骨及钙化组织脱钙过度后的补救

骨及钙化组织的石蜡切片,组织在充分固定后,应进行脱钙处理,一般先经有机酸或无机酸稀溶液浸渍脱钙,再用流水冲洗24h,除去组织内的酸,然后才能按常规脱水、浸蜡、切片、HE染色.     

骨髓活检组织前脱钙法与后脱钙法的体会

鉴于骨髓组织含有大量的钙盐而非常坚硬致密,不能直接进行石蜡制片.需经过脱钙处理后,才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色[1].一种好的脱钙方法能够提高骨髓活检组织的制片质量,提高HE染色和免疫组化染色的效果,更好地满足临床病理的精准诊断.目前常用的方法是前脱钙法即传统脱钙法:在脱水前采用4％盐酸甲醛溶液先行脱...     

改良骨及钙化组织快速脱钙法在病理诊断中的应用

目的:探讨骨及钙化组织改良快速脱钙法在病理诊断中的应用。方法:回顾性分析31例骨肿瘤患者需脱钙处理的骨组织病理切片资料。结果:改良骨及钙化组织快速脱钙法脱钙时间较常规脱钙法缩短48 h,切片厚薄均匀,平坦完整,结构清晰,着色均匀。结论:对骨及钙化组织脱钙方法进行改良,可缩短骨及钙化组织的制片时间、并制出优良切片。     

脱钙处理对骨及其软组织免疫细胞化学染色的影响

目的 探讨低温微波硝酸脱钙方法对骨及软组织抗原活性的影响。方法 根据实验条件分为４组：低温微波１０℃组（Ｉ组）;冰箱４０℃（Ⅱ组）;室温２０℃（Ⅲ组）;及冰箱３７℃（Ⅳ组）。分别使用５％硝酸、甲酸－甲醛混合液、２０％甲酸液、Ｊｅｎｋｉｎｓ液、１０％乙烯二胺四乙酸钠（ＥＤＴＡ）作为脱钙液。应用免疫组织化学ＬＳＡＢ染色和图像分析技术检测ＡＮＰ,５－ＨＴ,Ｓ－１００,ＮＦ,ＧＦＡＰ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的染     

改良非脱钙骨塑料包埋、切片、染色方法

经典非脱钙骨甲基丙烯酸甲酯(MMA)包埋、切片、染色方法，步骤较烦琐，所需专用切片机及切片刀价格昂贵，不利于普及。我们用甲基丙烯酸羟乙基酯(GMA)及甲基丙烯酸丁酯(BMA)混合行非脱钙骨包埋、切片、染色，相对简单易行，取得了比较理想的结果，现报告如下。     

脱钙骨/聚乳酸重组人工骨的体内生物学特性

背景:前期实验证实脱钙骨/聚乳酸重组人工骨不仅孔隙率、孔径、机械强度等性能符合人工骨材料的要求,并且结合了两种材料的优势,具有明显的促进细胞贴附、增殖作用.目的:进一步探讨脱钙骨/聚乳酸重组人工骨在体内的生物相容性、降解情况及成骨特点,评价其性能.方法:将脱钙骨/聚乳酸重组人工骨随机植入成年新西兰白兔1.5 cm的桡骨缺损及一侧臀肌内,并设立不植入任何材料的空白对照组.观察脱钙骨/聚乳酸重组人工骨植入后动物局部反应,检测血钙值;植入后6,8,12,16周取骨缺损处标本作X射线、骨矿含量、大体标本及组织形态学观察,臀肌处标本仅作组织形态学观察,分析不同时期组织反应、骨缺损修复及材料降解情况.结果与结论:脱钙骨/聚乳酸重组人工骨植入后无明显的局部不良反应,血钙值无明显变化;骨缺损内骨矿含量在植入6～16周内升高幅度明显高于空白对照组;X射线、大体标本及组织形态学观察显示,脱钙骨/聚乳酸重组人工骨的成骨方式主要是骨传导成骨,至植入后16周时骨缺损基本修复,而空白对照骨缺损断端仅有少量骨修复,形成骨不连;脱钙骨/聚乳酸重组人工骨植入后即开始其降解过程,12周以后材料周围出现较多吞噬有材料颗粒的巨噬细胞和多核巨细胞,16周时仍有部分材料未降解吸收.结果证实脱钙骨/聚乳酸重组人工骨具备良好的生物相容性和骨传导成骨能力,可以在体内逐渐发生生物降解.     

部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入形成软骨或骨的可能性实验

背景：采用理化技术制备的天然生物骨衍生材料具有天然网状孔隙系统，具有良好的细胞相容性，有利于成骨细胞的附着及生长，可用于成骨细胞的支架材料。 目的：观察部分去蛋白脱钙骨作为成骨细胞支架材料体内植入的成骨作用。设计：随机对照实验。 单位：昆明医学院第一附属医院中心实验室。 材料：部分去蛋白脱钙骨；人胎骨膜成骨细胞；4周龄BALB／c裸小鼠20只，体质量25～28g，雌雄不限。 方法：实验于2003—01／06在昆明医学院第一附属医院中心实验室完成。将部分去蛋白脱钙骨与人胎骨膜成骨细胞体外复合培养1周后植入裸鼠体内，每只裸鼠共植4块材料，脊柱左侧植入材料与细胞的复合物，作为实验侧，右侧单纯植入材料，作为空白对照侧。于术后4周及8周取出材料行碱性磷酸酶活性及常规组织学检查。 主要观察指标：裸鼠植入材料取出后行一般观察、碱性磷酸酶活性及常规组织学检查。 结果：20只裸鼠均进入结果分析。①裸鼠植入材料一般观察：植入材料的周围组织未见坏死、化脓、积液等迹象，材料内有软组织长入，包裹。②碱性磷酸酶活性测定结果：部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入8周时碱性磷酸酶活性比4周时强[（22，854&;#177;6．018），（11．286&;#177;4．268）nkat／g]，并比单纯植入的材料强得多[（1．217&;#177;0．083），（2．717&;#177;0．583）nkat／g]。③常规组织学检查结果：实验侧4周见有软骨形成，8周时部分软骨形成骨组织，并见有髓腔，且软骨或新骨形成增多，而对照侧未见软骨或骨形成。 结论：部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入后能形成软骨或骨．并随植入时间的延长，软骨或新骨形成增多；部分去蛋白脱钙骨可用于成骨细胞的支架材料。     

环孢素A影响脱钙骨基质诱导成骨的组织学观察

背景:脱钙骨可用于成骨细胞的支架材料,机体组织对脱钙骨有一定的免疫排斥反应.目的:观察环孢素A影响脱钙骨诱导成骨的组织学变化,探讨脱钙骨成为理想的骨移植材料的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/2008 04在大连医科大学附属_二院实验中心完成(国家分子生物学三级实验室).材料:用16只新西兰大白兔,分为4组,同种脱钙骨对照组和实验组,异种脱钙骨实验组和对照组,每组4只.环孢素注射液为北京诺华制药有限公司产品.方法:制备脱钙骨,取白兔的脱钙骨命名为同种脱钙骨,取自犬的脱钙骨命名为异种脱钙骨.于兔的脊旁肌肉内植入相应脱钙骨制备物,每侧2处.实验组每人肌注含环孢素A的实验液2 mg/kg,对照组肌注对照液2 mg/kg,共4周.植入物标本进行苏木精-伊红染色,光镜观察.主要观察指标:各组脱钙骨组织学观察结果.结果:同种脱钙骨在所有动物中均引起了骨形成.环孢素A并没有改变同种脱钙骨诱导成骨的形态学.异种脱钙骨对照组在第4周时没有骨或软骨细胞生成.异种脱钙骨环孢素A实验组在第4周时有软骨、骨形成.结论:环孢素A并没有改变同种脱钙骨诱导成骨的形态学.免疫反应抑制了异种脱钙骨的成骨,环孢素A可抵消这种抑制作用,环孢素A可提高异种脱钙骨治疗骨不连或骨缺损的成功率.     

生物硬组织透射电镜样品EDTA脱钙制样法

生物硬组织透射电镜样品ＥＤＴＡ脱钙制样法朱世柱，张友云，陈锡昌，皮昕，杜昌连，李春芳，孟杨，王纪透射电镜是形态学研究的主要方法之一，它在生物软组织的研究中得到了广泛应用。而生物硬组织因硬度大，很难超薄切片，防碍了对它的观察，因此人们一直在探索其脱钙制...     

组织工程化骨修复材料的弹性模量测定及其临床意义

目的 对组织工程化骨形成蛋白－脱钙骨基质颗粒－骨水泥复合材料进行弹性模量测定并探讨其临床意义。方法 提取牛骨形成蛋白（bBMP)并进行成骨诱导活性测定，制备人的异体脱钙骨基质颗粒（DBM），将bBMP与DBM以1：25质量比复合后，再与骨水尼（BC）按）：10，4：6，5：5，6：4和7．5：2．5的质量比进行复合，对所得的骨形成－脱钙骨基质颗粒－骨水泥复合材料进行弹性模量测定，并与正常人成国性的股骨，股骨下端松质骨的弹性模量相比较。结果 对测定结果进行统计学分析，含bBMP-DBM复合物75％的复合材料和弹性模量与正常成年男性股骨下端松质骨的弹性模量差异无显著性意义，P＜0．01，其余各组两两比较均差异有显著性意义，P＞0．01。结论 含bBMP-DBM复合物75％的复合材料与成年男性股骨下端松质骨的弹性模量相接近，用其修复靠近关节面附近骨缺损可有效的防止关节的退行性变。     

大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。适用组织化学、免疫组化等技术的染色。大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10％硝酸和乙二胺四乙酸二钠（EDTA）复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。     

大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一.它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的.适用组织化学、免疫组化等技术的染色.大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败.现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色.对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果.     

部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入形成软骨或骨的可能性实验

背景采用理化技术制备的天然生物骨衍生材料具有天然网状孔隙系统,具有良好的细胞相容性,有利于成骨细胞的附着及生长,可用于成骨细胞的支架材料.目的观察部分去蛋白脱钙骨作为成骨细胞支架材料体内植入的成骨作用.设计随机对照实验.单位昆明医学院第一附属医院中心实验室.材料部分去蛋白脱钙骨;人胎骨膜成骨细胞;4周龄BALB/c裸小鼠20只,体质量25～28 g,雌雄不限.方法实验于2003-01/06在昆明医学院第一附属医院中心实验室完成.将部分去蛋白脱钙骨与人胎骨膜成骨细胞体外复合培养1周后植入裸鼠体内,每只裸鼠共植4块材料,脊柱左侧植入材料与细胞的复合物,作为实验侧,右侧单纯植入材料,作为空白对照侧.于术后4周及8周取出材料行碱性磷酸酶活性及常规组织学检查.主要观察指标裸鼠植入材料取出后行一般观察、碱性磷酸酶活性及常规组织学检查.结果20只裸鼠均进入结果分析.①裸鼠植入材料一般观察植入材料的周围组织未见坏死、化脓、积液等迹象,材料内有软组织长入、包裹.②碱性磷酸酶活性测定结果部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入8周时碱性磷酸酶活性比4周时强[(22.854±6.018),(11.286±4.268)nkat/g],并比单纯植入的材料强得多[(1.217±0.083),(2.717±0.583)nkat/g].③常规组织学检查结果实验侧4周见有软骨形成,8周时部分软骨形成骨组织,并见有髓腔,且软骨或新骨形成增多,而对照侧未见软骨或骨形成.结论部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入后能形成软骨或骨,并随植入时间的延长,软骨或新骨形成增多;部分去蛋白脱钙骨可用于成骨细胞的支架材料.     

改良脱钙液在骨骼组织切片中的应用

在日常病理工作中,骨骼组织做病理切片之前,要进行脱钙处理.通常用的脱钙液有硝酸、盐酸、甲酸为主配制的脱钙液,还有铬酸和螯合剂配制的脱钙液[1].现介绍一种对脱钙组织损伤较小而且配制简便的脱钙液,固定脱钙组织时不需要配制专用固定液,只用10％中性甲醛液即可,方便了脱钙组织和其他组织共同进行固定、脱水,经过这种脱钙液脱钙后的组织制作出的切片完整,染色效果好,组织形态结构清晰,是一种适合于日常骨骼组织病理制片工作的脱钙液.     

β-磷酸三钙脱有机质骨的成骨性能

背景：人工发孔方法制备的β-磷酸三钙材料在孔隙结构上与天然松质骨的孔隙结构存在巨大的差异,进而影响了其本身的生物学性能。目的：采用体内成骨试验方法验证牛松质骨煅烧制备的β-磷酸三钙脱有机质骨的体内成骨活性。设计、时间及地点：对比观察,动物体内实验,于2005-07/2006-10在解放军总医院骨科研究所完成。材料：将健康牛松质骨脱去有机成分后,经2次高温煅烧方法制备形成β-磷酸三钙脱有机质骨标准试件,经辐照灭菌后备用。方法：健康新西兰大白兔12只,按4,8,12周3个取材时间分成3组,每组4只,将β-磷酸三钙脱有机质骨4个试件随机植入上述3组动物一侧下肢的骨缺损中,同时在每只兔另一侧下肢制备相同骨缺损模型,不植入任何材料,为空白对照。主要观察指标：于材料植入后1d以及4,8,12周分别拍摄兔膝关节正侧位X射线片,观察缺损部位新骨形成情况,并与空白对照组进行对比。结果：随着β-磷酸三钙脱有机质骨植入时间的延长,材料周边及中心部位逐渐有新生骨组织长入,但植入的材料无明显降解吸收,新骨长入量有限。空白对照至12周仅缺损周围有少量新骨生成。结论：β-磷酸三钙脱有机质骨具有体内成骨活性,但降解缓慢影响新骨的替代和改建过程。     

阿霉素异体脱钙骨基质骨粒骨水泥缓释体的制备及体外试验

目的：研制阿霉素异体脱钙骨基质骨粒骨水泥缓释体，并研究分析其体外药物缓释性能及对OS－9001骨肉瘤细胞的抑制能力，方法：按Urist等的方法制备异异体脱钙骨基质骨粒，通过冻干，真空吸附等处理，将阿霉素载入其中并与骨水泥按1：1比例复合，制得阿霉素异体钙骨基质骨粒骨水泥缓释体，对该缓释体进行体外药物释放及其浸出液的体外抑瘤试验。结果：该缓释体第1天释放量为总含量的19．23％，其第1，20，40及70天的浸出液对OS－9901骨肉瘤细胞的抑制率分别为64．27％，41．68％，28．71％，及24．32％，结论：该缓释体具有良好的缓释功能，在70d内对OS－9901骨肉瘤细胞维持良好的有效的抑制率。     

改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较

目的:常规的脱钙骨切片制作方法在脱钙、组织结构完整性等方面存在一定的缺陷.比较用改良后方法制作的脱钙骨组织切片与常规制作的脱钙骨组织切片质量的差异.方法:①实验材料:实验于2004-12/2007-12在广东医学院组织和胚胎学教研室及药理教研室完成.SPF级雌性SD大鼠10只,鼠龄6个月.②实验方法:取大鼠左右股骨和胫骨标本各20个,分为两组,左股骨和右胫骨为实验组,右股骨和左胫骨为对照组.实验组经过常规同定,而后应用改良脱钙液(甲酸10 mL、浓盐酸(相对密度1.19)8 mL、氯化铝3 g、体积分数为0.4的甲醛20mL、冰乙酸3mL,加生理盐水至总体积200mL)脱钙、脱水、氯仿透明、包埋时间延长、染色、封固和切片;对照组进行常规固定、脱钙、脱水、透明、包埋、染色、封固和切片.③实验评估:比较两组切片的质量和效果.结果:①实验组大鼠的脱钙骨切片与对照组比较,标本脱钙时间缩短,脱水时间变化不大,而透明效果明显改善.②与对照组比较,实验组骨组织切片标本薄均匀、平坦完整,脱蜡完整均匀.染色成功的切片,骨与骨周围的组织形态保持完整.结论:改良的脱钙大鼠股骨和胫骨石蜡切片制作方法能使标本脱钙更彻底、结构更清晰、组织完整性更好.     

异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥修复兔股骨粉碎性骨折

目的探讨异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥修复严重粉碎性骨折的效果。方法制造兔右股骨粉碎性骨折的动物模型,a组用异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥并表面贴附自体骨渣进行修复;b组用异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥进行修复;c组单纯植入骨水泥进行修复作为对照组。分别于术后不同时间行X射线照相、99mTc-MDP骨扫描和组织学观察。结果a组和b组4周开始形成骨痂,12周骨痂最丰富,24周复合材料与宿主骨边缘模糊,边缘部分的异体脱钙骨基质颗粒被新生骨替代,并与宿主骨融合。a组较b组骨痂形成快。99mTc-MDP骨扫描计数a组大于b组,b组大于c组(P<0.01)。结论异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥易塑形,并具有生物学活性,能修复粉碎性骨折,表面贴附自体骨渣进行修复效果更为理想。     

脱钙骨基质治疗长骨骨折延迟愈合及骨不连的远期临床观察

目的 探讨脱钙骨基质治疗长骨骨折延迟愈合和骨不连的远期疗效。方法 从1984-1994年用脱钙骨基质治疗长骨骨延迟愈合、骨不连共96例，其中采用手术植入治疗骨不连38例，经皮注射治疗骨折延迟愈合37例及骨不连2l例。结果 96例患者均获随访，随访时间4-16年，平均7．5年。脱钙骨注射治疗骨折延迟愈合的37例中，骨折愈合35例，2例胫骨骨折未愈合，愈合率94．6％：脱钙骨注射治疗骨折骨不连2l例中，骨折愈合17例，4例未发生愈合，其中胫骨3例、肱骨1例，愈合率81．0％，愈合时间3-8个月，平均4．5个月。脱钙骨基质移植治疗骨不连38例中，36例愈合，2例胫骨下1／3骨折未发生愈合，愈合率94．7％。结论 脱钙骨基质无论是采用注射移植还是手术方法移植，都能取得较好的效果，甚至达到自体骨移植的疗效。同时，脱钙骨基质的制备经过脱水、脱脂、脱钙、照射消毒等处理，比其他骨移植安全，免疫性小，可以长期保存，便于平时和战时应用。