17βE2对氧糖剥夺/复糖复氧诱导神经元损伤的保护作用

将培养8d的大鼠皮质神经元分为4组，A组为正常对照组、B组采用氧糖剥夺／复糖复氧（OGD／R）、C组采用17βE2预处理＋OGD／R、D组采用17βE2与PI3K抑制剂LY294002共同预处理＋OGD／R。发现OGD／R后神经元活性逐渐下降，P-Akt、凋亡诱导因子（AIF）表达较正常对照组增加；17βE2可明显提高OGD／R后神经元的存活率，使p-Akt的表达明显增加，AIF表达降低；LY294002与17βE2共同预处理，抑制了17βE2的作用。提示17βE2可减轻OGD／R诱导的皮质神经元损伤，这种保护作用可能与AIF及PI3K／Akt信号通路相关。     

小RAN干扰Trx1促进大鼠缺血再灌注损伤的星形胶质细胞凋亡、抑制其增殖及作用机制

目的研究硫氧还蛋白(Trx)1在氧糖剥夺(OGD)损伤后对星形胶质细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养原代星形胶质细胞分为对照组、OGD模型组、小干扰(si)RNA-NC组、siRNA-Trx1组,采用携带Trx1的siRNA星形胶质细胞抑制Trx1表达后进行OGD/复氧(R)干预,氧糖剥夺6 h,复氧24 h,对照组为正常培养的星形胶质细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰效果。噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹试验检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、活化的(Cleaved)Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果与对照组相比,OGD模型组、siRNA-NC组、siRNA-Trx1组Trx1 mRNA表达水平显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白显著下降(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05);与OGD模型组相比,siRNA-NC组星形胶质细胞的增殖、凋亡及凋亡蛋白水平无显著变化(P0.05),siRNA-Trx1组细胞的增殖显著降低(P0.05),凋亡显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05)。结论 Trx1可促进氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2/Bax/Cleaved Caspase-3信号通路有关。     

低温对小鼠N2a细胞氧糖剥夺复糖复氧模型3-羟基-3-甲基戊二酰裂解酶的影响

目的观察低温对小鼠神经母细胞瘤(N2a)细胞氧糖剥夺复糖复氧(OGD/R)模型3-羟基-3-甲基戊二酰裂解酶(HMGCL)的影响。方法将生长状态良好的N2a细胞随机分为对照组、模型组和低温组,后2组建立氧糖剥夺模型3h后,模型组复糖复氧48 h,低温组于32℃复糖复氧24 h,再正常条件培养24 h。各组细胞于OGD/R模型24 h和48 h,用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,细胞计数试剂盒检测细胞存活率,分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性,Western blot法检测HMGCL表达。结果对照组24 h和48 h几乎没有凋亡细胞。与对照组比较,模型组和低温组24 h和48 h凋亡细胞数增多,细胞存活率降低[(47.13±4.20)%和(63.94±5.21)%vs(100.00±0.00)%,(60.39±1.16)%和(68.27±3.16)%vs(100.00±0.00)%,P0.05],Caspase-3活性升高(3.88±0.40和2.17±0.39 vs 1.00±0.00,3.65±0.11和2.17±0.14 vs 1.00±0.00,P0.05),HMGCL相对表达量升高(1.24±0.05和0.96±0.03 vs 0.78±0.03,1.18±0.02和0.95±0.04 vs 0.69±0.03,P0.05);与模型组比较,低温组24 h和48 h凋亡细胞数减少,细胞存活率升高(P0.05),Caspase-3活性降低(P0.05),HMGCL相对表达量降低(P0.05)。结论低温可以减轻N2a细胞OGD/R模型损伤,该机制可能与抑制HMGCL表达,降低Caspase-3活性,减少细胞凋亡有关。     

二氮嗪对氧糖剥夺PC12细胞的作用

目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道（K＋-ATP）开放剂-二氮嗪对氧糖剥夺PC12细胞的保护作用及其机制.方法 体外培养PC12细胞,分为正常对照绀、氧糖剥夺组、二氮嗪预处理组（氧糖剥夺前20 min给予二氮嗪200 μmol/L）.以改良噻唑蓝法测定细胞活性,采用Heochst33342/PI双染法测定细胞凋亡率,Fluo-3/AM（钙离子荧光探针）榆测PC12细胞内钙离子的浓度.结果 ①与正常对照组比较,氧糖剥夺后细胞活力明显降低（P〈0.01）;在氧糖剥夺前给予200 μmol/L的二氮嗪可使细胞活力明显升高（P〈0.01）.②正常对照组细胞凋亡率为（7.5 ±2.1）%,氧糖剥夺组为（42.0±2.6）%,二氮嗪预处理组为（21.3±3.2）%.与正常对照组比较,氧糖剥夺纽和二氮嗪预处理组差异均有统计学意义（P〈0.01）,二氮嗪预处理组与氧糖剥夺组比较,差异亦有统计学意义（P〈0.01）.③正常对照组、氧糖剥夺组、二氮嗪预处理组细胞内游离钙离子平均荧光值分别为（120.6±1.6）%,（280.8 ±2.5）%,（167.0±3.9）%.与正常对照组比较,氧糖剥夺组和二氮嗪预处理组差异均有统计学意义（P〈0.01）,二氮嗪预处理组与氧糖剥夺组比较,差异亦有统计学意义（P〈0.01）.结论 线粒体K＋-ATP 开放剂--二氮嗪可增强氧糖剥夺细胞的活力,减少细胞的凋亡率,其机制可能与降低细胞内钙超载有关.     

阿司匹林对缺氧/缺糖大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察大鼠皮质神经元细胞在缺氧/缺糖(OGD)时线粒体膜电位(MMP)的变化及阿司匹林的保护作用。方法取体外培养7d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧/缺糖模型组、缺氧/缺糖加阿司匹林组。缺氧/缺糖2h后在常氧下继续培养24h。流式细胞术检测不同时间段神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧/缺糖损伤2h,缺氧/缺糖组线粒体膜电位水平较正常对照组显著降低(P<0.01)。缺氧/缺糖加阿司匹林组皮质神经元细胞在缺氧2h及再复氧24h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧/缺糖模型组(P<0.01)。结论阿司匹林可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

大鼠皮层神经元原代培养、鉴定及氧糖剥夺模型的建立

目的 原代培养和鉴定大鼠皮层神经元,并建立大鼠皮层神经元氧糖剥夺(OGD)模型.方法 采用酶消化法和机械分离法相结合进行大鼠神经元原代培养,采用抗NSE免疫细胞化学染色鉴定,应用缺氧D-Hank液及缺氧培养罐行OGD,台盼蓝染色及LDH漏出率检测细胞损伤程度.结果 神经元培养至第6天,NSE染色阳性细胞为86.32%±2.64%;神经元经不同时长的OGD处理后,台盼蓝染色呈现不同形态;OGD 60 min时,神经元LDH漏出率较对照组明显增加(P<0.05).结论 成功完成大鼠皮质神经元原代培养,神经元在培养第6天可用于模型制备,成功建立神经元OGD模型.     

人参皂苷Rb3保护低糖低氧/复氧诱导乳鼠皮层神经元凋亡的离子通道机制

目的研究人参皂苷Rb3对低糖低氧/复氧大鼠神经元凋亡的保护作用,并探讨其发挥神经保护作用与线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATPC)开放的关系。方法建立原代培养的大鼠皮层神经元的低糖低氧/复氧(OGD/R)模型,分为5组:正常对照组,低糖低氧/复氧组(OGD/R)、60 mol/L人参皂苷Rb3组、100 mol/L 5-羟基葵酸盐(5-HD)组、60 mol/L人参皂苷Rb3+100 mol/L 5-HD组。利用Hoechst染色法检测细胞凋亡;Western印迹法检测多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达并测定caspase-3的活性。结果经OGD/R损伤后细胞出现凋亡典型的形态学特征;凋亡蛋白caspase-3活性增强,PARP蛋白表达下降。与OGD/R组比较,60 mol/L人参皂苷Rb3降低OGD/R损伤后神经元的凋亡(P<0.01)。抑制caspase-3活性(P<0.01),保持PARP蛋白条带的完整性。5-羟基葵酸盐则削弱人参皂苷Rb3抑制神经元凋亡的作用,使caspase-3活性增强、PARP蛋白表达降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rb3对OGD/R损伤神经元的凋亡具有抑制作用,mitoKATPC开放可能介导了人参皂苷Rb3的抗凋亡作用。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

马钱苷调节AKT/AMPK/Nrf2通路改善氧葡萄糖剥夺/复氧诱导的神经元铁死亡的机制研究

目的:探讨马钱苷通过调节蛋白激酶B(AKT)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)通路改善氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的机制。方法:将神经元分为对照组、OGD/R组、OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷+ML385组。透射电子显微镜观察神经元线粒体形态;检测铁含量、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG),还原型辅酶Ⅱ(NADPH)/辅脱氢酶Ⅱ(NADP⁺)及乳酸脱氢酶(LDH)含量;使用CM-H2DCFDA、C11-BODIPY581/591分别检测细胞内和脂质活性氧(ROS)水平;四唑盐(MTT)试剂盒检测细胞活性;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、...     

黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制

目的探讨黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的作用机制。方法取体外无血清原代培养8 d的大鼠海马神经元,采用随机数表法分为A组:正常对照组、B组:模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、C组:黄芪注射液溶剂对照组、D组:黄芪注射液组、E组:二甲基亚砜(DMSO)组、F组:Bax抑制剂组、G组:Bax激动剂组、H组:Bax抑制剂+黄芪注射液组、I组:Bax激动剂+黄芪注射液组。各组除A组均经0.5 h缺氧缺糖,分别采用免疫组化法和RT-PCR法对复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72、120 h的Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表达进行检测和比较。结果各组海马神经元除0 h外,其他时间点的Bcl-2水平均高于A组,且各组Bcl-2水平均随时间延长而增高,2 h达到顶峰。除0 h外,其他各时间点H组大鼠海马神经元的Bcl-2水平均显著高于其他组(P<0.05),其次为F组、D组、I组、G组、E组、B/C组、A组,且B组与C组无显著差异(P>0.05)。各组大鼠海马神经元除0 h外,其他各时间点的Bax水平均低于A、B组,且各组均随时间延长而增高,6 h达到顶峰,各组大鼠海马神经元除0 h外,其他各时间点的Caspase-3 mRNA阳性神经元百分率均高于A组,且各组均随时间延长而增高,24 h达到顶峰。除0 h外,其他各时间点B组Bcl-2水平和Caspase-3 mRNA阳性神经元百分率均显著高于其他组(P<0.05),其次为E组、G组、I组、D组、F组、H组,且B组与C组各时间点比较无显著差异(P>0.05)。结论黄芪注射液能够抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元Bax蛋白的表达,提高Bcl-2蛋白表达,抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡;且Bax激动剂能够加速缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡,Bax抑制剂能够减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡。     

沙库巴曲缬沙坦对缺氧心肌细胞线粒体动力系统和细胞凋亡的影响

目的 验证沙库巴曲缬沙坦(S/V)能否通过调节线粒体动力系统改善缺氧大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)凋亡水平,发挥心脏保护作用。方法 培养H9c2心肌细胞,建立糖氧剥夺模型(OGD),将细胞分为对照组、造模组、药物组。对照组正常培养心肌细胞,造模组采用OGD建模,药物组采用OGD建模后加用S/V 20μmol/L干预处理,每组重复5遍。采用流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS),JC-1检测线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法(WB)检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、细胞色素C(CytC)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)及含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达情况。采用GraphPad Prism 8统计软件进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 H9c2心肌细胞建立OGD模型,经S/V处理后,光镜下心肌细胞形态学明显改善;流式细胞技术分析结果显示S/V明显降低细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡(P＜0.05);荧光显微镜分析结果显示S/V明显改善线粒体膜电位水平(P＜0.05);WB结果显示S/V可明显提升Mfn2、Mfn1、Bcl2蛋白表达水平,降低Drp1、Fis1、CytC、Bax及Caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05)。结论 S/V可能通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂调节线粒体稳态,减少ROS生成,减轻心肌细胞凋亡。     

氧糖剥夺影响人脐静脉内皮细胞紧密连接相关蛋白的机制研究

目的 探究氧糖剥夺影响人脐静脉内皮细胞（HUVEC）紧密连接相关蛋白的机制。方法 本实验时间为2021年5月至2022年1月。将HUVEC分为正常组、氧糖剥夺6 h组和氧糖剥夺24 h组。正常组HUVEC进行正常培养；氧糖剥夺6 h组HUVEC制备氧糖剥夺模型，并在缺氧培养箱中培养6 h；氧糖剥夺24 h组HUVEC制备氧糖剥夺模型，并在缺氧培养箱中培养24 h。在倒置显微镜下观察HUVEC的形态并拍照，采用CCK-8检测孵育1、2、3、4 d细胞增殖水平。将HUVEC分为氧糖剥夺组、空质粒组、排斥导向分子（RGM）a质粒敲减组。氧糖剥夺组HUVEC制备氧糖剥夺模型，并在缺氧培养箱中培养24 h；空质粒组HUVEC在氧糖剥夺组基础上，转染空载体；RGMa质粒敲减组HUVEC在氧糖剥夺组基础上，转染慢病毒。采用Western blot法检测RGMa、紧密连接相关蛋白（Claudin-5和ZO-1）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、CDC42。结果 与正常组相比，氧糖剥夺6 h组、氧糖剥夺24 h组细胞体肿胀或变形，光晕消失，细胞边缘不清晰，细胞体内出现空泡，突起缩短，连接断裂，视野内颗粒样...     

HSP70蛋白在神经元样PC12细胞氧糖剥夺后的表达变化

目的 探讨神经细胞氧糖剥夺(OGD)造模后PC12细胞凋亡和热休克蛋白(HSP)70水平,评价OGD模型.方法 利用PC12细胞,经NGF刺激诱导向神经细胞分化,利用OGD建立神经细胞OGD模型;利用MTT法、共聚焦显微镜鉴定PC12细胞转化为神经元样细胞及OGD模型的建立,Western印迹检测OGD后HSP70蛋白的表达.结果 应用终浓度50 ng/ml NGF的DMEM完全培养基培养PC12细胞,随培养时间的增加细胞呈典型的神经元形态.微管相关蛋白(MAP)2免疫荧光细胞化学染色呈强阳性;建立OGD后神经元出现不同程度的损伤、坏死及凋亡,随OGD时间延长存活率逐渐降低、凋亡率升高、HSP70蛋白表达增加.结论 NGF有效地诱导PC12细胞转化为神经细胞,OGD可以有效诱导HSP70表达.     

替罗非班通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路对氧糖剥夺心肌细胞的干预作用

目的 探讨替罗非班对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)心肌细胞的干预作用,并探索其相关机制.方法 H9C2细胞被分为正常组、模型组、替罗非班组、抑制剂组、替罗非班+抑制剂组.建立OGD细胞模型,以MTT曲线确定最终的实验浓度和作用时间为替罗非班100 nmol/L,作用时间为24 ...     

吡格列酮对培养大鼠大脑皮质神经元氧-葡萄糖剥夺/复氧后PPARγ、NF-κB c-Rel和Bcl-xL表达的影响

目的 探讨吡格列酮(pioglitazone,PIO)对Wistar大鼠大脑皮质神经元氧-葡萄糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors γ,PPARγ)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)亚基c-Rel以及抗凋亡因子Bcl-xL表达的影响.方法 大鼠大脑皮质神经元体外原代培养,建立OGD/R模型,分为正常组、OGD4 h/R6 h组、OGD4 h/R12 h、OGD4 h/R6 h+PIO组、OGD4 h/R6 h+PPARγ抑制剂T0070907 (TIO)组、OGD4 h/R12 h+PIO组以及OGD4 h/R12 h+TIO组.采用蛋白质印迹法检测神经元内PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应检测神经元内Bcl-xL mRNA表达.结果 蛋白质印迹分析显示,OGD/R后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达水平较正常组显著性增高(P＜0.01),给予PIO后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达水平进一步增加,显著高于单纯OGD4 h/R6 h组和OGD4 h/R12 h组(P＜0.01),而给予TIO后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达减少,显著性低于单纯OGD/R组(P＜0.05)以及相应PIO组(P＜0.01).逆转录-聚合酶链反应分析显示,OGD4 h/R6 h组Bcl-xL mRNA表达水平较正常组显著性增高(P＜0.01),PIO组Bcl-xL mRNA表达水平显著性高于单纯OGD4 h/R6 h组和OGD4 h/R12 h组(P＜0.01),给予TIO后Bcl-xL mRNA表达减少,显著性低于单纯OGD/R组(P＜0.05)以及相应PIO组(P＜0.01).结论 PIO可上调培养大脑皮质神经元OGD/R后PPARγ蛋白表达,进而增加NF-κB亚基c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xLmRNA表达,这可能是PPARγ神经保护作用的部分机制.     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2、bax及cyt-c蛋白形态学表达的影响

目的 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2、bax及cyt-c蛋白表达的影响,探讨黄芪注射液防治海马神经元凋亡的作用机制.方法 取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组.除正常对照组外,各组均进行缺糖缺氧0.5 h,再分别于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120 h采用细胞免疫化学法检测海马神经元bcl-2、bax、cyt-c蛋白的表达.结果 与正常对照组比,模型组bcl-2、bax、cyt-c蛋白表达明显升高,而bcl-2/bax比值下调(P＜0.05).与模型组相比,黄芪注射液组bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax比值升高,cyt-c、bax蛋白表达明显降低(P＜0.05);而黄芪注射液溶剂对照组bcl-2、bax、cyt-c蛋白表达及bcl-2/bax比值则无显著变化(P＞0.05).结论 黄芪注射液可提高缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax比值,抑制bax、cyt-c蛋白表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖引起的海马神经元凋亡.     

沙库巴曲缬沙坦调节线粒体动力系统改善缺氧心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦（Sacubitril Valsartan,S/V）通过调节线粒体动力系统对缺氧H9c2心肌细胞凋亡保护作用。方法 实验分为3组: 对照组、造模组、造模 S/V组。流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（Reactive oxygen species,ROS）,JC-1检测线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法（Western blot,WB）检测线粒体融合蛋白1（Mfn1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）、动力相关蛋白 1 (Drp1)、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、细胞色素C（CytC）、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）及含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)表达情况。采用 GraphPad Prism 8统计软件进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析。结果 H9c2心肌细胞建立糖氧剥夺模型,经S/V处理光镜下心肌细胞形态学明显改善;流式细胞技术分析S/V明显降低细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡（P＜0.05）;荧光显微镜分析提示S/V明显改善线粒体膜电位水平（P＜0.05）;WB显示S/V可明显提升Mfn2、Mfn1、Bcl2蛋白表达水平,降低Drp1、Fis1、CytC、Bax及Caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 S/V可能通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂调节线粒体稳态,减少ROS生成,减轻心肌细胞凋亡。     

缺氧后适应与心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及机制探讨

目的 探讨缺血后适应与心肌营养素-1（CT-1）对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及其机制.方法 将体外培养的H9C2细胞株分为正常对照组（a组）、缺氧复氧组（b组）、缺氧复氧＋缺氧后适应组（c组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋ CT-1组（d组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋ ERK抑制剂组（e组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋二甲基亚砜组（f组）,MTS法检测各组细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测细胞外调节激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达、Q-PCR检测Bad mRNA的表达.结果 与a组比较,其他各组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA和p-ERK1/2（除外e组）表达量增加,P均＜0.05;与b组比较,c组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,Bad mRNA表达、凋亡率下降,P均＜0.05;与c组比较,d组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,细胞Bad mRNA表达、凋亡率下降（P均＜0.05）;与d组比较,e组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA表达量增加,p-ERK1/2表达量下降;d、e组各项指标指标比较差异无统计学意义.结论 缺氧后适应可减少心肌细胞缺氧复氧损伤,联合CT-1后保护作用明显加强,而ERK1/2抑制剂可阻断这种保护作用;该保护机制可能与CT-I激活ERK1/2信号通路,下调Bad mRNA的表达有关.     

组织激肽释放酶对酸敏感离子通道1a介导的大鼠酸中毒神经元氧化应激的影响

目的探讨组织激肽释放酶（TK）对酸中毒损伤神经元的保护作用及对酸敏感离子通道1a（ASIC1a）介导的氧化应激反应的影响。方法取原代培养8～10 d的新生SD大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组,酸中毒组（pH=6.0的细胞外液处理4 h）,TK（100 nmol/L）、缓激肽B2受体（B2R）激动剂（缓激肽,100 nmol/L）、ASIC1a阻断剂（狼蛛毒素,100 ng/ml）及B2R拮抗剂（HOE140）预处理组。TK、B2R激动剂、ASIC1a阻断剂预处理组在给予酸性液处理前,先给予相应药物预处理30 min;B2R拮抗剂预处理组,在TK干预前30 min,给予HOE140（500 nmol/L）,30 min后给予酸性液处理。采用活细胞计数试剂盒（CCK-8）测定各组神经元的存活率。应用不同的荧光探针标记细胞内活性氧（ROS）,一氧化氮（NO）,线粒体膜电位（MMP）以及细胞内游离Ca2＋,采用荧光酶标仪测定上述各组细胞内各荧光物质的相对强度,计算各物质的相对含量。结果①正常对照组,TK、ASIC1a阻断剂及B2R激动剂预处理组的神经元存活率分别为（96.6±2.6）%、（79.7±5.9）%、（74.2±4.6）%、（77.7±5.0）%,与酸中毒组的（59.0±6.0）%比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。B2R拮抗剂预处理组为（64.6±3.8）%,与TK预处理组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。②与正常对照组比较,酸中毒组细胞内ROS、NO及游离Ca2＋水平显著增高（P〈0.01）,MMP水平显著下降（P〈0.01）;与酸中毒组比较,TK、ASIC1a阻断剂及B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO及Ca2＋水平显著下降,MMP水平显著增高（P〈0.01或P〈0.05）;而与TK预处理组比较,B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO含量,游离Ca2＋水平明显增高,MMP水平明显下降,P〈0.01。结论在酸性环境下,ASIC1a激活介导了神经元内氧化应激反应,诱导神经元损伤;TK通过B2R能够减轻ASIC1a介导的氧化应激性损伤。     

原代培养的大鼠皮质神经元缺氧复氧时神经源性丝氨酸蛋白酶抑制物和组织型纤溶酶原激活物表达的动态变化

目的 探讨原代培养的大鼠皮质神经元在缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)时神经源性丝氨酸蛋白酶抑制物(neuroserpin,NSP)和组织型纤溶酶原激活物((tissue plasminogen activator,tPA))表达的动态变化.方法 原代培养取自生后24 h内的大鼠大脑皮质神经元,建立原代培养的大鼠皮质神经元H/R模型.采用免疫荧光双标染色和Western印迹法检测培养神经元NSP表达.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测tPA表达.结果 氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)1.5 h后NSP蛋白表达轻度上调,复氧6 h时达高峰(P<0.05),然后缓慢下降,复氧24 h时基本恢复至缺氧前水平.OGD 1.5 h时,细胞表达少量tPA(P<0.05),随着复氧时间的延长tPA含量逐渐增高,复氧6 h时较OGD前显著增高(P<0.01),随后逐渐降低,复氧24 h时基本恢复至复氧前水平.结论 NSP和tPA在神经元H/R时表达均显著上调,并且两者的动态变化基本一致.