乙型肝炎患者血清HBV cccDNA检测的临床意义

目的观察乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA,cccD-NA）在血清中的分布特点及与HBV感染状态的联系,探讨HBV cccDNA与患者病情的轻重、HBV的复制指标（HBeAg、HBV DNA）的关系。方法分别采用PCR荧光分子信标、荧光定量PCR、酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测162例乙型肝炎患者外周血清中HBV cccDNA定量、HBV DNA定量和乙型肝炎病毒标志物。结果162例乙型肝炎患者,血清HBV cccDNA阳性率为48.15%（78/62）。HBV cccDNA阳性率在HBV DNA阳性患者中为60.94%（78/128）,显著高于HBV DNA阴性者[0（0/34）]（P〈0.01）;HBeAg阳性患者HBV cccDNA检出率为61.70%（58/94）,显著高于HBeAg阴性者29.04%（20/68）（P〈0.01）;中、重度慢性乙肝患者HBV cccDNA检出率为58.97%,高于轻度慢性乙型肝炎患者（45.45%）（P〈0.05）。重型肝炎患者HBV cccDNA阳性者存活率（37.5%）明显低于HBV cccDNA阴性者（78.26%）（P〈0.05）。结论HBV cccDNA仅存在于血清HBV DNA阳性乙型肝炎患者外周血清中;HBV cccDNA检出率与外周血HBV复制指标（HBeAg、HBV DNA）有显著的相关性,并与肝细胞炎症相关,是乙型肝炎病毒在患者体内大量复制及肝细胞损伤的血清标志。     

肝组织HBV cccDNA与HBV复制水平的相关性分析

目的 探讨乙肝患者肝组织中乙型肝炎病毒（HBV ） cccDNA与血清 HBV DNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）含量的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测乙肝患者肝组织 HBV cccDNA和血清HBV DNA ,采用化学发光法检测其血清中 HBeAg。结果 肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（ r ＝0．806,P ＜0．01）,与血清 HBeAg定量值无相关关系（ r ＝0．219,P ＞0．05）。结论 血清HBeAg阳性组病毒复制较阴性组活跃,HBV DNA阴性不能完全反映肝组织内 HBV是否存在复制,而检测肝组织HBV cccDNA可精确反映肝内 HBV复制情况。     

乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA与HBV DNA、HBsAg和HBeAg定量关系的分析

目的定量检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）、HBV DNA、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）并分析其相互关系,探讨定量检测血清中HBV cccDNA的临床应用价值。方法随机选取HBV感染者83例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测血清中HBVcccDNA及HBV DNA,同时采用化学发光法定量检测血清中HBsAg和HBeAg。结果 83例患者中HBV DNA阳性62例,其中HBV DNA载量≥105拷贝/mL者40例,血清HBV cccDNA阳性28例（70.00%）;HBV DNA载量〈105拷贝/mL者22例,血清HBV cccDNA阳性2例（9.09%）,不同DNA载量组HBV cccDNA差异有统计学意义（P〈0.01）。HBeAg阳性组和阴性组HBV cccDNA阳性率分别为70.00%（28/40）和4.65%（2/43）,两组差异有统计学意义（P〈0.01）。HBV cccDNA定量值与HBV DNA、HBsAg呈正相关（P〈0.01）。结论血清中HBV cccDNA水平可同时反应血清HBV DNA和HBsAg水平,血清HBV cccDNA含量可作为观察HBV复制情况和评价抗病毒疗效的相关血清指标。     

肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒感染者病毒复制标志物与肝组织病理改变的关系

目的 了解肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织病理改变特征,并分析血清HBeAg及HBV DNA定量与肝组织病理改变的关系.方法 选取肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒感染者244例,行肝穿刺病理检查、肝功能、血清HBV DNA及乙肝血清学标志物检测.结果 244例患者中病理诊断为肝硬化7例(2.9％,7/244),慢性乙型肝炎轻度143例(58.6％,143/244)、中度32例(13.1％,32/244)、重度9例(3.6％,9/244),病理无明显改变者53例(21.7％,53/244);炎症分级(G)≥2者48例(19.7％,48/244);纤维化分期(S)≥2者54例(22.1％,54/244).对HBV DNA阳性者,HBeAg阴性组肝脏病理炎症分级及纤维化分期均明显高于阳性组(P均＜0.05).HBV DNA低载量组患者肝纤维化分期高于高载量组,但两组间肝组织炎症分级差异无统计学意义.结论 多数肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒感染者有不同程度肝组织炎症和肝纤维化,HBeAg、HBV DNA与肝组织病理改变有密切关系.     

前S1抗原与HBV DNA及HBV血清标志物检测的相关性及临床意义

目的 探讨前S1抗原(PreS1)和乙型肝炎病毒(HBV)DNA及HBV血清标志物(HBV-M)之间的关系.方法 对585例慢性乙型肝炎患者采用时间分辨荧光免疫法检测HBV-M,ELISA法检测PreS1,PCR检测HBV DNA.结果 HBV DNA在HBeAg(+)模式中的阳性率为94.8%,高于在HBeAg(-)模式中的阳性率(52.3%),差异有统计学意义(P<0.01).PreS1在HBeAg(+)模式中的阳性率为87.9%,高于在HBeAg(-)模式中的阳性率(47.5%),差异有统计学意义(P<0.01).HBV DNA在HBeAg(+)模式中的阳性率高于PreS1在HBeAg(+)模式中的阳性率,差异有统计学意义(P<0.01),而两者在HBeAg(-)模式中的阳性率差异无统计学意义(P>0.05).585例标本中,HBV DNA总阳性率为69.1%,比PreS1的总阳性率(63.4%)高,差异有统计学意义(P<0.05).HBeAg与HBV DNA的一致性一般,PreS1与HBV DNA的一致性较好(P<0.05).结论 PreS1能较HBeAg更敏感地反映病毒复制,与HBV DNA有较高的符合率,在无条件开展HBV DNA检测的条件下可作为补充指标.     

HBV标志物与乙型肝炎研究新进展

本文对近年来国内外关于乙型肝炎病毒血清标志物及其在乙型肝炎的诊断、发病相制及预后中作用的研究作一综述。这些乙型肝炎病毒标志物主要有乙型肝炎表面抗原及其抗体、核心抗原及其抗体、e抗原及其抗体、HBV、DNA、乙型肝炎病毒前S1抗原及其抗体、前S2抗原及其抗体及乙肝病毒X抗原等。     

慢性HBV感染患者血清中HBV-DNA与HBsAg、HBeAg的关系

目的:定量检测慢性HBV感染患者血清中HBV-DNA与HBsAg、HBeAg,并寻找三者浓度之间的关系.方法:选取555例HBsAg阳性的慢性HBV感染患者血清标本,分别用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测HBV-DNA和微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测HBsAg、HBeAg.结果:555例患者中,有338例检测出HBV-DNA阳性.阳性率为60.9%(338/555);对HBV-DNA浓度取对数后分为三组:>6组、3～6组和<3组.三组之间HBsAg的浓度差异存在显著性(P<0.001),进一步两两比较发现>6组中位浓度低于3～6组(P<0.001),而3～6组和<3组之间差异无显著性(P=0.505);三组之间HBeAg差异有显著性(P<0.001),进一步进行两两比较,发现>6组高于3～6组(P<0.001),而3～6组高于<3组(P<0.001).在HBV-DNA阳性组,对HBV-DNA浓度的对数与HBeAg进行相关分析,两者相关系数为0.463,而与HBsAg浓度呈负相关,相关系数为-0.180.结论:随着HBV-DNA拷贝数的增加,HBsAg量呈下降趋势,而HBeAg浓度呈上升趋势.且均存在相关性.     

HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布及其与抗病毒治疗疗效的关系

目的探讨绍兴地区拉米夫定治疗乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布及其与抗病毒治疗疗效的关系。方法对122例HBeAg阳性CHB患者进行基因分型,分析接受拉米夫定抗病毒治疗1年后HBV基因型与HBVDNA、HBeAg、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及HBVP基因变异的关系。结果122例CHB患者中,B基因型34例(27.87%),C基因型82例(67.21%),D基因型3例(2.45%),C/D混合基因型1例(0.82%),B/C混合基因型2例(1.64%)。B基因型感染者的HBVDNA转阴率、HBeAg转阴率显著高于C基因型感染者(P均0.01),HBVDNA水平显著低于C基因型感染者(P0.05),ALT复常率高于C基因型感染者,但差异无统计学意义(P0.05)。B基因型感染者中临床表现以CHB轻度为主(44.12%),C基因型感染者临床表现以肝硬化失代偿期为主(30.49%)。B基因型感染者发生基因变异0例,C基因型感染者发生变异4例,两者差异无统计学意义(P0.05)。结论绍兴地区HBeAg阳性CHB患者HBV以C基因型为主,感染B型HBV的患者较感染C型HBV的患者对抗病毒治疗的应答为好,且临床表现较轻。     

乙型肝炎血清学标志物与HBV-DNA定量及肝功能指标相关性研究

目的探讨乙型肝炎不同血清学标志物（HBV-M）模式下HBV-DNA定量与肝功能的关系。方法对304例乙肝患者血清用ELISA法作HBV-M测定,用荧光定量PCR（FQ-PCR）法测定HBV-DNA含量,全自动生化仪进行肝功能指标总胆红素（TBil）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ谷氨酰基转移酶（γ-GT）及谷草转氨酶线粒体同工酶（ASTm）测定,并作统计学分析。结果 HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）（大三阳组）HBV-DNA定量显著高于HBsAg（＋）HBeAg（-）HBcAb（＋）（小三阳组）（t=6.47,P〈0.05）和HBsAg（＋）HBcAb（＋）组（简称＂1,5组＂）（t=2.25,P〈0.05）,后两者间差异无统计学意义（t=1.21,P〉0.05）;大三阳组的HBV-DNA阳性率为90.8%（108/119）明显高于小三阳组的32.4%（52/150）及1,5组的34.3%（12/35）（P〈0.05）。HBV-DNA定量与肝功能各指标的相关性分析表明,全部病例分析仅TBil与HBV-DNA水平无统计学相关性,但分组分析表明,大三阳组中TBil和γ-GT与HBV-DNA水平无统计学相关性,而小三阳组和1,5组TBil、ALT、AST、γ-GT和ASTm与其均存在一定的相关性。结论乙肝患者中,大三阳组与小三阳组、1,5组间HBV-DNA水平及阳性率存在显著性差异,此外,乙肝患者血清学不同的HBV-M下,HBV-DNA水平与肝功能指标TBil、ALT、AST、γ-GT和ASTm的相关性不尽相同。     

慢性乙型肝炎患者HBeAg与HBVDNA的关系及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者的HBV DNA表达水平与HBeAg的关系及其与肝细胞损害的关系。方法采用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测290份CHB患者血清中HBV DNA含量，同时采用ELISA法检测血清病毒标志物，肝功能检测用常规法，并对HBeAg阳性、阴性与HBV DNA含量及ALT水平进行分析。结果290例CHB患者中HBeAg阴性159例，占54．8％（159／290），HBeAg阳性131例，占45．2％（131／290）。HBV DNA〉10^5拷贝／ml的患者，HBeAg阴性组63例，占39．6％（63／159），HBeAg阳性组123例，占93、9％（123／131），HBeAg阴性组低于阳性组（x^2=91．97，P〈0．01）。159例HBeAg阴性CHB患者79例血清ALT〉80U／L，随着HBV DNA增高其所占例数也相应增高，ALT分布随HBV DNA含量不同而有显著性差异（x^2=22．95，P〈0．01），血清病毒载量与ALT水平戍正相关。131例HBeAg阳性CHB患者93例血清ALT〉80U／L，ALT分布随HBV DNA含量不同而无显著性差异（x^2=2．71，P〉0．05），血清病毒载量与ALT水平无关。结论HBeAg阳性与HBV DNA复制密切相关。19．5％HBeAg阴性CHB患者HBV DNA复制活跃，可能存在HBV的前c区变异。血清HBV DNA含量可作为判断HBeAg阴性CHB患者肝细胞损害程度的指标，血清HBV DNA水平愈高肝细胞损害往往愈重。血清HBV DNA含量不能反映HBeAg阳性CHB患者肝细胞损害的程度。临床上应重视HBeAg阴性而病毒复制活跃的CHB患者的随访和治疗。     

乙型肝炎患者血清中HBeAg与乙型肝炎病毒DNA关系的探讨

目的探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)定量之间的关系。方法用化学发光法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)法同时检测103例乙型肝炎患者血清HBeAg和HBVDNA水平,进行统计学分析。结果 103例乙型肝炎患者血清HBeAg和HBVDNA阳性率分别为40.78和61.17,差异具有统计学意义(χ2=7.473,P0.05);HBeAg和HBVDNA反映乙型肝炎病毒复制的敏感性差异有统计学意义(χ2=19.047,P0.05);经相关性分析,HBeAg和HBVDNA之间具有较好的相关性(r=0.738)。结论与HBeAg相比,HBVDNA能够更加敏感地反映乙型肝炎病毒的复制,但仍需二者有机结合、综合分析,以指导临床合理用药。     

HBsAg及HBV DNA定量检测在慢性乙型肝炎患者不同病程阶段中的应用价值

目的研究慢性乙型肝炎(简称乙肝)患者病程进展中HBsAg及HBV DNA定量水平变化及其相关性,比较其在慢性乙肝不同病程阶段的水平。方法收集2015年1月至2016年12月于该院就诊的302例慢性HBV感染患者血清,分为轻、中及重型慢性乙肝组。采用化学发光法定量检测HBsAg水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清HBV DNA水平。多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用Mann-Whitney U检验,采用Spearman检验进行数据间的相关性分析。结果轻、中、重型慢性乙肝组HBsAg定量水平中位数分别为2 583.96、6 998.34、3 669.91U/mL,3组比较差异有统计学意义(Z=15.50,P0.05);轻型慢性乙肝组与中型慢性乙肝组HBsAg定量水平比较,差异有统计学意义(Z=-3.89,P0.05);中型慢性乙肝组与重型慢性乙肝组HBsAg定量水平比较,差异有统计学意义(Z=-2.32,P0.05);轻型慢性乙肝组与重型慢性乙肝组HBsAg定量水平比较,差异无有统计学意义(Z=-1.22,P0.05)。轻、中、重型慢性乙肝组HBV DNA定量水平中位数分别为246 500、2 840 000、894 000log copy/mL,3组比较差异有统计学意义(Z=9.33,P0.05);轻型慢性乙肝组与中型慢性乙肝组HBV DNA定量水平比较,差异有统计学意义(Z=-2.96,P0.05);其他两两比较,HBV DNA定量水平差异无统计学意义(P0.05)。HBsAg与HBV DNA在轻型慢性乙肝组、中型慢性乙肝组、重型慢性乙肝组患者中均呈正相关(r=0.68、0.60、0.66,P0.05)。结论 HBsAg及HBV DNA在慢性HBV感染患者不同病程阶段均呈正相关,可作为预测慢性乙肝病程进展的血清学标志物。     

HBV标志物定量和标准化是临床检测的方向

HBV的抗病毒治疗目标是使HBeAg发生血清学转换和病毒复制的持续抑制.多项研究表明HBV的定量检测在决定治疗时机、减少治疗失败和监测耐药性方面发挥着重要作用.WHO建立了统一的标准品,以IU/ml(国内文献用U/ml)表示HBV DNA的含量.HBsAg和HBeAg在预测血清学转换中可能发挥着潜在作用.本文探讨了HBV病毒学和血清学标志物的监测及其在临床中的应用前景.     

慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg与HBV-DNA的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg与乙肝病毒HBV-DNA之间的关系。方法选取655例HBsAg阳性的慢性乙型肝炎患者血清标本,用微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测HBeAg、HBsAg,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA。结果在HBeAg阳性标本中,HBV-DNA阳性率为64.64%;HBeAg阴性标本中,HBV-DNA阳性率为36.61%,二者差异有统计学意义(P0.01)。不同浓度组HBeAg和HBV-DNA检测结果比较,差异有统计学意义(P0.01)。不同载量HBV-DNA组,HBeAg差异有统计学意义(P0.01),且随HBV-DNA含量增加而增加;HBsAg差异也有统计学意义(P0.01),但随HBV-DNA含量增加而降低。结论同时检测HBV-DNA与HBeAg能更好地用于临床诊断与疗效观察,HBeAg随着HBV-DNA拷贝数的增加而增加,而HBsAg却呈下降趋势。     

慢性HBV感染者肝组织HBV cccDNA的定量检测

目的建立一种肝活检组织中HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）的定量检测方法。方法待检肝组织标本共21份，来源于江苏省人民医院肝脏手术患者，包括19份慢性HBV感染，其中HBeAg（＋）标本10份，HBeAg（-）标本9份，4份非HBV感染为阴性对照组，取HBVDNA阳性的患者外周血作为rcDNA组。检测方法的主要步骤为肝组织经蛋白酶K和细胞裂解缓冲液消化后，用液相抽提法提取核酸，将提取的核酸溶液分为2等份。1份用特异性降解单链DNA的核酸酶加以消化，纯化后使用跨缺口引物和SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时荧光定量PCR分析；另1等份则用以定量检测肝细胞看家基因（β-Globin）作为样本细胞参数。检测结果的特异性主要通过PCR反应产物的序列分析及rcDNA组结果的对照进行证实，HBeAg（＋）组和HBeAg（-）组cccDNA水平的差异通过两样本t检验进行分析。结果PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示扩增产物的碱基数为350bp左右，DNA测序分析提示产物与目的片段的序列符合率为99％以上，且以rcDNA为对照的结果均为阴性，排除最有可能造成假阳性的rcDNA对结果的干扰。本方法对10mg HBeAg（＋）肝组织标本的cccDNA的检测阳性率为100％。血清HBeAg（＋）的肝组织样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb（＋）的肝组织标本（P〈0．05）。结论通过上述三种途径证实了本文所建立方法的特异性。应用SYBR GreenⅠ荧光染料和β-Globin作为样本细胞参数所建立的实时荧光定量PCR方法检测肝细胞内HBV cccDNA，具有较高的特异性、敏感性，且成本较低的特点。     

乙型肝炎肝硬化的抗病毒治疗

据世界卫生组织（WHO）报道，全球60亿人口中约1／2的人生活在乙型肝炎病毒（HBV）高流行区。全球约有20亿人感染了HBV，其中6．9亿人在中国；全球有乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）携带者3．5亿人，其中1／3在中国；全世界每年有75万人死于HBV感染引起的疾病，其中28万人来自中国，其中25％～40％最终将死于肝硬化和肝癌。在全球前十位疾病死因中，慢性乙型肝炎（简称乙肝）占第7位，每年因慢性乙肝死亡者约为75万例。乙肝肝硬化患者发生肝细胞肝癌的五年累计危险度在亚洲为17％，在欧洲和北美为10％，五年肝病相关性死亡率在亚洲为14％，欧洲为15％。     

乙型肝炎病毒5项检测的临床意义

乙型肝炎（下称乙肝）5项由乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒e抗体（抗-HBe）、乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）组成,以下将按如上顺序直接给出结果,阴性（-）,阳性（＋）。     

慢性乙型肝炎HBV cccDNA的研究现状

HBV cccDNA一直是国内、外肝病界研究的热点,随着分子生物PCR技术的发展,对HBV cccDNA认识更加清晰。HBV cccDNA的产生是1个极其复杂的过程,合成受免疫细胞因子及其病毒包膜蛋白等一系列因素影响,对HBV cccDNA的形成尚未完全阐明。目前认为,它能够反映HBV抗病毒药物的应答情况,同时对抗病毒药物效果评价要优于其他指标,是衡量抗病毒疗效的主要指标,且能够评估慢性乙型肝炎预后。