且基线免疫状况较好,医院发现人群、异性性传播人群、老年人群和男性持续发现较晚,必须不断的提高HIV检测的敏感性,以便早发现感染者。     

反复种植失败患者的外周血Th17/调节性T淋巴细胞的失衡情况

目的 探讨反复种植失败(RIF)患者外周血Th17/调节性T淋巴细胞(Treg)的失衡情况。方法 纳入26例RIF患者(RIF组)和27例非妊娠期且生育功能正常的女性(对照组)。于月经周期的增殖晚期,检测两组外周血单核淋巴细胞中叉头状/翅膀状螺旋转录因子P3(FOXP3)与视黄酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)的mRNA表达量,以及CD4⁺IL-17A⁺Th17/CD4⁺T淋巴细胞比值和CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺Treg/CD4⁺T淋巴细胞比值;并检测两组血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素(IL)-10、IL-6、IL-17A、IL-23蛋白水平。结果 RIF组CD4⁺IL-17A⁺Th17/CD4⁺T淋巴细胞比值及RORγt mRNA表达量均高于对照组,而CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺     

人类免疫缺陷病毒感染者拔牙围手术期的风险评估和管理

目的 评估人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染者拔牙围手术期的免疫状态,探索预防感染的临床处理方法,降低患者的术后感染风险。方法 分析首都医科大学附属北京佑安医院五官中心口腔科2008年5月至2018年7月拔牙的246例HIV患者的临床资料,依据患者术前CD4⁺T淋巴细胞水平的差异分为3组,给予相应的抗感染的预防用药,总结每组患者围手术期的相关处理流程,并对术后7 d和术后1个月CD4⁺T淋巴细胞的变化情况进行分析。结果 经过适当的抗感染治疗,虽然术后7 d患者的CD4⁺T淋巴细胞水平均有明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,但术后1个月即可恢复至术前水平。结论 利用CD4⁺T淋巴细胞能够有效反映机体免疫功能状态的特点,确定最佳手术时间、评估手术风险并给予相应的预防性干预治疗,可切实降低HIV患者手术感染风险。合理的抗感染治疗可在一定程度上改善患者的免疫状态,同时,围手术期的心理管理和饮食管理也不容忽视。     

HIV感染者外周血CXCR5+CD4+T细胞水平与HIV病毒载量相关性

目的 研究外周血CXCR5+CD4⁺滤泡辅助性T细胞（follicular helper T,TFH）水平与HIV感染者血浆HIV病毒载量的相关性。方法 纳入2019年1月—2020年12月期间青海省第四人民医院收治的100例HIV感染者,根据CD4⁺T淋巴细胞计数分为A组（CD4⁺T淋巴细胞计数<200/ μL）23例和B组（CD4⁺T淋巴细胞计数200~<500/ μL）77例,以同期行健康体检80名健康者为对照组。分别检测HIV感染者外周血中HIV病毒载量、CD4⁺T淋巴细胞计数和TFH水平以及健康对照组CD4⁺T淋巴细胞计数以及TFH水平,并进行相关性分析。结果 A组血浆HIV病毒载量为（4.70±1.13） log /mL显著高于B组（2.74±0.74）log/mL（P<0.05）。A、B和健康对照组CD4⁺T淋巴细胞计数分别为（113.64±23.44）/μL、（334.10±31.52） / μL和（995.41±49.23） /μL,三者比较差异有统计学意义（P<0.05）。A、B和健康对照组TFH细胞计数绝对值分别为（18.63±5.67） /μL、（59.35±13.73） /μL和(194.85±25.78) /μL,A、B组均低于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;A、B和健康对照组TFH细胞百分比分别为（15.83±4.05）%、（17.57±5.08）% 和（19.59±4.25）%,A、B组均低于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关性分析显示,HIV病毒载量与CD4⁺T淋巴细胞计数以及TFH细胞计数呈负相关（P<0.05）。结论 HIV感染者外周血CD4⁺T淋巴细胞计数和TFH计数与HIV病毒载量呈负相关,且TFH计数可作为病情诊断和预后评估的重要指标,并有望成为HIV感染免疫治疗的新靶标。