胶质瘤协同诱导分化的免疫组化研究

目的探索诱导分化在脑胶质瘤治疗中的用途。方法应用SP免疫组化染色法,检测9顺式维甲酸及干扰素-γ(9-cis RA/IFN-γ)协同诱导分化处理前后脑胶质瘤细胞Ki-67及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗原的表达变化。结果9-cisRA/FN-γ协同诱导分化可使脑胶质瘤细胞Ki-67 LI水平显著下降(P＜0.01)。而GFAP蛋白的表达显著增加(P＜0.01)。结论协同诱导分化能有效逆转脑胶质瘤细胞的恶性增殖表型,并促使其进一步分化。     

地黄多糖对过表达Notch1（NICD）大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化及增殖的影响

目的：探讨地黄多糖对过表达Notch1（NICD）大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导分化及增殖的影响。方法以P3～P5代大鼠B MS C s为研究对象,将细胞随机分为正常对照组、空载体组和转染组。脂质体法转染Notch1（NICD）过表达真核载体,转染后以地黄多糖（0．2 mg／mL）进行诱导分化,转染和诱导后行细胞一般状态观察,采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测Notch1（NICD）蛋白、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达,CCK-8检测细胞存活率。结果转染后转染组细胞似神经胶质样细胞形态改变,诱导后各组细胞似神经元样细胞形态结构,转染组显著。转染组Notch1和GFAP蛋白表达阳性率显著高于正常对照组和空载体组（P＜0．05）,而NSE在3组间差异无统计学意义（P＞0．05）;诱导后转染组NSE阳性率高于正常对照组和空载体组（P＜0．05）。转染后与诱导后比较,转染组Notch1表达阳性率降低（P＜0．05）,且正常对照组与空载体组亦降低（P＜0．05）;转染组NSE表达阳性率明显升高（P＜0．01）,且正常对照组与空载体组明显升高（P＜0．01）;转染组GFAP表达阳性率明显降低（P＜0．01）。CCK-8检测显示,地黄多糖诱导后,随时间延长各组细胞存活率略呈下降趋势。结论转染高表达Notch1（NICD）大鼠BMSCs具有向神经胶质样细胞分化倾向,地黄多糖显著抑制Notch1蛋白的表达,诱导BMSCs向神经元样细胞分化。     

C—rbB—2,PCNA和Ki67在乳腺癌中的表达及临床意义

目的：研究乳腺癌中原癌蛋白C－erbB-2，细胞增殖标志物PCNA和Ki67的表达与临床病理参数（癌组织大小，淋巴结转移，年龄，雌，孕激素受体ER，PR表达）之间的关系。方法：免疫组化SP法，结果：54例乳腺癌中，C－erbB-2,PCNA和Ki67阳性表达率分别为51．9％，68．5％和48．1％，C－erbB-2,PCNA和Ki67表达之间显著正相关（P＜0．01），C－erbB-2,及其和PCNA共同高表达与癌组织大，淋巴结转移＋，ER－和PR－，PCNA高表达与癌组织大，ER－和PR－，Ki67及其和C－erbB-2共同高表达与癌组织大，淋巴结转移＋和ER－这些不良预后因素分别显著相关（P＜0．05或P＜0．01），结论：C－erbB-2,PCNA和Ki67高表达是乳腺癌预后不良的指标，PCNA与Ki67是独立的乳腺癌细胞增殖的指标。     

rIL—2、TNF—α、IFN—γ对抗CD3—抗胶质瘤双特异性抗体的协同细胞毒作用

目的：观察细胞因子rIL-2、TNF－α、IFN－γ对抗CD3－抗胶质瘤双特异性抗体（双抗）的协同作用,进一步提高双抗对人脑胶质瘤的治疗作用。方法：以人脑胶质瘤细胞株SHG－44为靶细胞,健康人或胶质瘤患的外周血单个核细胞（PBMC）为效应细胞,以18h ^3H-TdR掺入释放法测定细胞毒活性,采用单比实验和联合作用等对比分析方法,分析各细胞因子（rIL-2、TNF－α、IFN－γ)对双抗诱导的细胞毒性作用的影响。结果：rIL-2、TNF－α、IFN－γ均可协同提高双抗对人脑胶质瘤的细胞毒作用（P＜0．05）。来源于恶性胶质瘤患的效应细胞活性较正常人低,rIL-2与双抗可协同增强其活性。结论：细胞因子rIL-2、TNF－α、IFN－γ可协同提高双抗对效应细胞的活化,充分激活效应细胞,增强抗肿瘤免疫能力。     

Ki67、GFAP 在人脑恶性胶质瘤病理分级中的意义!

目的探讨Ki67、GFAP与人脑恶性胶质瘤病理分级的关系。方法取深圳市宝安区中医院病理科2007年1月～2012年12月组织学确诊为恶性胶质瘤标本3l例,根据WHO（2007年）胶质瘤分级标准,分为胶质瘤Ⅱ级组、胶质瘤Ⅲ级组和胶质瘤Ⅳ级组,另取10名正常人脑组织胶质细胞作为正常对照组。免疫组织化学法检测Ki67及GFAP表达。结果Ki67表达水平在正常对照组最低,随着肿瘤WHO分级的增高而增高,在胶质瘤Ⅳ级组达高峰,差异有统计学意义（P〈0．05）;GFAP表达水平在正常对照组最高,随WHO分级的增高而降低,在胶质瘤Ⅳ级组表达水平最低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ki67、GFAP可作为人脑恶性胶质瘤病理分级及预后判断有价值的参考指标。     

NLRP7在早期葡萄胎诊断中的应用

目的：探讨NLRP7、P57和Ki－67免疫组织化学染色在早期葡萄胎的表达情况及应用价值。方法根据葡萄胎病理学诊断标准结合P57的表达,将确诊的葡萄胎分为部分性（PHM）和完全性葡萄胎（CHM）,利用免疫组织化学染色检测妊娠早期的部分性葡萄胎（n＝22）和完全性葡萄胎（n＝24）石蜡组织切片中NLRP7和Ki－67蛋白的表达。结果 NLRP7蛋白在部分性葡萄胎和完全性葡萄胎的表达率分别为54．55％（12／22）和50％（12／24）,差异无统计学意义（ P＞0．05）,但CHM组NLRP7蛋白的表达强度组内比较有统计学差异,且强阳性表达组和部分性葡萄胎组相比,有显著统计学差异（P＜0．01）。 Ki－67在部分性和完全性葡萄胎组表达率分别为59．09％（13／22）和79．17％（19／24）,有统计学差异（P＜0．05）。结论 NL-RP7蛋白单项检测不可直接用于鉴别部分性和完全性葡萄胎,需进一步检测基因突变,但联合P57和Ki－67蛋白可为复发性葡萄胎的预防及监测提供指导意义。     

P27和PCNA在儿童脑胶质瘤中的表达及其意义

目的：探讨P27、PCNA在儿童脑胶质瘤中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学S－P法，检测48例儿童脑胶质瘤和9例正常脑组织中P27、PCNA蛋白的表达。结果：27在儿童脑胶质瘤阳性表达（58．3％）明显低于正常组（100％，P＜0．05）；P27表达与儿童脑胶质瘤病理分级有关（r＝0．515，P＜0．01），随着肿瘤恶性程度的增高P27表达呈降低态势；低度恶性组与高度恶性组之间比较有明显差异（P＜0．05）。PCNA表达与儿童脑胶质瘤病理分级有关（r＝0．452，P＜0．01），随肿瘤恶性程度增高，PCNA表达强度增高。P27与PCNA表达之间相关分析无显著意义（r＝0．022，P＞0．05）。结论：P27和PCNA可作为判断儿童脑胶质瘤恶性程度的重要指标。     

高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,检测高胰岛素（HI）对VSMC膜蛋白激酶C（PKC）活性的影响,并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂－H7对脂多糖（LPS）＋γ－干扰素（γ－IFN）诱导NO生成和一氧化氮合酶（iNOS) 表达的影响。结果：HI预处理的VSMC,膜PKC活性明显高于对照（P＜0．05）,LPS＋γ－IFN诱导NO生成显著低于对照（P＜0．01）,加H7培育,NO的生成量较HI处理组明显提高,但低于对照（P＜0．01）。免疫印迹示HI处理的VSMC,iNOS表达下降,提示：高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC,部分抑制iNOS表达,减少NO产生。     

哮喘患者白细胞介素—10、γ—干扰素水平与IgE关系的研究

目的：了解哮喘患者白细胞介素－10、γ－干扰素（IFN－γ）水平与IgE生成的关系。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测30例哮喘患者和20例健康人外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中IL－10和IFN－γ的含量以及血浆中IL－10、IFN－γ和IgE的水平,并进行相关性研究。结果：哮喘组PBMC培养上清液中IL－10与IFN－γ含量显著低于对照组（P＜0．001,P＜0．01）。哮喘组血浆中IL－10、IFN－γ含量显著低于对照组（P＜0．001,P＜0．05）,血浆IgE含量显著高于对照组（P＜0．001）。哮喘组患者血浆中IL－10、IFN－γ含量和IgE浓度呈负相关（r1=-0.31,r2=-0.50）。结论：IL－10、IFN－γ在哮喘患者IgE的产生过程中起抑制作用。     

小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中α－玉米赤霉醇对 PⅠNP 和 BMP －2表达的影响

目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中α－玉米赤霉醇（α－ZAL ）对Ⅰ型前胶原 N 端前肽（PⅠNP）和骨形态发生蛋白－2（BMP －2）表达的影响。方法采用全骨髓培养差速贴壁法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，取第3代细胞分为空白诱导组、阳性诱导组及高、中、低浓度α－ZAL 诱导组。空白诱导组仅加入成骨条件培养基，阳性诱导组加入等量成骨条件培养基及雌二醇，高、中、低浓度α－ZAL 诱导组分别加入成骨条件培养基及梯度浓度（10－5、10－6、10－7 mol ／L）的α－ZAL。采用 ELISΑ法测定 PⅠNP 和 BMP －2的表达量。结果小鼠骨髓间充质干细胞原代培养呈长梭形，有接触抑制现象，诱导后细胞呈三角形、多角形、不规则形状，细胞生长密集时可重叠生长。与空白诱导组比较，各组 PⅠNP 表达量均明显升高（P ＜0．01），阳性诱导组及低、中浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量均明显升高（P ＜0．01），高浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量明显下降（P ＜0．01）。与阳性诱导组比较，低浓度α－ZAL 诱导组 PⅠNP 表达量明显升高（P ＜0．01），而中、高浓度α－ZAL诱导组 PⅠNP 表达量明显下降（P ＜0．01），低、中浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量均明显升高（P ＜0．01），高浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量明显下降（P ＜0．01）。结论α－ZAL 呈剂量相关性促进体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化，低浓度（10－7 mol ／L）α－ZAL 可显著促进骨髓间充质干细胞骨向分化过程中 PⅠNP 和BMP －2的表达，随着剂量的升高，促进作用下降。