失血性休克缺血-再灌注损伤家兔肺泡巨噬细胞中IκK-β/NF-κB改变的实验研究

目的 观察失血性休克缺血-再灌注(I/R)损伤时兔肺泡巨噬细胞(AM)中I-κB激酶-β/核因子-κB (IκK-β/NF-κB)信号通路的改变,探讨肺部炎症损伤的细胞分子基础.方法 建立失血性休克I/R家兔模型,分离、培养AM,用原位杂交方法检测AM中IκK-β的mRNA表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测AM中NF-κB的活性和AM培养上清液中TNF-α、IL-6的含量.病理学光镜观察肺组织的炎症损害.结果 模型组IκK-β、NF-κB、TNF-α、IL-6指标较对照组显著升高(P＜0.01);I/R损伤动物肺组织呈现明显炎症病理改变.结论 AM是I/R损伤炎症信号通路的重要细胞基础;细胞内IκK-β激活/NF-κB核移位/细胞因子产生是I/R肺组织炎症病理损伤的重要分子机制.     

还原型谷胱甘肽对肝缺血再灌注损伤核因子-κB影响的实验研究

 目的探讨核因子-κB在肝缺血再灌注损伤中的表达和还原型谷胱甘肽的保护作用.方法将90只健康家兔随机分为对照组、肝缺血再灌注组和还原型谷胱甘肽保护组,制备肝缺血再灌注损伤模型.观察三组肝组织中核因子-κB的表达、血清ALT、丙二醛(MDA)及血浆TNF-α含量和肝脏的病理变化.结果正常肝组织中仅偶见肝细胞核因子-κB的表达,肝缺血再灌注损伤时,核因子-κB的表达明显增强,ALT、MDA、TNF-α含量显著升高(P＜0.01),肝脏出现坏死,大量炎性细胞浸润;使用还原型谷胱甘肽后,上述指标的异常变化均明显减轻,其差异有显著性意义(P＜0.01或P＜0.05).结论核因子-κB参与了肝缺血再灌注损伤,还原型谷胱甘肽能抑制其表达,对肝缺血再灌注损伤有积极的保护作用.     

内毒素诱导肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的变化

目的　观察内毒素(LPS)体外刺激诱发肺泡巨噬细胞(PAM)中NF κB信号通路的变化 ,探讨急性肺损伤 (ALI)的分子病理机制。方法　用原位杂交、EMSA及ELISA方法 ,检测LPS刺激后 0、1/ 4、1/ 2、1、2、4h各时相点PAM中Iκ B激酶 (IKK β)mRNA表达、NF κB核移位以及IκB α降解和TNF α分泌的变化。结果　IKK βmRNA表达在LPS刺激后 1/ 4h开始升高 ,1/ 2h达高峰 ,1h后逐渐下降 ;IκB α水平恰好与IKK βmRNA对应点变化幅度相反 ;NF κB的活性于 1/ 4h开始升高 ,1h达峰值 ,2h后逐渐下降 ;TNF α的含量 1/ 2h开始升高 ,1h达峰值 ,2～ 4h逐渐恢复至刺激前水平。结论　IKK β激活 /IκB α降解 /NF κB活化 /TNF α合成的转导通路在LPS介导ALI的病理机制中发挥了重要作用     

肝缺血再灌注损伤中重组人促红细胞生成素对核因子-κB活化的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对核因子(NF)-κB活化的影响在肝缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法制作大鼠部分肝I/R模型,分为:假手术组(A组),肝缺血90 min组(B组),肝缺血90 min,再灌注120 min组(C组),肝缺血90 min,再灌注120min,加重组人促红细胞生成素(建模前1、3 d及5 d给予rhEPO100 U/kg)组(D组)。光镜观察肝脏组织学改变,测定血清肝酶学水平,用Western blot技术检测肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65表达,用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果A组肝细胞索排列有序,肝细胞形态正常;B组肝小叶结构紊乱,肝血窦和中央静脉有轻度淤血,内皮细胞和肝细胞水肿变性;C组肝细胞坏死较明显,D组上述改变明显减轻。和C组相比,D组血清肝酶学指标、NF-κB p65和TNF-α的表达水平明显下降,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 重组人促红细胞生成素能抑制肝脏NF-κB的活化,对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用。     

肝脏缺血再灌注合并内毒素血症损伤中NF-κB的作用

目的 :探讨NF -κB在肝脏缺血再灌注并内毒素血症 (HIRE)损伤中的作用。方法 :Wister大鼠随机分为 :正常对照组 ;HIRE组 ;PDTC保护组 (HIRE +PDTC)。HIRE组肝左叶及中叶之入肝血流阻断 6 0min后再灌注 ,同时静脉注射LPS2 .5mg·kg-1;HIRE +PDTC组先静脉注射PDTC12 0 (mg·kg-1)后立即致伤 ;正常对照组仅显露肝脏左叶及中叶之肝动脉和门静脉 ,不阻断。分别采用EMSA法及赖氏法检测再灌注后 1,3,6 ,12hNF -κB活性及血浆中ALT含量。结果 :损伤后NF -κB结合活性明显升高 ,并于再灌注后 3h达到高峰 ,同时血浆中ALT含量亦明显升高 ,PDTC保护组NF -κB活性减弱 ,ALT水平降低。结论 :后NF -κB的结合活性与HIRE时肝脏损伤程度有直接关系。     

肝脏移植再灌注损伤早期NF-κB活性的影响及意义

目的观察肝脏移植后再灌注早期血液核转录因子-κB(NF-κB)活性、TNF-α、肝酶学指标的关系,探讨再灌注早期再灌注损伤的机制。方法对20例肝硬化晚期病人(实验组)接受肝移植术前1h,供肝恢复血供后1、2、4及6h抽取患者外周血进行肝酶学检查,用Westernblot技术检测外周血中NF-κBP65表达,用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定外周血中TNF-α表达水平,同时与10例健康成人(对照组)外周血肝酶学指标、NF-кBP65和TNF-α水平对比。结果肝移植术后早期外周血肝酶学指标在4h达到高峰,4h后呈现下降趋势,NF-κBP65和TNF-α的表达水平在2h达到峰值,且均高于移植术前和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NF-кBP65及TNF-α在肝移植术后早期高表达,同时伴有肝脏损伤酶学指标反应性上调,表示肝移植术后肝脏炎症通路活跃,可能和缺血后再灌注有关。     

犬肺栓塞缺血-再灌注损伤模型的实验研究

目的 建立一种良好的适合进行影像学实验研究的肺栓塞缺血-再灌注损伤动物模型.方法 健康杂种犬20只.采用Seldinger技术穿刺右颈内静脉,置鞘,经鞘置入Swan-Ganz导管,用其球囊栓塞犬的右肺下叶动脉4 h,然后再撤除球囊,使血流再灌注4 h,制成肺栓塞缺血-再灌注损伤模型.在缺血前、缺血4 h和再灌注4 h 3个时间点进行肺部CT扫描.最后处死犬,把双下叶肺组织送检病理和电镜检查.结果 成功制作20只犬的闭胸式活体肺栓塞缺血-再灌注损伤模型,CT、病理和电镜扫描显示均符合肺栓塞缺血-再灌注损伤的变化,即渗透性肺水肿.结论 犬的闭胸式活体肺栓塞缺血-再灌注损伤模型可真实模拟肺栓塞缺血-再灌注损伤的病理生理过程,是一种良好的适合进行影像学实验研究的动物模型.     

核因子-κB在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在肿瘤坏死因子-α表达中的作用

目的　观察内毒素 (LPS)刺激对大鼠肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophages,AM)中核因子 -κB(NF -κB)活性的影响 ,探讨NF -κB在LPS刺激大鼠AM表达肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)中的作用。　方法　体外观察LPS刺激大鼠AM中NF -κB活性的动态变化 ,应用圈套策略观察NF-κB在LPS刺激大鼠AM表达TNF -α中的作用。　结果　LPS刺激可使大鼠AM内NF -κB明显活化 ,并与LPS剂量正相关 ;抗体超迁移率实验结果显示p5 0、p6 5参与了NF -κB的活化 ;NF -κB的圈套硫代寡核苷酸 (S -ODN)能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF -α ,但不能完全阻断LPS诱导的TNF -α表达。　结论　NF -κB(p5 0 p6 5 )在LPS介导的炎症反应中发挥重要作用 ,LPS刺激大鼠AM表达TNF -α受NF -κB调控 ,但其他核转录因子可能也在TNF -α的表达中发挥重要作用。     

牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究牛磺酸(Taurine)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响并探讨其机制。方法采用大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)模型,将大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)和缺血再灌注加牛磺酸处理组(I/R+Taurine),观察缺血1 h再灌注24 h后,各组大鼠脑梗死体积、脑水含量及核因子кB(NF-кB)P65表达的变化。结果3组大鼠脑梗死体积百分比分别为0(、13.32±3.18)%(、9.21±2.24)%,与单纯缺血再灌注组比较,牛磺酸处理组脑梗死体积减少30.83%(P<0.05);脑水含量分别为(79.28±0.66)%,(82.46±0.94)%,(80.73±1.40)%,给药组脑水肿明显减轻(P<0.05);免疫组化染色结果显示牛磺酸抑制NF-кB的表达(P<0.05)。结论牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与其抑制NF-кB的激活,减轻神经细胞损害有关。     

严重创伤患者外周血清及内毒素对巨噬细胞核因子-κB活性的影响

目的 探讨严重多发伤患者外周血清及内毒素对巨噬细胞核因子-κB（NF-κB）活性的影响及其意义。方法 将带有荧光素酶报告基因的NF-κB重组质粒转染至小鼠巨噬细胞（RAW264．7）,24小时后用创伤或正常血清、创伤或正常血清＋内毒素（LPS）刺激该细胞6小时。本研究分4组：20例正常人外周血清为正常血清组,26例严重多发伤患者伤后1、3、7天外周血清为创伤血清组,同时设正常血清＋内毒素组,创伤血清＋内毒素组。用荧光素酶报告基因检测试剂盒分析荧光素酶报告基因（LUC）的活性。结果 各组荧光素酶报告基因活性的检测结果：创伤血清组、正常血清＋LPS组和创伤血清＋LPS组均显著高于正常血清组（P〈0．01）,创伤血清＋LPS组也显著高于创伤血清组和正常血清＋LPS组（P〈0．01）。创伤血清组和创伤血清＋内毒素组伤后1天的荧光素酶报告基因活性明显增高,伤后3天达高峰,伤后7天降低,但仍高于正常水平。创伤后并发器官损害病人的荧光素酶报告基因活性显著高于无器官损害者,其死亡率也较高。结论 严重多发伤患者外周血清及内毒素刺激可明显增强巨噬细胞NF-κB活性。荧光素酶报告基因活性检测可早期预测严重多发伤后的脏器功能不全或MODS。     

β-七叶皂甙钠对肢体缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察 β -七叶皂甙钠对肢体缺血再灌注损伤的保护作用。 方法 :用兔造成肢体缺血再灌注损伤动物模型。实验分对照组、缺血再灌注组和β -七叶皂甙钠组。取血浆测定丙二醛、肌酸磷酸激酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶含量。取骨骼肌标本测定丙二醛、髓过氧化酶活性、肌细胞线粒体钙含量和组织湿 /干重比值。结果 :缺血再灌注组与对照组比较 ,血浆和骨骼肌各项生化指标显著增高 (P <0 .0 1) ;使用 β -七叶皂甙钠后 ,血浆及骨骼肌各项测定指标较缺血再灌注组相比明显降低 (P<0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :β -七叶皂甙钠可减轻肢体缺血再灌注损伤 ,对骨骼肌有保护使用     

糖原合成酶激酶-3β抑制剂对肝热缺血再灌注损伤的保护

目的：研究糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）抑制剂TDZD-8对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用。方法：将大鼠随机分为4组：A组（假手术＋空白对照）、B组（假手术＋TDZD-8）、C组（I／R＋空白对照）和D组（I／R＋TDZD-8,实验组）。通过肝门阻断30min建立大鼠缺血再灌注模型,分别于再灌注后2、12h,每组各选取8只大鼠,测定血清ALT、AST含量,行肝组织形态学检测;TUNEL检测肝细胞凋亡,计算凋亡指数（AI）;采用实时定量PCR方法检测肝Bcl-2mRNA转录水平。结果：预先给予TDZD-8组在缺血再灌注期各时相点肝组织结构受损相应较轻,血清ALT、AST含量及凋亡指数均较低（P〈0．05）;Bcl-2mRNA则显著上升。结论：GSK-3β抑制剂可显著减轻肝脏缺血再灌注损伤程度,上调肝脏Bcl-2mRNA转录,抑制肝细胞凋亡。     

N-myc 下游调节基因-2在大鼠肠缺血再灌注肺损伤中的表达及其与 NF-κBp65的相关研究

目的通过建立大鼠肠缺血再灌注肺损伤(IIRI)模型,观察大鼠肠缺血再灌注肺损伤,肺组织中N-myc下游调节基因-2(NDRG2)表达水平的变化。方法 50只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)(其中根据缺血再灌注时间又分4个亚组),每组10只。缺血再灌注4个亚组选择缺血60min后分别再灌注30、60、120和180min,获取样本肺组织。术后样本行病理(HE)、湿干重比例(W/D)检测,免疫组化、Western-blot对NDRG2、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)检测,RT-PCR方法对NDRG2在mRNA水平含量进行检测,TUNEL法对凋亡细胞进行检测。结果缺血再灌注组与对照组比较,缺血再灌注组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D比值显著性升高(P<0.05),免疫组化显示NF-κBp65发生核转位现象,NF-κBp65蛋白水平表达明显升高(P<0.05),肺组织NDRG2在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低(P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可下调肺组织中NDRG2的表达,NDRG2可能通过对NF-κB通路进行调控,是导致缺血再灌注后肺损伤的靶向调控位点,对肠缺血再灌注肺损伤的大鼠起保护作用。     

N-myc 下游调节基因-2在大鼠肠缺血再灌注肺损伤中的表达及其与 NF-κBp65的相关研究

目的通过建立大鼠肠缺血再灌注肺损伤(IIRI)模型,观察大鼠肠缺血再灌注肺损伤,肺组织中N-myc下游调节基因-2(NDRG2)表达水平的变化.方法50只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)(其中根据缺血再灌注时间又分4个亚组),每组10只.缺血再灌注4个亚组选择缺血60min后分别再灌注30、60、120和180min,获取样本肺组织.术后样本行病理(HE)、湿干重比例(W/D)检测,免疫组化、Western-blot对NDRG2、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)检测,RT-PCR方法对NDRG2在mRNA水平含量进行检测,TUNEL法对凋亡细胞进行检测.结果缺血再灌注组与对照组比较,缺血再灌注组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D比值显著性升高(P<0.05),免疫组化显示NF-κBp65发生核转位现象,NF-κBp65蛋白水平表达明显升高(P<0.05),肺组织NDRG2在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低(P<0.05).结论缺血再灌注损伤可下调肺组织中NDRG2的表达,NDRG2可能通过对NF-κB通路进行调控,是导致缺血再灌注后肺损伤的靶向调控位点,对肠缺血再灌注肺损伤的大鼠起保护作用.     

纳洛酮对缺血／再灌注损伤心肌炎症介质生成的影响

目的本研究通过家兔心肌缺血再灌注动物模型观察纳洛酮对心肌缺血／再灌注损伤中白细胞介素-8（IL-8）及血栓素B2／6-酮-前列腺素F1α变化的影响。方法30只新西兰大白兔随机分为再灌注组（10只），结扎冠状动脉左前降支1h／开放4．5h；纳洛酮组（10只），于结扎同时静脉注射纳洛酮0．4mg·kg^-1；假手术组（10只）。测缺血／再灌注组和治疗组再灌注4．5h缺血区心肌IL-8含量及各组动脉结扎前及再灌注4．5h后的血清IL-8含量及血栓素B2、6-酮．前列腺素F1α含量。结果再灌注后，再灌注组缺血区心肌组织及血清IL-8含量明显升高，显著高于纳洛酮组和假手术组（P〈0．01）；再灌注组血浆血栓素B2含量及血栓素B2／6-酮-前列腺素F1α比值显著高于纳洛酮组和假手术组（P〈0．01）。结论纳洛酮可以抑制家兔心肌缺血／再灌注后炎症介质IL-8及血栓素B2的升高。     

高原肢体缺血再灌注损伤后血清酶谱及氧自由基改变的实验研究

在高原(海拔3700m)缺氧条件下,进行实验性肢体缺血再灌注损伤的血清酶谱及氧自由基改变的实验研究,结果提示:高原缺氧条件下肢体缺血再灌注损伤与氧自由基及脂质过氧化反应增强有密切关系;肢体缺血再灌注后可以诱发多个脏器功能的损伤。     

马来酸桂哌齐特对骨胳肌缺血-再灌注损伤的保护作用与机制研究

目的探讨马来酸桂哌齐特对骨胳肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法♂Wistar大鼠56只，随机分为假手术组（s组）、缺血再灌注组（I／R组）、马来酸桂哌齐特组（T组），检测骨骼肌腺苷含量和肿瘤坏死因子（TNF）-α基因转录水平，观察骨骼肌线粒体超微结构变化。结果I／R组缺血后20min骨骼肌腺苷含量显著升高，缺血2h和再灌注后1h明显回降，T组缺血后20min骨骼肌腺苷含量与I／R组无显著差异，但在缺血2h和再灌注后1h分别显著高于I／R组（P〈0．01）。I／R组再灌注1h骨骼肌TNF-α基因转录水平显著升高，T组显著低于I／R组（P〈0．01）。T组骨骼肌线粒体损伤明显轻于I／R组。结论马来酸桂哌齐特能够通过增加腺苷含量和抑制炎症反应，减轻骨骼肌缺血-再灌注损伤。     

核因子-κB抑制剂增强131I治疗甲状腺癌疗效的裸鼠实验研究

目的 通过小鼠活体研究,探讨核因子-κB抑制剂Bay 11-7082在131I治疗DTC中的协同作用.方法 通过裸鼠腹腔注射37 MBq131I,制备清除甲状腺裸鼠模型.将72只种植KTC-1癌细胞的清除甲状腺裸鼠随机分为4组:单独用131I组、单独用Bay 11-7082组、联合用药组和对照组.给药方法为:131I剂量37 MBq,于种植癌细胞第7周第1天腹腔注射;Bay 11-7082剂量按体质量10 mg/kg,于第7周第1、2和3天腹腔注射;联合用药组两药合用,剂量同上;对照组腹腔注射相同体积的生理盐水.成瘤后每周第7天测量癌结节大小,绘制癌结节体积变化曲线.裸鼠清除甲状腺前行99TcmO4-显像,131I清除甲状腺后和131I治疗种植瘤后3d行全身显像(单独用Bay 11-7082组未行治疗后显像).第7周第7天从每组中取6只裸鼠处死,对癌结节进行凋亡染色,计算凋亡指数(染色阳性细胞数/总细胞数×100％).用单因素方差分析和q检验进行数据比较.结果 裸鼠99TcmO4-显像可见甲状腺和胃显影;清除甲状腺时腹腔注射131I后显像可见甲状腺131I浓聚明显;131I治疗后荷裸鼠全身显像可见癌结节131I浓聚.从第8周末开始,3种治疗方案所致的癌结节体积改变差异有统计学意义(F=11.91 ～246.56,均P＜0.01),联合用药组癌结节体积明显小于单一用药组(q=3.36～ 14.99,均P＜0.01).对照组、131I治疗组、Bay 11-7082治疗组和联合用药组的凋亡指数分别为(0.28±0.15)％、(5.49±0.69)％、(6.82±0.72)％和(16.2l±1.57)％,差异有统计学意义(F =304.40,P＜0.01);其中联合用药组明显高于单独用药组(q=15.33和13.33,均P＜0.01).结论 裸鼠体内实验显示,通过Bay 11-7082对核因子-κB通路的抑制,可以增强131I治疗甲状腺癌的疗效,产生协同效应.