蒙药对马拉色菌的抗真菌活性研究

目的:研究石榴的干燥种子等11种蒙药在体外对马拉色菌的抑制活性,并研究两种蒙药合用对马拉色菌临床株和标准株的抑制活性的变化。方法:用琼脂稀释法、琼脂柱法筛选出最佳抗糠秕马拉色菌的一种蒙药,然后用该种蒙药与其它蒙药按等比例混合后对5种马拉色菌的标准株和临床株进行药敏试验。分析筛选出的蒙药石榴种子在体外对糠秕马拉色菌存活率、脂肪酶活性、脂质利用活性、诱导人角质细胞系分泌部分细胞因子活性的影响、并在兔模型上观察了石榴种子治疗马拉色菌毛囊炎的临床疗效。结果:石榴种子的醇提液抑制糠秕马拉色菌的作用最强,其MIC为2.5mg/ml。石榴种子与其他蒙药联合对马拉色菌的抑制作用显著增强,MIC最低达到0.313mg/ml。石榴种子在体外能够抑制糠秕马拉色菌的存活率,并降低其脂肪酶活性,抑制其脂质代谢活性。石榴种子抑制了糠秕马拉色菌诱导人角质细胞系分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的活性。石榴种子外用治疗马拉色菌毛囊炎具有明显疗效。结论:蒙药醇提液中以石榴种子的抑菌效果最佳,石榴种子对马拉色菌的抑制作用具有临床应用的前景。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌黏附的清除作用及对生物被膜形成的影响

目的:研究鱼腥草素钠(houttuyfonate sodium,SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)黏附的清除作用及对生物被膜(biofilm,BF)形成的影响。方法:用96孔板孔建立铜绿假单胞菌黏附生物被膜,MTT法检测膜内菌的代谢变化、评价药物对黏附菌的最小清除浓度(minimum eliminateing concentration,MEC)及最小抑膜浓度(sessile minimal inhibitoryconcentration,SMIC);菌落计数法观察药物对黏附、膜内菌量影响;扫描电镜观察药物对受试菌黏附作用及生物被膜的形态结构影响。结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MEC80为500 mg·L-1,MEC50为125 mg·L-1,对铜绿假单胞菌早期生物被膜和成熟生物被膜SMIC80均为500 mg·L-1,早期生物被膜、成熟生物被膜SMIC50分别为31.25,1.95 mg·L-1。250 mg·L-1药物浓度使载体上黏附的及初步生物被膜、成熟生物被膜内的活菌数明显减少,和对照组比较差异显著(P<0.05),扫描电镜观察黏附载体上的细菌明显减少,连续用药后,成熟生物被膜阶段载体上未见有生物被膜结构,菌量明显减少并且细菌形态发生变异,由杆状变为球杆状。结论:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的黏附有较强的清除活性,通过连续给药能抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的清除作用

目的研究鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌早期生物被膜及成熟期生物被膜的清除作用。方法用96孔板建立体外铜绿假单胞菌生物被膜,给药24 h后MTT法检测生物被膜最低清除浓度(sessile minimal eradicating concentration,SMEC),扫描电镜下观察药物对生物膜形态影响。结果鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的SMEC50,早期是15.6 mg/L,成熟期是250 mg/L,在早期生物被膜向成熟生物被膜发展过程中SMEC50均在250 mg/L,镜下观察250mg/L药物质量浓度能清除大部分的生物被膜,同时可使铜绿假单胞菌发生形态变异。结论鱼腥草素钠对早期及成熟期的生物被膜有一定的清除作用,对早期生物被膜的清除作用更强于成熟期生物被膜。     

鱼腥草与左氧氟沙星联合应用对生物被膜细菌的清除作用

目的探讨鱼腥草对细菌生物被膜的影响,观察鱼腥草与左氧氟沙星联合应用对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)生物被膜的作用.方法用试管二倍稀释法测定鱼腥草和左氧氟沙星的最低抑菌浓度;用平板培养法建立生物被膜细菌体外模型;用MTT活菌计数法测定存活细菌数;用扫描电镜观察药物对生物被膜的破坏及清除作用.结果铜绿假单胞菌培养7 d后可形成稳定的生物被膜.鱼腥草或左氧氟沙星单独作用,对生物被膜的形态及存活细菌数无明显改变.二者联合应用,能破坏生物被膜的结构,显著降低膜内存活细菌数.结论鱼腥草与左氧氟沙星联合运用对生物被膜细菌具有协同杀灭作用.     

中药复方黄聚凝胶对糠秕马拉色菌的敏感性检测研究

目的评价中药复方黄聚凝胶对糠秕马拉色菌的杀菌效果,为临床实际应用提供实验依据。方法采用美国临床实验室标准研究所制定的M27A2方案(CLSI M27 A2)的方法对中药复方黄聚凝胶进行体外抗糠秕马拉色菌敏感性检测。结果高浓度中药复方黄聚凝胶抗糠秕马拉色菌作用强(MIC0.78%),低浓度的作用中等(MIC3.13%),2组均优于对照组(MIC25%)。结论中药复方黄聚凝胶可以用于防治糠秕马拉色菌性疾病。     

大蒜提取液与环丙沙星杀菌活性的联合效应研究

目的:测定大蒜提取液与环丙沙星联合对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜的影响进行研究,探讨联合用药对生物被膜细菌杀菌活性的作用。方法:采用棋盘法设计,分为空白对照组、大蒜提取液组、环丙沙星组、大蒜和环丙沙星组。结果:1/16、1/4MIC的大蒜提取液单独作用并不能使BF活菌数减少,但是1/16、1/4MIC的大蒜提取液却可以增强1/4MIC、1/2MIC、1MIC的环丙沙星对BF细菌的抑制作用。结论:大蒜提取液与环丙沙星联用对PAO1、PAO-JP2生物被膜抗菌有增效作用。     

复方百肤青抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物被膜的作用

目的研究中药复方百肤青抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物被膜的作用。方法用白念珠菌(C.albicans)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)混合菌液,体外建立白念珠菌混合菌生物被膜(biofilm,BF),采用XTT减低法及形态学观察白念珠菌混合菌生物被膜的形成过程;形态学观察及菌落计数法评价复方百肤青对白念珠菌混合菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC)。结果白念珠菌混合菌48h能形成成熟的生物被膜;250 g.L-1浓度的百肤青能抑制白念珠菌混合菌生物被膜的形成。结论中药复方百肤青由于其有抗生物被膜的作用,可用于预防外阴阴道念珠菌病的复发。     

尿感方体外抗菌活性的初步研究

目的初步探讨尿感方的体外抗菌活性,为该药的临床运用提供理论依据。方法①运用二倍稀释法测定尿感方对12菌株的最低杀菌浓度(MBC)及杀菌曲线。②尿感方作用大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)4,24h后,通过计数黏附在T24细胞上的细菌个数来检测其对细菌黏附力的影响。实验结果采用SPSS17.0统计软件包进行处理。结果①尿感方具有一定的体外抗菌效果,对部分临床菌株杀菌速度快于维沙欣。②与模型组比较,尿感方高剂量组可显著降低细菌的黏附能力(P<0.01)。结论尿感方具有体外抗菌、降低细菌黏附力作用。     

二味蒙药对糠秕马拉色菌的体外抑菌试验研究

目的:观察2味蒙药的水提物及醇提物对糠秕马拉色菌的体外抑菌效果,并观察大花葵水、醇提物对糠秕马拉色菌超微结构的改变;方法:分别制备2味蒙药的水、醇提物,采用LAN培养基,应用液态稀释法进行体外药敏试验的研究,并对经药物作用前后的糠秕马拉色菌进行光镜及扫描电镜的超微结构观察.结果:大花葵水、醇提物对糠秕马拉色菌的MIC值分别为:12.5g/L和25g/L;超微结构观察显示,经大花葵水、醇提物作用后的糠秕马拉色菌有较明显的结构改变.结论:通过本实验进一步明确了蒙药具有有效抑制糠秕马拉色菌的作用,并可深入研究发展,为临床用药提供了坚实的理论基础.     

香鳞毛蕨有效部位对糠秕马拉色菌的体外抗真菌作用研究

目的研究香鳞毛蕨Dryopteris Fragrans有效部位对糠秕马拉色菌的体外抗真菌作用,进一步明确香鳞毛蕨有效部位的抗菌谱。方法用纸片法、试管内药基法、微量液基稀释法测定香鳞毛蕨有效部位对糠秕马拉色菌2株标准株和4株临床分离菌株的抑菌圈及最低抑菌质量浓度(MIC)。结果不同质量浓度香鳞毛蕨有效部位贮备液对糠秕马拉色菌标准菌株和临床分离菌株抑菌圈的大小分别为6.7~19.6mm、6.8~17.1mm;试管内药基法测定香鳞毛蕨有效部位对糠秕马拉色菌的MIC,对标准菌株MIC为10 mg生药/m L,对临床分离株MIC为5~10 mg生药/m L;微量液体稀释法测定香鳞毛蕨有效部位对糠秕马拉色菌的MIC,对标准菌株MIC为1.56~3.13 mg生药/m L,对临床分离株MIC为3.13 mg生药/m L。结论香鳞毛蕨有效部位对糠秕马拉色菌有抑菌作用。     

椪柑柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶基因的克隆、分析及表达

目的克隆中药橘核主要来源品种椪柑Citrus reticulata的柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶(limonoid-UDP-glucosyl transferase gene,LGT)基因,并进行生物信息学及表达分析为橘核有效成分合成及调控机制研究提供基础。方法克隆获得LGT序列,通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,构建LGT与相关物种LGT的系统进化树,利用RT-PCR分析橘皮、橘肉以及橘核中LGT基因表达量,并进行分析和比较。结果测序所得椪柑LGT序列全长为1 530 bp,具有1 509 bp的完整开放阅读框,编码502个氨基酸。并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测。基因表达分析结果发现椪柑LGT基因在橘核中表达量最低,其次为橘皮,表达量最高为橘肉。结论成功克隆、分析并表达了椪柑LGT基因,为橘核中柠檬苦素类物质合成及调控机制研究提供基础。     

不同比例甘草配伍祖师麻抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究

目的 观察不同比例甘草配伍祖师麻对大鼠佐剂性关节炎（AA）模型的治疗作用,筛选两者配伍比例,探讨其配伍意义。方法 采用足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型,将140只模型大鼠随机分成14组：模型组,雷公藤多苷片组,祖师麻低、中、高剂量组,甘草低、中、高剂量组,祖师麻-甘草（3：1）低、中、高剂量组,祖师麻-甘草（3：2）低、中、高剂量组,另取10只正常大鼠为对照组,给药组大鼠造模前2 d开始ig给药,连续给药31 d,观察各组大鼠体质量变化,计算足肿胀度、关节炎指数（AI）,采用ELISA法检测大鼠血清炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的水平,观察大鼠膝关节组织病理变化,通过免疫组化法测定大鼠膝关节滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、巨噬细胞游走抑制因子（MIF）的表达。结果 与模型组比较,祖师麻组、祖师麻甘草配伍组能够明显抑制AA大鼠体质量减轻的趋势,对抗AA大鼠足肿胀度及AI的增加,降低异常升高的血清TNF-α、IL-1β水平,改善关节病理组织变化,减少滑膜组织VEGF、MIF的表达,其中以祖师麻-甘草（3：2）配伍组效果最优。结论 祖师麻甘草配伍后,对AA大鼠各项指标改善作用显著,作用优于单用祖师麻,其最佳配伍比例为祖师麻-甘草（3：2）。调节血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1β及滑膜组织VEGF、MIF的表达,可能是祖师麻甘草配伍治疗类风湿性关节炎机制之一。     

夏天无HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究

目的建立夏天无HPLC指纹图谱及多指标成分测定方法,为夏天无药材质量标准提升提供科学依据。方法采用HPLC法,Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(三乙胺调pH 6.0)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;进样量10μL;检测波长280 nm;建立15批夏天无药材的指纹图谱,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)进行评价,聚类分析和主成分分析将15批药材分为2类,同时测定原阿片碱、黄藤素、荷包牡丹碱和延胡索乙素4种成分的含量。结果建立了夏天无药材的HPLC指纹图谱,共标定了10个共有峰;原阿片碱、黄藤素、荷包牡丹碱和延胡索乙素线性关系良好,r均大于0.999 9,平均回收率分别为97.12%、100.09%、98.53%、99.71%。结论 HPLC指纹图谱结合多指标成分测定可为夏天无药材质量评价提供参考。     

肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量测定

目的:建立肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量方法.方法:采用紫外分光光度法,以去氢二异丁香酚为对照品,测定波长275 nm.结果:去氢二异丁香酚质量浓度在1.5～9.0 mg·L-1与吸光度呈良好线性关系,r=0.999 8,平均回收率97.6％(n=6),RSD 1.2％.结论:建立的方法简便、快速、重复性好.     

内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对大肠杆菌抑菌机制的研究

目的研究分离自药用植物白毛蛇Humata tyermanni的内生真菌链格孢菌发酵产物醋酸乙酯提取物(B06e)对大肠杆菌的抑菌机制。方法采用倍比稀释法测定了B06e对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC);测定了B06e作用前后大肠杆菌培养液电导率、核酸和蛋白质的变化;结合流式细胞仪、扫描电子显微镜、凝胶阻滞实验、圆二色谱和荧光实时定量PCR的分析方法研究了B06e对大肠杆菌细胞膜结构、形态、DNA的影响。结果 B06e对大肠杆菌的MIC为25μg/m L,3×MIC处理组的电导率是对照组的1.01倍;3×MIC处理组的β-半乳糖苷酶活性是对照组的11.6倍;流式细胞仪分析表明3×MIC处理组被碘化丙啶(PI)染色的阳性细胞比是对照组的286.5倍;扫描电子显微镜结果显示,B06e处理后菌体表面变得粗糙,细胞膜大量塌陷;以上结果说明B06e能增大细胞膜的通透性,破坏细胞膜的完整性。凝胶阻滞、圆二色谱的结果表明,B06e能够以嵌插的方式与DNA结合,但不能降解DNA;实时定量PCR结果表明,经B06e处理后rec A和rec N基因的表达量分别是对照组的2.9和3.7倍,说明B06e能破坏DNA的结构,迫使大肠杆菌启动了SOS修复。结论 B06e通过破坏大肠杆菌细胞膜完整性和DNA的结构,使得细菌代谢紊乱,最终导致细菌丧失了生长繁殖的能力。     

瓜蒌皮药材的HPLC指纹图谱

目的：建立瓜蒌皮药材的 HPLC 指纹图谱。方法：采用 Agilent TC-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈-0.2%冰乙酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长 260 nm,流速 0.8 mL·min^-1,柱温 25℃,进样20 μL。结果：建立了瓜蒌皮药材的HPLC指纹图谱,方法学考察结果良好,确立了13个共有峰,其中5个共有峰得到确认,10批瓜蒌皮样品指纹图谱的相似度均>0.9。结论：该方法稳定性、重复性好,建立的指纹图谱可为瓜蒌皮的质量评价提供依据。     

基于毛蕊花糖苷含量分析陈皮和砂仁在熟地黄炮制中的影响性研究

[目的] 针对熟地黄的药性特点，深入研究熟地黄炮制过程中，陈皮与砂仁对其炮制过程中毛蕊花糖苷含量的影响，并建立超高压液相色谱-串联质谱（UPLC-MS）法检测熟地黄中毛蕊花糖苷含量的方法，并根据其含量变化，验证其炮制方法的科学性与合理性，为丰富熟地黄的炮制品种并建立其质量控制标准提供参考。[方法] 参考熟地黄在全国各省市《中药炮制规范》中的炮制方法，采用其中具有临床实用特色的方法，即：陈皮制熟地黄、砂仁制熟地黄（酒蒸法和拌制法），并以2015版《中华人民共和国药典》中熟地黄的质量标准为参照指标，采用UPLC-MS检测技术对其炮制过程中毛蕊花糖苷的含量变化进行研究，并结合性状评分，进行综合评价及统计学分析。[结果] 检测的线性范围为（1~1 000 ng/mL，r=1），其精密度、重复性、稳定性、准确度均较好（RSD<3%）。本实验中炮制后的熟地黄其毛蕊花糖苷的含量均超过药典标准，在炮制过程中当性状达到药典及传统标准时，其毛蕊花糖苷的含量能保持在较高水平，以陈皮制熟地黄后的毛蕊花糖苷含量最高，炮制过程中含量变化最显著。[结论] 陈皮制熟地黄可明显稳定和控制毛蕊花糖苷在熟地黄炮制过程中的下降趋势。这对通过相应的炮制方法，在有效保存熟地黄指标性成分的同时，扩大熟地黄临床使用范围有积极意义。同时UPLC-MS法由于操作简便、速度快、准确度高，可用于熟地黄炮制过程中毛蕊花糖苷含量的检测。     

酸碱药对甘草-马钱子配伍汤液沉积相态释放特性研究

目的 探讨甘草-马钱子配伍汤液沉积相态的释放行为,为甘草-马钱子配伍减毒提供科学参考。方法 建立沉积相态释放测定HPLC法,通过体外释放实验,追踪沉积相态在蒸馏水、人工胃液、人工肠液等不同介质中主成分的释放行为,并对其释放结果进行拟合研究分析。结果 甘草酸、马钱子碱以及士的宁在人工肠液中的释放量较大,且马钱子碱>甘草酸>士的宁。马钱子碱和甘草酸均与一级动力学模型拟合结果最佳,士的宁与Higuchi模型拟合结果最佳。结论 甘草-马钱子沉积相态主要毒效成分呈现出难溶性骨架材料缓释制剂的释放特性,毒(效)成分士的宁可能以沉积共聚体形式存在,在体释放呈缓释行为而减毒;同时,甘草酸的释放对减毒增效起到协同作用。     

苗药血人参提取物水凝胶的制备及促创面愈合体内外研究

目的 制备一种载苗药血人参Indigofera stachyodes提取物的聚乙烯醇（PVA）/木质素（Lig）/壳聚糖（CS）水凝胶并探究其促创面愈合机制。方法 在单因素考察的基础上,正交试验优选处方工艺并对其进行质量评价和体外生物评价,通过建立大鼠全层皮肤损伤模型,评价其促创愈合效果。结果 携载提取物的PVA/Lig/CS水凝胶的最优处方和制备工艺为PVA用量7.0 g、CS用量4.0 g、Lig用量0.5 g、冻融循环次数4次,每次冻结6 h。该凝胶具有多孔网状结构、良好的溶胀性、保湿性及一定的机械强度,同时具有良好的生物相容性、抑菌性以及有效抑制巨噬细胞细胞迁移,且抑制作用可能与时间呈正比。该水凝胶的体内药效学研究显示,其促创面愈合作用可能与减少创面组织炎性细胞浸润,促进巨噬细胞向M2型极化、增加毛血细管生成和纤维组织形成有关。结论 制备的载血人参提取物的PVA/Lig/CS水凝胶剂制备工艺简单、稳定可行、具有良好的缓释性能,且对全层皮肤损伤具较好的治疗效果。     

不同氮源对丹参和藏丹参毛状根有效成分积累的影响

目的氮素是中药材有效成分积累的重要影响元素,为探讨不同氮源对丹参Salviamiltiorrhiza和藏丹参Salvia castanea毛状根生长和活性成分积累的影响。方法分别采用硝酸铵、水解乳蛋白、蛋白胨、牛肉浸膏、酪蛋白和酵母提取物6种氮源处理对丹参和藏丹参毛状根的影响,分析毛状根生长及活性成分积累的变化。结果硝酸铵最有利于2种丹参毛状根的生长。水解乳蛋白能够显著促进丹酚酸类成分的积累,与硝酸铵对照相比,丹参迷迭香酸和丹酚酸B含量分别提高了2.94倍和3.27倍,藏丹参二者含量分别提高了13.74倍和2.01倍。酵母提取物对2种丹参毛状根二氢丹参酮Ι和隐丹参酮积累的促进效果最为显著,水解乳蛋白能显著促进丹参根中丹参酮IIA的积累,牛肉浸膏则对藏丹参中丹参酮IIA积累的促进作用最为显著。结论硝酸铵是2种丹参毛状根生长的最佳氮源,水解乳蛋白是丹酚酸积累的最佳氮源,不同氮源对4种丹参酮的影响不一致,丹参和藏丹参对不同氮源的响应也不一致。该研究不仅对丹参毛状根规模化培养及活性成分工业化生产具有一定指导意义,也对藏丹参资源的开发利用提供了借鉴作用。