ARHI基因与HuR蛋白在胰腺癌PANC-1细胞中的表达

  目的  观察ARHI基因转染胰腺癌PANC-1细胞后对HuR蛋白的影响。  方法  采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒pLNCX2-ARHI-EGFP和空载体pLNCX2-EGFP转染胰腺癌PANC-1细胞,细胞分为3组:实验组(pLNCX2-ARHI-EGFP)、空载体转染组(pLNCX2-EGFP)和PANC-1细胞空白对照组,用G418筛选稳定转染的细胞株;采用PCR和Western blot方法检测ARHI基因表达,采用Western blot方法检测HuR蛋白表达。  结果  稳定转染ARHI基因组可检测到ARHI基因mRNA和蛋白的表达。根据图像灰度计算蛋白条带相对表达量,稳定转染ARHI基因组HuR蛋白表达(0.2226± 0.0644)较空载体对照转染组(0.4063 ± 0.0925,P=0.029)和PANC-1细胞空白对照组(0.4178 ± 0.1319,P=0.022)显著降低。  结论  ARHI基因可以导致胰腺癌细胞株中HuR蛋白表达降低。     

ERCC1对晚期非小细胞肺癌一线含铂化疗疗效的预测价值

  目的  探讨肺癌组织ERCC1(excision repair cross-complementation group1)表达水平对晚期非小细胞肺癌含铂化疗疗效及生存期的预测价值。  方法  采用免疫组织化学方法对39例非小细胞肺癌患者的石蜡包埋肿瘤标本进行ERCC1检测, 分析其与化疗反应率及生存期间的关系。  结果  56.4%(22/39)的肿瘤组织呈ERCC1高表达。ERCC1表达与患者性别、年龄、病理类型、肿瘤分化程度、吸烟史及吸烟指数均无相关性; ERCC1低表达患者对含铂一线化疗的反应率优于ERCC1高表达者, P < 0.05。但ERCC1表达水平对患者总生存(overall survival, OS)和疾病进展(time to progression, TTP)时间没有明显影响。  结论  ERCC1在肺癌组织的表达水平可能成为预测晚期非小细胞肺癌患者一线含铂化疗方案疗效的因素之一。     

212例活动性结核病患者外周血淋巴细胞亚群特点:单中心描述性研究

  目的  基于相对较大的样本数据,探究活动性结核病(active tuberculosis, ATB)患者外周血淋巴细胞亚群特点及其意义。  方法  回顾性收集北京协和医院住院ATB患者(2012年6月—2022年1月)及年龄、性别与其相匹配的健康人群(2019年3月—2022年5月)的临床资料。以健康人群为对照,分析ATB患者外周血淋巴细胞亚群变化特点,并对不同确诊方式及受累部位ATB患者进行组间比较。  结果  共入选符合纳入与排除标准的ATB患者212例、健康人群200例。ATB患者中,临床确诊82例(38.7%)、病原学确诊130例(61.3%, 包括单纯肺结核77例、单纯肺外结核21例、肺结核并肺外结核32例)。相较于健康人群,ATB患者多种外周血淋巴细胞亚群指标计数及其百分比降低(P均＜0.05),T淋巴细胞百分比、CD8⁺T淋巴细胞百分比、记忆CD4⁺T淋巴细胞/CD4⁺T淋巴细胞比值、CD38⁺CD8⁺T淋巴细胞/CD8⁺T淋巴细胞比值等均升高(P均＜0.05)。相较于临床确诊ATB患者,病原学确诊ATB患者淋巴细胞、B细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞计数等均降低(P均＜0.05)。不同结核感染部位的患者记忆CD4⁺T淋巴细胞、纯真CD4⁺T淋巴细胞、CD28⁺T淋巴细胞及活化CD8⁺T淋巴细胞亚群计数及其百分比无显著差异(P均＞0.05)。相较于单纯肺结核患者,肺结核并肺外结核患者B细胞计数[23(10,69)个/μL比73(25,133)个/μL, P=0.003]降低,单纯肺外结核患者NK细胞百分比[16.7%(10.8%,23.6%)比10.6%(5.3%,17.4%), P=0.042]升高。  结论  ATB患者外周血淋巴细胞亚群指标整体呈减低状态,存在明显的免疫功能紊乱。     

肾上腺嗜酸细胞型皮质癌的临床病理特征及表皮生长因子受体基因状态

  目的  探讨肾上腺嗜酸细胞型皮质癌临床病理特征及其表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)蛋白表达、基因突变和基因拷贝数改变情况。  方法  回顾性分析2000年1月至2009年12月在北京协和医院手术切除的9例肾上腺嗜酸细胞型皮质癌的临床特点、组织形态学特征, 并以9例肾上腺嗜酸细胞型皮质腺瘤为对照, 应用免疫组织化学、Scorpion ARMS突变系统及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)的方法分析EGFR在二者中的蛋白表达、基因突变和基因拷贝数改变的情况。  结果  9例肾上腺嗜酸细胞型皮质癌中, Cushing综合征2例, 无功能性皮质癌7例。病例随访时间6~56个月, 皮质癌患者失访2例, 死亡6例。肾上腺嗜酸细胞型皮质癌中EGFR蛋白过表达率为77.8%(7/9), EGFR FISH阳性率为55.6%(5/9);仅有22.2%(2/9)皮质腺瘤存在EGFR蛋白的表达, 且EGFR FISH均为阴性。肾上腺嗜酸细胞型皮质腺瘤及皮质癌中均未检测出EGFR基因扩增及基因突变。  结论  肾上腺嗜酸细胞型皮质癌非常罕见, 其诊断依据病理学及免疫表型, EGFR蛋白过表达和7号染色体的高多体性较腺瘤更常见, 可能有助于与后者的鉴别诊断, 也有可能成为今后临床分子靶向治疗的潜在方向。     

局部注射胆固醇包裹let-7a miRNA模拟物下调人3种Ras表达抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生长和转移

  目的  研究胆固醇包裹let-7a模拟物(mimics)是否能通过下调人3种Ras抑制肝癌发展, 寻找肝癌的潜在治疗策略  目的  采用MTT增殖分析、PI单染和Annexin V/FITC双染方法检测let-7a mimics在体外对肝癌细胞的作用。使用裸鼠皮下移植瘤模型和通过肿瘤局部注射方法观察let-7a mimics对体内肝癌的作用。采用实时定量PCR和Western blot方法检测let-7a及其靶点Ras的表达  结果  与阴性对照组相比, let-7a mimics转染的肝癌细胞let-7a水平升高, 细胞增殖缓慢(P均 < 0.05);let-7a mimics阻滞更多肝癌细胞停留在G0-G1期且促进肝癌细胞凋亡(P均 < 0.05)。经let-7a mimics治疗的裸鼠体内肿瘤体积较阴性对照组减小, 是阴性对照组的54.97%(P=0.039);局部浸润和肝脏转移较阴性对照组明显减轻。肝癌细胞和移植瘤组织内let-7a上调的同时, 人K-Ras、H-Rras和N-Ras mRNA和蛋白的表达降低(P均 < 0.05)  结论  let-7a mimics下调人3种Ras mRNA和蛋白的表达, 影响细胞周期, 进而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。瘤周多点注射胆固醇包裹的let-7a mimics能抑制移植瘤的生长、浸润和转移。提示let-7阻断Ras可成为肝癌治疗的研究策略。     

动态联合监测血清淀粉样蛋白A、血清可溶性髓系细胞触发受体-1、D-二聚体对Sepsis患者预后的评估价值:前瞻性巢式病例对照研究

  目的  探讨血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein, SAA)、血清可溶性髓系细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1, sTREM-1)、D-二聚体在Sepsis患者预后评估中的价值。  方法  2018年1月至2019年2月, 前瞻性纳入海南省人民医院ICU收治的Sepsis患者, 检测患者诊断Sepsis后第1、3、7天的SAA、sTREM-1、D-二聚体、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、降钙素原(procalcitonin, PCT)水平、并记录患者急性生理和慢性健康状况评估(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ, APACHE Ⅱ)结果, 将诊断Sepsis后28 d内死亡患者作为研究组(死亡组), 存活患者作为对照组(生存组), 采用多因素Logistic回归分析和受试者工作特征(receiver operator characteristic, ROC)曲线分析各指标与患者预后的相关性及对预后的评估价值。  结果  共82例符合纳入和排除标准的Sepsis患者入选本研究, 其中男性51例, 女性31例, 平均年龄(68.17±9.94)岁。死亡组30例, 生存组52例, 两组年龄、性别、体质量指数差异无统计学意义(P均>0. 05)。死亡组与生存组在诊断Sepsis后第1、3、7天SAA、sTREM-1、D-二聚体、CRP和PCT水平及APACHEⅡ评分差异均具有统计学意义(P均 < 0.05)。诊断Sepsis后第1天, SAA(P=0.004)、sTREM-1(P=0.025)、CRP(P=0.005)、PCT(P=0.016)均为预测Sepsis预后的独立相关因素, 且SAA、sTREM-1水平在第1、3、7天与APACHEⅡ评分呈正相关(P均 < 0.05), 而D-二聚体仅在第3天和第7天与APACHEⅡ评分呈正相关(P均 < 0.05)。ROC曲线发现, SAA第1、3、7天的曲线下面积均最大(分别为0.878、0.916、0.954), sTREM-1第3天和第7天(0.907、0.929)的ROC曲线下面积均大于CRP(0.897、0.927)和PCT(0.892、0.890), SAA+sTREM-1+D二聚体联合检测在第1、3、7天的ROC曲线下面积分别为0.918、0.974、0.984。  结论  SAA、sTREM-1和D-二聚体的动态联合监测结果可作为Sepsis的预后指标, 且优于CRP、PCT等传统预测指标。     

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱联合磁珠技术寻找肺癌血清蛋白标志物

  目的  建立肺癌蛋白质指纹图谱诊断模型, 探讨用于肺癌早期诊断及手术疗效评估的血清蛋白标志物。  方法  收集38例肺癌患者、12例肺部良性肿瘤患者及32名正常对照者的血清标本, 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)联合磁珠技术, 获得蛋白质指纹图谱, 采用BPS分析软件对数据分组及相关性进行分析, 初步建立肺癌的血清蛋白质指纹图谱诊断模型, 并验证其诊断效率; 同时对比肺癌患者手术前后的差异蛋白质谱, 结合肺癌的诊断模型, 选取合适的蛋白作为肺癌手术疗效的观察指标。  结果  在质荷比为1000~50 000范围内, 肺癌患者、肺部良性肿瘤患者和正常对照者之间共检测到215个蛋白质峰。其中, 质荷比为1115.37、1929.70、3217.57、3246.34、3318.57、11 508.90的6个蛋白质峰表达差异具有统计学意义(P < 0.05)。决策树模型对肺癌的原始判别敏感性为92.11%(35/38), 特异性为90.91%(40/44);交叉验证敏感性为86.67%(13/15), 特异性为86.67%(13/15)。其中质荷比为1115.37、1929.70、3246.34和11 508.90的蛋白质峰在肺癌患者中明显升高(P < 0.05), 当肺癌患者手术治疗后表达量较术前明显降低(P < 0.01), 表明这4个蛋白质峰对肺癌的诊断及疗效判定具有潜在应用价值。  结论  应用SELDI-TOF-MS技术建立的肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型具有较高的敏感性和特异性, 为发现肺癌早期生物标志物并判断疗效奠定基础。     

中国人群胰腺癌与胃癌HER2/neu基因表达

  目的  探讨胰腺癌与胃癌组织中HER2/neu基因表达状态及其在治疗与评估临床结局中的作用。  方法  应用免疫组织化学和多色荧光原位杂交技术, 检测北京协和医院手术切除的81例胰腺导管癌及癌旁胰腺组织和100例胃癌及癌旁胃组织标本中HER2/neu蛋白表达及基因状态的变化, 分析HER2/neu蛋白表达与基因状态间的关系及其与胰腺癌和胃癌临床病理改变间的关系。  结果  免疫组织化学显示, 81例胰腺癌组织中9例(11.1%)HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+), 100例胃癌组织中13例(13%)HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+); 荧光原位杂交结果显示, 81例胰腺癌组织中15例(18.5%)HER2/neu基因扩增, 100例胃癌组织中11例(11%)HER2/neu基因扩增。胰腺癌HER2/neu基因扩增与淋巴结转移有显著相关性(P=0.001)。胃癌组织中6例HER2/neu蛋白3+病例均显示HER2/neu基因扩增, 且胃癌组织HER2/neu蛋白表达与其基因扩增有显著相关性(P < 0.0001)。无论是癌旁胰腺组织还是癌旁胃组织均未检测到HER2/neu蛋白表达及基因扩增。  结论  胰腺癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增不一致, 而胃癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增有显著相关性。HER2/neu基因异常可能在胰腺癌及胃癌的发生发展中起着重要作用, 对胰腺癌及胃癌患者进行HER2/neu基因状态检测可能对其靶向治疗具有一定的指导意义。     

亚低温对复苏后大鼠脑细胞凋亡相关因子的影响

  目的  研究亚低温对心肺复苏后大鼠神经细胞凋亡及凋亡基因表达的影响。  方法  60只健康雄性SD大鼠随机分为常温组(T=37℃±0.5℃)和亚低温组(T=33℃±1.0℃), 每组30只; 窒息法建立心肺复苏模型, 于自主循环恢复后12、24 h通过神经功能缺损评分评价神经功能, 使用TUNEL染色观察脑细胞凋亡情况, 并于自主循环恢复后0、2、6、12、24 h采用RT-PCR检测脑组织中凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor, AIF)、caspase-3、Fas基因mRNA表达。  结果  亚低温组大鼠12及24 h神经功能缺损评分明显高于常温组(P < 0.05), 6、12、24 h神经细胞凋亡数量明显少于常温组(P < 0.05);与常温组相比, 自主循环恢复后各时间点AIF、caspase- 3及6、12、24 h Fas基因mRNA表达显著下调(P < 0.05)。  结论  亚低温可能通过抑制脑组织中AIF、caspase-3、Fas凋亡基因表达, 减少神经元凋亡, 改善神经功能。     

胰岛素样生长因子与系统性硬皮病的相关性

  目的  探讨胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor, IGF)与系统性硬皮病(systemic sclerosis, SSc)的关系。  方法  采集2010年至2011年北京协和医院皮肤科就诊的24例SSc患者血清, 其中弥漫型SSc 12例, 局限型SSc 12例; 另外采集12名健康对照者及6例系统性红斑狼疮患者血清, 通过ELISA法检测血清IGF系统各因子的表达, 并结合患者临床资料进行分析。  结果  SSc患者血清IGF-Ⅰ和胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein, IGFBP)-3水平高于健康对照组[分别为(49.21±37.94) ng/ml vs.(15.54±9.07) ng/ml和(3.38±2.09) ng/ml vs.(1.00±0.83) ng/ml, P < 0.001], 且SSc患者血清IGF-Ⅰ与IGFBP-3水平呈正相关(r=0.883, P < 0.001)。血清IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平与患者年龄、病程、Rodnan皮肤评分不存在相关性。血清IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平在Scl-70抗体阳性与阴性SSc患者间及在肺间质纤维化与无肺间质纤维化SSc患者间差异均无统计学意义。SSc患者血清IGF-Ⅱ、IGFBP-5和IGFBP相关蛋白1(IGFBP-related protein 1, IGFBP-rP1)水平与健康对照组比较差异无统计学意义。  结论  SSc患者血清IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平升高, IGF系统可能参与了SSc的发病机制。     

中医疗法对过敏性紫癜患者免疫功能的调节作用

目的探讨以疏风清热、活血化瘀立法治疗过敏性紫癜(HSP)前后,外周血白细胞总数、淋巴细胞数、淋巴细胞亚群、辅助性T细胞(Th)1/Th2及调节性T细胞的变化。方法使用血细胞分析仪检测36例住院患者血常规,统计其中的白细胞总数及淋巴细胞数。使用流式细胞仪检测36例住院患者外周血淋巴细胞亚群、Th1/Th2及调节性T细胞。结果 HSP患者治疗后(恢复期)与治疗前(急性期)相比较,白细胞数、淋巴细胞数、CD3~+、CD4~+、CD19~+降低(P0.05),CD8~+、CD16~+CD56~+、Th1/Th2、CD4~+CD25~+升高(P0.05);HSP患者治疗前与对照组相比较,白细胞数、淋巴细胞数、CD3~+、CD4~+、CD19~+明显升高(P0.05),CD8~+、CD16~+CD56~+、Th1/Th2、CD4~+CD25~+降低(P0.05);HSP患者治疗后与对照组相比较,白细胞数、淋巴细胞数、CD19~+升高(P0.05);CD16~+降低(P0.05);CD3~+、CD4~+、CD8~+、Th1/Th2、CD4~+CD25~+无差异(P0.05)。结论以疏风清热、活血化瘀立法治疗HSP,能明显干预患者的外周血白细胞总数、淋巴细胞数、淋巴细胞亚群、Th1/Th2及调节性T细胞,对患者的免疫功能的调节作用明确,临床效果显著,极大地提高了临床诊疗能力。     

诱导扩增脐血单个核细胞为T/NK细胞的实验研究

目的　探索体外诱导脐血单个核细胞 (MNC)扩增分化为T/NK细胞的最佳培养体系。方法　脐血MNC在 6种培养体系中培养 4周 ,于各时间点用流式细胞仪测定细胞表面T/NK标志抗原的表达 ;测定有核细胞 (NC)数 ;并行细胞形态学鉴定及细胞毒功能实验。结果　脐血MNC在SCF +FLT 3L +IL 7+IL 15 +TNF α +IL 2体系中培养 ,第 2 2天NC数达 (2 0～ 2 6 )× 10 6/ml;淋巴细胞占NC的比例和CD3 + T细胞占淋巴细胞的比例均达到 90 %以上 ,以CD8+ T细胞亚群为主 ,CD4+ T细胞亚群比例下降 ;CD56+ CD3 + NKT细胞和TCRγδ+ 细胞的比例分别由不足 2 %升高到 30 %～ 4 0 %和 10 %～ 15 %。CD3 -CD56+ NK细胞无扩增。培养后细胞在效靶比为 5 0∶1时对K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤率分别达75 %以上和 32 %～ 6 5 %。结论　本实验中体外诱导脐血MNC扩增分化为T/NK细胞的最佳培养体系为SCF +FLT 3L +IL 7+IL 15 +TNF α+IL 2 ,最佳扩增时间是培养后第 2 2天。     

Interleukin 2 induction of pore-forming protein gene expression in human peripheral blood CD8+ T cells

Our studies have analyzed pore-forming protein (PFP) mRNA expression in resting and stimulated human peripheral blood CD3- large granular lymphocytes (LGL), CD3+ T cells, and their CD4+ or CD8+ subsets. Signals that stimulate T cells to develop cytotoxic activity (i.e., IL- 2 or OKT-3 mAb) led to the induction of PFP mRNA in T cells. The data indicated that IL-2 directly increased PFP mRNA in the CD8+ subset of T cells, in the absence of new DNA or protein synthesis. Abrogation of IL- 2-induced PFP mRNA expression and cytotoxic potential of T cells by the anti-p75 IL-2 receptor mAb suggested that low numbers of p75 IL-2 receptors on CD8+ T cells were capable of transducing signals responsible for these IL-2-induced effects. The induction of T cell PFP mRNA via CD3, using OKT-3 mAb, was less rapid but greater than that caused by IL-2; however, a combination of PMA and ionomycin, which bypasses crosslinking of the TCR/CD3 complex, could not mimic this increase in PFP mRNA levels in T cells. The role of second messenger systems in regulating PFP mRNA expression remains to be determined. In contrast, high constitutive PFP mRNA expression was observed in CD3- LGL and these mRNA levels could not be enhanced by stimulation with IL- 2. The cytotoxic potential of peripheral blood T cells and LGL induced in response to IL-2 correlated with IL-2-induced PFP mRNA levels in these cells and was consistent with PFP being one of several important molecules involved in the effector function of cytotoxic lymphocytes.     

原发性肝癌中高尔基体蛋白73表达与淋巴细胞亚群的相关性

目的:探讨原发性肝癌患者高尔基体蛋白73(GP73)的表达与外周血淋巴细胞亚群的相关性及其可能的临床意义.方法:收集2018年6月～2020年7月确诊为原发性肝癌患者129例及健康对照者36例,检测外周血血清GP73的表达量并根据临界值将原发性肝癌患者划分为阳性组和阴性组;流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群百分数.采用S...     

IL-2/IL-15刺激后脐血NK细胞穿孔蛋白表达及其与细胞毒活性的关系

本研究旨在探讨脐血NK细胞的穿孔蛋白表达水平以及IL-2、IL-15作用下穿孔蛋白表达与NK细胞细胞毒活性的关系。采用CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法纯化脐血NK细胞,流式细胞术测定NK细胞纯度,通过IL-2、IL-2+IL-15两种细胞因子培养体系培养3天,流式细胞术测定培养前后穿孔蛋白表达水平;LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562的细胞毒活性(效靶比10∶1)。结果表明,纯化后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%。,以K562为靶细胞,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2+IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,新鲜纯化CB-NK穿孔蛋白表达率为(67.21±6.14)%,IL-2组CB-NK细胞穿孔蛋白表达率(84.55±3.8)%,IL2-+IL-15组CB-NK细胞穿孔蛋白表达率(87.22±2.2)%。穿孔蛋白表达率与NK细胞毒活性呈正相关(r=88.6,p<0.05)。IL-2组穿孔蛋白表达率与新鲜组差别有统计学意义,IL-2组与IL-2+IL-15组穿孔蛋白表达率差别无统计学意义。结论:促进穿孔蛋白表达是IL-2提高脐血NK细胞细胞毒活性的途径之一。     

Rapid method for purification of CD56+ natural killer cells with preferential enrichment of the CD56bright+ subset

A rapid method for the purification of CD56⁺ natural killer (NK) cells with the preferential enrichment of the CD56^bright+ subset is described. The method is based on the adsorption of CD56⁺ cells indirectly stained with a biotinylated antibody on an avidin-coated column. The adsorbed CD56⁺ cells can then be squeezed out mechanically without damaging the viability or the function of the cells. Starting from peripheral mononuclear cells from adult donors, the recovery of the CD56⁺ cells was 11.9 ± 9.0% (n = 8), the purity 93.0 ± 4.9% (n = 10), and the enrichment factor 7.5 ± 1.7 (n = 8). Further phenotypic classification of the CD56⁺ cells into CD56^dim+ and CD56^bright+ cells showed a preferential enrichment of the CD56^bright+ phenotype with a recovery of 40.5 ± 19.6% (n = 8), a purity of 30.3 ± 13.2% (n = 8), and an enrichment factor of 29.8 ± 7.2 (n = 8). In conclusion, the described method allows the rapid purification of CD56⁺ NK cells with the preferential enrichment of the CD56^bright+ subset. © 1994 Wiley-Liss, Inc.     

CD39+CD73+B细胞亚群在原发性胆汁性胆管炎患者中的变化及其临床价值分析

目的:分析原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者外周血CD39^+CD73^+B细胞亚群在B细胞中所占比例的变化,及其与PBC的临床指标间的关系。方法:收集江苏苏州吴江区和常熟地区PBC患者60例,健康人对照者40例,以流式细胞术分析所有研究对象外周血CD39^+CD73^+B细胞在B细胞中的比例,多重微珠流式荧光法定量分析PBC患者抗线粒体抗体M2(AMA-M2)水平,全自动生化分析仪检测肝功能各项指标。统计分析CD39^+CD73^+B细胞比例的组间差异及其与自身抗体和肝脏酶指标之间的关系。结果:PBC患者CD39^+CD73^+B细胞的比例较对照组显著降低[55.6%(44.9%,60.5%)vs 73.0%(69.8%,74.9%),P<0.001]。PBC组CD39^+CD73^+B细胞比例与AMA-M2呈明显的负相关关系(r=-0.349,P=0.027)。抗糖蛋白210抗体(anti-GP210)阳性患者CD39^+CD73^+B细胞比例较anti-GP210阴性患者明显降低[44.6%(38.2%,49.9%)vs 58.7%(49.8%,63.8%),P<0.001],抗核蛋体100抗体(anti-SP100)阳性和阴性患者间CD39^+CD73^+B细胞比例差异无统计学意义[58.6%(47.9%,62.7%)vs 51.6%(44.7%,60.4%),P=0.292]。结论:PBC患者外周血CD39^+CD73^+B细胞比例显著降低,且与特异性自身抗体存在显著相关性,提示该群B细胞在PBC发病过程中可能发挥重要作用。     

自体外周血单个核细胞制备CIK细胞治疗恶性实体肿瘤应用价值研究

目的探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)应用于恶性实体瘤过继性免疫治疗的有效性。方法选取恶性实体瘤患者100名,粒细胞动员后,单采PMBC并计数,分析相关因素;流式检测CIK细胞中NKG2D受体率及CIK细胞治疗前后外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+、CD3+CD56+百分率;采用LDH释放法检测PMBC及CIK细胞的杀伤活性;利用Kaplan-Meier生存曲线对比分析CIK治疗组与非治疗组的生存期差异。结果 PMBC数与采血前外周血象的WBC及MNC总数相呈正相关,相关系数r分别为0.62、0.72(P<0.05),而与采集时间及血液流速无关。对照组、实验组各组CIK的杀伤活性与PMBC杀伤活性呈正相关(r分别为0.523、0.627,P<0.05)。培养前、培养至d 7、培养至d 14时CIK细胞杀伤活性都与NKG2D受体表达率成正相关r,分别为0.413、0.5460、.657(P<0.01)。CIK回输治疗前、后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+、CD3+CD56数量分别为38.66±8.34及62.15±12.36(P<0.05)、30.16±10.26及38.15±9.46(P<0.05)、37.42±11.12及25.74±10.35(P<0.05)1、.15±0.12及1.89±0.12(P>0.05)、17.63±4.25及25.89±8.96(P<0.05)、0.93±0.31及5.67±1.84(P<0.05)。对照组及CIK治疗组的3年生存率平均为86.5%及79%(P<0.05)。结论实体瘤患者的自体PMBC可以用于CIK细胞的制备及治疗。     

重型再生障碍性贫血患者骨髓Ⅰ型树突细胞亚群的变化

目的　测定重型再生障碍性贫血 (SAA)患者在免疫抑制治疗前、后骨髓中Ⅰ型树突细胞(DC1)亚群 (CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞 )的改变 ,评价CD11c CD83 细胞与Th1细胞、CD3 CD8 细胞及造血功能的相关性 ,探讨DC1在SAA发病机制中的作用。方法　以正常人为对照 ,用单克隆抗体及流式细胞仪检测发病期和恢复期SAA患者骨髓中Th1细胞、CD3 CD8 细胞、CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞百分率及CD11c CD83 细胞 /CD11c CD1a 细胞比值的改变 ;评价CD11c CD83 细胞与Th1细胞、CD3 CD8 细胞及网织红细胞绝对值、中性粒细胞绝对值(ANC)的相关性。结果　正常人骨髓中Th1细胞、CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞百分率及CD11c CD83 细胞 /CD1a CD11c 细胞比值分别为 (0 .4 2± 0 .30 ) %、(0 .38± 0 .2 9) %、(0 .37±0 .32 ) %、1.0 7± 0 .10 ,SAA患者发病期为 (4.87± 0 .5 4 ) %、(1.73± 0 .2 4 ) %、(3.38± 0 .5 6 ) %、2 .2 1±0 .32 ,SAA患者恢复期为 (0 .5 3± 0 .2 2 ) %、(0 .6 1± 0 .2 3) %、(0 .6 5± 0 .2 2 ) %、1.37± 0 .2 5 ;SAA患者发病期Th1细胞、CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞百分率及CD11c CD83 细胞 /CD11c CD1a 细胞比值均显著高于正常对照     

人胎血T淋巴细胞和NK细胞的免疫学表达特性

目的探讨人胎儿血T淋巴细胞和NK细胞的免疫学表达特性及其意义。方法用流式细胞仪检测20例胎儿血T淋巴细胞以及NK细胞免疫学标志,包括CD3＋、CIM＋CD28＋、CD4＋CD25＋、CIM5RO＋、CD45RA＋、CD4-CD8-、CD4＋CD8＋、CD4＋或CD8＋细胞的比例以及CD3-CD16＋CD56＋细胞的比例。结果20例胎血中CD3＋细胞百分率平均为（45．43±20．20）％,显著低于文献报道的脐血及正常外周血CD3＋细胞百分率。CD45RO＋细胞百分率为（2．47±2．62）％,显著低于CIM5RA＋细胞的百分率（39．41±19．37）％。胎血CD4＋CD25＋细胞的百分率为（0．764±0．73）％。20例胎血NK细胞标记CD3-CD16＋CD56＋表达为（15．69±9．92）％。胎血NK细胞比例与胎血的孕周龄之间存在负相关（r=-0．446,P=0．049）。结论人胎儿血的T淋巴细胞分化不成熟,较多的保持在初始阶段,且胎血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率较低,有可能对减少移植后移植物抗宿主病（GVHD）的发生有益。随孕龄的增长人胎血NK细胞比例有下降趋势。