突变型IκBα cDNA的克隆及其表达载体的构建

大量研究显示，慢性粒细胞白血病、急性髓系白血病以及淋巴细胞性白血病等均具有持续活化的核因子κB（nuclearfactor—κB，NF—κB）。因此，NF—κB的活化可能与白血病发生及其进展密切相关。NF—κB活化后，除了可调节参与细胞生长和增殖相关基因的表达外，还可上调凋亡抗性分子如cIAP1和TRAF1等基因的表达，从而使肿瘤细胞逃避凋亡。相反，抑制NF．κB活性，则能诱导细胞凋亡，抑制肿瘤的生长。因此，研究白血病细胞NF—κB的活化及其调控对揭示白血病的发病机制以及寻找白血病治疗新的靶分子具有重要意义。     

NF—κB在模拟缺血／再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中的作用

目的观察核因子KB（NF—κB）在模拟缺血／再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中活性的变化,并进一步阐明其作用。方法采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代,细胞以缺氧（5％CO2、1％O2、94％N2）＋兀糖KR液模拟缺血、缺氧,复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,用流式细胞术、免疫组化法、免疫印迹法观察正常对照组、模拟缺血／再灌注损伤组（I—R组）、NF—κB的抑制剂PDTC预处理组（使用10μmol·L^-1PDTC预处删胃黏膜上皮细胞24h）于模拟缺血1h、再灌注6h后细胞凋亡及NF—κB的表达情况。结果①I—R组细胞凋亡率较正常对照组明显增高（P〈0．01）,PDTC预处理组细胞凋亡率较I—R组明显下降（P〈0．01）。②正常对照组胃黏膜上皮细胞核内极少有NF—κB表达,I—R组细胞核内NF—κB表达明显增加,PDTC预处理绀NF—κB核转化现象减轻,胞核染色明显减少。③I—R组与正常对照组比较,胃黏膜上皮细胞核NF—κB蛋白表达水平显著增高（P〈0．01）;PDTC预处理组与I—R组比较,NF—κB蛋白表达水平明显降低（P〈0．01）。结论模拟缺血／再灌注能增加人肖黏膜上皮细胞核内NF—κB的表达,NF—κB的激活具有促进细胞凋产的作用;PDTC叮以抑制细胞凋亡,对人胃黏膜上皮细胞模拟缺血／再灌注损伤有保护作用。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

PDTC对重度颅脑损伤后NF-κB表达的影响

目的：观察核转录因子-κB（NF-κB）在大鼠创伤性脑损伤（TBI）后脑组织损伤区的表达变化，同时探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对其表达的影响。方法：参照改良Feeney自由落体脑损伤装置制备大鼠重度脑损伤模型，将72只大鼠随机分为TBI组、PDTC干预组和假手术对照组，每组分别于伤后2h、12h、24h、48h断头，取出损伤区脑组织，检测各组的NF-κBmRNA表达水平。结果：TBI组NF-κB于伤后2h表达增强，12h表达明显增加，24h达到高峰，48h略有下降，与假手术对照组相比差异显著（P〈0．05）。PDTC干预组与TBI组相比，NF—κBmRNA表达明显下降，差异显著（P〈0．05）。结论：大鼠重度TBI后，NF—κB的活化及过度表达参与了继发性脑损伤过程，PDTC可以通过抑制NF—κB的表达，对TBI起到保护作用。     

核因子-κB在重症急性胰腺炎肝损伤中的作用研究

目的 探讨该因子－κB（nuclear factor-kappa,B,NF－κB）在重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤发病机制中的作用。方法 38只健康雌性Wistar大鼠随机分为SAP组，PDTC（二硫代氨基甲酸吡咯烷）预处理组及正常组3组。SAP模型经胆胰管内加压注射5％牛磺胆酸钠溶液0．1ml/100g完成。PDTC预处理组在建立SAP模型前1h腹腔内按100mg/kg体重注入PDTC。建模后3、6、12h3个时间点将大鼠处死，血样检测天冬氨酸转氨酶（AST),留取肝组织苏木精－伊红染色不观察肝组织受损情况，应用SP免疫组化汉检测SAP肝组织NF－κB，用RT－PCR的方法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、是素－6（IL－6）、细胞间粘附分子－1（ICAM－1）mRNA的表达。结果 SAP肝组织苏木精－伊红染色未见明显的肝细胞坏死和肝细胞凋亡出现。PDTC预处理组与未处理组未见差别。SAP组AST明显升高，与正常组相比有显著性差异，PDTC预处理后各时间点AST均较未处理组下降。正常肝组织偶见NF－κB活化的肝细胞，在SAP肝组织可见肝细胞NF－κB活化。经PDTC预处理后肝组织NF－κB 化的阳性肝细胞数与未经PDTC处理者相比明显减少。SAP时肝组织TNF－α、IL－6、ICAM－1mRNA的表达明显增加，经PDTC预处理后相应各时间点均降低。但SAP肝组织ICKAM－1mRNA各时间点均无明显改变。结果 重症急性胰腺炎时存在肝损伤，TNF－α、IL－6mRAN表达参与肝损伤,SAP肝损伤时NF－κB活化并上调TNF－α、IL-6mRNA的表达，抑制NF－κB活化可下调这些细胞因子的表达，减轻肝脏损伤。     

益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸致兔血管平滑肌细胞核因子活化及血管细胞黏附分子表达的影响

目的：探讨益肾活血胶囊提取液（YSHXC）对高同型半胱氨酸（HCY）致兔血管平滑肌细胞（VSMCs）核因子-κB（NF—κB）活化及血管细胞黏附分子-1（VCAM—1）表达的影响。方法：以HCY诱导体外培养的兔主动脉平滑肌细胞建立细胞增殖模型。实验分为正常组、HCY组、HCY＋YSHXC（小、中、大）剂量组。通过细胞计数观察VSMCs的增殖情况，同时采用免疫组化和RT—PCR技术分别检测NF—κB、vCAM—1的蛋白及mRNA表达。结果：HCY诱导后可使NF—κB活化、VCAM—1的表达增强；而YSHXC可从蛋白和mRNA水平明显抑制其表达（P〈0．01），并呈现剂量依赖关系，这在各实验组细胞数目也有相应的体现。结论：YSHXC能明显抑制HCY诱导的NF—κB活化及VCAM—1的表达，减少VSMCs的增殖和向内皮的迁移，可能对延缓动脉粥样硬化（AS）的发生发展起到一定作用。     

NF—κB在子宫内膜异位症发病机制中的作用研究

目的了解NF—κB在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法分别用LPS及LPS＋PDTC干预正常及内异症患者的在位及异位子宫内膜细胞,收集细胞后用West Blot方法检测并比较三组NF—κB的蛋白浓度变化。结果（1）在正常、在位及异位子宫内膜细胞这三组细胞中,NF—κB蛋白在正常子宫内膜细胞表达最弱,与在位及异位子宫内膜细胞相比,差异有显著统计学意义（P〈0．01）;其次是在位子宫内膜细胞,异位子宫内膜细胞NF—κB的蛋白表达最高,两组之间比较,其差异有显著统计学意义（P〈0．01）。（2）对在位及异位子宫内膜细胞给予LPS刺激后,NF—κB的蛋白表达明显增强,与对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．01）;但如果在给予LPS刺激前先给予PDTC,则可见NF—κB的蛋白表达明显降低,与LPS组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。LPS＋PDTC组的NF—kB的蛋白表达甚至显著低于对照组,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。结论NF—κB可能在子宫内膜异位症的发病机制中起重要作用。     

地塞米松抑制核因子-κB活化增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡

目的 研究化疗药物诱导HL60—n白血病细胞核因子—κB（NF—κB)活化与凋亡的关系，并探讨地塞米松(DXM)对其的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF—κB活化水平；采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tunel)检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导HL60—n白血病细胞NF—κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡明显相关，1μmol/L DXM能显著抑制高三尖杉酯碱(HHT)0．5μmol/L或足叶乙甙(VP—16)1μmol/L诱导的HL60—n细胞NF—κB活化，抑制率分别为49．69％和44．35％，并增强它们诱导HL60—n细胞凋亡的作用，凋亡增加率分别为57．5％和37．2％。HL60—n细胞在接触化疗药物前，NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物在诱导HL60—n白血病细胞凋亡的同时活化NF—κB，DXM可通过抑制NF—κB活化以增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

NF-κB在子宫内膜异位症发病机制中的作用研究

目的了解NF—κB在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法分别用LPS及LPS＋PDTC干预正常及内异症患者的在位及异位子宫内膜细胞,收集细胞后用West Blot方法检测并比较三组NF—κB的蛋白浓度变化。结果（1）在正常、在位及异位子宫内膜细胞这三组细胞中,NF—κB蛋白在正常子宫内膜细胞表达最弱,与在位及异位子宫内膜细胞相比,差异有显著统计学意义（P〈0．01）;其次是在位子宫内膜细胞,异位子宫内膜细胞NF—κB的蛋白表达最高,两组之间比较,其差异有显著统计学意义（P〈0．01）。（2）对在位及异位子宫内膜细胞给予LPS刺激后,NF—κB的蛋白表达明显增强,与对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．01）;但如果在给予LPS刺激前先给予PDTC,则可见NF—κB的蛋白表达明显降低,与LPS组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。LPS＋PDTC组的NF—kB的蛋白表达甚至显著低于对照组,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。结论NF—κB可能在子宫内膜异位症的发病机制中起重要作用。     

EGCG影响NF—κB入核后的周期阻滞效应

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）调节肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的胃癌SGC-7901细胞核转录因子κB（NF—κB）入核后的周期阻滞效应。方法胃癌SGC-7901细胞分4组：空白对照组（常规培养换液）、TNF-α实验组（终浓度10ng／mL的TNF—α,培养60min）、EGCG组（终浓度为60μg／mL的EGCG作用24h后再加终浓度10ng／mL的TNF-α,培养60min）、阳性对照药物组（NF—κB通路阻断剂吡咯啉烷二甲基硫脲终浓度100μmol／mL预处理细胞30min后,再加终浓度10ng／mL的TNF-α,培养60min）。Western blot方法观察EGCG作用前后NF—κB蛋白在胞浆内及核内的变化;流式细胞术检测EGCG调节NF—κB入核前后细胞周期分布的变化。结果EGCG60μg／mL作用24h可有效抑制NF—κB入核。TNF—α作为NF—κB入核促进剂可以明显促进SGC-7901细胞由G1期进入S期;EGCG或吡咯啉烷二甲基硫脲（PDTC）,分别预处理SGC-7901细胞后,再以TNF-α处理细胞,结果呈现明显的G1期阻滞效应,且该效应呈浓度依赖性。结论EGCG能够抑制TNF-α诱导的NF—κB入核,并可能通过此机制发挥诱导细胞周期阻滞的作用。