全反式维甲酸对川崎病患儿外周血Th17/Treg细胞平衡的影响研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对川崎病患儿外周血Th17/Treg细胞平衡的影响。方法研究纳入10名川崎病患儿为病例组,选择10名健康儿童作为对照组,采取外周静脉血后,无菌分离、制备外周血单个核细胞(PBMC),给予不同浓度ATRA诱导培养PBMC72h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液的细胞因子IL-10、IL-17A、TGF-β以及IL-6水平,实时PCR检测RORγt mRNA和FOXP3 mRNA表达水平,流式细胞术检测Th17/Treg占外周CD4+T细胞百分比。结果未加ATRA作用下,病例组Th17细胞比例,转录因子RORγt的mRNA表达水平以及相关细胞因子IL-10、IL-17A均高于对照组(P均0.01),而Treg细胞比例,FOXP3mRNA表达水平以及相关细胞因子TGF-β、IL-6低于对照组(P均0.01)。给予不同浓度ATRA作用后,病例组以及对照组Th17比例、IL-10、IL-17A、RORγt的mRNA均有所下降,而Treg细胞比例、FOXP3mRNA表达水平、TGF-β、IL-6均有所上升(P均0.01)。结论 ATRA在体外可促进川崎病患儿外周血Treg分化,同时抑制Th17分化,改变川崎病患儿外周血Th17/Treg失衡状态,该研究为阐明川崎病的免疫学发病机制及探索新疗法提供实验依据以及思路。     

miR-99a对类风湿性关节炎及TH17/Treg细胞的影响

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-99a的表达与辅助性T细胞17(T helper cell 17,T_H17)、调节性T细胞(regulatory cells, Treg)比率失衡的关系。方法收集于我院就诊的RA患者80例,分为活动期RA组(42例)和稳定期RA组(38例),以体检健康者42例作为健康人对照组。流式细胞术测定各组外周血PBMC中T_H17、Treg细胞数;ELISA法检测各组血清IL-17、IL-6、TFN-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定T_H17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FoxP3 mRNA以及RA患者PBMC中miR-99a的表达水平;western blot检测各组RORγt和FoxP3蛋白的表达水平。结果与健康人对照组相比,活动期和稳定期RA患者的T_H17细胞数、RORγt mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,Treg细胞数及FoxP3 mRNA和蛋白质的表达水平均显著降低(P均0.01)。活动期RA患者血清IL-17、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达水平均显著升高,而IL-4和IL-10的表达水平均显著降低(P均0.01)。此外,活动期RA患者T_H17细胞中miR-99a的表达水平显著升高,Treg细胞中miR-99a的表达水平显著降低(P均0.01)。Pearson相关分析结果显示,RA患者T_H17细胞中miR-99a与RORγt mRNA的表达水平呈正相关(r=0.721,P0.01),Treg细胞中miR-99a与FoxP3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.815,P0.01)。结论 RA患者T_H17和Treg细胞中miR-99a的表达与T_H17、Treg细胞发育分化关键转录因子RORγt、FoxP3密切相关,miR-99a可能通过影响RORγt和FoxP3,参与RA患者T_H17/Treg细胞比率失衡。     

重度子痫前期患者外周血Th17和Treg细胞及相关细胞因子的表达及意义

目的探讨重度子痫前期(sPE)患者外周血Th17及CD4+CD25+Treg细胞及相关细胞因子白细胞介素(IL)-17、IL-21、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)的水平变化及意义。方法选取30例sPE患者(sPE组)及30例正常妊娠者(对照组)作为研究对象。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中Th17及CD4+CD25+Treg细胞水平。采用QRT-PCR检测维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA和Foxp3 mRNA的表达水平。采用ELISA法检测血浆IL-17、IL-21、IL-10和TGF-β水平。结果 sPE组外周血Th17细胞水平为(1.16±0.78)%,显著高于对照组的(0.68±0.35)%,差异有统计学意义(t=3.447,P=0.002)。sPE组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平为(1.65±0.49)%,显著低于对照组的(2.42±0.91)%,差异有统计学意义(t=-4.25,P=0.000)。sPE组RORγt mRNA表达水平为0.190±0.063,高于对照组的0.136±0.037,差异有统计学意义(t=3.776,P=0.001)。而sPE组Foxp3mRNA表达水平为0.069±0.025,低于对照组的0.127±0.027,差异有统计学意义(t=-8.218,P=0.000)。sPE组IL-17、IL-21、IL-10水平分别为(82.03±37.61)、(63.29±27.42)、(56.89±17.28)ng/L,高于对照组的(30.81±21.87)、(33.87±13.73)、(33.24±11.93)ng/L,差异有统计学意义(P0.01),TGF-β水平为(24.34±6.51)ng/L,低于对照组的(46.97±15.81)ng/L,差异有统计学意义(t=-7.781,P=0.000)。sPE患者血浆IL-17、IL-21水平与Th17细胞水平呈正相关(r分别为0.695、0.586,P0.01)。结论 sPE患者Th17细胞数量升高,CD4+CD25+Treg细胞数量减少,以及相关细胞因子的紊乱在sPE的发病机制中可能起到重要作用。     

桥本甲状腺炎患者外周血调节性T细胞与Th17细胞的动态变化及其意义

目的研究桥本甲状腺炎患者外周血调节性T细胞(Treg)与Th17细胞的动态变化与意义。方法采用回顾性研究方法,选取2016年8月至2017年4月陕西省安康市人民医院内分泌科收治的桥本甲状腺炎患者40例(观察组)以及同期健康体检者40例(对照组),比较两组外周血单个核细胞(PBMC)中Th7/Treg细胞比值、细胞特异性转录因子Foxp3、RORγt的mRNA表达以及血清中的IL-17A与TGF-β含量。结果观察组患者的TSH、TPO-Ab、Tg Ab明显高于对照组,FT3、FT4明显低于对照组(P0.05);观察组PBMC中的Treg与Th17细胞比率明显低于对照组(P0.05),Th7/Treg细胞比值明显高于对照组(P0.05),Foxp3中mRNA表达水平明显低于对照组(P0.05),RORγt的mRNA表达水平明显高于对照组(P0.05);观察组患者血清IL-17A水平明显高于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的Th17/Treg细胞比值会发生明显的改变,可能与甲状腺抗体存在联系,Th17/Treg细胞亚群免疫功能失衡与疾病有密切的关系。     

习惯性流产患者绒毛和蜕膜中Treg/Th17免疫失衡的检测及其临床意义

目的探讨绒毛和蜕膜中调节性T细胞(Treg)/Th17免疫失衡在习惯性流产(RSA)患者免疫发病机制中的作用。方法收集RSA患者和自愿终止妊娠的早孕妇女(正常对照组)的绒毛和蜕膜,采用流式细胞术检测其中Treg和Th17细胞数量,采用RT-PCR检测其中叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)的mRNA水平;收集RSA患者和正常对照组的外周血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-10、IL-17A和IL-17F的水平;统计分析Treg细胞和其相关细胞因子、Th17细胞和其相关细胞因子之间的相关性。结果和正常对照组比较,RSA患者绒毛和蜕膜中Th17细胞明显增多(均P0.01),Treg细胞明显减少(均P0.01),RORγt的mRNA水平明显升高(均P0.01),Foxp3的mRNA水平明显降低(均P0.01);RSA患者外周血中IL-17A和IL-17F水平明显升高(均P0.01),TGF-β和IL-10水平明显降低(均P0.01);RSA患者和正常对照组Treg细胞数量和TGF-β及IL-10水平、Th17细胞数量和IL-17A及IL-17F水平均呈正相关(均P0.01)。结论绒毛和蜕膜中Treg/Th17免疫失衡可能与RSA的免疫发病机制有关。     

桥本甲状腺炎患者外周血调节性T细胞/Th17细胞平衡动态变化的研究

目的 探讨桥本甲状腺炎(HT)患者外周血调节性T细胞(Treg)与Th17细胞的动态变化及其意义.方法 流式细胞术检测36例HT患者和30例健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中Treg和Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR检测Treg和Th17细胞特异性转录因子Foxp3、RORγt mRNA的表达水平,ELISA检测血清中相关细胞因子TGF-β和IL-17A的含量.结果 HT患者PBMC中Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显低于健康对照者(t=-10.62、-7.624,P均<0.01),HT亚组间差异具有统计学意义(F=4.414、4.512,P均<0.05);Th17细胞比例、RORγt mRNA表达水平及Th17/Treg比值均明显高于健康对照者(t=11.32、19.25、8.386,P均<0.01),HT亚组间差异均具有统计学意义(F分别为34.947、14.551、24.338,P均<0.01),亚组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05).HT患者血清TGF-β的含量较健康对照者略低,但差异无统计学意义(P>0.05);IL-17A的含量均较健康对照者显著升高(P<0.01),HT患者组内各亚组间血清IL-17A的含量差异具有统计学意义(F=11.077,P<0.01),两两比较差异亦具有统计学意义(P均<0.05).HT患者Th17/Treg比值与血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度均呈显著正相关(r=0.349、0.502,P=0.037、0.002).结论 在HT发病过程中,Th17/Treg细胞轴呈动态改变,并且与甲状腺自身抗体滴度正相关,说明Th17/Treg细胞亚群的免疫失平衡可能参与了HT的发生发展.     

Th17细胞在特发性血小板减少性紫癜发病中的作用和意义

目的:本研究探讨Th17细胞在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病中的作用和意义。方法:采用FCM检测ITP患者组和正常对照组外周血中Th17细胞的比例;ELISA技术检测上述两组血浆中IL-17、IL-23、IL-6和TGF-β1的表达水平;RT-PCR技术检测外周血单个核细胞(PBMNC)中IL-17和RORγt mRNA的表达水平;Westernblot法检测PBMNC中pSTAT3和RORγt蛋白的表达水平。结果:ITP患者外周血Th17细胞比例较正常对照组显著升高,血浆中IL-17、IL-23、IL-6和TGF-β1水平明显高于正常对照组(P0.01);ITP患者PBMNC中IL-17和RORγt mRNA表达水平明显高于正常对照组(P0.05);p STAT3和RORγt蛋白的表达水平明显高于正常对照组(P0.05))。结论:在ITP发生和发展中,Thl7细胞亚群比例增高可能是一个重要的决定因素,Th17细胞相关的细胞因子及转录调控因子水平的变化与ITP发病密切相关。     

银屑病患者 Th17和 Treg细胞及其相关细胞因子的表达

目的：探讨银屑病患者辅助性T细胞17（Th17）和调节性T （Treg）细胞及其相关因子表达的临床意义。方法用流式细胞术检测28例轻度和25例重度银屑病患者及25名健康对照者外周血中Th17和Treg细胞的比例;用逆转录聚合酶链反应（PCR）检测维甲酸相关孤儿受体γt（RORγt）和抗人叉头状转录因子（Foxp3） mRNA的表达;用酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测血浆Th17和Treg相关细胞因子白细胞介素17（ IL-17）和转化生长因子β（ TGF-β）的水平。结果与健康对照组比较,银屑病患者组Th17细胞比例、RORγt的mRNA水平及IL-17的浓度显著上升,且重度组显著高于轻度组（P＜0．05）;而重度银屑病患者Treg细胞、Foxp3 mRNA和血浆TGF-β浓度均较健康对照组和轻度组显著降低（ P＜0．05）。结论 Th17和Treg细胞的比例及其相关因子的表达可作为银屑病病情进展的标志。     

急性荨麻疹患者外周血Th17细胞数量和功能的变化

目的分析急性荨麻疹患者外周血辅助性T细胞17(Th17)细胞数量和功能的变化,探讨Th17细胞在急性荨麻疹免疫致病机制中的作用。方法收集50例急性荨麻疹患者和50例健康体检者外周血标本,流式细胞术分析其外周血Th17细胞数量,实时荧光定量PCR(qPCR)法分析其转录因子维甲酸相关孤儿素受体γt(RORγt)mRNA水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法分析其外周血Th17细胞相关细胞因子转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A、IL-17F和IL-23水平。结果急性荨麻疹患者Th17细胞数量(t=36.634 1,P0.05)和RORγt mRNA水平(t=23.840 1,P0.05)明显高于对照组,Th17细胞相关细胞因子TGF-β(t=15.521 1,P0.05)、IL-6(t=7.247 3,P0.05)、IL-17A(t=15.415 3,P0.05)和IL-17F(t=13.032 1,P0.05)水平均明显高于对照组。结论 Th17细胞可能通过分泌IL-17A、IL-17F和IL-6等炎症因子在急性荨麻疹发病过程中发挥作用。     

基因工程Th17细胞的研制及其功能探讨

目的 探讨并优化制备基因工程Th17细胞的方法,评估制备的工程Th17细胞是否具有同天然Th17细胞类似的表型和功能.方法 包装含RORγt基因的重组慢病毒pXZ9-RORγt和空载体对照质粒pXZ9.C57BL6小鼠CD4+ CD25 - na(i)ve T细胞体外活化36 h后依据感染慢病毒颗粒的不同及是否添加TGF-β和IL-6,分为五组:pXZ9-RORγt组、TGF-β+ IL-6组(pXZ9+ TGF-β+ IL-6组)、联合组(pXZ9-RORγt+ TGF-β+ IL-6组)、空载体对照组(pXZ9组)及空白对照组.流式细胞术检测各组IL-17A阳性细胞比例,荧光定量PCR检测各组细胞IL-17A、IL-17F、IL-21和IFN-γ表达水平.通过小鼠实验性变应性脑脊髓炎(EAE)模型评估各组细胞是否具有加重EAE的功能.结果 ①pXZ9-RORγt组、TGF-β +IL-6组和联合组均制备出工程Th17细胞,其中联合组IL-17A阳性率达(60.59±8.15)％,明显高于pXZ9-RORγt组[(40.25±5.46)％]和TGF-β+IL-6组[(14.36±5.27)％].②各组工程Th17细胞均表达IL-17A与IL-17F,而IL-21仅在给予TGF-β和IL-6时明显升高.③各组工程Th17细胞均可加重小鼠EAE.结论 成功建立了制备高效工程Th17细胞的方法,其中过表达RORγt基因与联合TGF-β和IL-6不仅可提高Th17细胞的制备效率,而且制备的工程Th17细胞在表型和功能上与天然Th17细胞相类似.     

特应性皮炎患者外周血Th17细胞比例及不同细胞因子微环境对其分化的影响

目的探讨Th17细胞在特应性皮炎(AD)发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测39例AD患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR(real-timeRT-PCR)检测PB-MC中Th17细胞相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23和TGF-βmRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中上述细胞因子的含量;同时以34例性别、年龄匹配的健康儿童做对照。分离AD患者PBMC体外培养,加入不同细胞因子微环境,观察其对Th17细胞数量及特异性转录因子RORγt表达的影响。结果 AD患者外周血Th17细胞比例(CD4+IL17+T细胞/CD4+T细胞%)显著高于正常对照者(P<0.01)。PBMC中IL-1β、IL-6、IL-17和IL-23mRNA表达水平及血清中相应细胞因子含量均显著高于正常对照者(P<0.01),PBMC中TGF-βmRNA表达水平及其血清中含量与正常对照者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AD患者PBMC在不同细胞因子微环境中培养,IL-1β+IL-23+IL-6处理组Th17细胞比例及RORγtmRNA表达最高,TGF-β处理组表达最低,与其余处理组比较差异均具有统计学意义(P均<0.05)。IL-1β+IL-6、IL-1β+IL-23、IL-6+IL-23处理组Th17细胞比例及RORγtmRNA表达水平低于IL-1β+IL-23+IL-6处理组,高于TGF-β处理组和未处理组,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。IL-1β+IL-6、IL-1β+IL-23、IL-6+IL-23处理组间差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 AD患者外周血Th17细胞比例及相应促分化细胞因子表达水平升高,IL-1β+IL-23+IL-6对Th17细胞具有明显的促分化作用,Th17细胞在AD发病机制中发挥作用。     

再生障碍性贫血患者外周血Th17细胞亚群水平及临床意义

目的:研究再生障碍性贫血(AA)患者外周血Th17细胞亚群水平及其临床价值。方法:选择2017年5月-2018年2月在我院治疗的85例再生障碍性贫血患者,其中51例患者疗效较差,纳入A组;34例患者疗效较好,纳入B组。同时选取35名体检健康者作为对照。采用ELISA实验分析患者血清IL-17、IL-6、IL-4及IFN-β水平;采用流式细胞术分析患者外周血Th17细胞亚群水平;采用RT-PCR分析淋巴细胞RORγt和STAT3的mRNA表达水平;采用Western blot分析淋巴细胞RORγt和STAT3蛋白水平。结果:A组与B组患者的性别、年龄、WBC、并发症的差异无统计学意义(P0.05)。B组NSAA 23例,其比例(23/34)显著高于A组(20/81)(P0.05)。B组患者的Hb水平为86.25±7.9 g/L,Plt计数(54.7±6.3)×109/L,显著高于A组(P0.05)。A组IL-17、IL-6水平显著高于对照组(P0.05);B组IL-17、IL-6水平显著低于A组(P0.05);A组IL-4及IFN-β水平显著低于对照组(P0.05);B组患者的IL-4及IFN-β水平显著高于A组(P0.05)。A组患者的外周血Th17细胞比例明显高于B组(P0.05)。A组RORγt及STAT3的m RNA水平显著高于对照组(P0.05);B组患者的RORγt及STAT3的mRNA水平显著低于A组(P0.05)。A组RORγt及STAT3的蛋白水平显著高于对照组(P0.05);B组患者的RORγt及STAT3的蛋白显著低于A组(P0.05)。结论:AA患者外周血Th17细胞上升,并促使患者体内炎性反应加剧,其机制可能与RORγt及STAT3基因表达上升有关。这为AA的临床治疗提供了实验依据。     

寻常型银屑病患者外周血单个核细胞转录因子RORγt与Foxp3 mRNA表达及相关性研究

目的探讨寻常型银屑病患者外周血中Th17细胞、Treg细胞特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA的表达情况,分析其与发病及病情严重程度的相关性。方法选取78例寻常型银屑病患者作为研究对象,对研究对象分期并进行银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分,对照组60例,均为健康体检者。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)分别检测外周血单个核细胞(PBMCs)中RORγt、Foxp3的mRNA的表达水平。结果寻常型银屑病组外周血中RORγt、Foxp3 mRNA相对表达量及RORγt/Foxp3表达量的比值分别为7.67±0.72、1.63±0.34、4.68±0.61,分别与正常对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。结果说明患病组外周血中RORγt mRNA的表达量明显高于对照组,Foxp3 mRNA的表达量则明显低于对照组,RORγt/Foxp3表达量的比值在患病组中也明显升高。同样在进行期外周血中RORγt mRNA的表达量明显高于静止期,Foxp3 mRNA的表达量则明显低于静止期,RORγt/Foxp3表达量的比值在进行期也明显高于静止期。进行期的PASI评分与RORγt mRNA相对表达量及RORγt/Foxp3表达量的比值呈正相关(r值分别为0.672、0.743,P均<0.01),与Foxp3 mRNA相对表达量呈负相关(r值为-0.795,P<0.01)。静止期PASI评分与RORγt mRNA相对表达量及RORγt/Foxp3表达量的比值呈正相关(r值分别为0.771、0.816,P均<0.01),与Foxp3 mRNA相对表达量呈负相关(r值为-0.863,P<0.01)。结论寻常型银屑病的发病及病情严重程度与外周血中RORγt mRNA表达的升高及Foxp3表达的降低有关,两种基因表达的失衡可能是引起寻常型银屑病外周血Th17/Treg失衡的一个重要原因。     

过敏性紫癜患儿Th17细胞表达及意义

目的 探讨Th17细胞在儿童过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿55例,采用流式细胞分析法检测外周血Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆相关细胞因子IL-17和IL-6的水平,并进行相关性分析.同期选取20例同龄健康儿童作为对照.结果 HSP患儿外周血Th17/CD4+T细胞比例显著高于对照组[(1.91±0.78)% vs(0.52±0.24)%,(P＜0.01)];HSP患儿血浆IL-17和IL-6的水平亦明显高于对照组[IL-17:(47.4±17.6)pg/ml vs (15.6±11.2) pg/ml;IL-6:(273.8±42.4)pg/ml vs(228.7±37.4)pg/ml,(P＜0.01)].患儿血浆IL-17和IL-6的水平呈正相关(r=0.762,P＜0.01).结论 过敏性紫癜急性期患儿Th17细胞比例增加,IL-17和IL-6水平升高,提示Th17细胞可能参与了HSP的发病及其炎性反应过程.     

系统性红斑狼疮患者外周血Th17和CD4+CDhigh25Treg细胞及相关细胞因子的检测及意义

目的 探讨SLE患者外周血Th17及CD4+ CDhigh25Treg细胞及相关细胞因子IL-17、IL-21、TGF-β和IL-10的水平变化及意义.方法 选取2009-2010年河南省人民医院56例SLE患者(非活动期26例、活动期30例)及28名健康对照者.采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中Th17及CD4+ CDhigh25 Treg细胞水平;采用QRT-PCR检测RORγt mRNA和Foxp3 mRNA的表达水平;采用ELISA检测血浆IL-17、IL-21、TGF-β和IL-10水平,并分析其与SLE的相关性.结果 SLE患者组外周血Th17细胞水平为(3.44±0.96)％,显著高于健康对照组的(2.42±0.52)％,差异有统计学意义(t=5.38,P=0.000).SLE患者组外周血CD4+CDhigh25Treg细胞水平为(1.32±0.57)％,显著低于健康对照组的(2.07±0.67)％,差异有统计学意义(t=3.28,P=0.034).SLE患者的RORγt mRNA表达水平为(0.219±0.063),高于健康对照组的(0.087±0.045),差异有统计学意义(t=6.41,P=0.000);而SLE患者的Foxp3+ mRNA表达水平为(0.063±0.045),低于健康对照组的(0.128±0.056),差异有统计学意义(t=5.28,P=0.000).SLE患者组IL-17、IL-21、IL-10水平分别为122.4(60.5～188.3)、167.2(128.7 ～871.4)、51.3(20.9 ～123.7)ng/L,高于健康对照组的27.1(18.1 ～86.2)、31.0(31.0～424.5)、33.5(16.4～54.1) ng/L,差异有统计学意义(Z值分别为3.83、4.54、1.87,P均＜0.05),TGF-β水平为31.0(31.0 ～168.6) ng/L,低于健康对照组的159.8(63.4～389.7)ng/L,差异有统计学意义(Z=4.87,P＜0.05).SLE患者血浆IL-17水平与Th17细胞水平、SLEDAI积分、抗dsDNA抗体水平呈显著正相关(r=0.621、0.581、0.512,P＜0.05),与补体C3水平呈负相关(r=-0.543,P＜0.05).CD4+ CDhigh25Treg细胞与SLEDAI积分呈负相关(r=- 0.423,P＜0.05),与补体C3水平呈正相关(r=0.511,P＜0.05).结论 SLE患者Th17细胞数量增高,CD4+ CDhigh25 Treg细胞数量减少,以及相关细胞因子的紊乱在SLE的发病机制中可能起到重要作用.     

Th17细胞、IL-17和MMP-13在过敏性紫癜发病机制中的作用

目的:通过测定过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)患者急性期外周血中Th17细胞、IL-17、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的水平以及患者皮损处IL-17的表达,探讨HSP的免疫学发病机制。方法:应用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测HSP组和健康对照组外周血中Th17细胞比例;双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测上述研究对象血浆中IL-17和MMP-13的浓度;免疫组织化学法检测HSP组皮损组织和健康对照组皮肤组织IL-17的表达情况。结果:HSP组急性期外周血中Th17细胞比例为(1.21±0.59)%,明显高于对照组的(0.71±0.26)%(t=4.907,P 0.01);HSP组急性期血浆中IL-17和MMP-13浓度分别为(64.58±36.21)pg/ml和(17.57±5.40)ng/ml,均明显高于对照组的(26.16±14.90)pg/ml和(11.55±4.40)ng/ml(t=6.183,P 0.01和t=5.022,P 0.01);HSP组皮损组织中IL-17的免疫组织化学积分光密度值为(7.26±2.34),非常显著高于对照组的(4.61±1.82)(t=2.877,P 0.01)。结论:Th17细胞、IL-17以及MMP-13有可能参与过敏性紫癜的发病过程。     

重组脂联素对自然流产模型小鼠妊娠结局及Th17/Treg平衡的影响

目的 分析重组脂联素对自然流产(SA)模型小鼠妊娠结局、辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法 选择SPF级CBA/J雌性小鼠与DAB/2、BALB/c雄性小鼠建立正常妊娠模型(CBA/J雌鼠与BALB/c雄鼠交配)与SA模型(CBA/J雌鼠与DBA/2雄鼠交配),SA模型小鼠分为模型组与重组脂联素组。重组脂联素组自妊娠第5天开始腹腔注射重组脂联素10μg(kg·d),连续9 d;模型组同步注射等量生理盐水;正常妊娠组不作任何处理。妊娠2周后处死各组小鼠,计算胚胎吸收率。苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠滋养细胞形态改变。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组小鼠血清脂联素、Th17相关细胞因子白细胞介素-17(IL-17)及Treg相关细胞因子白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子(TGF)-β1水平。取小鼠脾脏组织,流式细胞术检测Th17/Treg细胞平衡的变化。实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)测定Th17细胞转录因子RORγt及Treg细胞转录因子FOXP3 mRNA水平。结果 与正常妊娠组比较,模型组小鼠胚胎吸收率上升(P 0. 05);与模型组比较,重组脂联素组胚胎吸收率降低(P 0. 05);正常妊娠组、重组脂联素组胚胎吸收率比较差异无统计学意义(P 0. 05);与正常妊娠组比较,模型组、重组脂联素组血脂联素、IL-10、TGF-β1水平降低,IL-17水平及IL-17/TGF-β1值上升(P 0. 05),脾脏淋巴细胞Th17细胞比率、Th17/Treg值、RORγt mRNA上升,Treg细胞比率、FOXP3 mRNA降低(P 0. 05);与模型组比较,重组脂联素组血清脂联素、IL-10、TGF-β水平上升,IL-17水平及IL-17/TGF-β1值降低(P 0. 05),脾脏淋巴细胞Th17细胞比率、Th17/Treg值、RORγt mRNA降低,Treg细胞比率、FOXP3 mRNA上升(P 0. 05)。结论 重组脂联素可能通过调节Th17/Treg免疫平衡改善SA模型小鼠妊娠结局,维持妊娠早期免疫耐受。     

多发性骨髓瘤患者Treg细胞、Th17细胞及相关转录因子mRNA的表达及临床意义

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血及骨髓中调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Thl7细胞)的比率及其相应特异转录因子Foxp3、RORγt的mRNA表达水平,分析Treg/Thl7平衡的临床意义。方法:将46例MM患者分为初发组(n=20)、平台期组(n=16)、复发/难治组(n=10),以健康体检者(n=20)为正常对照组。用流式细胞术检测研究对象外周血及骨髓中Treg细胞、Th17细胞占CD4~+T细胞的比率及Treg/Th17比值的变化;RT-PCR检测转录因子Foxp3及RORγt mRNA的表达水平;同时分析患者血清IL-6及CRP水平变化。结果:初发组及复发/难治组患者外周血和骨髓Treg细胞比率较正常对照组及平台期组患者升高(P0.05);初发组及复发/难治组患者外周血和骨髓中Th17细胞比率与正常对照组及平台期差异均无统计学意义。初发组及复发/难治组患者外周血和骨髓中Treg/Thl7比值高于平台期组及正常对照组(P0.05)。各组外周血及骨髓中Foxp3和RORγt mRNA的变化趋势与Treg/Thl7一致。MM患者血清中IL-6、CRP水平与外周血及骨髓中Treg/Thl7比值变化一致。结论:MM患者活动期外周血及骨髓中Treg/Thl7平衡向Treg倾斜,Foxp3表达水平升高;血清中IL-6、CRP水平与Treg/Th17比值变化趋势一致,可用于预测MM患者预后。     

阿维A对寻常型银屑病患者外周血Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究

目的探讨阿维A治疗银屑病的疗效以及对银屑病患者外周血单一核细胞RORγt和Foxp3 mRNA表达的影响,进一步阐明阿维A治疗寻常型银屑病的作用机制。方法 90例中、重度寻常型银屑病患者采用口服阿维A治疗8周,以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法,检测正常对照组及寻常型银屑病患者治疗前后外周血单一核细胞中Th17和Treg细胞的特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA表达水平。结果阿维A治疗后PASI评分明显下降(P<0.01);银屑病组和正常对照组比较,患者外周血RORγt mRNA表达量(8.72±1.64)显著高于正常对照组(2.53±0.71)(P<0.01);Foxp3 mRNA的表达量(1.56±0.92)则明显低于正常对照组(2.98±1.03)(P<0.01);患者RORγt/Foxp3的比值也明显高于正常对照组。阿维A治疗后患者外周血RORγt mRNA的表达量及RORγt/Foxp3的比值较治疗前明显降低(3.07±0.95,1.23±0.77),而Foxp3 mRNA的表达量较治疗前明显升高(2.72±0.83)(P<0.01)。结论银屑病的发生及病情严重程度与外周血RORγt mRNA的高表达及Foxp3 mRNA的低水平有关;阿维A治疗银屑病疗效明显,治疗后外周血RORγt mRNA的水平明显降低,Foxp3 mRNA的表达量明显升高;阿维A可下调外周血RORγt mRNA的表达,提高Foxp3 mRNA的表达,这可能是阿维A治疗银屑病的机制之一。     

特异性细胞因子对T辅助17细胞和T调节性细胞表达的调节作用

目的 探讨多种细胞因子包括转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素2(IL-2)对CD+4T淋巴细胞的分化调节作用.方法 将人外周血T淋巴细胞、鼠脾脏T淋巴细胞在不同的刺激条件下进行体外培养,采用流式细胞仪分析活化T淋巴细胞中CD+4IL-17+T辅助17细胞(Th17细胞)、C+4IL-17+T淋巴细胞、CD+4CD+25FOXP+3T调节性细胞(Treg细胞)的表达情况.结果 鼠脾脏T淋巴细胞培养液中有TGF-β存在时可促进Treg细胞、rh17细胞和CD+8;IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(7.8±2.2)%、(12.6±3.1)%、(10.1±2.6)%.无细胞因子培养的同类细胞为实验对照组,表达水平分别为(4.8±0.6)%、(1.7±0.5)%、(1.0±0.4)%,差异均有统计学意义(q=4.09、8.80、9.61,P<0.05或P<0.01).TGF-β与IL-6细胞因子共同存在时可促进Th17和CD+8IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(17.8±5.3)%、(15.0±4.2)%,而分化受抑制的Treg细胞的表达水平为(4.I±1.2)%,与TGF-β组同类细胞表达水平比较差异均有统计学意义(q=5.03、5.17、5.04,P均<0.01).在TGF-β刺激的T淋巴细胞中加入IL-2细胞因子可使Th17细胞、CD+8;IL-17+T淋巴细胞表达减少,同时伴有Treg细胞表达量的增加;在加入抗IL-2后结果相反,即Th17细胞、CD+8IL-17+T淋巴细胞表达水平增加,Treg细胞表达水平减少.人外周血T淋巴细胞上Th17、CD+8IL-17+、Treg细胞表达水平变化趋势与鼠脾脏淋巴细胞相似.结论 不同细胞因子对于调控Th17细胞和Treg细胞之间的平衡起着十分重要的作用.