IL-12的真核表达载体促进小鼠对DNA疫苗的免疫应答

慢性乙型肝炎及其病毒携带者细胞免疫功能明显低下。ＤＮＡ疫苗可被体细胞摄取并表达相应抗原 ,激发出保护性免疫应答 ,包括特异性ＣＴＬ应答及特异性抗体的产生〔1〕。ＩＬ 12是目前发现对体内免疫活性细胞诱导和调节作用最强、范围最广的细胞因子。我们将ＨＢＶＤＮＡ疫苗 (ｐＣＲ3.1 Ｓ)与编码鼠ＩＬ 12的真核表达载体 (ｐＷＲＧ316 9,简称ＩＬ 12 )共同免疫小鼠后 ,观察其对小鼠免疫应答的影响。材料与方法材料 :5～ 8周龄雌性ＢＡＬＢ/ｃ小鼠购自本校实验动物中心 ,体重 15～ 2 0ｇ ;Ｐ815小鼠肥大细胞瘤细胞系 ,编码ＨＢＶＳ抗原的真…     

病毒核酸疫苗的研究现状

核酸疫苗是指将含编码抗原蛋白基因序更的质粒载体，经肌肉注射或微弹轰击等方法导入体内，从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导机体免疫应答，达到防治病毒感染的目的。核酸疫苗具有以下优点１．可在体内长期稳定地表达抗原蛋白，表达的抗原蛋白其结构与天然构更为接近，抗原性强；２．不仅能诱导体液免疫应答，并且能诱导细胞免疫应答，３．与减毒活疫苗和基因工程疫苗相比，研制工艺简单，成本低，运输贮存方便，临床应     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

重组rAAV-LMP诱导的特异性细胞毒T细胞对LMP阳性靶细胞的识别与杀伤

在正常个体中Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒是由病毒特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）所控制，虽不能清除病毒，却对于控制细胞处于潜伏感染状态是必需的。抽取病人血分离淋巴细胞，在实验室制备ＥＢ病毒特异性ＣＴＬ，然后回输到病人体内，具有预防和治疗ＥＢ病毒相关疾病的意义。我们将ＥＢ病毒潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰ）基因重组到腺病毒伴随病毒载体ｐＡＣＰ中去，与包装质粒Ａｄ８共转染已感染了Ⅱ型腺病毒的２９３细胞，获得重组病毒ｒＡＡＶ－ＬＭＰ，用此病毒感染淋巴细胞并表达ＬＭＰ，用高能Ｘ线照射灭活，与自体淋巴细胞共培养产生特异性ＣＴＬ。以ＥＢ病毒转化的类淋巴母细胞作靶细胞与ＣＴＬ反应，用ＢＬＴ活性法测定ＣＴＬ活性。结果表明，４株ＣＴＬ均能够识别和杀伤对应的靶细胞，并且随着ＣＴＬ数量的增加和反应时间的延长，上清中ＢＬＴ活性也增强。     

DNA疫苗非病毒载体的研究进展

DNA疫苗（DNA vaccine）又称为核酸疫苗或基因疫苗,是将编码特异性抗原的基因构建在表达性质粒中,经某种方法导入体内后,利用宿主细胞表达系统合成相应的病原体蛋白,诱导机体产生免疫应答以达到预防和治疗疾病的目的。DNA疫苗白1990年发现以来,因具有良好的安全性及可诱导广泛的体液免疫和细胞免疫,己越来越受到人们的关注,是继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第三代疫苗,     

MAGE-3基因编码的肿瘤排斥抗原在食管癌的表达

由于人类ＭＡＧＥ(ｍｅｌａｎｏｍａａｎｔｉｇｅｎ)基因编码的肿瘤排斥抗原(ｔｕｍｏｒｒｅｊｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ)可为ＣＴＬ(ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ)识别,且在许多肿瘤有较高的表达,而在正常组织(除了睾丸和胎盘外)均不表达,因而是一种ＣＴＬ介导的特异性免疫治疗的理想靶分子。在机体抗肿瘤免疫应答中,特异性ＣＴＬ的杀伤作用是主要的抗肿瘤机制,因而这一领域的研究,引起了国内外学者的极大重视。利用ＭＡＧＥ基因产物为靶分子的特异性免疫治疗在临床上已取得了一些令人鼓舞的成功〔1〕。目前,国内尚未见对Ｍ…     

小鼠肥大细胞瘤P815模型的建立与初步应用

目的 建立小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５种植瘤模型，并对其体内诱发特异性ＣＴＬ应答机理进行初步的研究。方法 经有限稀释法筛选Ｐ８１５单克隆瘤系，用ＲＴ－ＰＣＲ及产物ＤＮＡ测序鉴定肿瘤抗原Ｐ１Ａ基因的表达；在此基础上，用活瘤苗免疫同系小鼠，经标准＾５１Ｃｒ释放试验检测在体特异性ＣＴＬ的活性。结果 筛选出了一个Ｐ８１５单克隆成瘤系Ｐ８１－Ｆ３，并鉴定该瘤存在Ｐ１Ａ基因的表达，用活瘤疫苗免疫６只步鼠，在３只体内     

乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性CD8+T细胞动态变化和动态分布

目的：研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法：用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100ug免疫C57BL／6小鼠，用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8^ T细胞的动态变化。结果：pHBc144免疫后抗原特异性CD8^ T细胞逐渐增多，在初次免疫的第14天出现第一个免疫应答高峰，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第10天抗原特异性CD8^ T细胞数量达到高峰，约是初次免疫应答高峰的2倍，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降，但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论：pHBc144DNA疫苗可诱导有效的细胞免疫应答。     

检测Epstein—Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方？…

目的 建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的细胞免疫应答。方法 用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＾＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ！蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果 重组ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ     

特异性细胞毒性T细胞检测方法的建立及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用

报道了用ＣＢＡ／Ｊ小鼠、Ｌ９２９细胞及ＭＴＴ比色法建立的特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）的检测方法及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用。通过检测痘菌病毒特异性初发ＣＴＬ的动态变化及其二次反应ＣＴＬ，表明，本法能较好地检测初发及二次反应ＣＴＬ水平的变化。用本法检测了不同启动子控制下的表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｓ（ＥＢ）病毒膜抗原（ＥＢＶ－ＭＡ）的重组痘菌病毒ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ、以及与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ。结果表明，Ｐ７５００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ比Ｐ１１０００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ诱导的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ高，但无显著性差异。当上述重组痘苗病毒与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时，均能使二者的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ增高，但增高幅度本身及其二者之间均无显著性差异。     

塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节

目的 研究塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）衣壳蛋白5’翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响：方法将SFV衣壳蛋白（capsid，C蛋白）基因的5’端102bp翻译增强区插入到SFT复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游，得到DNA疫苗载体pCMV-RepC。将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC，使gag编码区与翻详增强区融合，得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag。同时，构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag。Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB／c雌性小鼠，ELISA检测Gag特片的抗体反应，ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5’翻译增强区增强了Gag表达水平，对体液免疫应答没有显著影响，但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反心。     

病毒性疾病的T细胞免疫治疗

病毒特异性细胞毒Ｔ细胞在杀伤病毒感染细胞消除病毒中起关键作用，在体外，将ＣＴＬ克隆和扩增后回输治疗和预防病毒感染是病毒性疾病治疗的一个重要和有希望的生物疗法，本文就此治疗机理，策略以及病毒逃逸细胞免疫等方面研究进展作一综述。     

脂质体包裹的mRNA体内诱生病毒特异性的细胞毒性淋巴细胞

脂质体包裹的ｍＲＮＡ体内诱生病毒特异性的细胞毒性淋巴细胞〔英〕／Ｍａｒｔｉ－ｎｏｎＦ…／／ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．─１９９３，２３．─１７１９～１７２２细胞毒性淋巴细胞（ＣＴＬ）介导的细胞毒作用是机体抗病毒作用的主要机制。理论上讲，应用减毒的活病毒人...     

SARS冠状病毒S蛋白C端片段基因的克隆及其DNA疫苗的免疫学研究

目的：构建抗原基因为SARS冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoY）S蛋白C端片段基因的DNA疫苗，采用肌注和滴鼻的方法接种小鼠后观察肌肉注射途径和黏膜途径免疫使机体产生免疫应答的情况。方法：将S蛋白C端片段克隆至真核表达载体pcDNA3．1（-），随之将重组质粒进行小鼠肌肉和黏膜免疫，定期检测外周血中抗SARS-CoV的病毒特异性抗体水平，流式细胞仪观察其淋巴细胞表型变化，免疫组化检测抗原表达分布，脾细胞增殖实验评价CTL效果。结果：疫苗注射后15天就能在血清中检测出病毒特异性抗体。随着时问的延续，抗体水平逐步升高，至30天后达到稳定，以CTL为主的CD8^＋T淋巴细胞的百分比含量增加极显著，引起强大的体液免疫和细胞免疫；疫苗滴鼻后45天可在鼻黏膜检测到抗原表达；而空载体质粒对照组未检测出明显的特异性免疫应答。结论：以S蛋白C端片段基因为抗原基因的DNA疫苗通过肌注和滴鼻能诱导小鼠针对SARS病毒强大的免疫应答。     

HBV前C/C基因变异与宿主T细胞免疫的关系

T细胞免疫反应对乙型肝炎患者病毒的清除有重要作用 ,乙肝病毒 (HBV)前C C基因变异不仅改变了病毒本身的生物学性状 ,也改变了宿主的特异性T细胞免疫应答。本文就近年来HBV前C/C基因变异与患者体内T细胞免疫的关系作一综述     

登革病毒E蛋白抗原基因肌肉注射诱导小鼠免疫应答的初步研究

目的：研究登革病毒Ｅ基因免疫的可行性,方法：用脂质体转染法将构建的Ｅ基因重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｅ导入小鼠成纤维细胞ＮＨ３Ｔ３细胞,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹试验检测Ｅ基因的体外表达。然后将该重组真核表达质粒经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,检测其诱发特异性免疫应答水平。结果：重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｅ在小鼠体内诱发一定水平的体液和细胞免疫应答,且持续时间较长。结论：登革病毒Ｅ基因免疫可诱发特异性免疫应答。为登革病毒疫苗的研制提供了实验依据。     

献血者乙型肝炎病毒体液免疫和细胞免疫水平研究

目的:研究自然状态下献血者对乙型病毒性肝炎不同抗原成份的体液、细胞免疫应答水平,及两者的相关性。方法:ELISA检测献血者血浆中HBsAb、HBcAb、preS1+S2-Ab的阳性率,ELISOPT检测外周血单个核细胞中抗原特异性IFN-γ分泌细胞水平。结果:体液免疫应答检测结果表明preS1+S2-Ab的检出率最高,占85.7%(48/56),核心杭体的检出率最低30.4%(17/56);特异性细胞免疫检测结果提示献血者总体preS1+S2-Ag、HBcAg的特异性细胞免疫应答水平有着良好的一致性,无统计学差异(P>0.05),但显著优于HBsAg;preS1+S2-Ag和HBsAg特异性细胞免疫和体液免疫应答有着较好的一致性,但HBcAg特异性细胞免疫和体液免疫无明确关联(P>0.05)。结论:自然状态下献血者对乙型病毒性肝炎不同抗原成份均有较好的体液、细胞免疫应答,preS1+S2的体液免疫应答水平优于表面及核心抗原提示人HBV疫苗的侯选对象。     

重组rAAV—LMP诱导的特异性细胞毒T细胞对LMP阳性靶…

在正常个体中Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒是由病毒特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）所控制，虽不能清除病毒，却对于控制细胞处于潜伏感染状态是必需的。抽取病人血分离淋巴细胞，在实验室制备ＥＢ病毒特异性ＣＴＬ，然后回输到病人体内，具有预防和治疗ＥＢ病毒相关疾病的意义。我们将ＥＢ病毒潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰ）基因重组至腺病毒随病毒载体ＰＡＣＰ中去，与包装质粒Ａｄ８共转染已感染了Ⅱ型腺病毒的２９３细胞，     

119 HBV前C/C基因变异与宿主T细胞免疫的关系

T细胞免疫反应对乙型肝炎患者病毒的清除有重要作用,乙肝病毒(HBV)前C/C基因变异不仅改变了病毒本身的生物学性状,也改变了宿主的特异性T细胞免疫应答.本文就近年来HBV前C/C基因变异与患者体内T细胞免疫的关系作一综述.     

HBV前C／C基因变异与宿主T细胞免疫的关系

T细胞免疫反应对乙型肝炎患者病毒的清除有重要作用,乙肝病毒（HBV）前C／C基因变异不仅改变了病毒本身的生物学性状,也改变了宿主的特异性T细胞免疫应答。本文就近年来HBV前C／C基因变异与患者体内T细胞免疫的关系作一综述。