ITF2357体外对急性髓系白血病细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的 探讨新型组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂ITF2357对急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制及诱导分化和促凋亡作用及其机制.方法 以AML细胞系Kasumi-1细胞(AML1-ETO阳性)为模型,应用MTT比色法观察ITF2357对白血病细胞的增殖抑制作用,并与THPI细胞(AMLl-ETO阴性)进行比较;用流式细胞术分析细胞周期和分化抗原的表达;用Annexin V标记和流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot法检测AMLl-ETO及乙酰化组蛋白、caspase蛋白水平.结果 0.5 umol/L ITF2357即能明显抑制Kasumi-1细胞增殖,48 h半数抑制浓度(IC50)为0.1 Ixmol/L,然而对于AMLl-ETO阴性的THPl细胞系的起始抑制浓度为5.0 umoL/L;ITF2357诱导Kasumi-1细胞凋亡呈时间、剂量依赖性,ITF2357处理24 h早期凋亡细胞由(1.44±1.52)%增加至(24.51±5.79)%,48 h晚期凋亡细胞由(2.37±2.80)%增加至(63.66±1.56)%.0.25 μmol/L ITF2357即可诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CDl3及CDl5表达增加.并呈剂量和时间依赖性.经5.0μmoVL ITF2357作用后细胞阻滞于Go/G1期,Gn/G1期细胞由(39.69±6.56)%增加至(79.20±6.51)%,伴有S期细胞减少,由(60.12±3.29)%降低至(18.97±6.62)%.Western blot检测发现0.5斗moL/L ITF2357可降低AMLI-ETO蛋白水平,处理24 h开始减少,处理96 h后AMLl-ETO基本消失,并依赖于caspase途径.经ITF2357处理后,组蛋白H4及H3的乙酰化水平增加.结论 低剂量HDAC抑制剂ITF2357能有效抑制AML细胞的增殖,对于AMLl-ETO阳性AML细胞尤为有效,通过降解AMLl-ETO蛋白抑制Kasumi-1细胞增殖,使细胞阻滞于Go/G1期,诱导其发生凋亡及分化.     

急性髓系白血病CD33~+/CD34~+细胞表面核酸适配体的筛选及结构分析

目前,对急性白血病细胞表面特异性分子标记物所知甚少,因而白血病的诊断尚缺乏白血病细胞的特异性方法。为此,本研究采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cSELEX)技术,筛选与急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)M2型(AML-M2)患者CD33+/CD34+细胞结合的核酸适配体(aptamer),为寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物提供基础。首先,通过免疫磁珠方法分选出AML-M2患者骨髓CD33+/CD34+细胞并将其作为靶细胞,正常人CD33+/CD34+细胞为反筛选细胞,采用cSELEX技术,从单链DNA(single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库中筛选与AML-M2CD33+/CD34+细胞结合的适配体。随后,通过克隆和测序分析各适配体的结构。结果显示,经过13轮次的反复筛选,ssDNA文库的适配体与AML-M2患者CD33+/CD34+细胞的富集度从0.7%增加到52.9%,至第13轮时趋于稳定。对所获得的30个适配体序列分析表明,大多数适配体含有CCCCT、CTCTC和CTCAC保守序列中的一种。二级结构分析显示,30个适配体中含有3种不同类型的模拟二级结构。结论 :本研究成功筛选到AML-M2型白血病CD33+/CD34+细胞的适配体,这为进一步寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物以及AML-M2型白血病的分子诊断创造了基础。     

CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+细胞表达水平对急性髓系白血病预后的意义

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+细胞表达水平,并分析CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+表达水平与预后的相关性。方法:采用流式细胞术检测148例初诊AML患者骨髓单个核细胞中CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+表达水平,分析CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+细胞表达水平与完全缓解率、无病生存率和总体生存率相关性。结果:初诊AML患者骨髓细胞中CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+阳性细胞中位表达率为2.8%(0.01%-67%)。AML患者CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+高表达与NPM1野生型呈正相关(x~2=5.194,P=0.023),而与FLT3-ITD突变阳性无相关性(x~2=0.418,P0.05)。多变量回归分析显示,CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+高表达与较低的完全缓解率(P=0.035)、较差的无病生存(P0.001)、较短的总生存(P0.001)相关。结论:CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+表达率与AML患者治疗的反应及生存密切相关,在临床中可做为快速识别患者治疗失败的风险预后指标。     

急性髓系白血病细胞CD34+抗原表达及与预后的关系

为了检测初治急性髓系白血病（AML）细胞CD34^＋抗原的表达,并分析其与预后的关系,应用间接免疫荧光法检测了238例AML患者.结果表明：238例AML中CD34阳性表达者有92例,占38.7%.除M3无CD34阳性表达外,CD34^＋表达与FAB亚型M0、M1有关;CD34^＋组完全缓解率为32%,明显低于CD34^-纽的61%;除淋系抗原CD7在CD34^＋组表达明显增高外,其它淋系抗原表达在两组间无差异（P＜0.05）.结论：有CD34^＋表达的AML患者预后差、CR率低,检测CD34表达对判断AML疗效有一定价值.     

NVP-BEZ235抑制CD34~+CD38~-急性髓系白血病干细胞的增殖和集落形成

本研究旨在探讨PI3K/mTOR信号系统双靶点抑制剂———NVP-BEZ235对CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖、细胞周期和集落形成能力的影响。用流式细胞术检测急性髓系白血病KG1a细胞表面CD34和CD38的表达;应用台盼蓝染色细胞计数法检测不同浓度NVP-BEZ235对KG1a细胞增殖的影响,PI染色流式细胞术检测NVP-BEZ235对KG1a细胞周期的影响,持续用软琼脂集落形成实验检测不同浓度NVP-BEZ235对KG1a细胞集落形成细胞的影响。结果表明,急性髓系白血病KG1a细胞中CD34+CD38-占(98.02±0.72)%,NVP-BEZ235(0.125-1μmol/L)对KG1a细胞增殖抑制呈现时间和剂量依赖(P<0.05),其24和48 h的IC50值分别为0.597和0.102μmol/L。0.5μmol/L的NVP-BEZ235作用24 h后,G0/G1期KG1a细胞比例达(83.2±3.80)%,较对照组(43.47±9.60)%明显增高(P<0.05)。2500个细胞在NVP-BEZ235(0-1μmol/L)持续作用下14 d和21 d而形成的集落数分别由375.67±21.46、706.33±87.31降至0(P<0.05)。结论:NVP-BEZ235能抑制CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖和集落形成。     

CD34在成人急性髓系白血病中的表达及其意义

近年来．随着急性白血病免疫标记的进展，人们发现某些细胞分化抗原在急性髓系白血病（AML）细胞的表达存在较大的差异，其表达频率与临床化疗疗效、预后有一定的相关性。CD34抗原在正常骨髓白细胞中表达约为1％～4％．而在AML细胞上则有较高频率的表达。为探讨CD34抗原在AML细胞表达情况及临床意义，我们对71例成人AML患者骨髓细胞进行了CD34检测，同时分析CD34抗原表达与临床特征及疗效的关系。现将结果报告如下。     

细胞遗传学对CD34~+细胞亚群分析表明急性髓系白血病恶性转化发生在早期造血干细胞阶段

根据形态学、免疫分型、遗传学,急性髓系白血病(AML)是一种异质性的疾病。白血病细胞保留的分化能力是应用免疫表型对白血病原始细胞群进行分类以及鉴别不同亚群的基础。在造血细胞发育与分化的阶段中,迄今仍不清楚,急性髓系白血病恶性转化发生在哪一阶段。作者运用细胞遗传学技术和细胞分检技术对白血病发生过程中可能涉及到的具有免疫表型的多能干细胞进行分析。 作者对13例AML(11例原发的,2例继发的)患     

成人急性淋巴细胞白血病髓系抗原和CD34表达研究

分析成人急性淋巴细胞白血病的髓系原、ＣＤ３４表达的特点及与Ｐｈ染色体表达,预后的关系。方法采用间接免疫荧光法分析１０２例初治ＡＬＬ患的免疫表型。结论成人ＡＬＬ髓系抗原表达和ＦＡＢ分型有关,与治疗缓解率呈负相关;ＣＤ３４表达与ＡＬＬ亚型,细胞分化程度有关,和治疗缓解率无显关系。     

急性髓性白血病患者淋巴细胞中CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例与预后的相关性

目的探讨急性髓性白血病(AML)患者淋巴细胞中CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例与预后的相关性。方法选取AML患者157例(AML组),并将其按AML 5种亚型分为AML-M1、AML-M2、AML-M3、AML-M4和AML-M55个亚组,以41名体检健康者作为正常对照组。采用流式细胞术检测所有对象外周血CD39~+CD4~+CD25~+T细胞和~+CD4~+CD25~+T细胞占淋巴细胞的比例。分别根据CD39~+CD4~+CD25~+T细胞或CD4~+CD25~+T细胞占淋巴细胞的比例将AML患者分为低、中、高水平组。结果 AML组及各亚组CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例均明显高于正常对照组(P0.05)。AML组与正常对照组之间CD4~+CD25~+T细胞比例差异无统计学意义(P0.05),但AML-M1组明显低于正常对照组(P0.05)、AML-M2组明显高于正常对照组(P0.05)。CD39~+CD4~+CD25~+T细胞低水平组、中水平组和高水平组髓外浸润比例及骨髓原始细胞CD34、CD7阳性率依次升高,各组间差异有统计学意义(P0.05)。CD4~+CD25~+T细胞低水平组、中水平组和高水平组之间髓外浸润及CD34、CD7阳性率差异均无统计学意义(P0.05)。与CD39~+CD4~+CD25~+T细胞低水平组比较,中水平组和高水平组的下次治疗时间(TTT)较短(P0.05);而CD4~+CD25~+T细胞低水平组、中水平组和高水平组之间TTT差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例升高与AML预后较差有关。CD39或可作为AML疾病发展的标志物。     

灯盏花乙素对急性髓系白血病细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:探讨灯盏花乙素(SCU)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、周期与凋亡的影响及相关分子机制。方法:体外培养人AML HL-60细胞，分别以0、2、4、8、16、32、64μmol/L浓度的SCU处理HL-60细胞，采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。以4、8、16μmol/L浓度的SCU处理HL-60细胞，并设置阴性对照组(NC组)，采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡，Western blot法检测细胞周期、凋亡相关蛋白及JAK2/STAT3通路相关蛋白的表达。结果:SCU对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用，且增殖抑制作用呈浓度(r=0.958)、时间(r=0.971)依赖性。与NC组比较，SCU 4、8、16μmol/L组HL-60细胞G0/G1期比例、细胞凋亡率均显著升高，S期比例均显著降低(P <0.05); p21、p53、caspase-3、Bax蛋白相对表达量均显著升高，CDK2、cyclin E、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低(P <0.05),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著降低(P <0.05)，且上述...     

WT1高表达及CD34~+和Auer~+与急性髓细胞性白血病患者预后的关系

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓WT1表达水平的临床意义,了解CD34~+和Auer~+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测92例初诊AML(non-M3)患者骨髓WT1表达水平,分析初次诱导缓解率(CR1)与总生存率(OS)的关系。比较CD34~+和CD34~-以及Auer~+和Auer~-AM L患者在CR1和OS方面的区别。结果:初诊时WT1高表达的AML具有较低的CR1(P0.05)。CD34~+患者的CR1较CD34~-者低(P0.05),Auer~+的AML患者CR1较Auer~-AM L患者高(P0.05)。WT1高表达组的OS低于低表达组,具有显著性差异(P0.05)。CD34~+组的OS低于CD34~-组,且具有显著差异(P0.05),Auer~+组与Auer~-组的OS没有明显差异。结论:AML患者骨髓WT1高表达及CD34~+提示患者的预后不良,Auer小体阳性仅与CR1相关,而与OS无关。     

雷公藤红素对人急性髓系白血病原代细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察雷公藤红素对人类急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖和凋亡的影响.方法 初诊人AML细胞按雷公藤红素浓度分成5组,A组为阴性对照组,B～E组分别为雷公藤红素1,2,5,10μmol/L处理组,应用四甲基偶氮唑兰比色法及流式细胞术等方法检测雷公藤红素对细胞的生长增殖抑制作用及诱导凋亡作用.结果 作用不同时间后,B～E组增殖抑制率随雷公藤红素浓度的增加而增加,与A组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);C,D组增殖抑制率与B组比较差异有统计学意义(P＜0.01),与E组比较差异无统计学意义(P＞0.05);雷公藤红素抑制作用的最适浓度为2μmol/L;C～E组作用6,12,24 h时增殖抑制率比较差异无统计学意义(P＞0.05),与3h时比较差异均有统计意义(P＜0.01);B～E组作用于AML细胞6h后均能诱导AML细胞凋亡,D组细胞凋亡率最高;2 μmol/L雷公藤红素作用于AML细胞3,6,12,24 h,其细胞凋亡率随时间延长而逐渐增高.结论 雷公藤红素有明确抗AML细胞增殖的能力,其作用可能与诱导细胞凋亡有关.     

生存素与CD34在急性髓系白血病患者骨髓细胞中的表达

目的 探讨骨髓细胞中生存素(survivin)和白细胞分化抗原34(CD34)的表达与急性髓系白血病(AML)发生、发展的关系.方法 采用流式细胞术检测62例AML患者和31例非恶性血液病患者骨髓细胞中的survivin及CD34.结果 survivin+/CD34+双表达:AML组骨髓细胞的survivin+/CD34+双表达为(13.74±10.92)%,明显高于对照组(2.53±1.85)%(P<0.01),且治疗缓解组[(4.01±1.41)%]低于治疗未缓解组[(23.83±20.42)%](P<0.01).survivin+/CD34-表达:AML组骨髓细胞的survivin+/CD34-表达为(22.07±16.95)%,明显高于对照组[(12.29±8.80)%](P<0.05),且治疗缓解组[(14.32±7.53)%]低于治疗未缓解组[(29.83±26.37)%](P<0.05).结论 骨髓细胞中survivin表达的检测对血液疾病的转归具有提示的作用,且比CD34和白血病发生、发展的关系更加密切;对AML的治疗效果及预后有一定的评估价值.     

姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Western blot分别检测Bax、BCL-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果：姜黄素10、20和40μmol/L组培养24 h和48 h细胞增殖抑制率均高于对照组（姜黄素0μmol/L）,且细胞增殖抑制率呈浓度-时间依赖性（r=0.879,r=0.914）。姜黄素10、20和40μmol/L组G0/G1细胞比例和细胞凋亡率均高于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.856,r=0.782）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax和Caspase-3 mRNA表达高于对照组,而BCL-2 mRNA表达低于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.861,r=0.748,r=-0.817）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax蛋白表达灰度值高于对照组,而BCL-2和Caspase-3蛋白表达灰度值低于对照组,且呈药物浓度依赖...     

雷帕霉素对慢性髓性白血病细胞增殖的抑制作用及其机制

目的 探讨雷帕霉素对慢性髓性白血病(CML)细胞增殖的抑制作用及可能机制.方法 用不同浓度雷帕霉素处理CML细胞系K562细胞,用MTT法检测雷帕霉素对K562细胞的增殖抑制率;Western blot法及RT-PCR法检测不同浓度雷帕霉素作用后的K562细胞中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白及mRNA表达水平,Western blot法检测CML慢性期患者骨髓原代细胞中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白及磷酸化水平,并以健康人骨髓细胞为对照;数据采用x2检验、Fisher确切概率计算、单因素方差分析(ANOVA)方法进行分析.结果 CML慢性期患者骨髓中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白磷酸化水平与正常对照相比明显增高(70.6％对30.0％,76.5％对40.0％,73.5％对20.0％,P值均＜0.05);20 nmol/L及更高浓度雷帕霉素对K562细胞增殖有明显抑制作用;雷帕霉素作用可降低K562细胞中mTOR磷酸化水平,及4E-BP1、p70S6K蛋白及mRNA表达水平(P值均＜0.05).结论 mTOR途径在CML的发病中发挥重要作用,其靶向抑制剂雷帕霉素可通过阻断mTOR途径抑制K562细胞增殖.     

肝素对人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨肝素对长春新碱诱导的人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法：肝素（5、25、50、100、200U／mL）处理K562细胞1h后，加入长春新碱（0．05μg／mL）24h，应用Trypan blue拒染法和MTT法检测不同浓度肝素对K562细胞增殖的影响，DNA琼脂糖凝胶电泳检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：肝素各组的细胞数量与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05），肝素各组的OD值与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05）；肝素在5～200U／mL的浓度时能够抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡及DNA凋亡梯带的形成。结论：不同浓度肝素对K562细胞无毒，无刺激或抑制作用，但可抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。     

急性髓系白血病WHO分型探讨

白血病是血液系统的恶性克隆性疾病，正确的诊断及分型对指导治疗和判断预后至关重要。1976年的FAB分型方案是以形态学及细胞化学为基础的诊断分型方法：八十年代中期，随着生物医学技术的发展，FAB分型标准又逐渐增加了白血病的MIC分型（Morphologic immunologic and cytogenetic working classification）指标，大大提高了诊断的准确性．     

长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病细胞增殖的机制研究

目的:探讨长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、K562、KG-1、HT-93增殖的作用原理。方法:HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞与长柱重楼皂苷共同培养24、48和72 h,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞株的凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白PARP,Caspase3,Mcl-1, BCL-2, BAX,P53,P27的表达变化,GAPDH为内参对照。结果:与对照组相比,长柱重楼皂苷可以抑制HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞的增殖,且呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性(r=0.9436;r=0.8623;r=0.9922;r=0.8918)。不同浓度的长柱重楼皂苷(4和8μg/ml)分别作用于HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞24 h后,与表达对照组比较,凋亡细胞的比例均明显增加。随着药物浓度的增加,PARP与Caspase3的剪切带也逐渐增加(r=0.9945;r=0.965),同时BCL-2家族的促凋亡蛋白BAX表达逐渐增加(r=0.9916),而抗凋亡蛋白MCL-1与BCL-2表达逐渐减少(r=0.9959;r=0.9927)。抑癌基因p53蛋白及其下游p27蛋白的表达也随着药物浓度的增加而逐渐升高(r=0.9959;r=0.9778)。结论:长柱重楼皂苷通过活化内源性凋亡通路有效抑制白血病细胞增殖,这为临床上治疗AML白血病提供潜在新药物选择。     

急性髓细胞性白血病细胞培养上清对CD4+和CD8+T细胞增殖和凋亡的影响

为了研究不同的急性髓细胞性白血病（AML）细胞株培养上清对CD4^＋和CD8^＋T细胞增殖以及凋亡的影响,探讨AML的免疫抑制的形成机制,将3种AML细胞株（HL-60、NB4和U937）培养上清和普通培养液按不同比例混合,用于培养CFSE染色的淋巴细胞.抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激3天后,标记7AAD和相应荧光抗体.利用流式细胞术检测不同T细胞亚群CFSE荧光强度和7AAD表达率的变化,分析其增殖和凋亡变化情况.结果表明：3种AML细胞株中有2种（HL-60和NB4）培养上清可显著抑制CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的增殖,并随浓度增加而增强.同样,HL-60和NB4细胞株培养上清亦可抑制刺激后的CD4^＋T细胞的凋亡,但对刺激后的CD8^＋T细胞的凋亡并无明显影响.相反,HL-60和NB4细胞株培养上清可显著增加增殖的CD8^＋T细胞的凋亡.结论：AML细胞株培养上清液对CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞增殖的抑制以及对增殖的CD8^＋T细胞凋亡的诱导作用,可能是AML患者免疫功能缺陷的机制之一.     

急性髓系白血病患者外周血CD34、Fas及P170的表达及其临床意义

为探讨急性髓系白血病（ＡＭＬ）凋亡通路与耐药机制的某些特征，我们用流式细胞仪同时检测了２２例ＡＭＬ患者外周血ＣＤ３４、Ｆａｓ及Ｐ１７０的表达情况，分析如下。病例和方法１病例２２例ＡＭＬ均为我院１９９７年３月～１９９８年５月住院的患者。男１２例，女１０例，年龄１９～５４岁。初治１７例，复治５例。完成２个疗程治疗的１８例患者中，有８例在第２疗程后再次检测了３项指标。外周血白细胞（１．７０±９．０６）×１０９／Ｌ；原始＋幼稚细胞０．２４５±０．２７９。用常规化疗方案治疗，２个疗程未达完全缓解（ＣＲ）者…