Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用

目的　观察Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（贝伐单抗）对转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ）-β２诱导下的人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法　用含体积分数１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ高糖型培养基对人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、ＴＧＦ-β２处理组（加入终浓度为１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２ＤＭＥＭ完全培养基）及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组（加入１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２和１．０ｇ?Ｌ－１的ＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＤＭＥＭ完全培养基）,置于３７℃、体积分数５％二氧化碳培养箱中培养４８ｈ,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验检测Ｂｅｖ-ａｃｉｚｕｍａｂ对ＴＧＦ-β２刺激下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）表达的影响。结果　α-ＳＭＡ蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示ＴＧＦ-β２处理组可以见到α-ＳＭＡ的荧光表达,而Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白表达受到抑制。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示空白对照组、ＴＧＦ-β２ 处理组及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量分别为０．６３０±０．０３８、１．１３０±０．０７１和０．３４０±０．０３３,Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量低于空白对照组和ＴＧＦ-β２处理组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ可明显抑制ＴＧＦ-β２诱导下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-ＳＭＡ蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。     

转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究

目的　本研究探讨转化生长因子-β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ-β）体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓ-ｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）的表达。方法　原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,ＭＴＴ法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入２０ｎｇ·ｍＬ－１ ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ＴＧＦ-β３,分别于１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ检测α-ＳＭＡｍＲＮＡ,Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果　与对照组相比,ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）,其中ＴＧＦ-β１促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强（Ｐ＜０．０５）;ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３均增加α-ＳＭＡ的表达（均为Ｐ＜０．００１）,ＴＧＦ-β３促进α-ＳＭＡ表达作用最强（Ｐ＜０．００１）。结论　ＴＧＦ-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。     

转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的　探究转化生长因子-β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β２,ＴＧＦ-β２）诱导人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）层细胞上皮-间质转分化中ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达变化及意义。方法　使用不同浓度ＴＧＦ-β２刺激ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ,ＦＮ）、神经钙粘连蛋白（ｎｅｒｖｅｃａｌｃｉｕｍａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏ-ｔｅｉｎ,Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达。采用ＲＴ-ＰＣＲ检测不同浓度ＴＧＦ-β２及不同时间ＴＧＦ-β２（５μｇ·Ｌ－１）刺激ＲＰＥ细胞后ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达。结果　ＴＧＦ-β２刺激后的ＲＰＥ细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内（１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１）,随着ＴＧＦ-β２浓度的增加ＦＮ、Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ及相应ｍＲＮＡ随之增加,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ-β２在一定浓度范围内（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,在ＴＧＦ-β２浓度为５μｇ·Ｌ－１时ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达量最低。ＴＧＦ-β２在一定时间范围内（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ）以时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ组与０ｈ相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　一定范围内ＴＧＦ-β２以剂量和时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达,为进一步研究ｍｉＲＮＡ-２９ｂ与ＴＧＦ-β２在ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。     

miRNA-184在TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的表达

目的　研究ｍｉＲＮＡ-１８４（ｍｉＲ-１８４）在转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦ-β２）诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法　应用不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２ 诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法观察转分化相关分子波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、钙黏附蛋白Ｅ（Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达;应用ｑＲＴ-ＰＣＲ检测ｍｉＲ-１８４在不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２、不同作用时间（０ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）ＴＧＦ-β２（１０μｇ·Ｌ－１）诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化。结果　随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞胞浆中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ荧光强度增强;Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达逐渐减少,各组细胞间Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝８７．６１７,Ｐ＜０．０１）;Ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝６８．９２３,Ｐ＜０．０１）。随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增多,在１０μｇ·Ｌ－１ＴＧＦ-β２诱导组达到峰值;随着ＴＧＦ-β２诱导时间的延长,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增加,在２４ｈ表达达到峰值。结论　ＴＧＦ-β２诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内ｍｉＲ-１８４表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究ｍｉＲ-１８４在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础。     

结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用

目的　研究结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）在人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）中的作用。方法　采用ＣＣＫ-８细胞计数试剂盒测定４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理后的ＡＲＰＥ-１９细胞以及稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估ＣＴＧＦＲＮＡｉ对ＡＲＰＥ-１９细胞迁移的影响,同时测定稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞中ＣＴＧＦ、ＦＮ、ＭＭＰ-２和α-ＳＭＡ的表达水平以评估ＣＴＧＦ对于ＴＧＦβ１诱导的ＥＭＴ作用。结果　４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理组ＡＰＲＥ-１９细胞与未接受ＣＴＧＦ处理组细胞之间以及ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照ｓｉＲＮＡ组之间的细胞倍增时间均存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。正常培养ＡＲＰＥ-１９细胞组修复划痕的时间（≤４８ｈ）显著少于ＣＴＧＦＲＮＡｉ靶向干扰处理组（≥７２ｈ）。以ＴＧＦ-β１诱导ＥＭＴ,ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照组比较,ＣＴＧＦ、α-ＳＭＡ、ＦＮ和ＭＭＰ-２表达均显著下调。此外,外源性ＣＴＧＦ可单独诱导ＡＲＰＥ-１９细胞α-ＳＭＡ表达增加。结论　ＣＴＧＦ能够促进ＡＲＰＥ-１９细胞增生,而ＣＴＧＦＲＮＡｉ不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ＡＲＰＥ-１９细胞的迁移。此外,ＣＴＧＦ可通过上调α-ＳＭＡ表达水平而增强ＡＲＰＥ-１９细胞对于ＴＧＦ-β１的反应,ＣＴＧＦＲＮＡｉ可使ＴＧＦ-β１诱导的ＥＭＴ减弱。     

转移生长因子β1在牛眼小梁网的表达

目的研究转移生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦ－β１）与开角型青光眼的关系。方法用异硫氰酸胍法提取２４只新生牛眼小梁网的总ＲＮＡ，将ＴＧＦ－β３３质粒导入大肠杆菌ＨＢ１０１中充分扩增、ＢａｍＨＩ酶切后，片段以α－３２－Ｐ－ｄＡＴＰ标记成ｃＤＮＡ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙＤＮＡ）探针，ＲＮＡ斑点杂交，放射自显影法观察和测定牛眼小梁网的ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达。结果牛眼小梁网中有ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达。结论房水中的部分ＴＧＦ－β１由小梁细胞分泌。此结果可以作为利用分子生物学手段研究ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的异常合成、活化、清除及与开角型青光眼病理改变间关系的基础。     

组织激肽释放酶在糖尿病视网膜病变患者血清中的变化及其调节血管新生机制

目的　检测组织激肽释放酶（ｔｉｓｓｕｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ,ＴＫＬＫ）、血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）和可溶性细胞间黏附分子-１（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｎｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌ-１,ｓＩＣＡＭ-１）在糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）患者血清中的变化,观察ＴＫＬＫ在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＲＭＥＣｓ）中ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１表达的影响。方法　收集２型糖尿病患者６０例,按照ＤＲ分期标准将患者分为糖尿病无ＤＲ组（ＤＭ组）、非增生性ＤＲ组（ＮＰＤＲ组）和增生性ＤＲ组（ＰＤＲ组）,收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组２０例。ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１的水平。体外ＨＲＭＥＣｓ分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组ＴＫＬＫ处理后,检测细胞增殖、凋亡以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达。结果　ＤＭ、ＮＰＤＲ和ＰＤＲ组患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平明显高于对照组,４组总体差异有统计学意义（Ｆ＝２８．８０５,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝３２．０４１,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝２６．１６９,Ｐ＝０．００１）;ＰＤＲ患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平显著高于ＤＭ和ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．００１）。ＴＫＬＫ与ＶＥＧＦ（ｒ＝０．６２３,Ｐ＜０．０１）和ｓＩＣＡＭ-１水平（ｒ＝０．５９８,Ｐ＜０．０１）均呈正相关。１０μｇ?ｍＬ－１ｒｈＴＫＬＫ可显著抑制低氧诱导的ＨＲＭＥＣｓ增殖以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达,并可促进细胞凋亡（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＫＬＫ通过与ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１相互作用而影响ＤＲ的进展。     

细胞生长因子对人晶体上皮细胞转铁蛋白mRNA表达的影响

目的 分析转化生长因子－β２和碱性成纤维细胞生长因子对培养的人晶体上皮细胞转铁蛋白ｍＲＮＡ表达的影响,方法 人晶体前囊膜取和于３岁以下各种原因死亡２４ｈ内的２０例（４０只眼）婴和眼球。晶体上皮细胞原代培养和传代培养,选用传代汇合后２周的细胞,分别用ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦ作用天,用异硫氰酸胍、酚、氯仿、异戊醇等抽提细胞总ＲＮＡ,选择转铁蛋白的核酸探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,分析转铁蛋白ｍＲＮＡ的表     

异搏定对培养角膜基质细胞分泌转移生长因子—β1的影响

目的 探讨异搏定对体外培养兔角膜基质细胞分泌ＴＧＦ－β１的影响。为预防或减轻ＰＲＫ后混浊形成提供线索。方法 将传代细胞，在加药培养后４８ｈ，应用ＴＧＦ－β１Ｆｍａｘ＾ＴＭＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ试剂盒和培养上清中ＴＧＦ－β１含量进行检测，根据标准曲线分别计算出各孔ＴＧＦ－β１的浓度。结果 Ｖｅｒａｐａｍｉｌ浓度５μｇ／ｍｌ和１０μｇ／ｍｌ，作用４８ｈ，培养上清中ＴＧＦ－μ１含量明显降低。     

SnoN蛋白及TGF-β在早期糖尿病大鼠视网膜组织中表达及意义

目的　观察ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β在糖尿病大鼠视网膜上的表达,探讨ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β与糖尿病视网膜病变（ｄｉａ-ｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的关系,为ＤＲ发病机制的研究提供新的理论依据。方法　选择健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只,随机分为正常对照组与糖尿病（ＤＭ）组,每组各１０只。采用一次性腹腔注射５０ｍｇ?ｋｇ－１链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ,ＳＴＺ）的方法建立ＤＭ大鼠模型,正常对照组一次性给予等体积柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液腹腔注射。分别于造模后８周和１２周处死各组大鼠,均完整摘除各组大鼠的左眼球制成眼杯,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β蛋白的表达。结果　造模后８周和１２周,ＤＭ组大鼠血糖值分别为（２２．６４±３．５７）ｍｍｏｌ?Ｌ－１、（２４．０８±１．６０）ｍｍｏｌ?Ｌ－１,均明显高于正常对照组的（４．６４±０．９１）ｍｍｏｌ?Ｌ－１、（４．５０±０．６６）ｍｍｏｌ?Ｌ－１,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。正常对照组大鼠视网膜上ＴＧＦ-β无表达或弱表达,在造模后８周和１２周时,ＤＭ组大鼠视网膜上ＴＧＦ-β的ＯＤ值分别为０．１２１０±０．００５６、０．１５５０±０．００７０,均较正常对照组（０．０２２０±０．００７９、０．０２５０±０．００７０）明显增加（均为Ｐ＜０．０１）。正常对照组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ蛋白高表达,在造模后８周和１２周时,ＤＭ组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ的ＯＤ值分别为０．４１２０±０．０１１３、０．２１４０±０．００６９,均较正常对照组（０．９４５０±０．００７０、０．９４４０±０．００５１）明显降低（均为Ｐ＜０．０１）,且随着病程的延长,降低更明显。结论　ＳｎｏＮ蛋白对ＴＧＦ-β信号通路起负反馈抑制作用,能降低ＴＧＦ-β信号的强度和持续时间,因此对ＤＲ的防治具有重要意义。     

生长因子与角膜内皮细胞

角膜内皮细胞是维持角膜透明的关键细胞成分,角膜内皮细胞密度降低和形态异常可导致内皮细胞功能失代偿而降低视力。在伤口愈合过程中,生长因子可增加角膜内皮细胞密度槿刺激内皮细胞再生,促进伤口愈合。肽类生长因子影响着多种细胞生理过程,包括细胞增殖,分化,移行和存活。     

圆锥角膜组织中EGF和bFGF变化免疫组织化学的研究

目的 观察正常人及圆锥角膜中表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的表达，探讨EGF和hFGF在圆锥角膜中的变化。方法 采用免疫组织化学SABC法检测角膜组织中EGF、bFGF的表达，结果 在圆锥角膜上皮层、Bowman层和内皮层有EGF表达，EGF比正常角膜的表达强；在圆锥角膜的上皮层、实质层和内皮层可见bFGF的阳性表达，圆锥角膜的基质瘢痕区bFGF有较强的阳性表达。结论 圆锥角膜组织中EGF水平增高，促进上皮细胞和基质细胞的DNA合成，从而使组织愈合。bFGF表达增强可以促进角膜上皮、基质细胞和内皮细胞的增殖。     

生长发育迟滞与鼠视网膜病变发生的相关研究

目的 探讨生后生长发育迟滞对鼠视网膜的影响.方法 将怀孕18d的C57BL/6母鼠随机分为正常对照组、生长发育迟滞组、氧诱导视网膜病(oxygeninduced retinopathy,OIR)组、生长发育迟滞+OIR组.正常对照组母鼠予正常饮食;生长发育迟滞组母鼠予等热卡低蛋白饮食,持续至幼鼠出生21 d;OIR组建立OIR模型;生长发育迟滞+OIR组予生长发育迟滞及OIR联合诱导.于出生14 d、21 d检测血糖、胰岛素和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor,IGF-1)的变化.于生后14 d、21 d留取视网膜组织,检测精氨酸2活性及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.出生70 d,应用视网膜电流图评估视网膜功能.结果 生长发育迟滞组、生长发育迟滞+OIR组小鼠出生体质量明显低于其他两组(均为P＜0.05),生后14 d、21 d,生长发育迟滞组、生长发育迟滞+OIR组小鼠体质量、胰岛素、IGF-1值、VEGF在视网膜表达均显著低于正常对照组(均为P ＜0.05),而精氨酸2活性显著高于正常对照组(均为P＜0.05).OIR组、生长发育迟滞组、生长发育迟滞+ OIR组小鼠视网膜毛细血管密度指数增加,而以生长发育迟滞+OIR组小鼠增加最显著.生后70 d时OIR组、生长发育迟滞组小鼠视网膜电流图反应减弱,RmP2振幅(双极细胞)及8 Hz频闪振幅(R8:视网膜内功能)显著减小,且生长发育迟滞+ OIR组小鼠变化更加明显.结论 生长发育迟滞小鼠影响IGF-1、VEGF的表达及精氨酸2的活性,对视网膜病的发生有显著促进作用.     

孔源性视网膜脱离视网膜下液和前房液中VEGF及PDGF含量测定

目的研究血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)和血小板源性生长因子(platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)在视网膜下液(subretinal fluid,SRF)和前房液(anterior chamber fluid,ACF)中的含量,并观察其对增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathy,PVR)形成的影响。方法用ELISA测定63例孔源性视网膜脱离患者SRF和ACF的VEGF和PDGF的含量。结果孔源性视网膜脱离患者SRF和ACF中含有VEGF和PDGF;其含量随患者眼部病情的加重而增加;VEGF和PDGF含量在SRF中成相关关系,在ACF中亦成相关关系;同一患者的VEGF在SRF和ACF中成相关关系,PDGF亦是。结论VEGF和PDGF在PVR的发生发展过程中起了一定的作用,且VEGF和PDGF具有协同效应。     

水蛭素对血小板源性生长因子及受体的影响

目的 通过观察水蛭素对血小板源性生长因子(PDGF)及受体(PDGF-R)的影响,深入探讨水蛭素防治增生性玻璃体视网膜病变(PVR)形成的机制。方法 利用穿孔性眼外伤的动物模型,分别给予10U/ml和20U/ml的水蛭素于玻璃体腔内,用酶联免疫法(ELISA)测定玻璃体中PDGF的含量,用免疫组织化学法观察玻璃体腔内细胞增殖相关抗原(Ki-67)、白介素1β转换酶(interlukin 1-β converting enzyme,ICE)和PDGFR的表达。结果 造模后3d和28dPDGF的检测结果显示生理盐水对照组(434.88±56,75,457.17±74.39)与剂量Ⅰ组之间(285.95±54.04,322.50±106.93)差异有显著性(P<0.01);PDGF-R的检测结果显示生理盐水对照组(147.82±14.95,141.05±19.03)与剂量Ⅰ组(87.27±20.80,2.57±16.75)和剂量Ⅱ组(97.67±11.37,68.26±5.6)之间差异有显著性(P<0.01);ICE的检测结果显示生理盐水对照组(38.51±3.04,39.74±3.78)与剂量Ⅰ组(57.01±10.02,57.61±9.04)和剂量Ⅱ组(56.22±4.95,57.45±8.25)之间差异有显著性(P<0.01)。Ki-67检测结果显示造模后28d生理盐水对照组(127.83±128.72)与剂量Ⅰ组(51.67±18.61)和剂量Ⅱ组(51.50±31.55)之间差异有显著性(P<0.01和P<0.05)。结论 水蛭素通过抑制PDGF的分泌和PDGF-R的激活而抑制玻璃体腔内细胞的     

血糖控制达标的DR患者生长激素、胰岛素样生长因子-1水平及其与视网膜病变的关系

目的 分析血糖控制达标的2型糖尿病患者合并不同程度糖尿病视网膜病变的血清生长激素(growth hormone,GH)及胰岛素样生长因子-1(insuin-like growth factor-1,IGF-1)水平,并探讨GH和IGF-1与糖尿病视网膜病变的关系.方法 收集112例近3 a血糖控制达标的2型糖尿病患者,所有患者根据眼底荧光血管造影结果分为眼底正常组、非增殖期视网膜病变组及增殖期视网膜病变组.检测并分析3组间血清GH、IGF-1水平及差异;并分析其与糖尿病视网膜病变的关系.结果 增殖期糖尿病视网膜病变组低密度脂蛋白胆固醇、尿微量白蛋白、血清GH水平及IGF-1水平高于正常组及非增殖期糖尿病视网膜病变组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),非增殖期糖尿病视网膜病变组与眼底正常组间差异无统计学意义(P＞0.05);增殖期糖尿病视网膜病变组C肽水平低于眼底正常组及非增殖期糖尿病视网膜病变组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05);非增殖期糖尿病视网膜病变组与眼底正常组间血清C肽水平差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析显示,糖尿病病程(β=0.483,P=0.001)、尿微量白蛋白(β=1.420,P =0.008)、IGF-1(β=0.229,P=0.033)和空腹C肽(β=0.186,P=0.044)与糖尿病视网膜病变有关.结论 除糖尿病病程、收缩压、低密度脂蛋白胆固醇、C肽及尿微量白蛋白等常见危险因素外,血清GH及IGF-1水平偏高也与糖尿病视网膜病变有关,这可能是2型糖尿病患者视网膜病变进展的机制之一.     

PDGF抗体和VEGF抗体预防增生性玻璃体视网膜病变

目的评价血小板源性生长因子（PDGF）抗体和血管内皮生长因子（VEGF）抗体对实验性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的预防作用。方法将兔制成PVR模型，将一定浓度的PDGF抗体、VEGF抗体及BSS液分别在当时及第7d注入兔眼的玻璃体腔，每日观察兔眼情况，处死兔子做眼病理切片及免疫组织化学染色。结果间接检眼镜观察可见对照组与实验组均出现视网膜脱离。玻璃体腔内注药后第21d、28dPVR分级实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），在制作动物模型时直接注入和第7d时注入差异无统计学意义（P〉0．05）。病理检查所见与间接检眼镜所见相符。免疫组织化学染色计算阳性细胞百分率，亦得出相同结果。结论玻璃体腔内注入PDGF抗体、VEGF抗体均可预防PVR的进展，注药时间对于PVR的发展无明显影响。     

神经营养因子和生长因子等对培养的成人视网膜神经细胞的影响

目的　探讨成人视网膜神经细胞体外培养条件 ,脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养素 (NT 4 )、表皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF)、诱导分化因子全反式视黄酸 (RA)等对成人视网膜神经细胞生长、增殖、凋亡的影响及调控机制。方法　胰蛋白酶消化结合机械吹打分离成人视网膜神经细胞 ,在培养基中加入或不加入BDNF、NT 4、EGF、FGF、RA。根据细胞形态、生长方式及免疫细胞化学特征确定细胞类型。比较各组中神经元的数目、转录调控因子c fos、c jun及细胞凋亡调控因子Bcl 2、Bax表达水平。结果　与对照组相比 ,BDNF、FGF处理组存活的神经元特异性烯醇酶、Thy1.1抗体和Bcl 2、c fos及c jun表达阳性细胞数也增多 (均P <0 0 1) ,培养的视网膜神经细胞在体外存活时间可长达 8个月 ;RA处理组c fos、c jun阳性细胞数较对照组增多 (均P <0 0 1) ;而NT 4、EGF处理组各项指标与对照组比较 ,差异无显著意义 (均P >0 0 5 )。结论　BDNF、FGF、RA能显著提高体外培养的成人视网膜神经细胞的存活 ,其机制可能涉及上调转录调控因子c fos、c jun及凋亡抑制因子Bcl 2的表达 ,或下调凋亡促进因子Bax的表达。但EGF、NT 4对体外培养的视网膜神经细胞存活状态无明显改善作用。     

糖尿病性视网膜病变患者房水中VEGF与IGF-1的定量测定及分析

目的:探讨糖尿病视网膜病变(DR)程度与房水中VEGF、IGF-1含量之间的关系。方法:研究对象共44例,分为正常对照组(A组)、糖尿病患者无视网膜病变组(NDR组)(B组)、糖尿病性视网膜病变组(DR组)(C组),其中C组又分为单纯型糖尿病性视网膜病变组(BDR组)(C1组)和增殖型糖尿病性视网膜病变组(PDR组)(C2组)。对所有研究对象均收集房水标本。对标本均采用双抗体夹心ABC-ELISA法进行人VEGF和人IGF-1定量ELISA测定。结果:随着糖尿病的进展及DR的逐渐加重,房水中VEGF浓度呈明显增加趋势。房水IGF-1:对照组(A组)、NDR组(B组)、DR组(C组)各组间P<0.01,呈明显增高趋势。BDR组(C1组)与PDR组(C2组)间P<0.01,呈明显增高趋势。房水VEGF与房水IGF-1二者有显著正相关性(P<0.01)。结论:VEGF是影响糖尿病眼底微血管病变发生、发展的重要刺激因子;眼内IGF-1参与了DR进展的病理进程;在DR的发生发展过程中,IGF-1与VEGF有协同作用。     

Recent developments in our understanding of how platelet-derived growth factor (PDGF) and its receptors contribute to proliferative vitreoretinopathy

Proliferative vitreoretinopathy, a disease process occurring in the setting of a rhegmatogenous retinal detachment, is thought to develop as a result of exposure of retinal cells to vitreous. Vitreous contains many growth factors, and platelet-derived growth factor (PDGF) has been considered a major contributor to PVR. Evaluation of both PDGF and PDGF receptors (PDGFRs) as potential therapeutic targets in the context of a rabbit model of PVR revealed that PDGFR-based approaches protected from PVR, whereas neutralizing PDGFs was a much less effective strategy. The basis for these observations appears to reflect that fact that the PDGFR could be activated by a wide spectrum of vitreal agents that are outside of the PDGF family. Furthermore, blocking signaling events by which the non-PDGFs indirectly activated PDGF α receptor (PDGFRα) protected rabbits from developing PVR. These studies demonstrate that the best therapeutic targets for PVR are not PDGFs, but PDGFRα and certain signaling events required for indirectly activating PDGFRα.