聚合酶链反应结合尿嘧啶糖基化酶鉴定临床常见念珠菌

体外基于聚合酶链反应(PCR)技术用于念珠菌DNA特异性鉴定方法很多,但所用引物序列和种级水平鉴定临床常见念珠菌的方法不同,加之防污措施的不足或欠缺,致使其特异性、稳定性、重复性受到影响而未能应用于临床.本研究选取真菌界高度保守内转录间隔区ITS1-ITS4做外引物及据此外引物设计白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌内引物序列;据ITS1-ITS3设计光滑念珠菌内引物序列,采用套式PCR及酶学防污措施进行念珠菌种间鉴定^[1,2].旨在探索该套引物和酶学防污措施的临床实用价值,同时对5种临床常见念珠菌分离物进行PCR鉴定.     

真菌

20 0 0 150 6　某些致病真菌的聚合酶链反应检测 /朴英兰 (北京医大一院皮肤科 )…∥中华皮肤科杂志 .-1999,32 ( 6) .- 397建立一种比其它常规方法更为快速、稳定的体系 ,以协助临床早期诊断。共收集临床株 56株。制备模板DNA,引物为细胞色素 P4 50 L1A1基因序列引物 ,目的片段 PCR扩增。结果 :应用 ITS内转录间隔区通用引物 ,从所有受试真菌 DNA中均获得阳性 PCR扩增产物 ,出现预期的 148bp～ 4 78bp唯一条带 ;应用 DH- 1558念珠菌属特异引物 ,其扩增产物出现多条非特异性条带 ;应用 144 0 6/ 144 0 7白念珠菌特异性引物 ,经PCR…     

真菌病

20 0 2 2 835　PCR- RELP鉴别临床常见的皮肤癣菌 /李民 (复旦大学附属华山医院皮肤科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 2 ,16 (3) .- 15 8为建立一种能鉴别临床上常见的皮肤癣菌分子生物学方法 ,采用通用引物扩增皮肤癣菌的核糖体 ITS区 ,PCR产物予限制性内切酶酶切 ,然后对其 DNA电泳条带大小及酶切片段进行多态性分析。结果 :7种皮肤癣菌的 ITS区扩增产物条带大小不同 ;Mva I、Taq I、Hinf I三种酶切产物均产生独特且易区分的酶切图 ,尤其是前者产生的酶切图其种间差异明显 ,据此可将 7种菌明确区分开来。提示 PCR- RELP法分析其核糖体ITS区是区分常见皮肤癣菌的有价值的方法。图 4参 5　 (刘彤 )2 0 0 2 2 836　治癣醋剂治疗手足癣疗效观察 /吴建欣 (江西赣州市中医院 )∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 2 ,16(3) .- 192治疗组 12 0例 ,以黄芩、黄柏、苦参、百部、白藓皮、川楝子、石榴皮、皂角刺、枯矾各 2 0 g加食醋 10 0 0～15 0 0 ml制成醋剂 ,浸泡患处 1次 / d,每次 2 0...     

真菌病

20 0 3 0 679　耐特比萘芬的白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因开放读框的克隆及序列分析 /刘伟 (北京大学一院皮肤科 )…∥北京大学学报 . 2 0 0 2 ,3 4(6) . 73 5～ 73 6从 1例病程 2 4年以上 ,用过多种药物治疗的慢性粘膜皮肤念珠菌病患者口腔中分离到一株白念珠菌BMU 0 0 65 7,药物敏感性试验发现特比萘芬对其MIC >2 5 6mg/L ,表现出该分离株对特比萘芬显著耐药的特性。为探讨该分离株对特比萘芬发生耐药的可能机制 ,将其作用靶酶 ,角鲨烯环氧化酶基因 (ERG1 )的开放读框进行克隆 ,并作序列分析。结果该读框有 1 0处发生改变 ,分别引起相…     

皮肤科学基础

20 0 2 1386　酪氨酸酶相关蛋白 - 1的基因克隆、表达及纯化 /李春英 (四军大西京医院皮肤科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 1,15 (6) .- 368～ 370根据自行设计引物 ,通过 RT- PCR法扩增TRP- 1编码基因 ,并将目的基因片段克隆至PUC19载体中 ,酶切鉴定并测序。再亚克隆至GST融合表达载体 PGEX- 4 T - 1,转化大肠杆菌 ,TPTG诱导表达 TRP- 1/ GST融合蛋白 ,分析鉴定其可溶性 ,并用谷氨酰胺树脂纯化表达蛋白。结果 1从培养的人黑素细胞中扩增出的编码TRP- 1c DNA序列与文献报告一致。 2构建的GST融合表达载体 PGEX- 4 T- 1/ TRP- 1经诱导可表达 TRP- 1/ GST融合蛋白 ,后者纯化结果较好。图 5参 5　 (马慧群 )2 0 0 2 1387　酪氨酸蛋白激酶抑制剂对正常人角质形成细胞增殖的影响 /李承新 (四军大西京医院全军皮肤性病中心 )…∥第四军医大学学报 .- 2 0 0 1,2 2 (2 2 ) .- 2 0 2 0～ 2 0 2 3将不同浓度的酪氨酸蛋白激酶抑制剂 (GST)作用于体外培...     

真菌病

20 0 4 0 779　唑类药物体外诱导白念珠菌耐药的初步研究/宋晓静(浙大一附院皮肤科)…∥临床皮肤科杂志.- 2 0 0 3,32 (10 ) .- 575～576将质控株及敏感白念珠菌在含不同抑菌浓度的氟康唑(FCZ)、酮康唑(K CZ)、伊曲康唑(ICZ)的液体培养基中进行人工传代诱导耐药。结果白念珠菌在高浓度的唑类药物培养基中能诱导耐药,且为交叉耐药,而在低浓度中经传2 0代仍不能诱导耐药,诱导后的耐药菌株在无药物培养基中传代可恢复敏感性。提示唑类药物能诱导耐药白念珠菌的产生,但与诱导药物的浓度有关,且为不稳定耐药。(汤亚娥)2 0 0 4 0 780　白念珠…     

荨麻疹

20 0 0 2 4 4 8　慢性荨麻疹患者血清 ECP水平的测定 /李大宁 (上海铁道大学医学院附属甘泉医院皮肤科 )∥临床皮肤科杂志 .- 1999,2 8(5) .- 2 80～ 2 81采用法玛西亚 CAP ECP荧光酶标法检测系统测定 30例患者血清中嗜酸细胞阳离子蛋白 (ECP)水平 ,结果显示患者血清 ECP值较正常对照为高 ,两者有显著差异。参 4　 (武萌 )2 0 0 0 2 4 4 9　慢性荨麻疹血清屋尘螨、蟑螂特异性 Ig E抗体检测及意义 /王晓霞 (佛山市一院皮肤科 )…∥临床皮肤科杂志 .- 2 0 0 0 ,2 9(1) .- 2 1～ 2 2采用 Pharmacia CAP变应原检测系统对 54例慢性荨麻…     

用内转录间隔区通用引物的聚合酶链反应快速测定念珠菌菌种

目的：应用内转录间隔区（ITS）通用引物建立一种较为快速、简便的检测和鉴定念珠菌的聚合酶链反应（PCR）方法。方法：采用两对ITS通用引物ITS1、ITS4和ITS86、ITS4对7种（8株）念珠菌菌县液进行PCR扩增。结果：两对引物3.5h内对7种念珠菌的菌县液扩增出种特异的DNA多带，而第2对引物其种特异性更强。结论：采用ITS通用引物结合快速PCR检测法，可快速、简便、特异、敏感地检测出念珠菌，并能同时鉴定到种，这将在今后念珠菌病的早期诊断和治疗上有潜在的应用价值。     

遗传性皮肤病

20 0 32 587　表皮松解性角化过度型鱼鳞病二例及其基因突变的研究 /孙秀坤 (北大一院皮肤科 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 3,36 ( 4) .- 185～ 188提取患者外周血 DN A,采用 PCR 及 DNA 直接测序方法检测患者皮损角蛋白 10 ( K 10 )及角蛋白 1( K 1)基因突变 ;等位基因特异性引物 PCR及限制性内切酶片段长度多态性方法筛选正常人群中该等位基因频率。结果 :2例患者均存在 K1或K10基因的综合点突变 ,即 K10基因第 2 14 0位G→ A ,K 1基因第 4 2 2 6位 G→ A ,分别导致 K 10第 156位的精氨酸变为组氨酸 ( R 156 H )及 K 1第4 77…     

真菌病

20 0 10 0 86　 PCR方法快速检测一些常见医学真菌 /洪少林 (北京医大三院皮肤科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 0 ,14 ( 4 ) .- 2 2 7～ 2 2 9选取真菌 18Sr DNA基因序列中一对引物 ,对 12种真菌株进行 PCR扩增 ,均扩增出长约 310 bp产物。对一些临床常见细菌扩增均无反应。对酵母样菌、白念珠菌和新生隐球菌计数 ,其最小检出量均为菌体数达每个反应体系 10 3 ( CFU)。本实验过程总需时 36 h以内 ,而血培养需 2～ 5d,且仅 15%～ 50 %播散性念珠菌病 ( DC)患者能检出致病菌 ,因此 ,本法可快速特异性检测一些常见医学真菌。由于 50…     

病毒性皮肤病

20 0 4 2 0 31　体外 6种疱疹类病毒 DNA扩增及其基因分型 /董关萍 (浙江大学医学院儿童医院 )… //中华传染病杂志 .- 2 0 0 4 ,2 2 (1) .- 38～ 4 1在疱疹类病毒高度同源序列 DN A多聚酶基因区内设计两对通用引物 ,分别对单纯疱疹病毒 I型和 II型、受泼斯坦 -巴尔病毒、人类巨细胞病毒、水痘 -带状疱疹病毒和人类疱疹病毒 6型共 6种病毒进行基因扩增 ,再用 Bam HI和 Bst U I两种限制性内切酶消化扩增产物 ,成功地区分了 6种疱疹类病毒的基因型。由于其敏感、特异、快速、准确的特点 ,可作为早期、快速诊断疱疹类病毒感染的有效手段…     

结缔组织疾病

20 0 2 1690　 SL E患者抗 UIRNP抗体与 HL A- 类基因的相关性分析 /李晓岚 (昆明医学院二附院皮肤科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 2 ,16(1) .- 4～ 5采用多聚酶链反应 -序列特异性引物 (PCR-SSP)技术对 63例云南汉族 SL E患者进行 DRB1、DQA1、DQB1基因分型。结果表明 ,15例 UIRNP抗体阳性患者中 DQA1* 0 10 1等位基因频率、DR15 - DQA1* 0 10 2 - DQB1* 0 60 1单体型频率显著升高。提示不同种族 SL E患者自身抗体与 HL A的关联仍存在少数等位基因的差异。表 1参 2　(张孝友 )2 0 0 2 1691　 SL E患者血清抗心磷脂抗体和抗﹀2 糖蛋白 抗体水平及关系 /熊艳 (华中科大同济医学院协和医院检验科 )…∥临床皮肤科杂志 .- 2 0 0 1,30 (6) .- 35 1～ 35 2采集活动期 SLE患者血标本 35例 ,采用ELISA法测定血清中抗心磷脂抗体 (ACA)、抗 β2糖蛋白 (β2 GP )抗体水平。结果显示 SLE患者两种抗体明显升高 ,ACA 阳性...     

病毒性皮肤病

20 0 2 2 76 4　带状疱疹误诊为腰椎间盘突出症继发坐骨神经痛 1例 /李锐 (陕西省医院老年神经科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 2 ,16 (3) .- 2 0 42 0 0 2 2 76 5　带状疱疹累及脊髓运动神经 1例 /彭光辉(北京首钢总医院皮肤科 )…∥临床皮肤科杂志 .-2 0 0 2 ,31(3) .- 2 0 32 0 0 2 2 76 6　带状疱疹发疹前驱期的诊断与鉴别诊断(综述 ) /李彦恒 (吉林抚松县医院 )∥医学理论与实践 .- 2 0 0 2 ,15 (4) .- 411对带状疱疹发疹前驱期与三叉神经痛、胸膜炎、冠心病、肋间神经痛、急性胰腺炎、胆囊炎、肝炎、急性阑尾炎和坐骨神经痛的鉴别要点进行了简要综述。 (马勇 )2 0 0 2 2 76 7　喷昔洛韦乳膏治疗带状疱疹 36例临床观察 /潘纯曲 (重庆市涪陵中心医院皮肤科 )∥临床皮肤科杂志 .- 2 0 0 2 ,31(3) .- 2 0 42 0 0 2 2 76 8　乌体林斯治疗带状疱疹疗效分析 /刘子华(辽宁朝阳市中心医院皮肤科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 2 ,16 (3) .-...     

大疱及疱疹性皮肤病

20 0 4 16 5 1　天疱疮、类天疱疮及皮肌炎合并恶性肿瘤临床分析 /曾建英 (北京协和医院皮肤科 )… / /临床皮肤科杂志 .- 2 0 0 3,32 (6 ) .- 32 7～ 32 8分析 3种自身免疫性疾病合并恶性肿瘤发生与相关因素 ,其中天疱疮 92例 (6 .5 2 % )和类天疱疮 6 0例(10 % )的病程、皮肌炎 174例 (12 .0 7% )的年龄以及应用 MTX可能与肿瘤的发生相关。表 1参 7　 (刘斌 )2 0 0 4 16 5 2　头孢曲松钠等治疗泛发性大疱性脓疱疮 8例 /杨洪 (四川自贡市一院皮肤科 )… / /中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 3,17(4 ) .- 2 838例皮损均在 10 0个以上 ,均有典…     

PCR法扩增角鲨烯环氧化酶鉴定白念珠菌的研究

目的：通过扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,进行PCR来鉴定白念珠菌。方法：根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY^6的序列设计上游引物5‘－ATGAGTTCAGTTAAGTATG－3‘,编码^492NEIVR^496的序列设计下游引物5‘-CTATCTTACAATCTCGTTC-3‘,对白念珠菌ATCC11006,22株临床分离株,7株其它致病性念珠菌,8株致病性丝状真菌,1株新生隐球菌及1份人的基因组DNA进行了PCR扩增,并对PCR产物用酶切方法鉴定,结果：所有23株白念菌均可获得约1．5kb大小的PCR产物,16株其它致病性真菌及人的DNA标本均无扩增产物,PCR产物经BamHI酶切,产生两个大小分别约为1．0kb和500bp的片段。结论：利用设计的引物,扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,可以特异地鉴定白念珠菌。     

真菌病

20 0 4 0 0 91　从包皮龟头炎患者皮损处分离鉴定马拉色菌 /郭晓莉 (四川大学华西医院皮肤科 )…∥临床皮肤科杂志 .- 2 0 0 3,32 (7) .- 385～ 387从患处取材直接镜检见马拉色菌孢子和 (或 )菌丝的包皮龟头炎患者作为研究对象。用胶带法取材后分别接种在含菜子油的培养基及无放线菌酮的沙堡培养基分离菌种。依据生理生化和形态学特点及转种到科玛嘉显色培养基和米粉吐温80琼脂培养结果鉴定出马拉色菌和 (或 )念珠菌。结果 :81例患者中有 5 7例培养并鉴定出马拉色菌 (共 6 0株 ) ,其中糠秕马拉色菌 2 0株 ,合轴马拉色菌 18株 ,钝形马拉色菌 …     

皮肤科学基础

20 0 32 4 39　人源性抗角蛋白单链抗体的构建及表达 /李承新 (四军大西京医院皮肤科 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 3,36 ( 4) .- 181～ 184利用基因重组技术对从半合成噬菌体库中克隆的人源性抗角蛋白抗体 Fab片段进行改造 ,获得人源性抗角蛋白 Sc Fv片段 ,并进行 DN A序列分析 ,同时用 ELISA法鉴定 Sc Fv的抗原结合活性和特异性 ,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性及临床应用奠定了基础。图 2表 2参 8　 (贾泰元 )2 0 0 32 4 40　结合珠蛋白在正常人皮肤中的定位表达 /李萍 (中国医大一附院皮肤科 )…∥中华…     

种特异性引物鉴定申克孢子丝菌

目的 研究申克孢子丝菌的分子鉴定方法,为孢子丝菌感染的分子诊断奠定基础.方法 对22株申克孢子丝菌和12种12株暗色真菌临床分离株的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)进行聚合酶链反应扩增.对10株来源于中国不同地区及1株来源于美国的申克孢子丝菌的扩增产物测序并进行分析,以获得的ITS2区序列为靶序列设计出申克孢子丝菌的种特异性引物(SSP),并用该引物扩增全部受试菌株.结果 序列分析显示,申克孢子丝菌rDNA的ITS2区相当保守,特异性引物对22株申克孢子丝菌可扩增出一条300bp的片段,其他受试菌株均为阴性.结论 应用设计出的种特异性引物,结合PCR方法,鉴定申克孢子丝菌特异、敏感、可靠,可用于临床诊断.     

真菌病

20 0 0 3661　烟台市海洋作业人群浅部皮肤真菌病与近海环境相关因素的调查研究 /成淑闻 (烟台市烟台山医院 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 0 ,14( 3) .- 182在烟台市有关海洋作业单位普查 4 82 0人次 ,检出 5.93%患浅部皮肤真菌病 ,而非海洋作业人员中为2 .96% ,差异显著。调查皮肤科门诊患者 30 0 0 2人次 ,6.75%患皮肤癣菌病。致病菌以红色毛癣菌为主 ,石膏样毛癣菌、酵母菌、念珠菌属次之。近海环境物主要携带念珠菌属。表 2参 6　 (刘彤 )2 0 0 0 3662　伊曲康唑治疗体、股癣疗效观察 /金学洙(白求恩医大二院皮肤科 )…∥临床皮肤…     

药物反应

20 0 4 2 2 19　复方倍他米松钠注射液的不良反应调查 /蒙秉新 (海南省医院皮肤科 )… //临床皮肤科杂志 .-2 0 0 3,32 (9) .- 54 2共对 370例应用该药的患者进行调查。结果显示 ,无任何不良反应者 334例 ,占 90 .2 7% ;原有胃痛史并服雷尼替丁者 54例 ,用药后仍有胃部不适 14例 ,无胃痛史而用药后出现胃部不适者 9例 ;体重增加 4例 ,女性月经期延长 4例 ,血压升高、耳鸣伴恶心、睡眠差、四肢躯干明显多毛、性功能下降各 1例。 (汤亚娥 )2 0 0 4 2 2 2 0　别嘌醇药疹和青霉素类药疹比较分析 /张思平 (安徽省立医院皮肤科 )… //临床皮肤科杂…