HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体MAIPA定量检测方法的建立

目的分别建立针对人类血小板抗原(HPA)-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的定量血小板(PLT)抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测(MAIPA)方法。方法采用MAIPA方法检测不同浓度的标准或参比HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗血清,优化实验条件,在检测范围内绘制线性曲线,并分别分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的MAIPA定量检测方法得到了优化,检测范围分别为0~4 IU、0~20 AU、0~20 AU,准确性(回收率)分别为96.20%~103.10%、97.90%~103.10%、100.20%~106.10%。批内精密度[变异系数(CV)]分别为1.3%~3.6%、2.7%~5.2%和4.7%~5.3%,批间精密度(CV)分别为4.0%~5.6%、4.4%~5.9%和3.2%~6.3%,检测人源抗体抗A、抗B、抗I、抗P均无明显阳性,具有良好的特异性。结论建立的针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体的MAIPA定量检测体系均具有较高的敏感度、特异度、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和PLT安全输注具有重要的应用价值。     

HPA-1a抗体MAIPA定量检测标准体系的建立

目的建立针对人类血小板抗原HPA-1a抗体的血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定定量检测(MAIPA)的标准体系。方法用MAIPA方法检测不同稀释度的标准HPA-1a抗血清,优化该方法的最佳实验条件,绘制线性标准曲线,并对该方法的敏感度、特异性、准确度和精密度进行了分析。结果经优化,确定MAIPA定量检测方法的最佳实验条件如下:铺板抗体羊抗鼠Ig G单抗:3μg/m L,血小板每孔2×107个,检测抗体小鼠抗人CD61单抗:20μg/m L,酶标羊抗人Ig G:稀释度1:10 000。该方法的线性检测范围是0-4 IU。该方法最低检测限至少为0.3 IU,批内变异系数为1.3%-3.6%,批间变异系数为4.0%-5.6%。特异性检测:用抗-A、抗-B、抗-H、抗-I、抗-P1、抗-Lewisa等试剂以及含其他抗体的抗血清进行试验,均无明显阳性。结论本研究建立的针对HPA-1a抗体的MAIPA定量检测的标准方法具有较高的敏感度、特异性、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和血小板安全输注具有重要的应用价值。     

抗HPA-3a抗体所致新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜一例并文献复习

目的 探讨抗血小板特异性抗原(HPA)-3a抗体所致新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)的诊断和治疗.方法 采用多重PCR及基因测序技术检测1例出血伴血小板减少新生儿及其父母HPA-1~21bw系统基因型,采用流式细胞术(FCM)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测患儿及其母亲血清血小板特异性抗体并进行特异性鉴定.结果 患儿出生后2 h出现全身多发皮下出血点、血尿及咖啡色呕吐物.基因分型显示患儿为HPA-3ab、母亲为HPA-3bb、父亲为HPA-3aa;患儿及母亲血清中均含与患儿父亲血小板反应的特异性抗体,经MAIPA技术鉴定为抗HPA-3a抗体.结论 发现1例抗HPA-3a抗体所致NAITP患者,通过临床特征分析为该病的诊断和治疗提供借鉴与参考.     

血小板特异性糖蛋白抗体在血小板输注无效患者中分布的研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者的血小板特异性糖蛋白抗体的表达及PTR与血小板特异性抗原的相关性。方法采用ELISA方法检测27名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体,应用PCR-SSP的方法检测其HPA-1～17基因分型。结果 27名PTR患者的HPA基因频率为HPA-1a(0.900),1b(0.100);HPA-2a(0.926),2b(0.074);HPA-3a(0.648),3b(0.352);HPA-4a(0.981),4b(0.019);HPA-5a(0.940),5b(0.060);HPA-6a(0.815),6b(0.185);HPA-7a～14a、16a、17a(1.000),7～14、16、17b(0.000);HPA-15a(0.463),15b(0.537);PTR患者的HPA抗原分布与健康献血者的基因频率无统计学差异(P>0.05)。血小板抗体阳性的27名PTR患者中,血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体阳性表达者占78%(21/27)、GPⅠa/Ⅱa抗体阳性占70%(19/27)。对3名PTR患者作血小板特异性抗原分析发现:患者产生的血小板特异性糖蛋白抗体与HPA基因型密切相关,以抗-HPA-3b、-5b为常见。结论多次输注血小板无效的患者,应选择与其HPA基因型一致的血小板供者,以提高血小板输注疗效,避免血液资源的浪费。     

国内首例抗HPA-5b引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的检测、诊断及分析

本研究旨在探讨抗HPA-5b抗体引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜（NAITP）的实验检测及临床诊断。临床监测患儿血小板计数及其他临床表现;多重PCR及DNA测序检测患儿及其父母HPA-1—21bw系统基因型;流式细胞术（FCM）和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术（MAIPA）检测及鉴定患儿及其母亲血清中的血小板特异性抗体。结果表明：患儿临床症状较轻,基因分析显示患儿为HPA-5ab,父亲为HPA-5ab,母亲为HPA-5aa;患儿母亲血清中含与父亲血小板反应的血小板特异性抗体为抗HPA-5b抗体。结论：该病例为抗HPA-5b抗体引起的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜。     

流式微球技术检测血小板特异性抗体

目的建立流式微球技术检测血小板特异性自身抗体方法,并对方法学及临床应用进行初步探讨。方法用包被抗血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb、Ⅱb、Ⅲa、Ⅱb/Ⅲa单克隆抗体的微球捕获与血小板GP结合的特异性抗体,加入FITC标记的羊抗人IgG抗体后用流式细胞仪检测分析。结果特发性血小板减少性紫癜(ITP)组4种单抗荧光强度比值与非ITP血小板减少组和正常对照组有显著性差异(P<0.01);若将ITP组患者4种单抗荧光强度比值分别大于正常对照组上限1.37、1.24、1.48和1.19判断为阳性,则流式微球技术检测血小板特异性自身抗体的敏感性为73.2%,特异性为94.3%;4种单抗联合检测总体敏感性明显高于改良间接单抗特异的血小板抗原固定试验(MAIPA)(P<0.05),且大于各单个抗体检测敏感性。结论流式微球技术可以简便、快捷地检测血小板膜糖蛋白特异性抗体,联合检测多种自身抗体可以提高检测阳性率,对于ITP的诊治具有一定的临床价值。     

流式微球技术检测糖蛋白Ⅱb/Ⅲ a自身抗体在特发性血小板减少性紫癜诊断中的应用

目的 建立流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)特异性自身抗体的方法,比较该方法和改良间接单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)与非免疫性血小板减少性紫癜鉴别诊断中的价值.方法 应用抗人血小板GPⅡb/Ⅲa单抗(CD41a)包被微球.分离血小板,将血小板裂解后与包被过的微球孵育,再加入PE标记的羊抗人IgG多克隆抗体,流式细胞术分析.分别用该方法和改良间接MAIPA检测血小板表面和血浆中的糖蛋白特异性自身抗体,并将检测结果进行比较.结果 将样本的平均荧光强度值(MFI)与正常对照MFI的均值比较,计算比率.该比率均值及范围在ITP组为3.36(0.84～22.94),非免疫性血小板减少组为1.16(0.67～5.59),正常对照组为1.08(0.72～1.76).非参数检验得ITP组荧光强度比率与非免疫性血小板减少组及正常对照组存在显著差异(P《0.01).若将正常对照组上限作为界值,比率大于1.76定为阳性,则流式微球技术诊断ITP的敏感性为71.43%,特异性为94.28%,阳性预测值为95.24%,其敏感性高于改良间接MAIPA的测定值(51.79%)(χx2=4.57，P<0.05)。由ROC曲线得流式微球法区分ITP患者与正常人的鉴别效度为0.916。结论 流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体，耗时短、重复性好，敏感性高于改良间接MAIPA，对提高ITP的实验诊断水平及指导临床治疗有一定的价值。     

重组设计的抗体用于HPA-1a定型

人类血小板抗原—1(HPA-1)同种抗原是由于GPⅢa上第33位氨基酸的替换而形成,。HPA-1a对于HPA-b纯合子,且DRB3*0101阳性的病人是强免疫原。1/365的妊娠可产生抗-HPA-1a抗体,1/1100的新生儿可产生严重的血小板减少症。用人类重组抗-HPA-1a单链抗体片断的V基因,作者研制了2个抗体分子(完全IgG1和双体物质),用于简单快速的检测HPA-1a表现型。异硫氰酸荧光素(FITC)标记的IgG1用于间接流式细胞仪试验,检测50份全血标本只需孵育20分钟,用中等强度荧光能清楚的鉴别HPA-1a阳性和阴性血小板。为检测血浆中溶解的HPA-1a,研究了一种简单的2步血凝试验,这种试验拥有抗-Dx和抗-HPA-1a双特异性物质。对1002份随机血浆标本进行检测,22个为HPA-1a阴性(2.2％)。这个基于双性物质的试验,最适合对供者或孕妇的筛选。同时流式细胞仪可用于紧急标本表现型的快速检测或用于确定血液成分的HPA-1a状态。     

应用流式细胞术检测原发免疫性血小板减少症患者血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表达及其临床意义

免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是一类由体液和细胞免疫异常导致血小板破坏增多的疾病[1-2]。发病机制与免疫功能异常引起的自身抗血小板抗体产生关系密切。血小板表面膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa是血小板及巨核细胞主要的膜糖蛋白,GPⅡb/Ⅲa抗体是ITP患者自身抗体的主要成分之一。目前测定血小板膜糖蛋白特异性抗体的方法主要有放射免疫微球法[3]、单克隆抗体俘获血小板抗原技术( MAIPA)[4],我们用流式细胞术(FCM)检测血小板减少患者及正常人血小板GPⅡb/ⅢRa的变化,探讨FCM检测血小板GPⅡb/Ⅲa在诊断免疫性血小板减少性紫癜中的意义。     

血小板特异性自身抗体检测在特发性血小板减少性紫癜中的意义

目的 检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者体内的血小板特异性自身抗体与临床严重程度和临床疗效间的关系. 方法 应用改良的单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)法检测血小板膜糖蛋白(GPⅡ bⅢa、GPIb)特异性自身抗体. 结果 ITP组(40例),10例为单一抗GPⅡ b Ⅲa抗体阳性.6例为单一抗GPIbα抗体阳性,20例为双抗体阳性,4例为双抗体阴性.非免疫性血小板减少组与正常对照组均为阴性.抗GPⅡbⅢa抗体(b=-0.071,P<0.01)、抗GPlbα抗体(b=-0.092,P<0.01)均与采血时血小板计数呈显著负相关.治疗后,双抗体阳性组8例治疗无效,单抗体阳性组(16例)1例治疗无效(χ2=6.09,P<0.05). 结论 血小板特异性自身抗体检测对鉴别特发性和非免疫性血小板减少症有一定价值.抗体种类与临床疗效有一定关系.     

血小板输注无效患者体内血小板反应性抗体特异性调查研究

目的探讨血小板输注无效患者体内血小板反应性抗体的发生频率及其特异性。方法对48名血小板输注无效患者,利用MACE法筛查其血清中的血小板反应性抗体,进一步用PAK12诊断试剂MAIPA法鉴定血小板HPA抗体特异性。结果血小板输注无效患者中血小板反应性抗体的总检出率为50%(24/48),其中同种HLA抗体发生率为39.6%(19/48),占所有抗体检出的79.2%,同种HPA抗体的检出率为29.2%(14/48),而其中有64.3%(9/14)是与HLA抗体同时存在。检出的HPA抗体特异性有抗-HPA-3a(n=2),-5a(n=1),-5b(n=1),-2b(n=1),-4b(n=1);同时HPA抗体中有78.6%(11/14)是针对GPⅡb/Ⅲa,Ⅰa/Ⅱa和/或Ⅰb/Ⅸ的多反应性抗体。女性患者中检出抗体的比例55.2%(16/29)高于男性患者42.1%(8/19),但差异没有显著性统计学意义。结论血小板输注无效患者中血小板同种抗体以HLA抗体多见,但HPA抗体并不像之前报道的罕见。与高加索人群PTR患者血小板同种反应性抗体以抗-HPA-5b,-1b为主不同,研究发现中国人群PTR患者HPA同种抗体以HPA-3,-5系统抗体多见,同时检出了HPA-4b,-2b抗体。     

采用双重凝集反应(diabody-based)或重组IgG1技术快速测定HPA-1a表型

背景 HPA系统携带β3整合素,HPA—1a(Zw(a),P1(A1))是HPA1b纯合子(HPA-1b1b)的免疫个体的免疫原。调查的365名妊娠妇女中,有1例形成抗-HPA-1a,该抗体引起严重的新生儿血小板减少的发病率为1/1000。需要建立可靠的、低成本的自动化检测方法,检测女性产生HPA-1a抗体的风险和筛查供者以获得HPA-1a阴性血小板。研究设计与方法针对第一个抗HPA-1a片段的基因密码,建立具有HPA-1a×D和IgG1抗HPA-1a双特异性的试验,采用这些试剂,检测两种互补的HPA-1a表型。结果运用简单的凝集反应技术检测EDTA抗凝血浆中可溶性糖蛋白Ⅱb/Ⅲa水平上的HPA-1a     

前瞻性评价单克隆抗体俘获血小板抗原技术对免疫性血小板减少症的诊断价值

目的 评价单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)对免疫性血小板减少症(ITP)的诊断价值,以及对免疫性和非免疫性血小板减少的鉴别诊断价值.方法 以来自14家医院的321例血小板减少患者为研究对象,男118例,女203例,应用改良MAIPA试验双盲法检测患者血小板膜糖蛋白特异性自身抗体(抗-GPⅡb/Ⅲa和抗-GP Ⅰ b/Ⅸ),客观评价该试验在ITP诊断中的敏感性和特异性,了解ITP患者血小板特异性抗体浓度与血小板数量的相关性以及地塞米松治疗后抗体浓度的变化.结果 抗-GPⅡb/Ⅲa、抗-GP Ⅰ b/Ⅸ、抗-GPⅡb/Ⅲa联合抗-GP Ⅰ b/Ⅸ诊断ITP的敏感性分别为39.75%、32.64%、55.23%,特异性分别为97.56%、93.94%、92.68%,阳性预测值分别为97.94%、93.98%、95.65%,阴性预测值分别为35.71%、32.35%、41.53%,总有效率分别为54.51%、48.29%、64.80%;ITP患者血小板特异性抗体阳性率显著高于非免疫性血小板减少患者;抗体阳性患者的血小板数量显著低于阴性患者,ITP患者血小板特异性抗体水平[吸光度(A)值]与血小板数量呈负相关;激素治疗有效的ITP患者抗-GPⅡb/Ⅲa或(和)抗-GP Ⅰ b/Ⅸ转阴或抗体水平降低.结论 MAIPA试验对ITP具有较高的诊断价值,对ITP患者的疗效也具有指导意义,可作为IFP和非免疫性血小板减少的鉴别诊断依据.     

北京地区HPA1-6,15基因库的建立与应用

目的:建立人血小板抗原(human platelet antigen,HPA)HPA1-6,15血小板供者库,为患者提供HPA相合的血小板。方法:采用序列特异性引物-聚合酶链反应(Sequence specific primer polymerase chain reaction,SSP-PCR)对血小板捐献者和53名血小板抗体筛查阳性患者HPA基因进行分型。分析37例血小板抗体阳性患者输注HPA配型相合血小板的输注效果。结果:血小板捐献者最常见的基因型为HPA-1a/1a-2a/2a-3a/3b-4a/4a-5a/5a-6a/6a-15a/15b,其次为HPA-1a/1a-2a/2a-3a/3a-4a/4a-5a/5a-6a/6a-15a/15b。53名血小板抗体筛查阳性患者最常见的基因型为HPA-1a/1a-2a/2a-3a/3b-4a/4a-5a/5a-6a/6a-15a/15b。37例血小板抗体阳性患者中输注HPA基因相合血小板28例有效,与随机输注比较差异有统计学意义。HPA-3,HPA-15是导致供者和患者基因组合呈多态性的主要因素。结论:HPA-3,HPA-15系统具有多态性,是HPA配合性输注的关注重点。HPA配合性输注可改善患者血小板输注效果,避免血液资源的浪费。现有血小板捐献者基因型基本上能满足患者常见基因型输注的需求。     

血小板输注无效患者血小板特异性糖蛋白抗体表达的实验研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者血小板特异性糖蛋白抗体的表达情况。方法采用ELISA方法检测56名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体、应用PCR方法检测其血小板特异性抗原(HPA)1-6,15基因分型。结果 56名PTR患者检出血小板特异性糖蛋白抗体,8例表达阳性(占14.3%),包括血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa阳性7例,GPⅠa/Ⅱa阳性1例、GPⅠb/Ⅰx阳性1例、GPⅣ阳性1例。结合8例患者的抗体检测反应格局和HPA抗原基因型结果分析抗体的特异性为:4例存在抗-HPA3b、3例存在抗-HPA3a、1例存在抗-HPA5b。结论反复输血的血小板输注无效患者,应选择HPA抗原相匹配的血小板供者,以改善血小板输注效果。     

应用重组抗-HPA-1a的一步全血HPA-1aELIST定型法

由HPA-1a引起的严重新生儿同种免疫性血小板减少症,需输注HPA-1a阴性的血小板来快速纠正血小板数。建立HPA-1a阴性的供者队伍需要简单可靠的HPA-1a定型方法。现在多数应用多克隆抗体技术,这种技术耗时,从而影响血小板分离。作者用抗-HPA-1a的重组IgG1研制了一种基于ELISA技术的定型试验,这种试验克服了过去的技术存在的问题。这个试验用孵育单克隆RFGP56可以从20ul的全血中检出GPⅡb/GPⅢa,连接辣根过氧化物酶(HRP)IgG1重组抗体可以检测HPA-1a抗原。在1小时内能对96份标本进行HPA-1a定型。在一次试验中,检测了782份随机供者的标本,鉴定出19汾HPA-1a阴性标本(2.4％)。HPA-1a阴性标本的平均OD值为0.097(平均值 3sd=0.278),而阳性标本的平均OD值为1.42(平均值-3sd=0.6)。所有HPA-1a阴性的标本用以下方法确认:通过流式细胞仪用异硫氰酸荧光素(FITC)-标记的抗—HPA—1a的重组IgG1对全血进行检测;通过流式细胞仪用多克隆抗HPA-1a对提纯的血小板进行检测和应用PCR-序列特异性引物(SSP)方法。总结,用重组抗-HPA-1a连接HRP,我们研究了一种只用20ul的全血快速定型技术,这种技术适用于半自动化检测。     

新乡地区HPA基因分型供者库在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的建立新乡地区已知HPA-1-18基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(PRT)患者提供HPA相合的血小板,方法建立PCR-SSP检测HPA-1-18基因型检测方法;采用固相凝集法对52名PRT患者,做血小板同种抗体筛查;应用HLA抗体特异性试剂盒检测患者血清群体反应性抗体;对血小板同种抗体筛查阳性患者,采用已知HPA基因型的标准谱血小板做抗体鉴定,并对其进行HPA基因分型;采取HPA抗体无对应抗原的供者血小板进行输注。结果成功检测出150名无偿血小板捐献者HPA-1-18基因型。在52例PRT病例中,检出血小板同种抗体23例(阳性率44%),其中5例鉴定为抗-HPA(21.7%),分别为HPA-3a 2例;HPA-15b 3例;其余HLA抗体阳性18例。结论对PRT患者采用HPA基因型相合的方法进行输注取得临床效果。     

流式免疫微球芯片技术分析特异性血小板自身抗体

目的建立流式免疫微球芯片技术（FCIBA）分析特异性血小板自身抗体的新方法。方法使用不同红色荧光强度的微球，包被不同血小板膜蛋白单克隆抗体（抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC单克隆抗体），制备特异性血小板自身抗体检测微球，用流式细胞仪检测微球捕获的血小板抗原-自身抗体复合物，检测结果与微孔板改进抗原捕获ELISA（MACE）进行比较，并检测了部分免疫性以及非免疫性血小板减少性紫癜患者血清中的5种特异性血小板自身抗体。结果FCIBA分析抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体，批内重复性变异系数（CV）分别为4．82％、6．09％、5．04％、5．73％、5．30％；稀释试验呈对数线性相关，相关系数（r）分别为0．9972．0．9966．0．9988．0．9965、0．9982；新方法对5种特异性血小板自身抗体的分析结果均与MACE试验结果高度相关，r值分别为0．9289、0．9224、0．8894、0．9100、0．9134（P均〈0．01）。新方法分析98例免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，血小板特异性自身抗体检出的阳性率为51．69％；其中，抗GPⅡb／Ⅲa为40．82％，抗GPⅠa／，Ⅱa为24．45％，抗GPⅣ为19．39％，抗GPⅠb／Ⅸ为32．65％，抗HLA-ABC为17．35％。新方法分析40例非免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，阳性率为0。结论本研究建立了FCIBA分析特异性血小板自身抗体的新方法，可同时分析抗血小板GPⅡb／Ⅲa、GPⅠa／，Ⅱa、GPⅣ、GPⅠb／Ⅸ和HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体。     

直接MAIPA对免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜的鉴别诊断

目的检测免疫性与非免疫性血小板减少患者血小板膜糖蛋白特异性自身抗体，评价该方法在免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜鉴别诊断中的价值。方法应用改良直接单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)检测血小板膜糖蛋白(GPⅡh／Ⅲa、GP I b和GPI a／Ⅱa)特异性自身抗体。结果免疫性血小板减少患者自身抗体阳性率(76．4％)显著高于非免疫性血小板减少患者(3．6％)(P＜0．05)。直接MAIPA诊断免疫性血小板减少的敏感性为76．4％，特异性为96．4％，阳性预测值为97．1％。GPⅡh／Ⅲa特异性自身抗体阳性的免疫性血小板减少患者血小板计数与自身抗体吸光度比值呈显著负相关(r=-0．338，P＜0．05)。结论直接MAIPA检测血小板膜糖蛋白特异性自身抗体对于鉴别免疫性与非免疫性血小板减少有一定意义。     

血小板输注无效患者血小板同种抗体及血小板特异性糖蛋白抗体表达的研究

目的 探讨血小板输注无效与血小板同种抗原或血小板特异性抗原的相关性.方法 选择65例临床确诊血小板输注无效患者作为研究对象,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测血清、血小板洗脱液中血小板特异性抗体;应用HLA抗体特异性检测试剂盒,对组合反应性抗体(PRA)阳性的患者进行HLA抗体特异性分析;用HPA分型试剂盒检测8个血小板同种抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、9、15;用HLA分型试剂盒对HLA-A/B抗原进行基因分型.结果 65例患者HLA-A/B抗原,HPA-1、2、4、5、6、9、15抗原的基因频率分布与健康献血员比较差异无统计学意义.HPA-3a、3b抗原频率分别为0.65、0.35,与健康献血员比较差异有统计学意义(P＜0.05).65例患者中HLA抗体单独阳性24例(36.9%),HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同阳性14例(21.5%);HLA抗体和血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体共同阳性6例(9.2%),血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体阳性13例(20%),HLA抗体、血小板特异性糖蛋白抗体及血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体共同阳性4例(6.2%);HLA-A/B特异性抗体中,HLA-A*9抗体占全部抗体的46.2%,HLA-B*40抗体占33.6%.血清血小板特异性抗体以GPⅡb/Ⅲa为主(26.2%),其次为GP Ⅰa/Ⅱa(21.5%),血小板洗脱液中,血小板特异性抗体以GPⅡb/Ⅲa和GP Ⅰb/Ⅸ为主(41.5%).对2例患者进行了遗传学调查,发现产生的血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体与父母血小板抗原及HLA抗原不相合呈密切相关.结论 血小板输注无效患者中,HLA抗体占主要地位,其次为血小板特异性糖蛋白抗体.