FoxO3a 与泌尿系肿瘤关系的研究进展*

FoxO转录因子家族通过对其靶基因的调节作用,在细胞代谢、凋亡、增殖、应激反应、DNA 修复和免疫应答等生命活动中发挥着重要作用。该家族成员FoxO3a 可调控靶基因启动子发生组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化等修饰从而影响其表达。FoxO3a 在泌尿系肿瘤中存在异常的低表达,其蛋白质修饰状态和活性受到以PI 3K/Akt为主的多条信号通路的复杂调控,对泌尿系肿瘤的发生、发展和预后产生重要的影响。本文将对FoxO3a 在泌尿系肿瘤中的研究进展进行综述,探讨FoxO3a 调控的机制,为临床诊断和靶向治疗提供新的策略。     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。     

FoxO3a转录因子在肿瘤治疗中的作用

FoxO3a是叉头基因（Forkhead）转录因子家族的一个重要成员,在抑制肿瘤发生发展、细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞增殖凋亡及应激反应中发挥重要作用,并参与调节干细胞的保持和分化。FoxO3a作为抑癌基因,其激动剂与化疗药物联合应用可提高肿瘤细胞药物敏感性。文章就FoxO3a在肿瘤治疗中的作用作一综述,旨在揭示靶向FoxO3a对于肿瘤治疗的潜在意义。     

葫芦素B对卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用

摘 要：［目的］ 研究葫芦素B对卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用。［方法］ 利用MTT法检测不同浓度葫芦素B对卵巢癌细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;荧光定量PCR法测定STAT3 mRNA表达水平。［结果］ 葫芦素B对SKOV3细胞的增殖具有抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性(P<0.05);随葫芦素浓度的增加,出现明显的G2/M期细胞阻滞,细胞凋亡率也随之增加(P<0.05);STAT3 mRNA表达量明显下降(P<0.05)。［结论］ 葫芦素B抑制STAT3的表达,引起细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长。     

二氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用

目的 研究二氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。方法 用MTT法检测DHA对SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪（FCM）测其凋亡率,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax的表达。结果 双氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制效应,呈明显的时间-剂量依赖性。DHA处理SKOV3细胞后,24、28、72 h的IC50值分别为117、35.677、23.382 μmol/L。二氢青蒿素可以抑制SKOV3细胞增殖,促进其凋亡,下调Bcl-2基因的表达,增加Bax基因的表达,并有时间、浓度依赖性。结论 二氢青蒿素对人卵巢癌SKOV3细胞有体外抑制作用, 可能通过下调Bcl-2、增加Bax基因的表达来促进细胞的凋亡。     

卵巢癌SKOV3细胞中侧群细胞的生物学特性

目的 分选人卵巢癌细胞系SKOV3中的侧群（side population, SP）细胞,并探讨其是否具有肿瘤干细胞的生物学特性。方法 流式细胞仪检测、分选经DNA染料Hoechst 33342染色后SKOV3中的SP细胞,并对侧群细胞（SP）与非侧群细胞（non-SP）作细胞生物学鉴定,包括增殖能力、克隆形成能力、侵袭及迁移能力、自我更新能力及细胞周期。结果 SKOV3细胞系中SP细胞比例为（1.12±0.104）%,SP细胞增殖速度快于non-SP细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。接种相同数量的细胞,SP细胞克隆形成率高于non-SP细胞（P<0.05）。Transwell实验显示,SP细胞侵袭与迁移的细胞数与non-SP相比均明显增多（P<0.05）。SP细胞体外能分化为Non-SP细胞,具有自我更新能力。SP细胞大多处于细胞周期的G0/G1期。结论 卵巢癌细胞系SKOV3中的SP细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性,SP细胞表型可考虑作为富集卵巢癌干细胞样细胞的有效方法。     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响

目的：从转录及翻译两个水平观察As2O3对卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响,从而明确As2O3是否可以通过抑制卵巢癌细胞表达VEGF而达到抗卵巢癌血管生成的目的。方法：RT-PCR半定量法测定不同浓度As2O3作用于SKOV3细胞24h后VEGF mRNA含量的变化。用ELISA法测定不同浓度和作用时间下As2O3对SKOV3细胞培养上清液中VEGF蛋白表达的影响。结果：1μmol/L-4μmol/L As2O3能显著抑制VEGF mRNA的表达,且具有浓度依赖性。1μmol/L-4μmol/L As2O3能明显降低培养上清中VEGF蛋白表达,具有浓度依赖性,但随时间延长抑制作用减弱。结论：As2O3能通过降低卵巢癌SKOV3细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌抑制肿瘤血管生成。     

鱼藤素通过调控miR-520a-3p影响卵巢癌SKOV3细胞的增殖和凋亡

目的：探讨鱼藤素通过调控miR-520a-3p表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法：将SKOV3细胞分为对照组（鱼藤素0μmol/L）、鱼藤素低剂量（5μmol/L）、中剂量（10μmol/L）、高剂量（20μmol/L）组,miR-NC组、过表达miR-520a-3p组,鱼藤素+anti-miR-NC组、鱼藤素+anti-miR-520a-3p组。CCK-8法、细胞集落形成实验、FCM以及qPCR法分别检测SKOV3细胞的增殖抑制率、细胞克隆形成数、凋亡率以及miR-520a-3p表达水平。结果：与对照组比较,鱼藤素（低、中、高剂量）组SKOV3细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-520a-3p表达水平均显著升高（均P<0.05）,细胞克隆形成数显著减少（P<0.05）。与miR-NC组比较,过表达miR-520a-3p组SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率均显著升高（均P<0.05）,细胞克隆形成数显著减少（P<0.05）。与鱼藤素+anti-miR-NC组比较,鱼藤素+anti-miR-520a-3p组SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率均显著降低（均...     

FoxO3a在三氧化二砷诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的表达和意义

目的 探讨FoxO3a在三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡过程中的表达变化及其可能的机制。方法 将不同浓度的As2O3(2.0、4.0、8.0μmol/L)与MCF-7细胞共同培养24h后,采用流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;采用免疫细胞化学及Western blot技术检测FoxO3a和Caspase 3蛋白的表达,各实验均设相应的阴性对照组。结果 经不同浓度As2O3作用后,MCF-7细胞凋亡率逐渐增加,分别为(6.26±0.94)%、(9.30±1.63)%和(13.02±3.82)%,且呈剂量依赖关系(rs=0.949, P<0.01);免疫细胞化学染色显示FoxO3a蛋白胞核表达增强,且Caspase-3蛋白表达增强（P<0.05);Western blot条带显示FoxO3a蛋白表达水平逐渐升高,且激活型Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高（P<0.05)。结论 As2O3可通过增强FoxO3a蛋白的活性,激活Caspase-3蛋白的表达而诱导MCF-7细胞凋亡。     

Identification of a cancer stem-like population in the Lewis lung cancer cell line

Objective: Although various human cancer stem cells (CSCs) have been defined, their applications are restricted to immunocompromised models. Developing a novel CSC model which could be used in immunocompetent or transgenic mice is essential for further understanding of the biomolecular characteristics of tumor stem cells. Therefore, in this study, we analyzed murine lung cancer cells for the presence of CSCs. Methods: Side population (SP) cells were isolated by fluorescence activated cell sorting, followed by serum-free medium (SFM) culture, using Lewis lung carcinoma cell (LLC) line. The self-renewal, differentiated progeny, chemosensitivity, and tumorigenic properties in SP and non-SP cells were investigated through in vitro culture and in vivo serial transplantation. Differential expression profiles of stem cell markers were examined by RT-PCR. Results: The SP cell fraction comprised 1.1% of the total LLC population. SP cells were available to grow in SFM, and had significantly enhanced capacity for cell proliferation and colony formation. They were also more resistant to cisplatin in comparison to non-SP cells, and displayed increased tumorigenic ability. Moreover, SP cells showed higher mRNA expression of Oct-4, ABCG2, and CD44. Conclusion: We identified SP cells from a murine lung carcinoma, which possess well-known characteristics of CSCs. Our study established a useful model that should allow investigation of the biological features and pharmacosensitivity of lung CSCs, both in vitro and in syngeneic immunocompetent or transgenic/knockout mice.     

Characterization of sphere-forming cells with stem-like properties from the small cell lung cancer cell line H446

A relatively novel paradigm in tumor biology hypothesizes that cancer growth is driven by tumor cells with stem-like properties. However, direct proof of a population of stem cells in small cell lung cancer (SCLC) remains elusive. In this study, we enriched for stem-like cells from the SCLC cell line H446 by growing them as spheres in a defined serum-free medium. Sphere-derived cells have increased in vitro clonogenic and in vivo tumorigenic potentials as well as drug-resistant properties. After enrichment for stem-like cells, we used multiple candidate stem cell markers to examine the expression profile and found that the sphere-derived cells contained a higher proportion of cells expressing the stem cell surface markers uPAR and CD133 when compared with parental cells. To identify a selectable marker for the sphere-forming cells, we evaluated the sphere-forming abilities of uPAR(+) and uPAR(-) cells as well as the sphere-forming abilities of CD133(+) and CD133(-) cells. Both CD133(+) and CD133(-) cell fractions were capable of forming spheres, and no statistically significant difference was observed in the sphere-forming efficiency between these two populations. In contrast, cells derived from the uPAR(+) fraction were capable of forming spheres, whereas cells derived from the uPAR(-) fraction remained as single cells. Moreover, uPAR(+) cells efficiently formed transplantable tumors, whereas uPAR(-) cells were unable to initiate tumors when transplanted at equivalent cell numbers. In addition, uPAR(+) cells could differentiate into CD56(+)cells, CK(+) cells, and uPAR(-) cells. These data support the existence of a population of tumor sphere-forming cells with stem cell properties in the H446 SCLC cell line. Furthermore, the stem cell population may be enriched in cells expressing the uPAR cell surface marker.     

血卟啉单甲醚对卵巢癌细胞系SKOV3的光动力学杀伤效应

背景与目的：光动力学治疗（photodynamic therapy,PDT）近年来逐渐成为一种新的可供选择的卵巢癌治疗手段。血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）是我国自主开发研制的一种新型光敏剂,本实验目的在于体外实验研究HMME在卵巢癌细胞系SKOV3细胞中的荧光显微成像,并验证其对SKOV3的光动力杀伤作用。方法：30μg／ml HMME与细胞孵育不同时间后,置于高灵敏度荧光显微镜与激光共聚焦显微镜下检测HMME荧光及其细胞内的定位,形态学软件分析其荧光强度;不同浓度（5—50μg／ml）HMME与细胞孵育3h后,以不同能量激光（1．5、3、6、12J／cm^2）照射,MTT比色法检测细胞的存活率;以5μg／ml、3J／cm^2,20μg／ml、6J／cm^2剂量处理细胞,4h及24h后分别收集细胞行Annexin V／PI双染色,流式细胞仪分析细胞死亡方式。结果：HMME呈红色荧光弥漫性分布于细胞浆内,细胞内荧光强度于用药3h后达到高峰。高浓度HMME单独使用可能对细胞具有暗毒性。而单独激光照射对细胞存活无影响。随着HMME浓度与激光剂量的增加,细胞存活率逐渐下降。当HMME浓度增高到≥40μg／ml时．加大药物浓度与激光剂量细胞存活率并不随之降低。流式细胞仪分析结果显示HMME光动力学处理后死亡细胞主要为坏死细胞。结论：HMME对SKOV3细胞具有光动力学杀伤效应。     

LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

摘 要　目的：从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAM high特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法：从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAM high表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化。MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAM high、EPCAM low和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布。3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAM high细胞中 CD44/EPCAM的表达。结果：LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAM high细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别。CD44+/EPCAM high细胞增殖能力高于EPCAM low细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期。以500个CD44+/EPCAM high细胞接种裸鼠成瘤率为90%（9/10）,而1×104个EPCAM low细胞成瘤率为0（0/10)。小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAM high细胞仍能少量表达CD44和EPCAM。结论：LoVo细胞中存在CD44+/EPCAM high结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAM high可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究。     

FAP-1分子对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响

目的探讨Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响.方法采用免疫印记法(Western blot)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测了经FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)封闭前后FAP-1蛋白与核酸在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达水平;应用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞术(FCM)检测了经抗Fas激活性抗体DX2诱导凋亡后FAP-1分子对SKOV3细胞凋亡行为的影响.结果FAP-1蛋白与mRNA在卵巢癌细胞株SKOV3中均有明显表达.当用DX2以不同时间和不同浓度诱导凋亡后,DX2 FAP-1ASODN组在12、24、48和72 h的细胞抑制率约为DX2组的1～2倍,细胞凋亡率约为后者的2～4倍,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);在DX2低、中、高3个浓度时,DX2 FAP-1ASODN组的细胞抑制率为(20.94±1.15)%、(34.70±1.24)%、(45.45±2.80)%,DX2组分别为(11.42±0.38)%、(18.33±1.29)%、(28.75±1.81)%,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);而在DX2组与DX2 FAP-1SODN组间无显著性差异(P＞0.05).结论FAP-1分子在卵巢癌细胞SKOV3中有明显表达,且具有抵抗Fas介导凋亡的功能,而FAP-1ASODN可以明显提高卵巢癌细胞对凋亡的敏感性,可能对卵巢癌的发病与治疗具有重要意义.     

Isolation of cancer stem-like cells from a side population of a human glioblastoma cell line,SK-MG-1

Accumulating evidence suggests that in several types of brain tumors, including glioma, only a phenotypic subset of tumor cells called brain cancer stem cells (BCSCs) may be capable of initiating tumor growth. Recently, the isolation of side population (SP) cells using Hoechst dye has become a useful method for obtaining cancer stem cells in various tumors. In this study, we isolated cancer stem-like cells from human glioma cell lines using the SP technique. Flow cytometry analysis revealed that SK-MG-1, a human glioblastoma cell line, contained the largest number of SP cells among the five glioma cell lines that were analyzed. The SP cells had a self-renewal ability and were capable of forming spheres in a neurosphere culture medium containing EGF and FGF2. Spheres derived from the SP cells differentiated into three different lineage cells: neurons, astrocytes and oligodendrocytes. RT-PCR analysis revealed that the SP cells expressed a neural stem cell marker, Nestin. The SP cells generated tumors in the brains of NOD/SCID mice at 8 weeks after implantation, whereas the non-SP cells did not generate any tumors in the brain. These results indicate that SP cells isolated from SK-MG-1 possess the properties of cancer stem cells, including their self-renewal ability, multi-lineage differentiation, and tumorigenicity. Therefore, the SP cells from SK-MG-1 may be useful for analyzing BCSCs because of the ease with which they can be handled and their yield.     

Gankyrin基因沉默对人卵巢癌SKOV3/CDDP细胞顺铂耐药性的逆转作用和机制

背景与目的：卵巢癌是常见的妇科肿瘤,抗肿瘤药耐药性的产生是卵巢癌治疗失败的主要原因之一,Gankyrin基因被认为与肿瘤耐药性密切相关,本文探讨了Gankyrin基因沉默对卵巢癌耐顺铂细胞系SKOV3/DDP顺铂耐药性的逆转作用及机制。方法：应用real-time PCR技术考察Gankyrin在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的表达,应用MTS法检测Gankyrin对SKOV3/DDP细胞顺铂耐受性的影响,应用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡和细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh-123)含量的变化,Western blot和real-time PCR技术检测肿瘤细胞耐药相关蛋白MDR1、Caspase-3/8、Survivin和Bcl-2蛋白表达,Western blot法检测p53、NF-κB和PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平。结果：Gankyrin在SKOV3/DDP细胞中表达升高,沉默Gankyrin基因后可增加SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。基因沉默前后耐药逆转倍数(resistant factor,RF)为1.81和2.45,肿瘤细胞中Rh-123含量提高了1.73和2.42倍,细胞凋亡率是对照组的2.23倍和4.23倍,耐药相关蛋白MDR1、Survivin和Bcl-2蛋白水平显著下降,MDR1 mRNA表达是对照组的62.8%和21.6%,Survivin mRNA表达是对照组的24.5%和10.3%,Bcl-2 mRNA表达是对照组的47.5%和18.4%,Caspase-3/8、p53和PTEN表达水平上升,AKT磷酸化和NF-κB水平下降。结论：沉默Gankyrin基因可逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药性,可能与抑制药物外排,促进细胞凋亡有关,PTEN/AKT/NF-κB/p53信号通路可能是其中心环节。     

伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究。方法 以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,随机分为空白组、伏立诺他高剂量组、中剂量组和低剂量组共4组,采用CCK-8法测定SKOV3细胞增殖情况,Western blot检测SKOV3细胞H3K4ac和H3K27ac蛋白表达情况,Real-time PCR检测SKOV3细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、p53 mRNA、CyclinD1 mRNA表达。结果 CCK-8法测定结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组增殖明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中Bcl-2 mRNA和CyclinD1mRNA表达明显降低,Bax mRNA和p53 mRNA表达明显升高。Western blot结果显示与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中H3K4ac和H3K27ac蛋白表达明显增加。结论 伏立诺他抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与抑制组蛋白去乙酰化酶活性,激活p53凋亡通路有关。     

多聚乙烯基亚胺介导的卵巢特异性启动子调控下的自杀基因抑制卵巢癌细胞生长的体外研究

背景与目的目前基因治疗领域的关键技术问题是如何提高基因载体的转导效率和靶向性。近年来以一种新的多聚阳离子化合物—多聚乙烯基亚胺(polyethylenimine,PEI)作为载体为基因转移提供了一条有效的新思路。本研究应用PEI介导卵巢特异性启动子OSP-1调控下的自杀基因HSV-tk体外处理人卵巢癌细胞SKOV3,观察其抗瘤效应和靶向性。方法(1)将pGL3-Luc质粒分别介导多聚乙烯基亚胺PEI、脂质体DOTAP和裸DNA转染人卵巢癌细胞SKOV3,检测荧光素酶表达RLU(relativeluciferaseunit);(2)利用PEI将卵巢特异性启动子调控下的真核表达质粒pOSP1-HSVtk导入人卵巢癌细胞SKOV3、人肝癌细胞SMMC7721,应用MTT法测定更昔洛韦(ganciclovir,GCV)对两种肿瘤细胞的毒性;高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测GCV在SKOV3的细胞内代谢;流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)检测肿瘤细胞的凋亡。结果(1)PEI组的荧光素酶表达活性最高(187.35±6.48),与另两组相比(45.74±5.98,0.03±0.00),有显著性差异(P<0.01);(2)GCV对SKOV3细胞呈现明显的细胞毒性,对SMMC7721细胞没有产生细胞毒性;HPLC检测显示随着作用时间的延长,细胞内GCV水平逐渐下降;流式细胞仪显示转染pOSP1-HSVtk质粒的SKOV3细胞经GCV作用24、48、72h后,凋亡率分别为(8.42±0.76)%、(18.50±1.78)%、(34.80±3.46)%,呈明显的增高趋势;TUNEL检测SKOV3细胞可见大量凋亡细胞。结论多聚乙烯基亚胺介导卵巢特异性启动子调控下的自杀基因对卵巢癌有特异的体外杀伤作用,有助于提高基因治疗的有效性和靶向性。