miR-92a与其靶基因的研究进展

微RNA-92a(microRNA-92a, miR-92a)是在进化中高度保守的致病微RNA，属于微RNA-17-92基因簇成员，参与调控细胞增殖、凋亡及分化等生物学活动。最近研究发现，miR-92a表达紊乱与疾病发生相关，主要通过调控靶基因或靶蛋白发挥致病作用。目前与miR-92a相关的研究主要集中在恶性肿瘤领域，且已发现其高表达与癌细胞恶性及肿瘤对放化疗敏感性降低相关。miR-92a靶向靶基因或靶蛋白致病及其与放化疗的关系，是近年来的研究热点。基于此，该文将miR-92a靶向靶基因或靶蛋白致病及其对化学治疗影响的最新研究进行了综述，以期对临床疾病诊疗提供靶标。     

基于TCGA 数据库卵巢癌患者的miR-301b 表达量与生存状况生物信息学分析

目的 研究肿瘤基因图谱（the cancer genome atlas，TCGA）数据库中microRNA-301b（miR-301b）在478 例卵巢癌患者中的表达量与卵巢癌患者生存状况的关系。方法 对TCGA 数据库中478 例卵巢癌患者的miR-301b 表达量与生存状况进行分析，预测其靶基因及生物学活性。结果 miR-301b 高表达患者具有更长的生存时间, 是卵巢癌患者预后的保护因素（OS:P<0.001, DFS:P<0.05），综合3 个靶基因数据库的预测结果得到12 个靶基因，编码的蛋白多数与肿瘤的发生发展有关，其中靶基因TEA 结构域家族成员1（TEA domain family member 1，TEAD1） 与胞质多糖基化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4, CPEB4)的表达量与卵巢癌患者的预后相关（TEAD1:P<0.05，CPEB4:P<0.05）。结论 miR-301b 表达对卵巢癌患者的预后具有重要的意义，表现出抑癌因子的作用，对卵巢癌的预后评估和治疗具有重要的指导意义。     

肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及意义

目的 探讨肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及其意义.方法 将30例肾透明细胞癌手术患者的肾癌组织和癌旁正常组织标本按是否有淋巴结转移分为2组:A组15例为无淋巴结和(或)远处转移,B组15例为有淋巴结和(或)远处转移.提取各标本中的DNA,经甲基化处理后,用PCR的方法检测miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在2组肾癌组织和癌旁正常组织中的表达情况.结果 电泳结果显示,miRNA-34a和miR-34b/c基因成单一条带,其所处的位置及其在正常组织和癌组织中的甲基化情况符合前期的预计.miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态如下:A组肾癌组织中miR-34a 4例,占26.7％,miR-34b/c 15例,占100.0％,癌旁正常组织均为0;B组肾癌组织中miR-34a 13例,占86.7％,miR-34b/c15例,占100.0％,癌旁正常组织均为0.miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高;伴有淋巴结转移的肾癌组织中,miR-34a基因CpG岛甲基化明显高于无淋巴结转移的肾癌组织(86.7％比26.7％,P＜0.05).结论 miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高,提示其与肾透明细胞癌的发生与进展有关,尤其是miR-34a基因CpG岛高甲基化与肾透明细胞癌的转移可能存在密切联系,有望成为指导肾透明细胞癌诊断、治疗及判断预后的新靶点.     

MicroRNA-34家族的功能及应用研究进展

MicroRNA-34(miR-34)家族包括miR-34a、miR-34b、miR-34c,与人体正常发育及多个器官功能的维持密切相关。MiR-34的表达受抑癌基因p53和长链非编码RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs)的调控,其表达失衡会导致一系列疾病的发生发展。MiR-34与肿瘤发生发展密切相关,主要通过阻碍细胞周期、诱导细胞凋亡与自噬、抑制上皮-间充质转化、阻止细胞迁移与侵袭等机制,发挥抑癌作用。MiR-34在心脏保护中也发挥着重要作用。MiR-34功能的发挥主要涉及NF-κB、Notch等多个信号通路,基于miR-34表达的调控有利于部分疾病的控制和转归,是潜在的临床诊治靶标,具有广阔的临床应用前景。因此,本文就miR-34家族的功能及应用进展进行综述,以期为后续研究提供参考。     

结直肠黏膜上皮良恶性病变的CpG岛甲基化表型差异和病理机制初探

目的探究正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠腺癌(colorectal cancer,CRC)的Cp G岛甲基化表型(CIMP)差异及相关分子病理机制。方法随机选取中国人民解放军火箭军特色医学中心送检结直肠组织160例,按照组织病理改变分为正常黏膜组、低级别腺瘤组、高级别腺瘤组、CRC组,每组40例,采用甲基化实时荧光定量PCR(Methylight)法检测CIMP相关基因甲基化状态;使用高通量测序法("Next-generation"sequencing technology,NGS)检测CRC中62个肿瘤易感基因的突变负荷;利用真核表达载体技术过表达CRC细胞LOVO的甲基化转移酶3 A(DNMT3A),采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q PCR)及免疫组化技术检测DNMT3A、Cyclin D1、p16的基因及蛋白表达。结果正常黏膜组的CIMP-0占比为50%(20/40例),CIMP-L占比50%(20/40例),无CIMP-H;低级别腺瘤组中CIMP-0为32.5%(13/40例),CIMP-L为67.5%(27/40例),无CIMP-H;高级别腺瘤组中CIMP-0占12.5%(5/40例),CIMP-L占75%(30/40例),CIMP-H占12.5%(5/40例); CRC组中CIMP-0占5%(2/40例),CIMPL占77.5%(31/40例),CIMP-H占17.5%(7/40例)。CRC组中CIMP相关基因甲基化发生数量和肿瘤易感基因的突变数量呈正相关,线性回归方程R=0.130,P=0.022;过表达DNMT3A后,SW620细胞DNMT3A mRNA及蛋白表达量明显上升(P0.001),p16基因发生甲基化,p16基因mRNA及蛋白表达量下降(P0.05),Cyclin D1基因甲基化状态未发生变化,仍为非甲基化状态,但Cyclin D1基因及蛋白表达量上升(P0.001)。结论①启动子区Cp G岛甲基化是导致肿瘤发生的重要机制之一,其可能通过甲基化使肿瘤易感基因序列的稳定性下降,导致更易发生致癌突变。②DNA甲基转移酶3A过表达可引起肠癌细胞CIMP表型改变并继而导致相关基因的沉默或活化。     

MicroRNA-20a通过调节CKIP-1促进小鼠C3H/10T1/2成骨分化

目的:研究microRNA-20a(miR-20a)对小鼠C3H/10T1/2细胞成骨分化作用的影响及其调控机制。方法:对贴壁培养的小鼠C3H/10T1/2细胞成骨诱导不同时间,ALP染色及应用qRT-PCR验证其诱导结果,同时观察MiR-20a在诱导过程中表达变化;细胞转染MiR-20a mimics,CKIP-1 siRNA,在荧光显微镜下观察转染效果,应用qRT-PCR测定过表达及干扰效率;qRT-PCR检测过表达MiR-20a及干扰CKIP-1对细胞成骨分化的影响及过表达MiR-20a对CKIP-1基因表达的影响。结果:成骨标记基因ALP、OSX、OCN、BSP随小鼠C3H/10T1/2细胞诱导过程逐渐升高,且成骨诱导分化过程中MiR-20a表达上调。过表达MiR-20a促进C3H/10T1/2细胞成骨分化,成骨标记基因碱性磷酸酶(ALP)、RUNX2、OSX、0CN、BSP显著高于对照组,并且抑制CKIP-1的表达;干扰CKIP-1能促进细胞成骨标记基因表达。结论:MiR-20a可能通过下调骨形成负调节因子CKIP-1的表达促进C3H/10T1/2细胞成骨分化。     

MiR-17-92簇的研究进展

MiR-17-92是一个高度保守的基因簇,该基因簇主要有6个成员,包括miR-17,miR-18a,miR-19a,miR-20a,miR-19b-1和miR-92a。这些基因通过调控靶基因参与肿瘤的发生、发展,参与一些细胞的免疫反应,并在内分泌系统中发挥一定的作用。     

5-Aza-2’-CdR对K562细胞甲基化酶及miR-146a、miR-29b表达的影响

目的观察甲基化酶抑制剂5-Aza-2’-CdR作用后K562细胞中miR-146a及miR-29b的表达水平变化及DNMT1、DNMT3a、DNMT3b三种甲基化酶水平的改变。方法 MTT法检测5-Aza-2’-CdR作用于K562细胞时的IC50浓度。通过茎环引物法及荧光定量PCR的方法检测miRNAs以及甲基化酶的水平。结果 5-Aza-2’-CdR作用于K562细胞时的IC50浓度随药物作用的时间不同而异。药物作用后72h进行检测,凋亡细胞比例上升,miR-146a、miR-29b的水平较对照组升高,而DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的水平与对照组相比呈降低的趋势,DNMT3a在11μM 5-Aza-2’-CdR处理72h后虽表现出了升高的趋势,但差异无统计学意义。结论 5-Aza-2’-CdR能促进K562细胞的凋亡,5-Aza-2’-CdR作用后miR-146a、miR-29b表现出了上升的趋势而三种甲基化酶表达水平有所降低。     

miR-181b与肿瘤

microRNA(miRNA)是一类在转录后水平调控基因表达的单链非编码小分子RNA。miRNA能够调控机体多种生理和病理过程,如细胞增殖、分化、发育、凋亡、激素分泌和肿瘤形成等。在肿瘤中miR-181b与靶基因结合,作用相关信号通路,促进或抑制肿瘤生长,可作为判断某些肿瘤的生物标志物。对miR-181b与恶性肿瘤的发生、发展机制的研究具有重要意义,可为恶性肿瘤的诊断与治疗提供新的思路。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素受体基因甲基化及DNA甲基转移酶表达水平研究

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体(INSR)基因甲基化及DNA甲基转移酶(DNMT)表达水平。方法随机选择本院2014年5月至2016年6月收治的PCOS患者80例,根据是否合并胰岛素抵抗(IR),分为IR组及非胰岛素抵抗(NIR)组,比较两组患者体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA稳态模型指数(HOMA指数)、性激素水平,以及子宫内膜组织INSR基因甲基化水平和DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表达水平。结果 IR组BMI、WHR、FBG、FINS、HOMR指数均明显高于NIR组(P0.05)。两组均未检出INSR基因完全甲基化患者,但IR组部分甲基化检出率高于NIR组(P0.05)。DNMT1、DNMT3aH-score评分比较差异无统计学意义(P0.05),但IR组DNMT3b H-score评分明显高于NIR组(P0.05)。结论 POCS患者子宫内膜INSR基因部分甲基化检出率较高,POCS发病可能与DNA表观遗传学调控有关,合并IR的POCS患者子宫内膜DNMT3b表达水平较高,说明POCS属于表观遗传学疾病,且合并IR的POCS患者是子宫内膜癌的高发人群。     

miR-203在恶性肿瘤中的作用及其相关靶基因的研究进展

微小RNA是具有调控功能的非编码RNA,通过碱基互补配对的方式识别靶基因信使RNA(messenger RNA,mRNA)的3'-非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR),根据互补程度的不同降解靶mRNA或抑制靶mRNA翻译,在恶性肿瘤的发生、发展中发挥作用。miR-203在多种恶性肿瘤组织中异常表达,通过与下游靶基因结合调控恶性肿瘤的生长、分化及增殖。本文就miR-203在食管癌、结直肠癌、肺癌及其他恶性肿瘤中的作用及其相关靶基因的研究进展作一综述。     

乳腺癌BRCA1基因启动子区甲基化与蛋白表达及其与DNA甲基转移酶3a、3b的相关性分析

目的分析探讨乳腺癌BRCA1基因启动子区甲基化与蛋白表达及其与DNA甲基转移酶3a、3b的相关性。方法采取免疫组化法对27例乳腺纤维腺瘤以及198例散发性乳腺癌组织中的DNA甲基转移酶3a、3b蛋白的表达情况进行检测分析,对其中112例散发性乳腺癌组织中的BRCA1基因的启动子甲基化状态实施甲基化特异性PCR检测,同时收集各提供乳腺癌组织患者的相关临床资料。结果 198例散发性乳腺癌组织中有114例(57.6%)DNMMT3a蛋白阳性,有109例(55.1%)DNMMT3b蛋白阳性,乳腺癌组织中DNMMT3a蛋白的表达水平显著高于乳腺纤维腺瘤(P0.05),而DNMMT3b蛋白的表达水平比较则无显著差异(P0.05);BRCA1基因启动子区甲基化和DNMT3a表达呈正相关关系(r=0.223,P=0.019),而BRCA1蛋白表达水平和DNMT3a表达呈负相关关系(r=-0.169,P=0.019)。结论 DNA甲基转移酶3a、3b蛋白的高水平表达现象与乳腺癌细胞的发病过程有相关性,DNA甲基转移酶3a蛋白通过参与BRCA1基因启动子区甲基化,使BRCA1蛋白表达水平降低,抑癌功能降低,从而导致散发性乳腺癌的发病。     

miRNA-148a在膀胱癌组织中的表达及生物信息学分析

目的 探索miRNA-148a在膀胱癌发生发展中的作用。方法 收集35例膀胱癌组织和16例非癌组织,采用荧光定量PCR方法检测miRNA-148a的相对表达量,并分析其与临床特征的相关性; 采用生物信息学分析,预测miRNA-148a的靶基因和转录因子,构建TF-miRNA-148a-靶基因调控网络图,并对其靶基因进行GO富集和KEGG Pathway分析。结果 miRNA-148a在膀胱癌中的相对表达量(0.0008±0.0002)明显低于非癌组织(0.0021±0.0005)(t=2.46,P＜0.05),其相对表达量在不同性别、年龄、病理分级、临床分期、淋巴结转移组的差异无统计学意义(P＞0.05)。3个软件都预测到的miRNA-148a靶基因268个; 预测到miRNA-148a的转录因子60个,结合评分＞80的结合位点657个; 对268个靶基因进行GO富集分析,发现其靶基因主要涉及神经细胞分化、发育、增殖、mRNA合成,蛋白连接等众多的生物学过程(P＜0.001,相对于背景具有统计意义); KEGG Pathway分析发现268个靶基因参与p53,恶性肿瘤、前列腺癌、PI3K-AKT等信号通路(P＜0.05,相对于背景具有统计意义); 根据构建的TF-miRNA-148a-靶基因调控网络图,挖掘出可能调控miRNA-148a的转录因子有SP1,ESR1,AP1,MYC,BRCA1等; 可能受miRNA-148a调控的基因有IGF1,P27^kip1,NCOA1,PTEN,SERPINE1等。结论 miRNA-148a在膀胱癌中表达下调,可能参与膀胱癌的发生发展,生物信息学分析为后续研究提供一定的思路。     

K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2甲基化关系的研究

目的:探讨慢性髓系白血病(CML)急变细胞系K562细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)与造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因表达及其启动子2的甲基化状态的关系。方法:分析NCBI数据库中SHP-1基因启动子2启动子区序列。将携带DNMT1sh RNA的psi HIV-m U6-sh DNMT1和樱桃色荧光蛋白(mcherry FP)psi HIV-m U6-control的慢病毒干扰载体感染K562细胞系。应用甲基化特异的聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测K562细胞中SHP-1基因启动子2的甲基化状态,Western blot检测SHP-1、DNMT1蛋白的表达水平,SYBR Green荧光定量PCR检测SHP-1 m RNA的表达。结果:SHP-1基因启动子2在-353 bp-+182 bp区有22个Cp G岛,K562细胞中SHP-1基因启动子2异常高甲基化且SHP-1蛋白表达缺失。K562细胞转染psi HIV-m U6-sh DNM T1后DNM T1表达水平为0.48±0.06,较转染psi HIV-m U6-control组明显降低(1.33±0.19)(t=4.18,P=0.014)。K562细胞中SHP-1蛋白表达缺失,转染psi HIV-m U6-sh DNM T1后K562细胞SHP-1蛋白恢复表达,转染psi HIV-m U6-sh DNM T1的K562细胞中SHP-1 m RNA相对表达水平(14.23±3.83)较转染psi HIV-m U6-control组(1.031±0.156)高(P=0.004)。DNMT1基因沉默后SHP-1基因启动子2中Cp G岛去甲基化。结论:K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2的异常甲基化及沉默相关。     

急性B淋巴细胞白血病的差异microRNA综合调控网络的生物信息学分析北大核心CSCD

目的通过生物信息分析途径,从系统水平揭示参与急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）发病的分子机制,为研究提供新的思路。方法从公共数据库GEO中下载B—ALL的microRNA（miRNA）芯片数据,利用QlucoreOmicsExplorer3．0软件筛选差异表达miRNA,再分析得到差异miRNA与靶基因、长链非编码RNA和转录因子各自的调控数据,然后构建以差异miRNA为中心的综合调控网络。另外,功能富集分析有功能的靶基因。结果共筛选出15个差异miRNA,其中7个miRNA表达上调,8个miRNA表达下调。通过差异miRNA为中心的综合调控网络可知,hsa—miR．126和hsa—miR-486—3p调控大量的靶基因,其中hsa．miR-126的靶基因包括MYC基因。hsa—miR．29a、hsa．miR-130a和hsa—miR-181c调控大量的长链非编码RNA,包括XIST。hsa．miR-181a．2、hsa—miR．18ib-2和hsa．miR-663调控大量的转录因子,包括CDX2、YYl等。hsa—miR．126靶基因的通路分析显示富集到Wnt通路。结论通过生物信息学方法分析得出,hsa—miR-29a、hsa．miR-126和hsa—miR-181家族是B．ALL的核心差异miRNA,及其转录因子CDX2、长链非编码RNAXIST和靶基因MYC基因在B．ALL的发生发展中起重要作用,可能为潜在的治疗靶点。     

miR-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义

目的:探讨miR-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义。方法:选择10例非血液系统疾病患儿作为对照组,收集对照组骨髓细胞标本,另选择HL-60和K562白血病细胞株,采用荧光定量PCR检测对照组骨髓细胞、HL-60和K562细胞株的miR-34b相对表达量,并用甲基化特异性PCR检测各组miR-34b甲基化状态。用地西他滨处理HL-60和K562细胞株,用同样方法检测两种细胞株miR-34b相对表达量及甲基化状态。采用脂质体转染法将Has-miR-34b转染至K562细胞株,根据转染是否成功分为未转染组、阴性对照组和Has-miR-34b转染组,记录各组培养后不同时间细胞的增殖情况,并计算增殖抑制率。结果:对照组miR-34b相对表达量为(5.23±0.75),HL-60相对表达量为(0.05±0.01),K562相对表达量为(0.04±0.01),3组间比较差异具有统计学意义(F=44.812,P=0.000)。HL-60细胞株和K562细胞株分别在启动子区CpG岛存在甲基化状态,10例非血液系统疾病患儿骨髓细胞无甲基化现象。经过地西他滨处理后HL-60和K562细胞株miR-34b表达水平均显著增加(P0.05);加地西他滨前后白血病细胞株启动子区CpG岛均存在甲基化,但是加药后甲基化明显减弱,提示地西他滨对启动子区CpG岛甲基化具有抑制作用。培养48、72、96和120 h后Has-miR-34b转染组细胞增殖抑制率分别为24.8%、46.7%、33.6%和24.7%,细胞增殖率均显著低于未转染组和阴性对照组,组间比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:白血病细胞株miR-34b启动子区CpG岛甲基化使其表达水平显著降低,这也是miR-34b对细胞株增殖抑制作用降低的原因;miR-34b也有可能是一种抑癌基因参与调控白血病的发生、发展。     

微小RNA-25与临床疾病关系的研究进展

microRNA-25是miR-106b家族(miR-106b、miR-93和miR-25)中的一员,位于人染色体7q22.1的miR-106-25基因簇,在蛋白质编码基因MCM7初级转录本的第13个内含子区,目前研究证明miRNA-25异常表达对人类多种疾病的发生发展中起着至关重要的作用。本文就miRNA-25与临床疾病关系的国内外研究进展进行综述。     

DNA甲基转移酶在骨髓瘤细胞株中的表达异常及其意义

本研究旨在探索多发性骨髓瘤细胞株U266 DNA甲基转移酶(DNMT)活性、基因表达情况并分析其生物学意义。用ELISA方法检测U266细胞DNMT活性,用半定量RT-PCR技术分析DNMT 1、3a、3b mRNA在U266细胞中的表达,体外用不同浓度去甲基化化合物异硫氰酸苯己酯(phenyl hexyleisothiocyanate,PHI)处理U266细胞,分析DNMT活性变化及DNMT1、3a、3b在瘤细胞中的表达改变。结果表明,骨髓瘤细胞U266中DNMT总活性升高,DNMT1、3a、3b mRNA均高表达,不同浓度PHI处理U266细胞后,细胞增殖抑制,DNMT活性亦被显著抑制,DNMT1、DNMT3a以及DNMT3b mRNA表达下降并呈浓度依赖性。结论:DNMT活性及其表达增高是骨髓瘤细胞特征之一,当DNMT活性或mRNA表达抑制时瘤细胞发生凋亡,因此DNMT可作为骨髓瘤治疗的新靶点。     

上皮性卵巢癌患者microRNA-15a/b表达及其临床意义

目的检测上皮性卵巢癌(EOC)患者肿瘤组织以及血清microRNA-15a/b(miR-15a/b)表达水平,并探讨其临床意义。方法回顾性选取30例卵巢良性疾病或健康体检者(对照组)以及64例EOC患者,应用实时定量PCR检测肿瘤组织以及血清中miR-15a/b表达水平,同时评价两类样本中miR-15a/b表达相关性。受试者工作特征曲线(ROC)和Kaplan-Meier生存分析分别用于评价血清miR-15a/b表达的诊断价值及对预后的影响。结果 EOC患者血清以及组织miR-15a/b表达水平均低于对照组(P 0. 001和P 0. 01),且血清与组织中miR-15a/b表达呈显著正相关(r=0. 912,P 0. 001和r=0. 881,P 0. 001)。ROC分析显示血清miR-15a/b表达能够较好地区分EOC患者与对照组,曲线下面积分别为0. 805(95%CI:0. 718～0. 893)和0. 806(95%CI:0. 718～0. 894)。此外,miR-15a/b高、低表达组间患者的FIGO分期、肿瘤分化程度以及淋巴结转移等有显著差异(P 0. 05)。Kaplan-Meier生存分析发现miR-15a低表达患者的总体生存以及无病生存均短于miR-15a高表达患者(P=0. 005和0. 072)。结论 miR-15a/b表达下调是EOC患者常见的分子事件,且血清miR-15a可以作为非侵入性分子标志用于EOC的诊断及预后判断。     

MiR-133和MiR-294的功能研究进展

正MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码小RNA,研究表明miRNA参与了增殖、分化、凋亡、迁移等细胞进程,其对生物体的发育非常关键。其在干细胞的自我更新与分化;各种炎症以及各类肿瘤的发生和发展;表观遗传学层面的调控等方面都发挥着巨大的作用。本文主要介绍MiR-133家族,特别是MiR-133b在肌肉发育、肿瘤抑制等方面的功能和机制;miR-290